CN101879138A - 长春花生物碱纳米乳剂注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种含有长春花生物碱，特别是含有长春瑞滨的纳米乳剂注射液及其制备方法，平均粒径小于100nm，既能减小长春瑞滨注射液的用药刺激性，又可以提高长春瑞滨在产品中的浓度，同时具有更高的靶向性。

Description

长春花生物碱纳米乳剂注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种纳米乳剂注射液及其制备方法，具体地说涉及长春花生物碱纳米乳剂注射液及其制备方法。

背景技术

长春瑞滨是半合成长春碱类药物，作为第三代长春碱的代表药物，其抗肿瘤活性强，疗效确切，而且神经毒性比长春花碱等其它长春花生物碱小。在临床上应用广泛且联合用药方案众多，对非小细胞肺癌和乳腺癌较为有效，给药方便，且品种成熟，市场销势强劲。国内目前上市产品为酒石酸长春瑞滨注射液(商品名为诺维

盖

民诺

)和软胶囊，尚无其他剂型的产品上市。

由于目前上市普通注射液是呈酸性的高渗溶液，在使用时血管刺激性较为严重，对静脉刺激性较大，易发生静脉炎。具体可表现为皮肤色素沉着、血管疼痛或变硬等症状。研究表明，约有1/3的患者会发生以上不良反应，而其中5％的患者反应严重。因此在临床使用时需要快速静滴，30分钟内滴完，化疗前后地塞米松各静脉推注1次，并用大量生理盐水冲洗血管。因而临床应用时存在诸多不便。

纳米乳(Nanoemulsion，NE)是由水相、乳化剂和油相组成的粒径小于0.1μm的O/W型脂质纳米小球给药系统。注射后可选择性蓄积于炎症及肿瘤部位，是抗炎药、抗感染药以及抗肿瘤药物的良好载体。

纳米乳具有以下优点①动力学稳定；②较厚的乳化膜抑制了乳滴间液体膜的稀释或破坏；③与亚微乳相比，纳米乳在血浆中的浓度更高，被单核巨噬细胞系统摄取的更少，更有利于药物的靶向性；④与微乳相比，纳米乳的制备中表面活性剂用量小，毒性更小；⑤与纳米脂质体相比，纳米乳更稳定，制备更易工业化。

纳米乳的制备方法与临床使用的静脉用脂肪乳基本相同，是在后者基础上发展起来的一种新型靶向给药系统。而静脉脂肪乳作为营养剂临床使用已达40多年，安全性好，生产工艺比较成熟，因此这是一种可以产业化的给药技术。

将酒石酸长春瑞滨以纳米乳为给药载体制成注射液，药物被包封在O/W型脂质纳米乳滴粒子的内相，避免了药物和血管内皮细胞的直接接触，降低或避免其血管刺激性。另外药物以纳米小球的形式输送到体内，可以改变药物在体内的分布，达到高度靶向性，并能在一定程度上控制药物的释放速度，从而增加药物的溶解度和吸收速率，提高药效和降低毒性。

国内现有多篇关于长春瑞滨乳剂的专利，乳剂的粒径均是亚微乳的粒径范围(即平均粒径均在100nm以上)，目前尚未见长春瑞滨纳米乳剂的报道。

公开号CN177195A长春瑞滨脂质微球注射液及其制备方法、公开号CN1679576A供静脉用长春花生物碱的稳定水包油乳剂及其制备方法分别使用增溶剂和助溶剂使药物包裹于油相或油水界面膜中。

公开号CN1634058A长春瑞滨的乳剂和冻干乳剂，发明一种冻干产品，尽管冻干乳是乳剂领域中的研究热点，但目前尚未解决冻干产品复溶稳定性问题。

本发明制备的纳米乳注射剂，平均粒径小于100nm，与上述发明相比，本发明既能减小长春瑞滨注射液的用药刺激性，又可以通过简单的制备工艺使长春瑞滨扩散到油水界面膜中，提高长春瑞滨在产品中的浓度，同时具有更高的靶向性。

