CN105505928B - 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法 - Google Patents

一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105505928B
CN105505928B CN201610079591.5A CN201610079591A CN105505928B CN 105505928 B CN105505928 B CN 105505928B CN 201610079591 A CN201610079591 A CN 201610079591A CN 105505928 B CN105505928 B CN 105505928B
Authority
CN
China
Prior art keywords
zhi
st3kzr
st3kzf
specific primer
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610079591.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105505928A (zh
Inventor
王慧中
冯尚国
姜梦莹
焦凯丽
史钰军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Meixin Holding Co.,Ltd.
Original Assignee
Hangzhou Kexing Biochem Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Kexing Biochem Co Ltd filed Critical Hangzhou Kexing Biochem Co Ltd
Priority to CN201610079591.5A priority Critical patent/CN105505928B/zh
Publication of CN105505928A publication Critical patent/CN105505928A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105505928B publication Critical patent/CN105505928B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法。本发明鉴别苦蘵的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于鉴别苦蘵的特异性引物上游序列ST3KZF：如SEQ ID NO.2所示；下游序列ST3KZR：如SEQ ID NO.3所示。利用特异性引物ST3KZF/ST3KZR，通过常规PCR方法来鉴别苦蘵。本发明样品用量少，仅需少量样品就可以完成整个操作；准确、灵敏度高，ST3KZF/ST3KZR为苦蘵特异性扩增引物，若为其他酸浆属植物种类，为阴性反应；方法简便，采用PCR技术进行检测，耗时短，3～5小时即可完成。

