RU2332463C1 - Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них - Google Patents
Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них Download PDFInfo
- Publication number
- RU2332463C1 RU2332463C1 RU2007102654/13A RU2007102654A RU2332463C1 RU 2332463 C1 RU2332463 C1 RU 2332463C1 RU 2007102654/13 A RU2007102654/13 A RU 2007102654/13A RU 2007102654 A RU2007102654 A RU 2007102654A RU 2332463 C1 RU2332463 C1 RU 2332463C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sturgeon
- species
- determining
- primers
- pcr
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб со следующими нуклеотидными последовательностями:
обратный праймер AHR (TATACACCATTATCTCTATGT) для определения видовой принадлежности к осетровым рыбам и прямые праймеры:
AGF (GCACAGACTATGTGGTATCCAGAA) для определения видовой принадлежности к русскому осетру,
ABF (CAGATGCCAGTAACAGGCTGA) для определения видовой принадлежности к русскому и сибирскому осетрам,
ABRM (TGTCTGTCTAGAACATAtG) для определения видовой принадлежности к сибирскому осетру, HusF (TATCTATTACCTGCGAGCAGGCTG) для определения видовой принадлежности к белуге,
DauF (CCTCTTATGTACGCGGTGT) для определения видовой принадлежности к калуге,
SchF (TGTGGGGTCACGGACTTTACAG) для определения видовой принадлежности к амурскому осетру
NudF (TGTCTTTTCTGAAGGAGCTTTGC) для определения видовой принадлежности к шипу,
RutF (GGGAATAACCGTTAATTTGG) для определения видовой принадлежности к стерляди,
и SteF (GGGGTTCTTGGCATGTTGTGAGCG) для определения видовой принадлежности к севрюге.
Изобретение может быть использовано для детекции наличия митохондриальной ДНК одного из восьми видов осетровых рыб. 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к рыбной промышленности и молекулярной биологии, в частности к способам индентификации видовой принадлежности осетровых и получаемой из них икры и другой продукции. К настоящему времени были предложены следующие методики определения видовой принадлежности осетровых и продуктов их переработки на основании анализа митохондриальной ДНК.
Сайт специфический ПЦР на основании полиморфизма по гену цитохромоксидазы субъединицы В (CytB). Метод впервые предложен ДеСале и Бирштейном (DeSalle и Birstein. 1996), US Patent No. 5766144. July 28, 1998. European Patent No. 087690. August 28, 2002. Метод основан на использовании видоспецифичных праймеров по гену CytB. Достоинство предложенного метода - охватывает все виды осетровых мира (27 видов).
Недостатки. Низкая сайтоспецифичность праймеров, что вызывает высокий процент ложных срабатываний.
Небольшая выборка особей каждого из видов (для некоторых видов праймеры составлялись на основании последовательности одного экземпляра) и связанная с этим высокий процент ложнопозитивного сигнала.
Не позволяет дифференцировать сибирского и русского осетров (несущего «baerii-like» гаплотип).
Сиквенирование участка гена CytB. Метод предложен Файном и коллегами (National Fish and Wildlife Forensics Laboratory, Ashland), опубликован только в Интернете. Предполагает дорогостоящее сиквенирование каждого изучаемого образца. В настоящее время не актуален.
Рестрикционный анализ амплифицированного участка мтДНК (метод PCR-RFLP) предложен Людвигом и соавторами (Ludwig и др., 2002). Включает последовательное применение рестрикционных ферментов для идентификации видоспецифичных участков ПЦР-продукта с гена CytB. Достоинство: высокая воспроизводимость результатов. Недостатки: требует трудоемкой и дорогостоящей процедуры, включающей до 4-х реакций рестрикции и соответствующее количество визуализации продуктов рестриции методом электрофореза. Не позволяет дифференцировать сибирского и русского осетров (несущего «baerii-like» гаплотип).
Технической задачей заявленного изобретения является расширение спектра видоспецифических праймеров, позволяющих детекцию наличия митохондриальной ДНК видов осетровых рыб, обитающих на территории РФ.