发明内容

本发明的目的就是克服原有长春花生物碱注射液的临床刺激性、降低毒性，提供一种安全、有效、稳定的纳米乳剂注射液；本发明的另一目的就是针对现有技术不足，提供一种新的方法制备乳剂，可解决原有乳剂制备过程中活性成分在油相溶解慢或是难溶解等问题。

本发明涉及长春花生物碱纳米乳剂注射液及其制备方法。

本发明提供的注射液是含有长春花生物碱或其盐、注射用油、表面活性剂和水的稳定的水包油型乳剂注射液，其中乳剂中乳滴的平均粒径小于100nm。

本发明所述的长春花生物碱是提取或合成、半合成的长春花生物碱，所述的盐是长春花生物碱与药学上可用的酸反应得到的盐。长春花生物碱类包括但不局限于长春瑞滨、长春碱、长春新碱、长春地辛、异长春碱；长春花生物碱盐类包括但不局限于酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐；优选长春瑞滨或长春瑞滨的酒石酸盐。长春花生物碱的用量范围占所述纳米乳剂注射液的0.05％-5％(w/v)。

本发明所述的注射用油选自矿物油、植物油、动物油或合成油的一种或几种。所述的植物油包括大豆油、红花油、玉米油、椰子油、蓖麻油、鸦胆子油、棕榈油、中链脂肪酸甘油三酯、花生油、棉籽油或其混合物；所述的动物油包括鱼油、鲸蜡油或其混合物。注射用油的用量范围占所述纳米乳剂注射液的2％-30％(w/v)。

本发明所述的表面活性剂选自磷脂、非离子型表面活性剂或其混合物；磷脂选自卵磷脂、豆磷脂或其混合物，优选蛋黄卵磷脂；所述的非离子表面活性剂优选聚氧乙烯蓖麻油，吐温-80、泊洛沙姆188；聚乙二醇类非离子表面活性剂优选聚乙二醇硬脂酸酯15、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯。表面活性剂用量范围占所述纳米乳剂注射液的1％-20％(w/v)。

本发明所述的纳米乳剂注射液，其特征在于：该注射液还可含有金属螯合剂。所述的金属螯合剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠盐、乙二胺四乙酸二钙盐或其混合物；优选乙二胺四乙酸二钠盐。金属螯合剂用量范围占所述纳米乳剂注射液的0％-0.5％(w/v)。

本发明提供的注射液还可含有抗氧剂，所述的抗氧剂包括水溶性抗氧剂和油溶性抗氧剂，水溶性抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸钠、L-半胱氨酸或其混合物，优选亚硫酸钠；油溶性抗氧剂为α-生育酚、α-醋酸生育酚、α-生育酚琥珀酸酯其混合物，优选维生素E。抗氧剂用量范围占所述纳米乳剂注射液的0％-1％(w/v)。

本发明提供的注射液还可含有渗透压调节剂。所述的渗透压调节剂是甘油、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、氯化钠或其混合物；优选甘油。渗透压调节剂用量范围占所述纳米乳剂注射液的0％-5％(w/v)。

本发明提供的注射液还可含有稳定剂。所述的稳定剂是油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、去氧胆酸、去氧胆酸钠或其混合物；优选油酸钠。稳定剂用量范围占所述纳米乳剂注射液的0％-1.5％(w/v)，可以调节体系的电荷，提高制剂稳定性。