Description

一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法
技术领域
本发明属于利用分子生物学方法鉴别苦蘵的技术领域，涉及一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物及其方法。
背景技术
苦蘵(Physalis angulata L.)，为茄科(Solanaceae)酸浆属(Physalis)一年生草本植物，分布于世界热带与亚热带地区，常生于海拔500～1500米。在我国主要分布于华东、华中、华南及西南等地。作为传统药材，几个世纪以来，苦蘵以果、根或全草入药，可用于多种疾病的治疗，早在秦汉时期的《尔雅》中就有记载，很多中药材地方志中均有对其描述。其性味苦、寒，主治咽喉肿痛、腮腺炎、急慢性气管炎、肺脓疡、痢疾、小便不利和外用治脓泡疮等。现代医学研究表明苦蘵主要有醉茄内酯、酸浆苦素、黄酮、生物碱及甾醇等化学成分，其中酸浆苦素和谷甾醇具有多种体内外的抗癌活性，对于宫颈癌和皮肤癌都具有明显疗效。另外，苦蘵果实中的多糖对超氧阴离子自由基和二苯代苦味自由基起抗氧化作用，苦蘵提取液具有抗菌消炎、降血糖、降血脂等疗效。
苦蘵与小酸浆P.minima、酸浆P.alkekengi及毛酸浆P.pubescens等其他酸浆属植物的形态学特征非常相似(包括茎、叶、花及果实等特征)，因此，利用传统形态学分类方法很难将苦蘵与其他酸浆属相似植物快速准确的鉴别开。所以，在过去，将其他酸浆属植物误认为苦蘵进行使用的情况经常发生，这为苦蘵药材资源的安全使用和保护带来了困难。
随着生物科学的发展，DNA分子标记技术弥补和克服了传统鉴别方法的一些缺陷和难题，已经成为了植物辅助鉴别的重要手段。本申请人运用目标起始密码子多态(startcodon targeted Polymorphism,SCoT)分子标记方法，对苦蘵及其他一些酸浆属植物进行DNA指纹图谱研究，从中筛选出苦蘵特异性DNA片段，通过TA克隆、测序等方法，设计发明了特异性引物，应用于苦蘵的鉴定，为有效的鉴别和保护苦蘵药材资源提供有效的分子技术依据。
发明内容
本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供了一种鉴别苦蘵的核苷酸序列。
本发明用于鉴别苦蘵的特征性核苷酸序列来源于SCoT通用引物3(5’-CAACAATGGCTACCACCG-3’)扩增所得的苦蘵特异性DNA片段，具体序列为：
CAACAATGGCTACCACCGGAGCTCCTAACAGGTCGGGAGGGAAAACTAAGGCGCACCTCGCAATACCGCACAACAAGTCCCAACCATCGATAGCCCCACCTAGGCGAGAAATATCAGGATCAACCTAGCAAGTGCTACGTTATCTAACCTCTACAGGATATAAATAGTAGCAGTAATAACGCCATCCCTCGGCCCCACATGGCCTGCTGGGAGAAAACACAGCTCGAACAGCCCTACTACGCCATTACCGGGCCCCGAACAGCACAAGAAGGGAGTAAATAACATAATATAATAGGTACTCGACCTATAATCCCCTCCCACACGAACAGCCGCGCTGTCGTAAGTCCTACAACAGTCCAATCTAAAGTAAAGACAGAGCGTAGCCTACCTCGACGTAGAACAGCAGAAAAGCTAGCCAAAATGAGCTCCCAAGGCTCGAACTATCACGAACAGACTCCGAACTCTCTGAAACTATCAAATATAGATACTACCCTTCAACATGATTCCGTAGATACCCATATTTCCCTGCCTGGGCTCGGGTCGGAAATGGGTCATGAAAACGAGCCCACGTGTCCGAAACTCAAAAAAAATACAAAAGTTTTGCTAATGCGTCACTCTCGGCTCAATGAACACGTGGTTCGAAATGGAGCTAATATCAACCTCTGAAAGGTCTAGAAAATCTTAAAACAAGTTTAAGCTATATCCGAAAATGCTAAATTCGCGATGAGAAATTGGAATGACTTACCCGTATCGACGAGCAACACCACACGCCTCAAACCCGTTCCAAACAACTCCACAATGCCCACTAAAATCACAGCAAACAGCTCCAATCAAGATATGATCAAAATTCCTCAAAATCCAACTCAAAAACGCCAAATTCTTACCTTGAGGAGCATTATTGGTGGCCTGGTATGAGACGTTCTATTGTGTCTTTTGTGTCTTGTTGTTTGAATTATCAGCAGGTTTAGGCCGAGCACCAGAGACCCGAAGGTGAGCTTCAGAGGCTTCCTATTTCTACGTGGAAATGGGAGCAGATTACTATGGATTTTGTAGTTGGCCTACCCAGGACATCGTAGAGACATGATTCCATTTGGGTTATTATTGATAGGCTGATTAAGTCAGCGCACTTCTTTCCGGTTGATTCGAGTTGGGGAGCTGAGGCTTTAGCCATTCTGTATATTCCGGAGATCGTGAGATTGCATGGGTGCCGACATCTATTATATCTGATAGAGGTATGAAGTTCACCTCGATATTCTGGAGATCAATTCAGCGTGATTTGGGCACCCAGGTGGCCTTGAGCACAGCCTTCCATCCCCAGACTGACGGCCAGTCAGAGCGTACGATCCAGGTGTTGCAGGATATGTTGCGAGCTTGTGTACTGGATTTCGGTGGTAGCCATTGTTG，如SEQ ID NO.1所示；
