CN105567789A - 鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的pcr引物对组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一组鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物及其应用。本发明提供的组合物，由鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本的组合物甲、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的组合物乙和鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本是否为小体鲟的组合物丙组成；组合物甲、组合物乙和组合物丙均独立包装；组合物甲由AGF、ABF、ABRM、DauF和SchF；组合物乙由Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Atr-117、Eu-39、Eu-40、Eu-41、Afu19、Afu22、Afu39、Afu54和Afu68的组成；组合物丙由RutF组成。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域中鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的PCR引物对组合物及其应用。
背景技术
鲟鱼隶属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、辐鳍亚纲(Actinopterygii)、硬鳞总目(Chondrostei)、鲟形目(Acipenseriformes)。鲟鱼类是一种古老的、有重要经济价值的、大型的亚冷水性鱼类。现存的鲟鱼有2科6属27种，其中鲟科(Acipenseridae)有鳇属(Huso)2种、鲟属(Acipenser)18种、铲鲟属(Scaphirhynchus)2种、拟铲鲟属(Pseudoscaphirhynchus)3种，白鲟科(Polyodontidae)有白鲟属(Psephurus)和匙吻鲟属(Polyodon)各1种。
在鲟鱼野生资源日益枯竭的同时，由于其重要的经济价值，市场对鲟鱼产品的需求却逐年增加，因此人工养殖就成为解决鲟鱼资源保护和市场需求间矛盾的唯一方法。但是现存的鲟鱼都是多倍体，彼此间极易进行杂交，鲟形目鱼类种间甚至属间的杂交现象极为普遍，且部分杂交种仍可育，产生三杂交后代，且产生的杂交种很难区分，这为进行鲟鱼种质鉴定造成了极大的困难。而不同种类鲟鱼及其杂交种的生长速度和适应条件各不相同，其经济价值也不尽相同。因此，进行正确的鲟鱼种质鉴定是解决因种质混乱引起的纠纷及提高鲟鱼产业价值的有效途径。
由于目前没有规范的养殖引种制度，且国内外也还没有一套完善的鲟鱼种质鉴定体系，使得鲟鱼种质现状繁杂，极不利于鲟鱼产业的健康发展。为规范鲟鱼贸易以及防止非法捕捞和交易，急需建立一套完整的鲟鱼种质鉴定体系。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质，并且区分鲟鱼的父本和母本。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物，其名称为组合物1，由鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本的组合物甲、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的组合物乙和鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本是否为小体鲟的组合物丙组成；所述组合物甲、所述组合物乙和所述组合物丙均独立包装；
所述组合物甲由名称为AGF的PCR引物对、名称为ABF的PCR引物对、名称为ABRM的PCR引物对、名称为DauF的PCR引物对和名称为SchF的PCR引物对组成；
所述AGF由序列表中序列27和序列28所示的两条单链DNA组成；
所述ABF由序列表中序列27和序列29所示的两条单链DNA组成；
所述ABRM由序列表中序列30和序列29所示的两条单链DNA组成；
所述DauF由序列表中序列27和序列31所示的两条单链DNA组成；
所述SchF由序列表中序列27和序列33所示的两条单链DNA组成；
所述组合物乙由名称分别为Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Atr-117、Eu-39、Eu-40、Eu-41、Afu19、Afu22、Afu39、Afu54和Afu68的组成；
所述Atr-101由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-105由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-107由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-114由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-117由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成；
所述Eu-39由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA组成；
所述Eu-40由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA组成；
所述Eu-41由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA组成；
所述Afu19由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA组成；
所述Afu22由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA组成；
所述Afu39由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA组成；
所述Afu54由序列表中序列23和序列24所示的两条单链DNA组成；
所述Afu68由序列表中序列25和序列26所示的两条单链DNA组成；
所述组合物丙由名称为RutF的PCR引物对组成；所述RutF由序列表中序列27和序列32所示的两条单链DNA组成；
所述鲟鱼母本或所述鲟鱼父本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合，具体可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂或施氏鲟♀×达氏鳇♂。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述组合物甲、所述组合物乙和组合物丙均可独立包装，在不同的步骤中使用。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均可独立包装。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68的单链DNA均可独立包装。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用荧光标记物标记，所述荧光标记物具体可为TAMRA、HEX或FAM。
在本发明的一个实施例中，所述Atr-101由TAMRA标记，所述Atr-105由HEX标记，所述Atr-107由TAMRA标记，所述Atr-114由TAMRA标记，所述Atr-117由TAMRA标记，所述Eu-39由FAM标记，所述Eu-40由HEX标记，所述Eu-41由FAM标记，所述Afu19由FAM标记，所述Afu22由FAM标记，所述Afu39由HEX标记，所述Afu54由FAM标记，所述Afu68由HEX标记。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF和所述SchF这五种引物对可组合在一起组合使用进行多重PCR。这五种引物对单独使用或组合使用时，本申请的鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中这五种引物对的配比没有要求，可以根据待鉴定鲟鱼确定。本申请中，这五种引物对组合在一起使用时，序列表中序列27、序列28、序列29、序列30、序列31和序列33所示的单链DNA的摩尔比为0.65:0.55:0.5:0.5:0.45:0.45。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述RutF的两条单链DNA的配比可以根据待鉴定鲟鱼确定，本申请中所述RutF的两条单链DNA的摩尔比为1：1。
本发明的再一个目的是提供鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物。
本发明所提供的为鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物，其名称为组合物2，为下述B1)-B7)中的任一种组合物：
B1)所述组合物乙与所述RutF；
B2)所述组合物乙与所述AGF；
B3)所述组合物乙与所述ABF；
B4)所述组合物乙与所述ABRM；
B5)所述组合物乙与所述DauF；
B6)所述组合物乙与所述SchF；