本发明还提供了一种新的制备长春花生物碱纳米乳剂注射液的方法，该方法包括以下步骤：

在惰性气体保护下，将注射用油搅拌均匀成油相；

将表面活性剂加入适量的注射用水中，搅拌均匀成水相；

在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

向初乳中加入长春花生物碱或其盐；

调节pH值4～9，继续加入水定容至全量，充分搅拌或经高压均质机匀化至乳滴平均粒径在100nm以下。

该方法进一步包括：

在惰性气体保护下，将注射用油、油溶性抗氧剂搅拌均匀成油相；

将水溶性抗氧剂、金属螯合剂、稳定剂和表面活性剂加入适量的注射用水中，搅拌均匀成水相；

在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

向初乳中加入长春花生物碱或其盐；

调节pH值4～9，继续加入水定容至全量，充分搅拌或经高压均质机匀化至乳滴平均粒径在100nm以下。

与现有技术相比，本发明有益效果为：

1.减小产品刺激性

纳米乳外观呈透明或略带乳光的半透明状，纳米乳黏度低，一般较接近水，注射给药时更能减少静脉刺激性。

2.降低毒性

恶心呕吐是化疗药物最常见的不良反应，部分病人反应严重，以致化疗难以进行，多数病人在化疗期间均有食欲降低情况，甚至有的病人无法进食，增加了病人的痛苦，影响治疗。长春瑞滨作为抗肿瘤药亦存在此不良反应。本发明产品由于具有和脂肪乳相近的处方组分，因而能为机体提供必需的能量，维持正常细胞结构，提高患者临床耐受性。

本品粒径小于100nm，与普通乳剂相比更能降低毒性。

3.工艺简单

本发明产品采用高压均质法后制备出空白纳米乳，由于粒径小于100nm，乳滴高度分散，药物加入该体系后，由于在油水两相间有较大的溶解性能差异，高度分散的乳滴又具有足够大的表面积使长春瑞滨能够迅速扩散到界面膜处，从而提高产品包封率。

4.制剂稳定性高

纳米乳粒径均匀，一般在10～100nm，是热力学稳定体系，可以长期放置且离心不分层，因而与普通乳剂相比，更能提高制剂稳定性。

附图说明

图1显示本发明长春花生物碱纳米乳剂注射液的粒径分布。

图2显示本发明长春花生物碱纳米乳剂注射液的形态图。

图3显示本发明长春花生物碱纳米乳剂注射液的配伍稳定性研究结果。

图4显示本发明长春花生物碱纳米乳剂注射液的刺激性实验结果。

具体实施方式

以下通过实施进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

长春瑞滨      0.05％

大豆油        2％

蛋黄卵磷脂    1％

在惰性气体保护下，将注射用大豆油20g搅拌均匀成油相，另将蛋黄卵磷脂10g加入600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入长春瑞滨0.5g、调节pH值8.0，加水定容至1000ml，充分搅拌，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例2

制备方法同实施例1，不同之处在于长春瑞滨的用量为50g、大豆油的用量为300g、蛋黄卵磷脂用量为200g。

实施例3

酒石酸长春瑞滨    0.05％

大豆油            5％

蛋黄卵磷脂        5％

葡萄糖            5％

油酸钠            0.1％

在惰性气体保护下，将注射用大豆油50g搅拌均匀成油相，另将蛋黄卵磷脂50g、葡萄糖50g和油酸钠1g加入600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入酒石酸长春瑞滨0.5g、调节pH值4.0，加水定容至1000ml，充分搅拌，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例4

制备方法同实施例3，不同之处在于油酸钠的用量为15g。

实施例5

酒石酸长春瑞滨    0.1％

大豆油            10％

大豆磷脂          10％

甘油              2.5％

油酸钠            0.3％

EDTA-2Na          0.5％

在惰性气体保护下，将注射用大豆油100g搅拌均匀成油相，另将大豆磷脂100g、甘油25g、油酸钠3g和EDTA-2Na 5g加入600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入酒石酸长春瑞滨1g、调节pH值5.0，加水定容至1000ml，充分搅拌，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例6

酒石酸长春瑞滨            0.2％

大豆油                    10％

蛋黄卵磷脂                3％

聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯  3％

甘油                      2.5％

油酸钠                    0.3％

EDTA-2Na                  0.01％

抗坏血酸                  1％

在惰性气体保护下，将注射用大豆油100g搅拌均匀成油相，另将蛋黄卵磷脂30g、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯30g、甘油25g、油酸钠3g、EDTA-2Na 0.1g和抗坏血酸10g加入600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入酒石酸长春瑞滨2g，调节pH值6.0，加水定容至1000ml，充分搅拌，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例7