Поставленная задача достигается набором олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них, причем олигонуклеотидный праймер выбирают со следующими нуклеотидными последовательностями:
Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них, причем олигонуклеотидный праймер выбирают со следующими нуклеотидными последовательностями: обратный праймер AHR (TATACACCATTATCTCTATGT) для определения видовой принадлежности к осетровым рыбам, и прямые праймеры:
AGF (GCACAGACTATGTGGTATCCAGAA) для определения видовой принадлежности к русскому осетру,
ABF (CAGATGCCAGTAACAGGCTGA) для определения видовой принадлежности к русскому ("baerii-like" мтДНА гаплотип) и сибирскому осетрам,
ABRM (TGTCTGTCTAGAACATAtG) для определения видовой принадлежности к сибирскому осетру, HusF (TATCTATTACCTGCGAGCAGGCTG) для определения видовой принадлежности к белуге,
DauF (CCTCTTATGTACGCGGTGT) для принадлежности к калуге,
SchF (TGTGGGGTCACGGACTTTACAG) для принадлежности к амурскому осетру
NudF (TGTCTTTTCTGAAGGAGCTTTGC) для определения видовой принадлежности к шипу,
RutF (GGGAATAACCGTTAATTTGG) для определения видовой принадлежности к стерляди,
SteF (GGGGTTCTTGGCATGTTGTGAGCG) для определения видовой принадлежности к севрюге.
В результате большого количества последовательностей регулярного участка митохондриальной ДНК восьми основных видов осетровых рыб (русский, сибирский, амурский осетры, белуга, калуга, шип, стерлядь и севрюга) был создан набор видоспецифических праймеров, позволяющих детекцию наличия митохондриальной ДНК. Анализироваться могут как образцы ткани осетровых рыб (образцы плавника, мускулатуры, печени и т.д.), так и икры и других продуктов, получаемых из осетровых рыб, например балычная продукция.
Метод ПЦР-индентификации осетровых рыб включает выделение ДНК, проведение ПЦР и визуализацию продуктов ПЦР на агарозном геле.
Выведение ДНК.
Выделение ДНК может проводится любым общепринятым методом. Нами в работе применялось главным образом метод солевой экстракции (Aljanabi S М & Martinez I 1997. Universal and rapid salt-extraction of high quality gnomic DNA for PCR-based techniques. Nucleic Acids Research. 25 (20): 4692-4693) и выделение с помощью фенольного метода (Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. 480 с.), а также на сорбентсодержащих колонках (Sigma). При выделении ДНК из икры перед лизированием необходимо удалить оболочку икринки, чтобы избежать последующее ингибирование ПЦР реакции полисахаридами яйцевой оболочки.
Проведение ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Все ПЦР-реакции проводились в объеме 25 мкл при следующих условиях:
1х Taq-буфер (Силекс, Москва, состав: (10х) 700 мM Трис-HCl, рН 8.6/25°С, 166 мM (NH4)2SO4, 25 мM MgCl2, 2.5 мМ каждого dNTP (Диалат, Москва), 2,5-5 пикоМ праймеров (праймеры согласно табл. 1 и разбираемым ниже примерам), 2,8 мкл Креазол-глицерин (3,5 мM крезоловый красный, 50% водный раствор глицерина), 2,5U Taq-полимеразы (Силекс-М) и 2 мкл экстракта ДНК, воды (milliQ) до 25 мкл).
ПЦР реакция проводилась при следующих параметрах:
Предварительный отжиг при 95°С - 2 мин.
Отжиг 92°С - 20 сек.
Отжиг 57°С - 30 сек.
Синтез 72°С - 30 сек.
Всего 35 циклов.
Окончательный синтез 72°С 10 мин.
Получаемые в ходе реакции видоспецифичные ампликоны (продукты ПЦР) имеют следующие размеры (Табл.1, чертеж).