本发明的第二个目的是提供基于上述鉴别苦蘵的核苷酸序列设计的用于鉴别苦蘵的特异性引物(ST3KZF/ST3KZR)，该特异性引物序列如下：
上游引物ST3KZF：5’-GCACCTCGCAATACCGCACA-3’，如SEQ ID NO.2所示；
下游引物ST3KZR：5’-TCCCCAACTCGAATCAACCG-3’，如SEQ ID NO.3所示。
上述特异性引物(ST3KZF/ST3KZR)，具有极高的专一性，仅与苦蘵发生反应，而不与其他酸浆属植物样品反应。利用该特异性引物通过常规PCR扩增可以快速的对苦蘵进行鉴别。
本发明的第三个目的是提供利用上述特异性引物(ST3KZF/ST3KZR)进行鉴别苦蘵的方法。
本发明采用上述引物组合(ST3KZF/ST3KZR)作为特异性扩增引物，以苦蘵基因组DNA为模板，经PCR扩增，电泳检测，获得清晰的苦蘵特异性条带，实现对苦蘵的快速鉴别。
本发明具有的有益效果：
(1)样品用量少，只需少量样品材料就可以完成整个操作；
(2)准确、灵敏性高，ST3KZF/ST3KZR为苦蘵专一性扩增引物，若为其他酸浆属植物种类，为阴性反应；
(3)方法简便，采用PCR技术进行检测，时间短，3-5小时即可完成。
附图说明
图1是本发明所述的苦蘵的特异性核苷酸序列及对苦蘵特异性引物ST3KZF和ST3KZR的位置图，左侧为5’端，右侧为3’端，其中黑色部分为特异性引物ST3KZF和ST3KZR扩增的序列片段大小及位置；
图2是采用SCoT引物3按照常规PCR方法对酸浆属植物进行PCR反应后的电泳图(箭头所指的条带是苦蘵特有的条带，分子量为1404bp)，其中通道1～4：小酸浆P.minima；5～13：苦蘵P.angulata；14～17：酸浆P.alkekengi；18～20：毛酸浆P.pubescens；M为DNA分子量标准marker DL2000；
图3是利用本发明设计的特异性引物ST3KZF/ST3KZR对酸浆属植物样品进行检测的PCR产物电泳图，其中通道1～4：小酸浆P.minima；5～13：苦蘵P.angulata；14～17：酸浆P.alkekengi；18～20：毛酸浆P.pubescens；M为DNA分子量标准marker DL2000；
具体实施方式
本发明可以从分子水平上较为客观准确的鉴别苦蘵，通过以下实施例对本发明做进一步说明：
实施例1：苦蘵特征性核苷酸序列的制备
1.基因组DNA的提取
剪取酸浆属植物样品(见表1)新鲜叶片100mg放入研钵中，立即加入液氮研磨至粉末，然后使用上海生工生物工程有限公司的UNIQ-10柱式植物基因组DNA抽提试剂盒提取基因组DNA，用0.8％琼脂糖胶对所得DNA进行电泳检测，并用紫外分光光度计检测DNA浓度，稀释至50ng/μl。
表1.发明实验中所用的酸浆属植物样品
2.SCoT–PCR反应，电泳检测
利用SCoT通用引物3(5’-CAACAATGGCTACCACCG-3’)进行PCR扩增，引物由上海生工生物工程有限公司合成，反应体系(总体积20μl)为：10×Buffer 2μl，MgCl2(25mM)2μl，dNTPs(10mM)0.8μl，SCoT引物3(10μM)1μl，0.5μl Taq酶(2U/μl)，1μl模板DNA(50ng/μl)，12.7μl ddH2O。
PCR反应程序为：94℃预变性5min；35个循环(94℃变性50s，51℃退火50s，72℃延伸1.5min)；最后于72℃下延伸10min。
PCR产物电泳结果见图2，箭头标的条带(分子量为1404bp，通道5～13)，是采用SCoT引物3进行PCR扩增时筛选出的苦蘵特征性条带。如图2(图中，通道1～20为来自4种不同酸浆属植物的样品，编号如表1，具体见附图说明；通道M为DNA分子量标准markerDL2000)所示，仅苦蘵(通道5～13)在分子量1404bp位置有条带出现，而其他酸浆属植物在分子量1404bp位置没有条带出现。因此，此条带为苦蘵的特有条带。
3.序列测定
运用SCoT通用引物3进行PCR扩增结束后，用1.5﹪琼脂糖对PCR产物进行凝胶电泳，对只在苦蘵中出现的特异SCoT片段(图2中箭头所指片段)进行切胶，采用PCR产物纯化试剂盒(上海生工)回收纯化所切DNA片段。然后将所纯化的DNA片段连接到PUCm-T载体(上海生工)上，转化到大肠杆菌感受态细胞中，然后送生物公司测序(上海生工)，得到如SEQID NO.1所示的核苷酸组成和排列。
实施例2：苦蘵特异性引物ST3KZF/ST3KZR的制备，PCR扩增，电泳检测
在获得苦蘵特异性核苷酸序列的基础上，利用Primer Primer 5.0软件设计得出ST3KZF/ST3KZR的核苷酸序列(分别为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的)，引物由上海生工生物工程有限公司合成。然后利用设计合成的引物ST3KZF/ST3KZR，对不同酸浆属植物样品(具体见附图说明)进行扩增检测。
PCR反应体系(总体积20μl)为：10×Buffer 2μl，MgCl2(25mM)2μl，dNTPs(10mM)0.8μl，引物ST3KZF(10μM)1μl，引物ST3KZR(10μM)1μl，模板DNA(50ng/μl)1μl，Taq酶(2U/μl)0.5μl，ddH2O 11.7μl。