酒石酸长春瑞滨        0.5％

中链油                10％

EPC-s                 4％

吐温-80               0.5％

甘油                  2.25％

油酸钠                0.1％

亚硫酸钠              0.2％

维生素E               0.05％

在惰性气体保护下，将注射用中链油100g和维生素E 0.5g搅拌均匀成油相，预热至70℃，另将吐温-805g、亚硫酸钠2g、油酸钠1g和EPC-s 40g加入650ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至70℃，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入酒石酸长春瑞滨5g、调节pH值7.0，加水定容至1000ml，二次高压均质机乳化，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例8

长春瑞滨          0.5％

中链油            5％

蛋黄卵磷脂        4％

聚氧乙烯蓖麻油    3％

甘油              2.5％

油酸钠            0.3％

EDTA-2Na          0.01％

维生素E           0.05％

抗坏血酸          0.1％

在惰性气体保护下，将注射用中链油50g、维生素E 0.5g搅拌均匀成油相，另将蛋黄卵磷脂40g、聚氧乙烯蓖麻油30g、甘油25g、油酸钠3g、EDTA-2Na 0.1g和抗坏血酸1g加入600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入长春瑞滨5g、调节pH值7.5，加水定容至1000ml，充分搅拌，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例9

长春瑞滨    1％

大豆油      7.5％

中链油      7.5％

蛋黄卵磷脂  5％

聚乙二醇硬脂酸酯15    4％

甘油                  2.5％

油酸钠                0.3％

亚硫酸钠              0.2％

EDTA-2Na              0.1％

在惰性气体保护下，将注射用大豆油75g和中链油75g搅拌均匀成油相，预热至75℃；另将蛋黄卵磷脂50g、油酸钠3g、亚硫酸钠2g、甘油25g、EDTA-2Na 1g和聚乙二醇硬脂酸酯1540g加入700ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至75℃；在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入长春瑞滨10g、调节pH值8.0，加水定容至1000ml，充分搅拌；灌装、充氮气、熔封。

实施例10

酒石酸长春瑞滨        5％

大豆油                10％

红花油                5％

蛋黄卵磷脂            12％

泊洛沙姆188           6％

甘油                  2.25％

油酸钠                0.15％

维生素E               0.05％

在惰性气体保护下，将注射用大豆油100g、红花油50g、维生素E0.5g搅拌均匀成油相，预热至80℃；另将蛋黄卵磷脂120g、油酸钠1.5g和泊洛沙姆18860g加入650ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至80℃；在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入酒石酸长春瑞滨50g、调节pH值9.0，加水定容至1000ml，充分搅拌，二次高压均质机乳化，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例11

硫酸长春新碱          2％

中链油             20％

大豆磷脂           10％

聚乙二醇硬脂酸酯15 5％

甘油               2.5％

油酸钠             0.2％

维生素E            0.05％

在惰性气体保护下，将注射用中链油200g、维生素E 0.5g搅拌均匀成油相，预热至60℃；另将大豆磷脂100g、油酸钠2g和聚乙二醇硬脂酸酯1550g加入700ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入硫酸长春新碱20g、调节pH值8.5，加水定容至1000ml，充分搅拌，二次高压均质机乳化，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

实施例12

硫酸长春地辛        0.5％

芝麻油              15％

大豆卵磷脂          10％

泊洛沙姆188         2％

甘油                2.25％

油酸钠              0.1％

维生素E             0.05％

亚硫酸钠            0.1％

在惰性气体保护下，将注射用芝麻油150g、维生素E 0.5g搅拌均匀成油相，另将大豆卵磷脂100g、油酸钠1g、甘油22.5g、无水亚硫酸钠1g、泊洛沙姆18820g加入700ml注射用水中，搅拌均匀成水相，在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳，加入硫酸长春地辛5g、调节pH值9.0，加水定容至1000ml，充分搅拌，二次高压均质机乳化，取样镜检，至平均粒径在100nm以下；灌装、充氮气、熔封。