Праймеры разработаны таким образом, что имеется возможность постановки мультиплекной ПЦР-реакции, т.е. с добавлением более двух праймеров в реакционную смесь. Однако подбор условий ПЦР реакции и концентрации каждого из праймеров должен проводиться нВ каждой лаборатории самостоятельно. Нами рутинно используется набор для мультиплексной реакции на определение русского и сибирского осетров (AGF, ABF, ABRM, AHR) в пропорции 1:2:1:1 и тех же параметрах амплификации, что и для одиночных реакций.
Визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле.
Продукт ПЦР наносится на 2% агарозный гель (0,5х ТВЕ) и разгоняется 30 мин при напряжении 15 В/см. Определение видового состава проводится по наличию амплификата в реакции с праймерами, специфичными для данного вида. В реакциях с другими праймерами ПЦР продукт должен отсутствовать. Допускается нанесение в одну лунку продукт всех реакций данной особи. В этом случае видовая принадлежность определяется по длине ПЦР продукта. Для удобства определения вида в процессе тестирования была составлена смесь из ПЦР-продуктов всех возможных длин, получаемых в процессе реакции (138, 190, 215, 253, 266, 329, 374, 420 и 429 п.н.). Смесь ПЦР-продуктов наносится на агарозный гель одновременно с тестируемыми образцами и является реперным маркером молекулярной массы, позволяющим визуально идентифицировать результаты тестирования (см. чертеж).
Примеры использования набора олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них.
Пример 1. Подтверждение видовой принадлежности образца ткани, заявленной как русский осетр.
1. Выделяем ДНК из образца ткани солевым методом (Aljanabi and Martinez 1997) и ставим ПЦР 25 мкл при следующих условиях:
265 мкл 10х Taq-буфер (состав: 10х: 700 мM Трис-HCl, рН 8.6 / 25°С, 166 мM (NH4)2SO4, 25 мM MgCl2 Силекс, Москва), 2.5 мМ каждого dNTP (Диалат, Москва), 2,5 пМ праймеров AHR, AGF, и ABRM каждого, 10 пМ праймера ABF, 2,8 мкл Креазол-глицерин (3,5 мM крезоловый красный, 50% водный раствор глицерина), 2,5U Taq-полимеразы (Силекс-М) и 2 мкл экстракта ДНК, воды (milliQ) до 25 мкл).
ПЦР реакция проводилась при следующих параметрах:
Предварительный отжиг при 95°С - 2 мин.
Отжиг 92°С - 20 сек.
Отжиг 57°С - 30 сек.
Синтез 72°С - 30 сек.
Всего 35 циклов.
Окончательный синтез 72°С - 10 мин.
По окончании синтеза наносим на 2% агарозный гель 10 мкл реакционной смеси (0.5хТВЕ), а также маркер молекулярной массы и проводим электрофорез при напряжении 15 В/см в течение 30 минут.
Присутствие на электрофореграмме одного ПЦР-продукта длиной 420 п.н. (как на дорожке 2 чертежа) свидетельствует, что изучаемый образец взят от особи русского осетра (A. gueldenstaedtii) с типичным гаплотипом. Присутствие продукта длиной только 215 п.н. (как на дорожке 3 чертежа) свидетельствует, что изучаемый образец взят от особи русского осетра (A. gueldenstaedtii) с гаплотипом "baeri-like". Присутствие на геле двух ПЦР-продуктов (215 и 138 п.н., дорожка 4 чертежа) говорит о том, что взятый образец принадлежит не русскому (A. gueldenstaedtii), а сибирскому осетру (А. baerii). Отсутствие ПЦР продукта может указывать как на то, что ДНК в образце деградирована (требуется проведение контроля чистоты, концентрации и фрагментной составляющей ДНК экстракта), так и на то, что образец принадлежит другим видам осетровых (проверка с другими праймерами из предлагаемого набора) или не принадлежит к осетровым.
Пример 2. Подтверждение видовой принадлежности образца ткани, заявленной как сибирский осетр (A. baerii).
Выделение ДНК, постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере. Два ПЦР-продукта длиной 138 и 213 п.н. (как на дорожке 4 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к сибирскому осетру (A. baerii)
Пример 3. Подтверждение видовой принадлежности образца ткани, заявленной как шип (A. nudiventris).