B7)所述组合物乙与所述RutF、所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF这六种中的任两种、任三种、任四种或任五种；
所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合，具体可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂或施氏鲟♀×达氏鳇♂。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述组合物乙可独立包装。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均可独立包装。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68的单链DNA均可独立包装。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用荧光标记物标记，所述荧光标记物具体可为TAMRA、HEX或FAM。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述RutF、所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF和所述SchF这六种引物对可单独使用分别进行单独的PCR。使用所述RutF、所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF或所述SchF进行单独的PCR时，这六种引物对中的每个引物对的两条单链DNA的摩尔比为1：1。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF和所述SchF这五种引物对可以单独使用分别进行单独的PCR，也可以组合使用进行多重PCR。这五种引物对单独使用或组合使用时，本申请的鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中这五种引物对的配比没有要求，可以根据待鉴定鲟鱼确定。这五种引物对组合使用的方式有多种，可以是其中任两种引物对组合在一起使用，也可以是任三种引物对组合在一起使用，也可以是任四种引物对组合在一起使用，也可以是五种引物对组合在一起使用。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述组合物乙的两条单链DNA的配比可以根据待鉴定鲟鱼确定，本申请中所述RutF的两条单链DNA的摩尔比为1：1。
本发明的再一个目的是提供鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物，其名称为组合物3，为上述组合物乙；所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述组合物乙的两条单链DNA的配比可以根据待鉴定鲟鱼确定，本申请中所述RutF的两条单链DNA的摩尔比为1：1。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合，具体可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂或施氏鲟♀×达氏鳇♂。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用荧光标记物标记，所述荧光标记物具体可为TAMRA、HEX或FAM。
本发明的再一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的试剂或试剂盒。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的试剂或试剂盒为下述A或B：
A、鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的试剂或试剂盒，含有上述组合物1；所述鲟鱼母本或所述鲟鱼父本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种；
B、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的试剂或试剂盒，含有上述组合物2或组合物3；所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的试剂或试剂盒中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合，具体可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂或施氏鲟♀×达氏鳇♂。
本发明的又一个目的是提供鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的试剂或试剂盒的制备方法。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的试剂或试剂盒的制备方法，包括将上述组合物1、上述组合物2或上述组合物3中各引物对或/和上述组合物1、上述组合物2或上述组合物3中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。
上述方法中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合，具体可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂或施氏鲟♀×达氏鳇♂。
本发明的又一个目的是鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物或鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物在鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质中的应用；所述鲟鱼种质为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟或施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
上述应用中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合。
上述应用中，所述鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质包括鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的母本和鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本。
上述应用中，所述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的母本包括下述S1)或S2)；
S1)选用50℃的退火温度，用所述组合物丙对所述待测鲟鱼的基因组DNA进行PCR扩增，检测得到的PCR产物的大小；根据所述PCR产物大小确定所述待测鲟鱼的母本：如果所述PCR产物中含有190bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为小体鲟或候选为小体鲟，如果所述PCR产物中不含190bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非小体鲟或候选非小体鲟；
S2)检测S1)得到的PCR产物大小，如果所述PCR产物不含有190bp的DNA片段，在同一个PCR反应体系中，选用50℃的退火温度，用所述组合物甲对所述待测鲟鱼的基因组DNA进行PCR扩增,检测得到的PCR产物的大小：如果所述PCR产物中含有420bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为俄罗斯鲟或候选为俄罗斯鲟，如果所述PCR产物中不含420bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非俄罗斯鲟或候选非俄罗斯鲟；如果所述PCR产物中含有215bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为西伯利亚鲟或候选为西伯利亚鲟，如果所述PCR产物中不含215bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非西伯利亚鲟或候选非西伯利亚鲟；如果所述PCR产物中含有182bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为西伯利亚鲟或候选为西伯利亚鲟，如果所述PCR产物中不含182bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非西伯利亚鲟或候选非西伯利亚鲟；如果所述PCR产物中含有439bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为达氏鳇或候选为达氏鳇，如果所述PCR产物中不含439bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非达氏鳇或候选非达氏鳇；如果所述PCR产物中含有254bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为施氏鲟或候选为施氏鲟，如果所述PCR产物中不含254bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非施氏鲟或候选非施氏鲟。