根据本发明制得的成品(按实施例1)的理化特征：

【成品性状】本品为类白色乳状液体。

【粒径分布】取本品适量，以水为介质，稀释50倍，用动态光散射法进行测定。测定波长λ＝633nm，测定角度173°，温度25℃。粒径大小以强度径(Intensity)数据表示。粒径分布图见图1和图2，平均粒径为87.99。

【形态学考察】吸取样品100μL，加注射用水20ml，摇匀。将铜网置于干净滤纸上，向铜网上滴加样品稀释液，用2％磷钨酸染色，待干燥后在JEM2010透射电镜(日本电子株式会社)下观察本品。形态图见图3。经透射电镜观察，酒石酸长春瑞滨纳米乳剂形态均为球形或近球形。

【流变学考察】取本品用5％葡萄糖注射液稀释后DV--III流变仪测定粘度(Brookfield公司)，粘度值为1.20cP。

【包封率测定】药物含量测定方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(YMC-pack ODS-A，150mm×4.6mm×5μm，YMC)，以0.2％癸烷磺酸钠甲醇溶液-50mMNaH₂PO₄缓冲溶液(磷酸调pH4.20)61∶39为流动相，检测波长267nm；流速：1.0mL/min，；柱温40℃，进样体积20μL。

包封率测定方法：取本品1支，精密吸取2.0mL置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，用8010型超滤器(MILLIPORE公司)超滤，弃去初滤液，取续滤液为供试品溶液。分别吸取供试品溶液、对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算制剂水相中药物含量，记为W；另按含量测定项下方法计算本品的药物总含量，记为W₀。按下式计算样品的包封率。

测定结果：本品包封率为99.66±0.04％(n＝3)。

【配伍稳定性】为满足临床用药需求，本品常用氯化钠注射液(0.9％)和葡萄糖注射液(5％)进行稀释。分别用上述稀释介质稀释5倍、10倍，分别于0、1、2、4、6h取样测定粒径，结果见图4。由结果可知：本品经0.9％氯化钠注射液和5％葡萄糖注射液稀释后6h内粒径无明显变化。

【刺激性实验】取健康家兔3只。将家兔固定于兔箱中，75％酒精消毒，缓慢耳缘静脉注射，左侧耳朵分别注射纳米乳剂注射液，右侧耳朵注射0.9％氯化钠注射液作为阴性对照，连续注射3次，每日1次，均以蠕动泵恒速推注，速度为2ml/min。给药后观察制剂对家兔血管的刺激，并观察注射部位有无瘀血、水肿和组织坏死等现象。最后一次给药后24小时后处死家兔，取注射部位组织10％甲醛固定，每例兔耳于注射点至向心方向1.3、2.6、4.0cm处分别切下0.5cm宽的标本。常规石蜡包埋、用德国生产的Leica RM2135型切片机制备2～3μm厚切片，苏木素伊红染色，用Leica DME显微镜观察。长春瑞滨纳米乳连续三次注射后，组织病理学检查均未见明显异常，说明该制剂静脉注射对血管无明显刺激性，结果见图5。

【溶血性实验】取家兔一只，自心脏采血约20ml置于三角烧瓶中，用竹签搅拌去除纤维蛋白，然后将血液移入刻度离心管内，加入生理盐水约5ml，混匀后2500转/分离心5分钟，去除上清液，再加生理盐水混匀离心，如此反复洗涤多次，至上清液无色透明，将所得红细胞按其容积，用生理盐水稀释成2％的红细胞悬液(2％RBC)。取试管7支，按表1的顺序加入下列各种溶液，轻轻摇匀，37℃水浴保温4小时，判断并记录结果，见下表。

结论：长春瑞滨纳米乳注射液对家兔红细胞无明显溶血和凝集作用。

注：“-”表示无溶血；“+”表示全溶血。

Claims (16)

1.一种长春花生物碱纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射液是含有长春花生物碱或其盐、注射用油、表面活性剂和注射用水的水包油型乳剂注射液，其中乳剂中乳滴的平均粒径小于100nm。