Выделение ДНК, постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров AHR и NudF. Продукт длиной 331 п.н. (как на дорожке 8 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к шипу (A. nudiventris).
Пример 4. Подтверждение видовой принадлежности образца ткани, заявленной как стерлядь (A. rutenus).
Выделение ДНК, постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров AHR и RutF. Продукт длиной 190 п.н. (как на дорожке 5 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к стерляди (A. rutenus).
Пример 5. Подтверждение видовой принадлежности образца ткани, заявленной как калуга (Huso dauricus).
Выделение ДНК, постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров AHR и DauF. Продукт длиной 438 п.н. (как на дорожке 10 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к калуге (Huso dauricus).
Пример 6. Подтверждение видовой принадлежности образца ткани, заявленной как амурский осетр (A. schrenkii).
Выделение ДНК, постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров AHR и SchF. Продукт длиной 246 п.н. (как на дорожке 10 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к амурскому осетру (A. schrenkii).
Пример 7. Подтверждение видовой принадлежности образца пищевой икры, заявленной как икра севрюги (A. stellatus).
Выделение ДНК проводится согласно протоколу выделения солевым методом (Aljanabi and Martmez 1997) со следующей модификацией: икринка помещается в лизирующий буфер, раздавливается стерильным наконечником, и оболочка икринки извлекается из лизирующего р-ра. Постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров AHR и SteF. Продукт длиной 266 п.н. (как на дорожке 7 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к севрюге (A. stellatus).
Пример 8. Подтверждение видовой принадлежности образца продукта переработки осетровых, заявленной как балык из филе белуги (Huso huso)
Выделение ДНК, постановка ПЦР и визуализация продуктов ПЦР на агарозном геле проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров AHR и HusF. Продукт длиной 375 п.н. (как на дорожке 8 чертежа) указывает на видовую принадлежность изученного образца к белуге (Huso huso)
Пример 9. Определение видовой принадлежности образца ткани осетровых рыб неизвестного вида.
Выделение ДНК как в предыдущем примере. Выделенная ДНК служит матрицей для 6 ПЦР реакций: на определение русского и сибирского осетров (праймеры AHR, ABF, AGF, ABRM), амурского осетра (праймеры AHR и SchF), стерляди (праймеры AHR и RutF), севрюги (праймеры AHR и SteF), шипа (праймеры AHR и NudF), Калуги (праймеры AHR и DauF), белуги (праймеры AHR и HusF). Продукты всех ПЦР наносятся на смежные дорожки агарозного геля. В зависимости от того, в какой из реакций образовался ПЦР продукт, делается заключение о видовой принадлежности изучаемого образца. При использовании маркера молекулярных масс (в диапазоне 100-500 п.н.) возможно нанесение смеси всех ПЦР продуктов в одну дорожку геля. В этом случае определяется длина ПЦР продукта и в соответствии с табл.1 делается заключение о видовой принадлежности изучаемого образца.
Пример 10. Определение видовой принадлежности образца ткани осетровых рыб неизвестного вида, хранившегося не в оптимальных условиях и содержащего сильно деградированную ДНК (с использованием метода «гнездового ПЦР»).
Выделение ДНК как в предыдущем примере. ПЦР-диагностика проводится в два этапа методом «гнездового ПЦР» (nested PCR). На первом этапе проводиться амплификация участка митохондриальной ДНК большего размера, чем используется в тесте (с «наружных» праймеров). На втором этапе используется предлагаемый набор диагностических праймеров. Первый ПЦР проводится как в предыдущем примере, однако вместо указанных выше праймеров в реакционную смесь добавляется по 5 пМ праймеров DL651 (ATCTTAACATCTTCAGTG) и AHR3 (CATACCATAATGTTTCATCTACC).
ПЦР реакция проводилась при следующих параметрах:
Предварительный отжиг при 95°С - 2 мин.