上述应用中，S1)的PCR体系中，10μl反应体系包括：浓度为30ng/μl的待测鲟鱼的基因组DNA1μl，10×PCRbuffer1μl，浓度为25mmol/L的MgCl20.6μl，含有dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mM的4种dNTP混合物1.2μl，浓度为5U/μl的Taq酶0.1μl，浓度为5μM的RutF的两条单链DNA(序列表中序列32的单链DNA和序列表中序列27的单链DNA)各0.3μl，双蒸水5.5μl。所述PCR扩增的循环条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火40s，72℃延伸46s，40个循环；72℃充分延伸8min。
上述应用中，S2)的PCR体系中，10μl反应体系包括：浓度为30ng/μl的待测鲟鱼的基因组DNA1μl，10×PCRbuffer1μl，浓度为25mmol/L的MgCl20.6μl，含有dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mM的4种dNTP混合物1.2μl，浓度为5U/μl的Taq酶0.1μl，浓度为5μM的序列为序列表中序列31的DauF的单链DNA0.55μl,浓度为5μM的序列为序列表中序列29的ABF的单链DNA0.5μl,浓度为5μM的序列为序列表中序列33的SchF的单链DNA0.5μl,浓度为5μM的序列为序列表中序列28的AGF的单链DNA0.45μl,浓度为5μM的序列为序列表中序列30的ABRM的单链DNA0.45μl,浓度为5μM的序列为序列表中序列27的单链DNA0.65μl，双蒸水3μl。所述PCR扩增的循环条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火40s，72℃延伸46s，40个循环；72℃充分延伸8min。
上述应用中，所述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本包括下述步骤S3)和S4)：
S3)为下述A和B：
A、用所述组合物乙中的每个引物对分别对所述待测鲟鱼的基因组DNA进行PCR扩增，收集所有引物对的PCR产物，将所述所有引物对的PCR产物命名为待测鲟鱼PCR产物；
B、用所述组合物乙中的每个引物对分别对参考鲟鱼的基因组DNA进行PCR扩增，收集所有引物对的PCR产物，将所述所有引物对的PCR产物命名为参考鲟鱼PCR产物；
S4)测定所述待测鲟鱼PCR产物的PCR产物序列和所述参考鲟鱼PCR产物的PCR产物序列，根据所述待测鲟鱼的PCR产物序列与所述参考鲟鱼PCR产物的序列的同一性确定待测鲟鱼的亲本；
所述参考鲟鱼为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种中的任一种。
上述应用中，S4)所述的根据所述待测鲟鱼的PCR产物序列与所述参考鲟鱼PCR产物的序列的同一性确定待测鲟鱼的亲本可为对所述待测鲟鱼的PCR产物序列和所述参考鲟鱼PCR产物的序列进行聚类分析，若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的纯种俄罗斯鲟聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲均为俄罗斯鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的纯种西伯利亚鲟聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲均为西伯利亚鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的纯种达氏鳇聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲均为达氏鳇；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的纯种小体鲟聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲均为小体鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的纯种施氏鲟聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲均为施氏鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的俄罗斯鲟与西伯利亚鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为俄罗斯鲟与西伯利亚鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的俄罗斯鲟与达氏鳇的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为俄罗斯鲟与达氏鳇；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的俄罗斯鲟与小体鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为俄罗斯鲟与小体鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的俄罗斯鲟与施氏鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为俄罗斯鲟与施氏鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的西伯利亚鲟与达氏鳇的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为西伯利亚鲟与达氏鳇；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的西伯利亚鲟与小体鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为西伯利亚鲟与小体鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的西伯利亚鲟与施氏鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为西伯利亚鲟与施氏鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的达氏鳇与小体鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为达氏鳇与小体鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的达氏鳇与施氏鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为达氏鳇与施氏鲟；若所述待测鲟鱼的PCR产物序列和作为参考鲟鱼的小体鲟与施氏鲟的杂交种聚为一类，可确定待测鲟鱼的双亲为小体鲟与施氏鲟。
上述应用中，所述组合物乙中的13PCR引物对分为三组：Ⅰ组包括所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Eu-39、所述Afu19、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68。Ⅱ组包括所述Atr-117、所述Eu-40和所述Afu22。Ⅲ组为所述Eu-41。这三组PCR引物对的反应体系见具体实施方式中表3。
具体实施方式中表3中所述dNTPs为含有dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mM的4种dNTP的混合物。所述PCR扩增的条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s，50-65℃退火40s，72℃延伸30s，35个循环；72℃充分延伸8min。
上述应用中，上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Atr-101对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为55℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Atr-105对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为50℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Atr-107对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为57℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Atr-114对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为60℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Atr-117对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0.5mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为55℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