CN105494098B - 一种快速繁殖金铁锁种苗的方法 - Google Patents

一种快速繁殖金铁锁种苗的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种快速繁殖金铁锁种苗的方法，包括种籽处理、原球茎诱导、原球茎增殖培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养、壮苗培养，其特征是：金铁锁种籽消毒处理后接种到原球茎诱导培养基培养，形成直径2～3mm的原球茎后，原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中培养，获得大量的直径2～3mm的原球茎，原球茎转接到丛生芽诱导培养基中培养，获得大量的长度1～2mm的从生芽，丛生芽转接到增殖培养基中培养，获得大量的长度为10～20mm的丛生芽，分成单芽转接入壮苗培养基上培养，获得大量的长度为80～100mm的脱毒金铁锁种苗。使用本发明繁殖金铁锁种苗育苗周期短、繁殖系数高、种苗质量好。

Description

一种快速繁殖金铁锁种苗的方法
技术领域
本发明涉及一种快速繁殖金铁锁种苗的方法，特别涉及一种用金铁锁种籽快速繁殖金铁锁种苗的方法。
背景技术
金铁锁（Psammosi lene tunicoi des W.C.Wu etc.y.wu），又名独定子、蜈蚣七、对叶七等、为石竹科金铁锁属植物，是我国西南地区特有的药用植物、金铁锁主要以根入药、临床上常用于治疗类风湿性关节炎等病，金铁锁主要化学成份是三萜、三萜皀苷、环肽以及内酰胺。药理试验表明，金铁锁总皀苷镇痛和抗炎效果明显。过去金铁锁主要是野生繁殖的，但近年来由于金铁锁的需求不断增加，野生植物资源急剧下降，已成为珍稀濒危物种，在《中国植物红皮书》中已被列为国家二级保护植物。
为了满足金铁锁的需求，近年来人们开始采用人工栽培方法种植金铁锁。但常规种子育苗方法一是育苗周期长，二是繁殖系数低，导致生产成本高，发展速度慢。为了解决常规种子育苗存在的问题，有的开始研究用嫩茎组织培养，如中国专利申请CN104255489A公开了“金铁锁带腋芽嫩茎无性快速繁殖技术方法”，但嫩茎组织带有内生菌，组织培养时内生菌将造成组培苗的污染，使成苗率低并且种苗质量差。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足之处，提供一种育苗周期短、繁殖系数高、种苗质量好的金铁锁种苗的繁殖方法。
本发明是这样实现的：包括种籽处理、原球茎诱导、原球茎增殖培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养和壮苗培养步骤，具体如下：
1、种籽处理：选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽，用洗衣粉溶液浸泡20～30min后，用清水冲洗3～5次，再用70%～75%酒精浸泡20～30s后，用无菌水冲洗2～3次，再用0.1%～0.2%HgCl2浸泡6～8min后，用无菌水冲洗5～7次，最后用无菌滤纸吸干水分；
2、原球茎诱导：按步骤1处理的金铁锁种籽接种到原球茎诱导培养基，在昼温18～23℃，夜温15～20℃的温度下暗箱培养8～10天后，萌动膨大的种籽在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1500Lx，昼光照时长10～12h的条件下再培养6～8天，形成直径2～3mm的原球茎，原球茎诱导培养茎为：1/2MS培养+6-BA（芐基腺嘌呤）0.5～1mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂6.1～6.5g/L，pH为5～6；
3、原球茎增殖培养：取步骤2中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养10～15天，获得大量的直径2～3mm的原球茎，原球茎的增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L，pH为5～6；
4、丛生芽诱导：将步骤3中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养30～40天，获得大量的长度1～2mm的从生芽，丛生芽诱导培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；
5、丛生芽增殖培养：将步骤4得到的丛生芽转接到增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养15～25天，获得大量的长度为10～20mm的丛生芽，丛生芽增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；
6、壮苗培养：将步骤5所得到的丛生芽，分成单芽转接入壮苗培养基上培养，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～2000Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养25～35天，获得大量的长度为80～100mm的脱毒金铁锁种苗，壮苗培养基为：1/2MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6。
使用本发明繁殖金铁锁种苗，繁殖系数38以上，繁殖周期为3个月左右，为自然繁殖时间的三分之一，而且金铁锁种苗不带内生菌，培养时不会受内生菌的污染，种苗质量好，成活率高。使用本发明可以降低金铁锁种苗育苗成本，提高金铁锁人工栽培发展速度，满足金铁锁市场需求。
具体实施方式
1、种籽处理：选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽，用洗衣粉溶液浸泡20～30min后，用清水冲洗3～5次，再用70%～75%酒精浸泡20～30s后，用无菌水冲洗2～3次，再用0.1%～0.2%HgCl2浸泡6～8min后，用无菌水冲洗5～7次，最后用无菌滤纸吸干水分；
2、原球茎诱导：按步骤1处理的金铁锁种籽接种于原球茎诱导培养基，在昼温18～23℃，夜温15～20℃的温度下暗箱培养8～10天后，种籽开始萌动膨大，此时调整培养环境，萌动膨大的种籽在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1500Lx，昼光照时长10～12h的条件下培养6～8天，形成直径2～3mm的原球茎，原球茎诱导培养茎为：1/2MS培养+6-BA（芐基腺嘌呤）0.5～1mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂6.1～6.5g/L，pH为5～6；
3、原球茎增殖培养：取步骤2中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养10～15天，获得大量的直径2～3mm的原球茎，原球茎的增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L，pH为5～6；
4、丛生芽诱导：将步骤3中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养，12~20天后可观察到原球茎开始分化芽点，继续培养10天左右，可观察到原球茎开始分叶，30～40天可获得大量的长度1～2mm的从生芽，丛生芽诱导培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；
5、丛生芽增殖培养：将步骤4得到的丛生芽转接到增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养15～25天，获得大量的长度为10～20mm的丛生芽，丛生芽增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；
6、壮苗培养：将步骤5所得到的丛生芽，分成单芽转接入壮苗培养基上培养，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～2000Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养25～35天，获得大量的长度为80～100mm的脱毒金铁锁种苗，壮苗培养基为：1/2MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6。