Отжиг 92°С - 20 сек.
Отжиг 52°С - 30 сек.
Синтез 72°С - 30 сек.
Всего 35 циклов.
Окончательный синтез 72°С 10 мин.
Второй цикл ПЦР реакций проводится как в примере 9, но вместо экстракта ДНК в качестве матрицы используется 1 мкл продукта первой ПЦР реакции. Визуализация и заключение о видовом составе проводиться как в примере 9.
| Таблица 1. | ||||
| Последовательности праймеров используемые для видовой идентификации и характеристика получаемого ПЦР-продукта | ||||
| Название | Последовательность | Используется с | Длина продукта | Видоспецифичность |
| AHR | TATACACCATTATCTCTATGT | AHR | Все виды | |
| AGF | GCACAGACTATGTGGTATCCAGAA | AHR | 420 | русский |
| ABF | CAGATGCCAGTAACAGGCTGA | AHR | 215 | Русский (baerii-like) и сибирский |
| ABRM | TGTCTGTCTAGAACATATG | ABF | 138 | сибирский |
| HusF | TATCTATTACCTGCGAGCAGGCTG | AHR | 374 | белуга |
| DauF | CCTCTTATGTACGCGGTGT | AHR | 439 | калуга |
| NudF | TGTCTTTTCTGAAGGAGCTTTGC | AHR | 329 | шип |
| RutF | GGGAATAACCGTTAATTTGG | AHR | 190 | стерлядь |
| SteF | GGGGTTCTTGGCATGTTGTGAGCG | AHR | 266 | севрюга |
| SchF | TGTGGGGTCACGGACTTTACAG | AHR | 254 | амурский осетр |
Claims (1)
- Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности восьми видов осетровых рыб и продукции из них, причем олигонуклеотидный праймер выбирают со следующими нуклеотидными последовательностями:обратный праймер AHR (TATACACCATTATCTCTATGT) для определения видовой принадлежности к осетровым рыбам и прямые праймеры:AGF (GCACAGACTATGTGGTATCCAGAA) для определения видовой принадлежности к русскому осетру,ABF (CAGATGCCAGTAACAGGCTGA) для определения видовой принадлежности к русскому ("baerii-like" мтДНА гаплотип) и сибирскому осетрам,ABRM (TGTCTGTCTAGAACATAtG) для определения видовой принадлежности к сибирскому осетру, HusF (TATCTATTACCTGCGAGCAGGCTG) для определения видовой принадлежности к белуге,DauF (CCTCTTATGTACGCGGTGT) для определения видовой принадлежности к калуге,SchF (TGTGGGGTCACGGACTTTACAG) для определения видовой принадлежности к амурскому осетру,NudF (TGTCTTTTCTGAAGGAGCTTTGC) для определения видовойпринадлежности к шипу,RutF (GGGAATAACCGTTAATTTGG) для определения видовой принадлежности к стерляди иSteF (GGGGTTCTTGGCATGTTGTGAGCG) для определения видовой принадлежности к севрюге.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007102654/13A RU2332463C1 (ru) | 2007-01-25 | 2007-01-25 | Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007102654/13A RU2332463C1 (ru) | 2007-01-25 | 2007-01-25 | Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2332463C1 true RU2332463C1 (ru) | 2008-08-27 |
Family
ID=46274498
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007102654/13A RU2332463C1 (ru) | 2007-01-25 | 2007-01-25 | Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2332463C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105567789A (zh) * | 2014-10-08 | 2016-05-11 | 北京市水产科学研究所 | 鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的pcr引物对组合物及其应用 |
| RU2769226C1 (ru) * | 2021-09-14 | 2022-03-29 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ") | Набор олигонуклеотидов для полуколичественной оценки содержания днк курицы в мясной продукции методом пцр в режиме реального времени |
-
2007