Eu-39对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为58℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Eu-40对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0.5mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为61℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Eu-41对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0.25mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为65℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Afu19对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为55℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Afu22对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0.5mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为52℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Afu39对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为55℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Afu54对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为55℃；上述鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本中，所述A中，用所述Afu68对所述待测鲟鱼的基因组DNA在Mg2+浓度为0mM的PCR体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增的退火温度为55℃。
实验证明，本发明的引物对组合物不仅可以鉴定纯种鲟鱼的种质，还可以鉴定鲟鱼的杂交种的种质。本发明的引物对组合物可以鉴定亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟、施氏鲟的鲟鱼。本发明只需要采集少量的鲟鱼鳍条组织即可提取基因组DNA进行鲟鱼种质的鉴定，避免对待测鲟鱼造成较大的损伤和干扰。本发明只需通过采用3％的琼脂糖凝胶电泳和DL2000DNAmarker分析扩增产物条带的有无和长度来判断样品线粒体序列的来源，进而直接确定样品的母本来源，该方法直观、快速、简便且成本低。本发明鉴定鲟鱼种质的方法既可以鉴定纯种杂交鲟也可以鉴定鲟鱼的杂交种，且还可以鉴定鲟鱼杂交种的父本和母本。本发明提供的引物对组合物可用于鲟鱼种质资源多样性分析、遗传多样性分析、家系分析、分子遗传育种等。
附图说明
图1为待测鲟鱼母本的PCR扩增产物的％琼脂糖凝胶电泳鉴定图。其中，M为DL2000marker；泳道1为从群体9、群体10和群体15-18中的所有个体中随机选取的一个个体的PCR扩增产物；泳道2为从群体5、群体6、群体11和群体12中的所有个体中随机选取的一个个体的PCR扩增产物；泳道3为从群体3和、群体4、群体13和群体14中的所有个体中随机选取的一个个体的PCR扩增产物；泳道4为从群体1、群体2、群体19-22中的所有个体中随机选取的一个个体的PCR扩增结果；泳道5为从群体7或群体8中的所有个体中随机选取的一个个体的PCR扩增结果。
图2为不同来源的22个鲟鱼群体基因型的聚类分析图。其中数字表示群体1-22。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
俄罗斯鲟(王吉桥,姜志强,胡红霞.1998,主要养殖鲟鱼的生物学特性.水产科学.17(6):34-38.)公众可从北京市水产科学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
西伯利亚鲟(王吉桥,姜志强,胡红霞.1998,主要养殖鲟鱼的生物学特性.水产科学.17(6):34-38.)公众可从北京市水产科学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
达氏鳇(王吉桥,姜志强,胡红霞.1998,主要养殖鲟鱼的生物学特性.水产科学.17(6):34-38.)公众可从北京市水产科学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
小体鲟(王吉桥,姜志强,胡红霞.1998,主要养殖鲟鱼的生物学特性.水产科学.17(6):34-38.)公众可从北京市水产科学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
施氏鲟(王吉桥,姜志强,胡红霞.1998,主要养殖鲟鱼的生物学特性.水产科学.17(6):34-38.)公众可从北京市水产科学研究所获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
本发明的鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的PCR引物对组合物可以鉴定或辅助鉴定亲本为施氏鲟、小体鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、俄罗斯鲟的鲟鱼，如纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×小体鲟♂、俄罗斯鲟♀×施氏鲟♂、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟♀×俄罗斯鲟♂、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、西伯利亚鲟♀×小体鲟♂、西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂、纯种达氏鳇、达氏鳇♀×俄罗斯鲟♂、达氏鳇♀×西伯利亚鲟♂、达氏鳇♀×小体鲟♂、达氏鳇♀×施氏鲟♂、纯种小体鲟、小体鲟♀×俄罗斯鲟♂、小体鲟♀×西伯利亚鲟♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×施氏鲟♂、纯种施氏鲟、施氏鲟♀×俄罗斯鲟♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×小体鲟♂这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合。具体方法如下：
以鲟鱼的基因组DNA为模板，先利用组合物丙进行针对小体鲟的的单重PCR，根据扩增产物的有无和长度来判断待测鲟鱼样品是否为小体鲟；若鲟鱼的母本非小体鲟，再以母本非小体鲟的每尾鲟鱼的基因组DNA为模板，利用组合物甲进行多重PCR，根据扩增产物的有无和长度来判断待测鲟鱼样品的母本。
以鲟鱼的基因组DNA为模板，利用组合物乙进行多重PCR，根据PCR产物序列与参考鲟鱼PCR产物的序列的同一性确定鲟鱼的双亲亲本，根据上述步骤中确定的鲟鱼的母本，进一步确定该鲟鱼的父本。
下面以施氏鲟、小体鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、俄罗斯鲟、西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂、小体鲟♀×达氏鳇♂、俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂、俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂、施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂、施氏鲟♀×达氏鳇♂为例阐述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的具体方法。
实施例1、鉴定鲟鱼亲本
以表2中已知种质的鲟鱼作为待测鲟鱼，来验证本申请的鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的PCR引物对组合物鉴定鲟鱼种质的可行性。
一、制备鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的PCR引物对组合物
本步骤中的鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物，由鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本的组合物甲、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的组合物乙和鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本是否为小体鲟的组合物丙组成。