PCR反应程序为94℃预变性5min；35个循环(94℃变性50s，65℃退火50s，72℃延伸1.5min)；最后于72℃下延伸10min。
PCR产物利用1.5﹪琼脂糖凝胶进行电泳检测，电泳图如图3所示，从图3(图中，通道1～12为来自4种不同酸浆属物种的样品，具体见附图说明；通道M为DNA分子量标准marker DL2000)可以看出，仅苦蘵(通道5～13)能扩增出特异性片段，而其他酸浆属植物种类没有扩增出任何条带，这表明本发明的特异性引物具有极高的专一性，因此可以用于快速的鉴别苦蘵。将苦蘵的特异性片段送去测序，其序列如SEQ ID NO.1的53～1154位碱基所示，其长度为1102bp，具体序列信息见图1。
SEQUENCE LISTING
<110> 杭州科兴生物化工有限公司
<120> 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法
<130> 1
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1404
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
caacaatggc taccaccgga gctcctaaca ggtcgggagg gaaaactaag gcgcacctcg 60
caataccgca caacaagtcc caaccatcga tagccccacc taggcgagaa atatcaggat 120
caacctagca agtgctacgt tatctaacct ctacaggata taaatagtag cagtaataac 180
gccatccctc ggccccacat ggcctgctgg gagaaaacac agctcgaaca gccctactac 240
gccattaccg ggccccgaac agcacaagaa gggagtaaat aacataatat aataggtact 300
cgacctataa tcccctccca cacgaacagc cgcgctgtcg taagtcctac aacagtccaa 360
tctaaagtaa agacagagcg tagcctacct cgacgtagaa cagcagaaaa gctagccaaa 420
atgagctccc aaggctcgaa ctatcacgaa cagactccga actctctgaa actatcaaat 480
atagatacta cccttcaaca tgattccgta gatacccata tttccctgcc tgggctcggg 540
tcggaaatgg gtcatgaaaa cgagcccacg tgtccgaaac tcaaaaaaaa tacaaaagtt 600
ttgctaatgc gtcactctcg gctcaatgaa cacgtggttc gaaatggagc taatatcaac 660
ctctgaaagg tctagaaaat cttaaaacaa gtttaagcta tatccgaaaa tgctaaattc 720
gcgatgagaa attggaatga cttacccgta tcgacgagca acaccacacg cctcaaaccc 780
gttccaaaca actccacaat gcccactaaa atcacagcaa acagctccaa tcaagatatg 840
atcaaaattc ctcaaaatcc aactcaaaaa cgccaaattc ttaccttgag gagcattatt 900
ggtggcctgg tatgagacgt tctattgtgt cttttgtgtc ttgttgtttg aattatcagc 960
aggtttaggc cgagcaccag agacccgaag gtgagcttca gaggcttcct atttctacgt 1020
ggaaatggga gcagattact atggattttg tagttggcct acccaggaca tcgtagagac 1080
atgattccat ttgggttatt attgataggc tgattaagtc agcgcacttc tttccggttg 1140
attcgagttg gggagctgag gctttagcca ttctgtatat tccggagatc gtgagattgc 1200
atgggtgccg acatctatta tatctgatag aggtatgaag ttcacctcga tattctggag 1260
atcaattcag cgtgatttgg gcacccaggt ggccttgagc acagccttcc atccccagac 1320
tgacggccag tcagagcgta cgatccaggt gttgcaggat atgttgcgag cttgtgtact 1380
ggatttcggt ggtagccatt gttg 1404
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
gcacctcgca ataccgcaca 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
tccccaactc gaatcaaccg 20