Claims (1)

1.一种快速繁殖金铁锁种苗的方法，其特征是步骤如下：
（1）种籽处理：选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽，用洗衣粉溶液浸泡20～30min后，用清水冲洗3～5次，再用70%～75%酒精浸泡20～30s后，用无菌水冲洗2～3次，再用0.1%～0.2%HgCl2浸泡6～8min后，用无菌水冲洗5～7次，最后用无菌滤纸吸干水分；
（2）原球茎诱导：按步骤（1）处理的金铁锁种籽接种到原球茎诱导培养基，在昼温18～23℃，夜温15～20℃的温度下暗箱培养8～10天后，萌动膨大的种籽在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1500Lx，昼光照时长10～12h的条件下再培养6～8天，形成直径2～3mm的原球茎，原球茎诱导培养基为：1/2MS培养+6-BA（芐基腺嘌呤）0.5～1mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂6.1～6.5g/L，pH为5～6；
（3）原球茎增殖培养：取步骤（2）中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养10～15天，获得大量的直径2～3mm的原球茎，原球茎的增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L，pH为5～6；
（4）丛生芽诱导：将步骤（3）中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养30～40天，获得大量的长度1～2mm的丛生芽，丛生芽诱导培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；
（5）丛生芽增殖培养：将步骤（4）得到的丛生芽转接到增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养15～25天，获得大量的长度为10～20mm的丛生芽，丛生芽增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；
（6）壮苗培养：将步骤（5）所得到的丛生芽，分成单芽转接入壮苗培养基上培养，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～2000Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养25～35天，获得大量的长度为80～100mm的脱毒金铁锁种苗，壮苗培养基为：1/2MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4-D（2.4-二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6-BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6。
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