- 2007-01-25 RU RU2007102654/13A patent/RU2332463C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DOUKAKIS P., BIRSTEIN V.J., RUBAN G.I., DESALLE R. Molecular genetic analysis among subspecies of two Eurasian sturgeon species, Acipenser baerii and A. stellatus. Mol Ecol. 1999 Dec; 8(12 Suppl 1):S117-27. BIRSTEIN V.J., DESALLE R. Molecular phylogeny of Acipenserinae. Mol Phylogenet Evol. 1998 Feb; 9(1):141-55. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105567789A (zh) * | 2014-10-08 | 2016-05-11 | 北京市水产科学研究所 | 鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的pcr引物对组合物及其应用 |
| CN105567789B (zh) * | 2014-10-08 | 2018-12-25 | 北京市水产科学研究所 | 鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的pcr引物对组合物及其应用 |
| RU2769226C1 (ru) * | 2021-09-14 | 2022-03-29 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ") | Набор олигонуклеотидов для полуколичественной оценки содержания днк курицы в мясной продукции методом пцр в режиме реального времени |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI425093B (zh) | Method for Extracting Bursaphelenchus xylophilus from Wood Tablets, LAMP Primer of Bursaphelenchus xylophilus and Method for Detecting Bursaphelenchus xylophilus from Wood | |
| CN108796131B (zh) | 可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光rt-lamp检测组、试剂盒及其应用 | |
| CN108103240A (zh) | 对虾传染性肌肉坏死病毒（imnv）的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
| Dąbrowska et al. | The use of a one-step PCR method for the identification of Microsporum canis and Trichophyton mentagrophytes infection of pets | |
| Wozney et al. | Real-time PCR detection and quantification of elephantid DNA: Species identification for highly processed samples associated with the ivory trade | |
| CN107828915A (zh) | 虾黄头病毒（yhv）的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
| Nunes et al. | Taenia saginata: differential diagnosis of human taeniasis by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism assay | |
| CN107988427A (zh) | 对虾肝胰腺细小病毒（hpv）的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
| RU2332463C1 (ru) | Набор олигонуклеотидных праймеров для определения видовой принадлежности осетровых рыб и продукции из них | |
| CN112322768B (zh) | 一种沙棘枝干枯萎病诊断及病原菌的快速rpa检测方法 | |
| RU2573937C1 (ru) | НАБОР СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ВОЛОДУШКИ МНОГОЖИЛЬЧАТОЙ (Bupleurum multinerve DC.) | |
| CN108950043B (zh) | 一种溺死相关浮游生物复合扩增检测体系及试剂盒 | |
| CN107385057B (zh) | 检测霍乱弧菌的rpa-iac引物及方法 | |
| CN110894532A (zh) | 细菌性败血症（fbs）的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
| Huang et al. | Identification of species in commercial frozen shrimp meat in Taiwan | |
| WO2017209599A1 (en) | Method and kit for simultaneous and rapid detection of prawn viruses | |
| KR101846952B1 (ko) | 리스테리아 모노사이토제니스, 장출혈성 대장균, 가스괴저균의 동시 검출을 위한 프라이머 세트 및 이를 포함하는 중합효소연쇄반응 키트 | |
| Short et al. | Denaturing gradient gel electrophoresis resolves virus sequences amplified with degenerate primers | |
| TWI658048B (zh) | 檢測美人魚發光桿菌殺魚亞種之特異性引子及其使用方法 | |
| KR102348237B1 (ko) | 소나무재선충 검출을 위한 Recombinase Polymerase Amplification (RPA)용 프라이머 및 이의 용도 | |
| CN110894549A (zh) | 流行性造血器官坏死病毒（ehnv）的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
| KR101954747B1 (ko) | 다중 중합효소 연쇄반응을 이용한 비브리오 분지군 동시 검출용 조성물 | |
| KR20200048622A (ko) | 박과 작물 바이러스 검출용 프라이머 세트 및 이를 이용한 박과 작물 바이러스병 진단방법 | |
| KR100639834B1 (ko) | 파이토퓨쏘라 인페스탄스의 ａ1 교배형 균주 검출용ｄｎａ 분자표지인자 | |
| Nikunj et al. | An application of loop mediated iso-thermal amplification technology in forensic science. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20151019 |