Claims (3)

1.一种鉴别苦蘵的核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.基于如权利要求1所述的一种鉴别苦蘵的核苷酸序列设计的特异性引物ST3KZF/ST3KZR，其特征在于该特异性引物序列如下：
上游引物ST3KZF如SEQ ID NO：2所示；
下游引物ST3KZR如SEQ ID NO：3所示。
3.一种鉴别苦蘵的方法，其特征在于采用权利要求2所述的特异性引物ST3KZF/ST3KZR作为PCR引物，利用PCR方法鉴别苦蘵，具体步骤按常规PCR方法进行。
CN201610079591.5A 2016-02-04 2016-02-04 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法 Active CN105505928B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610079591.5A CN105505928B (zh) 2016-02-04 2016-02-04 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610079591.5A CN105505928B (zh) 2016-02-04 2016-02-04 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105505928A CN105505928A (zh) 2016-04-20
CN105505928B true CN105505928B (zh) 2018-07-31

Family

ID=55714223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610079591.5A Active CN105505928B (zh) 2016-02-04 2016-02-04 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105505928B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106399557B (zh) * 2016-11-16 2019-04-30 杭州师范大学 毛酸浆的分子特异性标记引物及鉴别方法
CN106480207B (zh) * 2016-11-16 2019-09-20 杭州师范大学 一种鉴别酸浆的核苷酸序列、特异性标记引物和方法
CN106636369B (zh) * 2016-11-29 2020-05-19 杭州师范大学 小酸浆的分子特异性标记引物和检测方法
CN110195123B (zh) * 2019-06-20 2021-09-07 杭州师范大学 基于叶绿体基因组序列开发的苦蘵cpSSR标记引物及其应用
CN111208223B (zh) * 2020-01-13 2023-01-17 浙江大学 心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢物
CN113755635B (zh) * 2021-10-14 2023-09-29 杭州师范大学 一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列、标记引物及鉴别方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102051409A (zh) * 2009-10-29 2011-05-11 中国中医科学院中药研究所 中药黄芪原植物的分子鉴别方法
CN104630326A (zh) * 2013-11-08 2015-05-20 中国中医科学院中药研究所 断肠草鉴别的引物及pcr方法
CN105039584A (zh) * 2015-09-18 2015-11-11 北华大学 西洋参dna检测试剂盒及鉴定方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102051409A (zh) * 2009-10-29 2011-05-11 中国中医科学院中药研究所 中药黄芪原植物的分子鉴别方法
CN104630326A (zh) * 2013-11-08 2015-05-20 中国中医科学院中药研究所 断肠草鉴别的引物及pcr方法
CN105039584A (zh) * 2015-09-18 2015-11-11 北华大学 西洋参dna检测试剂盒及鉴定方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
廖保生.基于DNA条形码技术的中药材溯源系统研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）经济与管理科学辑年期2016/01页码J149-329》.2016, *
淫羊蓬属的系统发育及药用物种的分子鉴定研究;王川易;《中国博士学位论文全文数据库（电子期刊）医药卫生科技辑年期2015/05页码E057-3》;20150515;全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105505928A (zh) 2016-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105505928B (zh) 一种鉴别苦蘵的核苷酸序列、特异性引物和方法
CN103468709B (zh) 霍山石斛的叶绿体基因组及种质鉴定方法
CN108728573B (zh) 一种鉴别铁皮石斛的荧光pcr检测试剂盒及应用
CN111378777A (zh) 用于鉴别生药的引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法
Phoolcharoen et al. Molecular analysis of Vitex species using candidate DNA barcoding and PCR-RFLP of the matK gene for authentication of Vitex glabrata
CN106636369B (zh) 小酸浆的分子特异性标记引物和检测方法
CN103834735B (zh) 一种鉴别铁皮石斛的核苷酸序列、分子探针及其应用
CN110791583B (zh) 一种鉴别狭叶重楼的分子标记及其鉴别方法和应用
Lee et al. Application of the multiplex PCR method for discrimination of Artemisia iwayomogi from other Artemisia herbs
CN106480207B (zh) 一种鉴别酸浆的核苷酸序列、特异性标记引物和方法
CN108950088A (zh) 一种鉴别葡萄卷叶病毒3和葡萄茎痘病毒的双重pcr引物及方法
CN104120170B (zh) 马铃薯早疫病菌检测试剂盒及检测方法
CN101812445B (zh) 一种水稻dna快速提取试剂盒
CN106399557B (zh) 毛酸浆的分子特异性标记引物及鉴别方法
CN108998554B (zh) 鉴别药典中3种药用石斛的荧光pcr检测试剂盒及应用
CN107058559B (zh) 一种植物病原真菌的分子检测方法及试剂盒
CN100547082C (zh) 鉴别黄独性别的引物、片段与方法
CN101812446B (zh) 一种快速提取水稻dna的方法
CN109456967A (zh) 一种大果酸浆的特异性核苷酸序列、标记引物及鉴别方法
CN104531872A (zh) 鉴别重唇石斛和钩状石斛的分子特异性标记引物及方法
KR101326333B1 (ko) 고려인삼 연풍 품종 구별용 ｓｎｐ 프라이머 및 이를 이용한 연풍 품종 구별방법
Jiang et al. Helicase-dependent amplification is effective in distinguishing Asian ginseng from American ginseng
Sun et al. Genetic diversity and hybridization of Pulsatilla tongkangensis based on the nrDNA ITS region sequence
KR101481723B1 (ko) 고려인삼 k-1 품종 선별용 프라이머 세트 및 이를 이용한 k-1 품종 선별방법
CN108998559A (zh) 鉴定齿瓣延胡索的snp标记、等位基因特异性pcr法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220221

Address after: 311400 No. 1, No. 13 Road, Dongzhou industrial functional zone, Dongzhou street, Fuyang District, Hangzhou City, Zhejiang Province

Patentee after: Zhejiang Meixin Holding Co.,Ltd.

Address before: 311401 No. 1, No. 13 Road, Dongzhou industrial functional zone, Fuyang District, Hangzhou City, Zhejiang Province

Patentee before: HANGZHOU KEXING BIOCHEM Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right