组合物甲由名称为AGF的PCR引物对、名称为ABF的PCR引物对、名称为ABRM的PCR引物对、名称为DauF的和名称为SchF的PCR引物对组成；所述AGF由序列表中序列27和序列28所示的两条单链DNA组成；所述ABF由序列表中序列27和序列29所示的两条单链DNA组成；所述ABRM由序列表中序列30和序列29所示的两条单链DNA组成；所述DauF由序列表中序列27和序列31所示的两条单链DNA组成；所述SchF由序列表中序列27和序列33所示的两条单链DNA组成。组合物甲各引物对的PCR产物片段大小见表1。
组合物乙由名称分别为Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Atr-117、Eu-39、Eu-40、Eu-41、Afu19、Afu22、Afu39、Afu54和Afu68的组成；所述Atr-101由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述Atr-105由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述Atr-107由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；所述Atr-114由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；所述Atr-117由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成；所述Eu-39由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA组成；所述Eu-40由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA组成；所述Eu-41由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA组成；所述Afu19由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA组成；所述Afu22由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA组成；所述Afu39由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA组成；所述Afu54由序列表中序列23和序列24所示的两条单链DNA组成；所述Afu68由序列表中序列25和序列26所示的两条单链DNA组成。组合物乙的各引物对均用荧光标记物标记，所述荧光标记物为TAMRA、HEX或FAM：所述Atr-101由TAMRA标记，所述Atr-105由HEX标记，所述Atr-107由TAMRA标记，所述Atr-114由TAMRA标记，所述Atr-117由TAMRA标记，所述Eu-39由FAM标记，所述Eu-40由HEX标记，所述Eu-41由FAM标记，所述Afu19由FAM标记，所述Afu22由FAM标记，所述Afu39由HEX标记，所述Afu54由FAM标记，所述Afu68由HEX标记(见表1)。
组合物丙由名称为RutF的PCR引物对组成；所述RutF由序列表中序列27和序列32所示的两条单链DNA组成。
表1、组合物乙各引物对相关信息
上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述组合物甲、组合物乙和组合物丙均独立包装，且组合物甲、组合物乙和组合物丙中的每种引物对中的两条单链DNA的摩尔比均为1：1。
二、样品采集和基因组DNA的提取
1、样品采集
分别从中国水产科学研究院北京房山鲟鱼基地(五渡鲟鱼养殖基地)和北京市国家淡水渔业工程技术研究中心房山鲟鱼良种场(十渡鲟鱼养殖基地)采集已知种质的鲟鱼尾鳍样品共368个(表2)，剪取的鲟鱼尾鳍鳍条放在2ml无菌离心管中，向无菌离心管中加入95％乙醇，带回实验室放在4℃冰箱备用。
表2、已知种质的鲟鱼和数量样品
2、基因组DNA的提取
基因组DNA的提取方法如下：
(1)取鲟鱼鳍条样品约200mg，将鳍条样品剪碎后置入1.5ml的离心管中；
(2)向离心管中加入500μl的裂解液(裂解液由NaCl、Tris-HCl、EDTA、蛋白酶K、SDS和水组成，其中NaCl、Tris-HCl、EDTA、蛋白酶K、SDS的浓度分别为100mM、10mM、25mM、100μg/ml、0.5g/100mL)，用漩涡振荡器稍微混匀样品与所述裂解液，并置于55℃水浴中保温15-16h，直至裂解液变得澄清，鳍条样品完全裂解，得到裂解液1；
(3)向裂解液1中加入10μlRNA裂解酶(TaKaRa，货号为2158)，于37℃水浴下保温1h，得到裂解液2；
(4)向裂解液2中加入500μl的溶液A(溶液A由苯酚、氯仿和异戊醇组成，其中苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25：24：1)，慢慢旋转混匀，倾斜使得裂解液2与溶液A的接触面积变大，4℃放置10min，于4℃、1000r/min下离心10min；
(5)用扩口吸头吸出上层含有DNA的液相至新的离心管中(注意切勿吸出界面中的蛋白沉淀)，向该液相中加入500μl的溶液B(溶液B由氯仿和异戊醇组成，其中氯仿和异戊醇的体积比为24：1)，慢慢旋转摇匀，倾斜使含有DNA的液相与溶液B的接触面积增大，4℃放置10min，于4℃、10000r/min下离心10min；
(6)重复步骤(5)；
(7)用扩口吸头小心吸取上层含有DNA的液相，向该液相中加入该液相1/10体积(约50μl)的3MNaAc，小心混匀，得到混合溶液1，向混合溶液1中加入混合溶液1的2倍体积(1000μl)的无水乙醇，于-20℃放置2h，然后于12000r/min下离心15min；
(8)弃上清液，得到含有DNA的沉淀，向该沉淀中加入500μl的70％的乙醇，静置1-2min，于12000r/min下离心15min；
(9)重复步骤(8)；
(10)弃上清液，并用200μl的吸头将残留的液体吸出，于超净台中室温干燥(不要太干，否则DNA不容易溶解)，得到鲟鱼DNA；
(11)向鲟鱼DNA中加入50μlTE(pH8.0)(50mlTE溶液的配制方法为：将0.5mL1M的Tris-HCl溶液、0.1mL1M的EDTA溶液和49.4ml无菌双蒸水混合均匀)溶解DNA，得到鲟鱼DNA溶液，4℃暂存。
(12)用琼脂糖凝胶电泳检测鲟鱼DNA的完整度，并使用微量紫外分光光度计(NonodropND2000)检测DNA的总浓度，将各鲟鱼DNA样品用双蒸水稀释成30ng/μl的工作液于4℃保存，将母液-20℃保存备用。
三、鲟鱼亲本的确定
1、鲟鱼母本的确定
以步骤二得到的每个群体中的每尾鲟鱼的基因组DNA为模板，先利用步骤一中制备的组合物丙进行针对小体鲟的的单重PCR，根据扩增产物的有无和长度来判断待测鲟鱼样品是否为小体鲟；若鲟鱼的母本非小体鲟，再以母本非小体鲟的每尾鲟鱼的基因组DNA为模板，利用步骤一中制备的组合物甲进行多重PCR，根据扩增产物的有无和长度来判断待测鲟鱼样品的母本。其中利用组合物丙进行下述步骤1.1的单重PCR，利用组合物甲进行下述步骤1.2的多重PCR。
鲟鱼母本的确定方法如下：如果所述PCR产物中含有190bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为小体鲟或候选为小体鲟，如果所述PCR产物中不含190bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非小体鲟或候选非小体鲟；如果所述PCR产物中含有420bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为俄罗斯鲟或候选为俄罗斯鲟，如果所述PCR产物中不含420bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非俄罗斯鲟或候选非俄罗斯鲟；如果所述PCR产物中含有215bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为西伯利亚鲟或候选为西伯利亚鲟，如果所述PCR产物中不含215bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非西伯利亚鲟或候选非西伯利亚鲟；如果所述PCR产物中含有182bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为西伯利亚鲟或候选为西伯利亚鲟，如果所述PCR产物中不含182bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非西伯利亚鲟或候选非西伯利亚鲟；如果所述PCR产物中含有439bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为达氏鳇或候选为达氏鳇，如果所述PCR产物中不含439bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非达氏鳇或候选非达氏鳇；如果所述PCR产物中含有254bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本为施氏鲟或候选为施氏鲟，如果所述PCR产物中不含254bp的DNA片段，所述待测鲟鱼的母本非施氏鲟或候选非施氏鲟。
1.1利用组合物丙进行单重PCR及鲟鱼母本的确定
10μl反应体系包括：步骤二得到的浓度为30ng/μl的待测鲟鱼个体基因组DNA1μl，10×PCRbuffer1μl，浓度为25mmol/L的MgCl20.6μl，含有dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mM的4种dNTP混合物1.2μl，浓度为5U/μl的Taq酶0.1μl，浓度为5μM的两条单链DNA(序列表中序列32的单链DNA和序列表中序列27的单链DNA)各0.3μl，双蒸水5.5μl。单重PCR扩增的条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火40s，72℃延伸46s，40个循环；72℃充分延伸8min。