2.根据权利要求1所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的长春花生物碱是提取或合成、半合成的长春花生物碱，所述的盐是长春花生物碱与药学上可用的酸反应得到的盐。

3.根据权利要求2所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的长春花生物碱类选自长春瑞滨、长春碱、长春新碱、长春地辛或异长春碱，优选为长春瑞滨；所述的盐选自酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、硫酸盐、苹果酸盐、盐酸盐或磷酸盐，优选为酒石酸盐。

4.根据权利要求1所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射用油选自矿物油、植物油、动物油或合成油中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的植物油选自大豆油、红花油、玉米油、椰子油、蓖麻油、鸦胆子油、棕榈油、中链脂肪酸甘油三酯、花生油、棉籽油或其混合物；所述的动物油选自鱼油、鲸蜡油或其混合物。

6.根据权利要求1所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的表面活性剂选自磷脂、非离子型表面活性剂或其混合物。

7.根据权利要求6所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的磷脂选自卵磷脂、豆磷脂或其混合物；所述的非离子表面活性剂选自聚氧乙烯类和聚乙二醇类非离子表面活性剂。

8.根据权利要求7所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的聚氧乙烯类非离子表面活性剂选自吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆188或其混合物；所述的聚乙二醇类非离子表面活性剂选自聚乙二醇硬脂酸酯15、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯或其混合物。

9.根据权利要求1-8任一项所述的纳米乳剂注射液，其特征在于：

所述的长春花生物碱占所述纳米乳剂注射液的0.05％-5w/v％；

所述的注射用油占所述纳米乳剂注射液的2％-30w/v％；

所述的表面活性剂占所述纳米乳剂注射液的1％-20w/v％；且

其余为注射用水。

10.根据权利要求1-9任一项所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射液进一步含有金属螯合剂，所述的金属螯合剂选自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠盐、乙二胺四乙酸二钙盐或其混合物；所述的金属螯合剂占所述纳米乳剂注射液的0％-0.5w/v％。

11.根据权利要求1-10任一项所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射液进一步含有抗氧剂，所述的抗氧剂包括水溶性抗氧剂和油溶性抗氧剂，其中水溶性抗氧剂选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸钠、L-半胱氨酸或其混合物；油溶性抗氧剂选自α-生育酚、α-醋酸生育酚、α-生育酚琥珀酸酯或其混合物；其中所述的抗氧剂占所述纳米乳剂注射液的0％-1w/v％。

12.根据权利要求1-11任一项所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射液进一步含有渗透压调节剂，所述的渗透压调节剂选自甘油、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、氯化钠或其混合物；其中所述的渗透压调节剂占所述纳米乳剂注射液的0％-5w/v％。

13.根据权利要求1-12任一项所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射液进一步含有稳定剂，所述的稳定剂选自油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、去氧胆酸、去氧胆酸钠或其混合物；其中所述的稳定剂占所述纳米乳剂注射液的0％-1.5w/v％。

14.根据权利要求1-13任一项所述的纳米乳剂注射液，其特征在于所述的注射液的pH为4～9。

15.一种制备如权利要求1所述的长春花生物碱纳米乳剂注射液的方法，该方法包括以下步骤：

在惰性气体保护下，将注射用油搅拌均匀成油相；

将表面活性剂加入适量的注射用水中，搅拌均匀成水相；

在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

向初乳中加入长春花生物碱或其盐；

调节pH值4～9，继续加入水定容至全量，充分搅拌或经高压均质机匀化至乳滴平均粒径在100nm以下。

16.根据权利要求15所述的方法，该方法进一步包括：

在惰性气体保护下，将注射用油、油溶性抗氧剂搅拌均匀成油相；

将水溶性抗氧剂、金属螯合剂、稳定剂和表面活性剂加入适量的注射用水中，搅拌均匀成水相；

在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

向初乳中加入长春花生物碱或其盐；

调节pH值4～9，继续加入水定容至全量，充分搅拌或经高压均质机匀化至乳滴平均粒径在100nm以下。

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