将PCR扩增产物经3％的琼脂糖凝胶进行电泳，结果见图1。
结果显示，群体3、群体4、群体13和群体14中的每个个体在针对小体鲟的单重PCR中均扩增出大小为190bp的条带，表明群体3、群体4、群体13和群体14中的每个个体的母本均为小体鲟，而群体1、2、5-12、15-22中的每个个体在针对小体鲟的PCR反应中均没有扩增出大小为190bp的条带，表明群体1、2、5-12、15-22中的每个个体的母本均不是小体鲟。上述这些结果与实际采样情况一致，说明该方法鉴定小体鲟的母本是可行的。
1.2多重PCR及鲟鱼母本的确定
PCR扩增：10μl反应体系包括实施例1中步骤2得到的且母本不是小体鲟的群体1、2、5-12、15-22的浓度为30ng/μl的待测鲟鱼的基因组DNA1μl、10×PCRbuffer1μl、浓度为25mmol/L的MgCl20.6μl、含有dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mM的4种dNTP混合物1.2μl、浓度为5U/μl的Taq酶0.1μl、浓度为5μM的序列为序列表中序列31的DauF的单链DNA0.55μl、浓度为5μM的序列为序列表中序列29的ABF的单链DNA0.5μl、浓度为5μM的序列为序列表中序列33的SchF的单链DNA0.5μl、浓度为5μM的序列为序列表中序列28的AGF的单链DNA0.45μl、浓度为5μM的序列为序列表中序列30的ABRM的单链DNA0.45μl、浓度为5μM的序列为序列表中序列27的单链DNA0.65μl、双蒸水3μl。PCR扩增的条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火40s，72℃延伸46s，40个循环；72℃充分延伸8min。
将PCR扩增产物经3％的琼脂糖凝胶进行电泳，结果见图1。
结果显示，群体1、群体2、群体19-22中的每个个体在多重PCR反应中均扩增出大小为254bp的条带，表明群体1、群体2、群体19-22中的每个个体的母本均为施氏鲟；群体7、8中的每个个体在多重PCR反应中均扩增出大小为439bp的条带，表明群体6、7中的每个个体的母本均为达氏鳇；群体9、群体10、和群体15-18中的每个个体在多重PCR反应中均扩增出大小为420bp的条带，表明群体9、群体10和群体15-18中的每个个体的母本均为俄罗斯鲟；群体5、群体6、群体11和群体12中的每个个体在多重PCR反应中均扩增出大小为215bp和/或182bp的条带，表明群体5、群体6、群体11和群体12中的每个个体的母本均为西伯利亚鲟。上述这些结果与实际采样情况一致，说明该方法鉴定鲟鱼的母本是可行的。
2、鲟鱼父本的确定
群体1-22父本的确定方法为：以鲟鱼的基因组DNA为模板，利用组合物乙进行多重PCR，根据群体1-22的PCR产物序列与参考鲟鱼PCR产物的序列的同一性确定群体1-22的双亲亲本，根据步骤三的2中确定的群体1-22的母本，进一步确定群体1-22的父本。
2.1PCR扩增
根据组合物乙中13PCR引物对反应体系的不同，将其分为三组：Ⅰ组包括Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Eu-39、Afu19、Afu39、Afu54和Afu68。Ⅱ组包括Atr-117、Eu-40和Afu22。Ⅲ组为Eu-41。这三组PCR引物对的反应体系见表3。
分别以待测鲟鱼个体基因组DNA和参考鲟鱼的基因组DNA为模板，选用50-65℃的退火温度及组合物乙中的十三种PCR引物对进行单重PCR扩增，得到群体1-22的PCR产物和参考鲟鱼的PCR产物，具体的PCR扩增体系见表3。其中，群体1-22的基因组DNA为步骤二得到的浓度为30ng/μl的待测鲟鱼的基因组DNA；dNTPs为含有dATP、dTTP、dCTP和dGTP各2.5mM的4种dNTP的混合物。PCR扩增的条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s，50-65℃退火40s，72℃延伸30s，35个循环；72℃充分延伸8min。
表3、PCR反应体系
2.2鲟鱼父本的确定
将上述群体1-22的PCR产物和参考鲟鱼的PCR产物用ABIPRISM3730型遗传分析仪(AppliedBiosystems)对进行测定，并用GeneMapper软件(AppliedBiosystems)对基因型进行判读。根据微卫星基因型数据使用软件SPAGeDi计算遗传距离，再使用软件Phylip根据遗传距离进行聚类分析，结果如图2。
当以群体1的施氏鲟为参考鲟鱼、群体2为待测鲟鱼时，群体2和群体1聚为一类，可以确定群体2的两个亲本均为施氏鲟，鉴于步骤1中已确定群体2的母本为施氏鲟，则可确定群体2的父本为施氏鲟；当以群体2的施氏鲟为参考鲟鱼、群体1为待测鲟鱼时，群体1和群体2聚为一类，可以确定群体1的两个亲本均为施氏鲟，鉴于步骤1中已确定群体1的母本为施氏鲟，则可确定群体1的父本为施氏鲟。
当以群体3的小体鲟为参考鲟鱼、群体4为待测鲟鱼时，群体4和群体3聚为一类，可以确定群体4的两个亲本均为小体鲟，鉴于步骤1中已确定群体4的母本为小体鲟，则可确定群体4的父本为小体鲟；当以群体4的小体鲟为参考鲟鱼、群体3为待测鲟鱼时，群体3和群体4聚为一类，可以确定群体3的两个亲本均为小体鲟，鉴于步骤1中已确定群体3的母本为小体鲟，则可确定群体3的父本为小体鲟。
当以群体5的西伯利亚鲟为参考鲟鱼、群体6为待测鲟鱼时，群体6和群体5聚为一类，可以确定群体6的两个亲本均为西伯利亚鲟，鉴于步骤1中已确定群体6的母本为西伯利亚鲟，则可确定群体6的父本为西伯利亚鲟；当以群体6的西伯利亚鲟为参考鲟鱼、群体5为待测鲟鱼时，群体5和群体6聚为一类，可以确定群体5的两个亲本均为西伯利亚鲟，鉴于步骤1中已确定群体5的母本为西伯利亚鲟，则可确定群体5的父本为西伯利亚鲟。
当以群体7的达氏鳇为参考鲟鱼、群体8为待测鲟鱼时，群体8和群体7聚为一类，可以确定群体8的两个亲本均为达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体8的母本为达氏鳇，则可确定群体8的父本为达氏鳇；当以群体8的达氏鳇为参考鲟鱼、群体7为待测鲟鱼时，群体7和群体8聚为一类，可以确定群体7的两个亲本均为达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体7的母本为达氏鳇，则可确定群体7的父本为达氏鳇。
当以群体9的俄罗斯鲟为参考鲟鱼、群体10为待测鲟鱼时，群体10和群体9聚为一类，可以确定群体10的两个亲本均为俄罗斯鲟，鉴于步骤1中已确定群体10的母本为俄罗斯鲟，则可确定群体10的父本为俄罗斯鲟；当以群体10的俄罗斯鲟为参考鲟鱼、群体9为待测鲟鱼时，群体9和群体10聚为一类，可以确定群体9的两个亲本均为俄罗斯鲟，鉴于步骤1中已确定群体9的母本为俄罗斯鲟，则可确定群体9的父本为俄罗斯鲟。
当以群体11的西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体12为待测鲟鱼时，群体12和群体11聚为一类，可以确定群体12的两个亲本为西伯利亚鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体12的母本为西伯利亚鲟，则可确定群体12的父本为达氏鳇；当以群体12的西伯利亚鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体11为待测鲟鱼时，群体11和群体12聚为一类，可以确定群体11的两个亲本为西伯利亚鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体11的母本为西伯利亚鲟，则可确定群体11的父本为达氏鳇。
当以群体13的小体鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体14为待测鲟鱼时，群体14和群体13聚为一类，可以确定群体14的两个亲本为小体鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体14的母本为小体鲟，则可确定群体14的父本为达氏鳇；当以群体14的小体鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体13为待测鲟鱼时，群体13和群体14聚为一类，可以确定群体13的两个亲本为小体鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体13的母本为小体鲟，则可确定群体13的父本为达氏鳇。
当以群体15的俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂为参考鲟鱼、群体16为待测鲟鱼时，群体16和群体15聚为一类，可以确定群体16的两个亲本为俄罗斯鲟和西伯利亚鲟，鉴于步骤1中已确定群体16的母本为俄罗斯鲟，则可确定群体16的父本为西伯利亚鲟；当以群体16的俄罗斯鲟♀×西伯利亚鲟♂为参考鲟鱼、群体15为待测鲟鱼时，群体15和群体16聚为一类，可以确定群体15的两个亲本为俄罗斯鲟和西伯利亚鲟，鉴于步骤1中已确定群体15的母本为俄罗斯鲟，则可确定群体15的父本为西伯利亚鲟。
当以群体17的俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体18为待测鲟鱼时，群体18和群体17聚为一类，可以确定群体18的两个亲本为俄罗斯鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体18的母本为俄罗斯鲟，则可确定群体18的父本为达氏鳇；当以群体18的俄罗斯鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体17为待测鲟鱼时，群体17和群体18聚为一类，可以确定群体17的两个亲本为俄罗斯鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体17的母本为俄罗斯鲟，则可确定群体17的父本为达氏鳇。
当以群体19的施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂为参考鲟鱼、群体20为待测鲟鱼时，群体20和群体19聚为一类，可以确定群体20的两个亲本为施氏鲟和西伯利亚鲟，鉴于步骤1中已确定群体20的母本为施氏鲟，则可确定群体20的父本为西伯利亚鲟；当以群体20的施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂为参考鲟鱼、群体19为待测鲟鱼时，群体19和群体20聚为一类，可以确定群体19的两个亲本为施氏鲟和西伯利亚鲟，鉴于步骤1中已确定群体19的母本为施氏鲟，则可确定群体19的父本为西伯利亚鲟。
当以群体21的施氏鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体22为待测鲟鱼时，群体22和群体21聚为一类，可以确定群体22的两个亲本为施氏鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体22的母本为施氏鲟，则可确定群体22的父本为达氏鳇；当以群体22的施氏鲟♀×达氏鳇♂为参考鲟鱼、群体21为待测鲟鱼时，群体21和群体22聚为一类，可以确定群体21的两个亲本为施氏鲟和达氏鳇，鉴于步骤1中已确定群体21的母本为施氏鲟，则可确定群体21的父本为达氏鳇。
实验结果表明，本申请中的鉴定鲟鱼种质的方法鉴定出的鲟鱼的母本与父本与实际采样情况一致，且与其来源无关，说明该方法鉴定待测鲟鱼亲本的方法是可行的，因此该方法可以用来鉴定亲本为施氏鲟、小体鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇或俄罗斯鲟的鲟鱼的种质。
Claims (9)
1.鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物，其名称为组合物1，由鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本的组合物甲、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的组合物乙和鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本是否为小体鲟的组合物丙组成；所述组合物甲、所述组合物乙和所述组合物丙均独立包装；
所述组合物甲由名称为AGF的PCR引物对、名称为ABF的PCR引物对、名称为ABRM的PCR引物对、名称为DauF的PCR引物对和名称为SchF的PCR引物对组成；
所述AGF由序列表中序列27和序列28所示的两条单链DNA组成；
所述ABF由序列表中序列27和序列29所示的两条单链DNA组成；
所述ABRM由序列表中序列30和序列29所示的两条单链DNA组成；
所述DauF由序列表中序列27和序列31所示的两条单链DNA组成；
所述SchF由序列表中序列27和序列33所示的两条单链DNA组成；
所述组合物乙由名称分别为Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Atr-117、Eu-39、Eu-40、Eu-41、Afu19、Afu22、Afu39、Afu54和Afu68的PCR引物对组成；
所述Atr-101由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-105由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-107由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-114由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；
所述Atr-117由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成；
所述Eu-39由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA组成；
所述Eu-40由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA组成；
所述Eu-41由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA组成；
所述Afu19由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA组成；
所述Afu22由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA组成；
所述Afu39由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA组成；
所述Afu54由序列表中序列23和序列24所示的两条单链DNA组成；
所述Afu68由序列表中序列25和序列26所示的两条单链DNA组成；
所述组合物丙由名称为RutF的PCR引物对组成；所述RutF由序列表中序列27和序列32所示的两条单链DNA组成；
所述鲟鱼母本或所述鲟鱼父本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
2.根据权利要求1中所述的PCR引物对组合物，其特征在于：所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用荧光标记物标记。
3.鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物，其名称为组合物2，为下述B1)-B7)中的任一种组合物：
B1)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述RutF；
B2)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述AGF；
B3)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述ABF；
B4)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述ABRM；
B5)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述DauF；
B6)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述SchF；
B7)权利要求1或2中所述组合物乙与权利要求1中所述RutF、所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF这六种中的任两种、任三种、任四种或任五种；
所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的任一种。
4.鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物，其名称为组合物3，为权利要求1或2中所述的PCR引物对组合物中的所述组合物乙；所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
5.根据权利要求4中所述的PCR引物对组合物，其特征在于：所述Atr-101、所述Atr-105、所述Atr-107、所述Atr-114、所述Atr-117、所述Eu-39、所述Eu-40、所述Eu-41、所述Afu19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用荧光标记物标记。
6.鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的试剂或试剂盒，为A或B：
A、鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的试剂或试剂盒，含有权利要求1或2中所述的鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的PCR引物对组合物；所述鲟鱼母本或所述鲟鱼父本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种；
B、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的试剂或试剂盒，含有权利要求3或4中所述的鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物；所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
7.权利要求1或2或3或4中任一所述的PCR引物对组合物或权利要求5中所述的试剂或试剂盒的制备方法，包括将权利要求1或2或3或4所述的PCR引物对组合物中各引物对或/和各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。
8.权利要求1或2或3或4中任一所述的PCR引物对组合物或权利要求5中所述的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质中的应用；所述鲟鱼种质为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
9.根据权利要求8中所述的应用，其特征在于：所述鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质包括鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的母本和/或鉴定或辅助鉴定待测鲟鱼的父本。
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105861642A (zh) * | 2015-02-11 | 2016-08-17 | 华大(镇江)水产科技产业有限公司 | 一种鲟鱼性别差异性分子标记及其应用 |
| CN106498086A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-03-15 | 青岛农业大学 | 紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法 |
| CN108531620A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-09-14 | 四川农业大学 | 鉴定施氏鲟、西伯利亚鲟及其杂交后代的引物及方法 |
| CN108660220A (zh) * | 2018-05-21 | 2018-10-16 | 中国水产科学研究院 | 一组鲟鱼snp分子标记、鲟鱼制种评估方法及遗传评估方法 |
| CN108660223A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-10-16 | 四川农业大学 | 西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法 |
| CN108660224A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-10-16 | 四川农业大学 | 鉴定西伯利亚鲟、施氏鲟及其杂交后代的引物及方法 |
| CN109337962A (zh) * | 2018-08-24 | 2019-02-15 | 暨南大学 | 基于荧光定量pcr检测鲟鱼的引物和探针及其试剂盒与方法 |
| CN109337986A (zh) * | 2018-09-06 | 2019-02-15 | 西安理工大学 | 小体鲟个体鉴定的微卫星标记引物及个体识别的方法 |
| CN110951892A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-04-03 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 用于几种鲟鱼物种鉴定的ssr引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用 |
| CN111471775A (zh) * | 2019-01-24 | 2020-07-31 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 用于鲟鱼性别鉴定的特异性dna片段ssm2及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2332463C1 (ru) * | 2007-01-25 | 2008-08-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" (ФГУП "ВНИРО") | Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них |
-
2014
- 2014-10-08 CN CN201410524751.3A patent/CN105567789B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2332463C1 (ru) * | 2007-01-25 | 2008-08-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" (ФГУП "ВНИРО") | Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 《NCBI GENBANK》 * |
| 《TRANSACTIONS OF THE AMERICAN FISHERIES SOCIETY》 * |
| 《中国水产科学》 * |
| 《生物技术通报》 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105861642B (zh) * | 2015-02-11 | 2019-06-07 | 华大(镇江)水产科技产业有限公司 | 一种史氏鲟性别差异性分子标记及检测史氏鲟性别的方法 |
| CN105861642A (zh) * | 2015-02-11 | 2016-08-17 | 华大(镇江)水产科技产业有限公司 | 一种鲟鱼性别差异性分子标记及其应用 |
| CN106498086A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-03-15 | 青岛农业大学 | 紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法 |
| CN106498086B (zh) * | 2016-12-30 | 2019-10-29 | 青岛农业大学 | 紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法 |
| CN108660220B (zh) * | 2018-05-21 | 2021-07-13 | 中国水产科学研究院 | 一组鲟鱼snp分子标记、鲟鱼制种评估方法及遗传评估方法 |
| CN108660220A (zh) * | 2018-05-21 | 2018-10-16 | 中国水产科学研究院 | 一组鲟鱼snp分子标记、鲟鱼制种评估方法及遗传评估方法 |
| CN108660223A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-10-16 | 四川农业大学 | 西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法 |
| CN108660224A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-10-16 | 四川农业大学 | 鉴定西伯利亚鲟、施氏鲟及其杂交后代的引物及方法 |
| CN108531620A (zh) * | 2018-06-29 | 2018-09-14 | 四川农业大学 | 鉴定施氏鲟、西伯利亚鲟及其杂交后代的引物及方法 |
| CN108531620B (zh) * | 2018-06-29 | 2021-10-29 | 四川农业大学 | 鉴定施氏鲟、西伯利亚鲟及其杂交后代的引物及方法 |
| CN108660223B (zh) * | 2018-06-29 | 2021-10-29 | 四川农业大学 | 西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法 |
| CN109337962A (zh) * | 2018-08-24 | 2019-02-15 | 暨南大学 | 基于荧光定量pcr检测鲟鱼的引物和探针及其试剂盒与方法 |
| CN109337986A (zh) * | 2018-09-06 | 2019-02-15 | 西安理工大学 | 小体鲟个体鉴定的微卫星标记引物及个体识别的方法 |
| CN109337986B (zh) * | 2018-09-06 | 2021-11-16 | 西安理工大学 | 小体鲟个体鉴定的微卫星标记引物及个体识别的方法 |
| CN111471775A (zh) * | 2019-01-24 | 2020-07-31 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 用于鲟鱼性别鉴定的特异性dna片段ssm2及应用 |
| CN111471775B (zh) * | 2019-01-24 | 2021-04-30 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 用于鲟鱼性别鉴定的特异性dna片段ssm2及应用 |
| CN110951892A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-04-03 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 用于几种鲟鱼物种鉴定的ssr引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用 |
| CN110951892B (zh) * | 2019-11-25 | 2023-05-26 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 用于几种鲟鱼物种鉴定的ssr引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |