CN105431173A - 向吞噬细胞运输物质的载体 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供用于高效地向吞噬细胞运输物质的低成本且安全的手段，其涉及一种用于向吞噬细胞运输物质的载体，其特征在于，含有乳酸菌和/或其提取物。

Description

向吞噬细胞运输物质的载体
技术领域
本发明涉及特征在于含有乳酸菌的、用于向吞噬细胞运输物质的药物载体。
背景技术
生物体内的吞噬细胞除了对基于吞噬作用的异物、代谢物的除去、或者天然免疫发挥核心作用之外，认为还利用抗原处理功能对获得性免疫的调节也发挥重要作用。另一方面还已知，吞噬细胞的活性或功能的亢进有时会使生物体产生不健康的状态。
作为由吞噬细胞的活性或功能的亢进引起的疾病，可以列举：动脉粥样硬化、充血性心力衰竭、缺血性疾病、再狭窄、高血压、纤维性血管障碍(糖尿病、系统性红斑狼疮等)、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病、脊髓小脑变性病、肌萎缩性侧索硬化症等)、脑损伤、脑血管事件(例如，中风、发作、神经损伤和中枢神经系统内部的再生等)、造血功能障碍、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、癌症(特别是包括成人T细胞白血病的白血病)及实体瘤、自身免疫疾病、感染(例如，HIV感染和AIDS等)、纤维增生障碍(例如，牛皮癣等)、慢性和急性炎症疾病(例如，关节风湿、克罗恩病、炎性肠病综合征等)、肾小球疾病、败血症、移植物排斥反应、移植物抗宿主病、骨病、以变形性纤维增生/炎症应答为特征的心血管和心血管以外的血管的病态、例如以白细胞向氧或葡萄糖缺乏组织等因病受损的部位的浸润为特征的疾病(例如，脑中风和心肌梗塞等)等。
在各种生物体组织中的大部分吞噬细胞中，广泛地发现了有助于异物吞噬的清道夫受体。已知该清道夫受体对带负电的各种粒子具有亲和性，对经氧化、乙酰基化和糖化等改性后的改性LDL、以及侵入到体内的细菌及其构成因子的吞噬进行传播(非专利文献1～3)。清道夫受体的表达量不会依赖于吞噬细胞内的改性LDL的量进行调节，因此，吞噬细胞会无限制地摄入改性LDL。而且，上述动脉粥样硬化因过量蓄积了该改性LDL的吞噬细胞在血管内膜发生泡沫化而引起。
如上所述，由于吞噬细胞中的改性LDL的过量蓄积而引起动脉粥样硬化，因此认为，例如将具有抗泡沫化作用的化合物(例如，esculeogeninA(非专利文献4)、PPARγ激动剂(非专利文献5)、脂联素(非专利文献6)等)、或承担吞噬细胞内蓄积的改性LDL的代谢、分解的酶(非专利文献7)等高效地运输到吞噬细胞，由此，能够更有效地进行动脉粥样硬化的预防和治疗，近来进行了大量研究。
例如，为了向吞噬细胞高效地运输药物，以往设计了使用靶向脂质体的手段等。然而，靶向脂质体需要复杂的化学合成、精制工艺，在工业化方面存在大量问题。
因此，期望开发出向吞噬细胞运输物质的效率高且容易制造、安全性高、成本较低的载体。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Nature.1997Mar20；386(6622):292-6.
非专利文献2：CellMicrobiol.2009Aug；11(8):1160-9.
非专利文献3：JBiolChem.2011Feb11；286(6):4854-70.
非专利文献4：ArteriosclerThrombVascBiol.2007Nov；27(11):2400-6.
非专利文献5：NatMed.2001；7(1):48-52.
非专利文献6：Atherosclerosis.2013；228(1):124-35.
非专利文献7：日本乳酸菌学会杂志(日本乳酸菌学会誌)Vol.14(2003)No.2pp.72-79.
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的目的在于提供用于高效地向吞噬细胞运输物质(例如，药物、药剂等)的低成本且安全的载体，并且提供用于高效地向吞噬细胞运输物质的方法。
用于解决问题的方法
为了解决上述问题，本发明人进行了深入研究，结果令人惊奇地发现，乳酸菌被高效地摄入吞噬细胞内，进一步反复进行了研究，并得到如下见解：乳酸菌对吞噬细胞的清道夫受体具有高亲和性，由此，吞噬细胞摄入该乳酸菌的效率提高，并进一步反复进行了各种研究，从而完成了本发明。
即，本发明涉及以下发明。
(1)一种用于向吞噬细胞运输物质的载体，其特征在于，含有乳酸菌和/或其提取物。
(2)根据上述(1)所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌属于乳杆菌(Lactobacillus)属。
(3)根据上述(1)所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌属于植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。
(4)根据上述(1)所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌为植物乳杆菌L-137株(LactobacillusplantarumL-137)。
(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的药物载体，其特征在于，所述乳酸菌为死菌体。
(6)根据上述(1)～(5)中任一项所述的载体，其特征在于，物质向吞噬细胞的运输由吞噬细胞的清道夫受体介导。
(7)根据上述(6)所述的载体，其特征在于，所述清道夫受体为A类的清道夫受体。
(8)根据上述(1)～(7)中任一项所述的载体，其特征在于，所述物质为在吞噬细胞相关疾病的诊断、预防和/或治疗中使用的物质。
(9)根据上述(8)所述的载体，其特征在于，所述吞噬细胞相关疾病为动脉粥样硬化。
(10)一种组合物，其特征在于，含有上述(1)～(9)中任一项所述的载体和运输到所述吞噬细胞的物质。
(11)一种向吞噬细胞运输物质的方法，其特征在于，使用上述(1)～(9)中任一项所述的载体。
发明效果
根据本发明，能够提供用于向吞噬细胞高效地运输期望的各种物质的载体。另外，例如使用针对吞噬细胞相关疾病的药物作为上述物质时，能够提供用于在吞噬细胞相关疾病(例如，动脉粥样硬化等)的诊断、预防或治疗中使用的有效的载体或含有该载体的组合物。
另外，从安全性的观点、能够大量培养和大量获取的观点、比较容易应用基因重组技术的观点考虑，根据本发明，本发明中使用的乳酸菌能够廉价地制造安全性高、向吞噬细胞运输的效果高的载体。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。
本发明涉及用于向吞噬细胞运输物质的载体。本发明的上述载体含有乳酸菌菌体或其提取物。在本发明的优选方式中，上述载体含有乳酸菌菌体或其提取物，由此，向吞噬细胞运输物质的效率提高。
本发明的载体中使用的上述乳酸菌没有特别限定，例如，可以使用乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、乳球菌属、双歧杆菌属的各菌等公知的乳酸菌。更详细而言，可以列举：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)、布氏乳杆菌(Lactobacillusbuchneri)、德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、植物乳球菌(Lactococcusplantarum)或嗜热双岐杆菌(Bifidobacteriumthermophilum)、长双岐杆菌(Bifidobacteriumlongum)、短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)等。在这些各种乳酸菌中，从分子运输效果优良的观点考虑，优选乳杆菌属的乳酸菌，其中，特别优选植物乳杆菌。
作为属于上述植物乳杆菌的菌在本发明中的优选代表例，可以列举植物乳杆菌L-137株(1995年11月30日以保藏编号FERMP-15317、微工研菌寄第15317号保藏于工业技术院生命工学工业技术研究所)、植物乳杆菌JCM1149标准株和植物乳杆菌L-051株(微工研菌寄第11912号)等，特别优选可以列举植物乳杆菌L-137株等。
作为本发明中使用的上述乳酸菌，可以是在天然培养基、合成培养基和半合成培养基等培养基中培养得到的乳酸菌中的任意一种。在本发明中，乳酸菌的培养可以根据公知方法、本身公知的方法或以它们为基准的方法来进行。
作为上述培养基，没有特别限定，例如，优选使用含有氮源和/或碳源的培养基。作为上述氮源，没有特别限定，可以列举例如肉提取物、蛋白胨、谷蛋白、酪蛋白、酵母提取物、氨基酸等。作为上述碳源，没有特别限定，可以列举例如葡萄糖、木糖、果糖、肌醇、麦芽糖、糖稀、米曲汁(麹汁)、淀粉、甘蔗渣、麦麸、糖蜜、甘油等。这些成分可以使用一种，也可以组合使用两种以上。
上述培养基中，除了上述氮源和/或碳源之外，还可以添加无机质。作为上述无机质，没有特别限定，可以列举例如：硫酸铵、磷酸钾、氯化镁、食盐、铁、锰、钼或各种维生素类等，这些无机质可以使用一种，也可以组合使用两种以上。
关于上述乳酸菌的培养温度和培养时间，只要能够高效地实施培养，则没有特别限定，在本发明的一个方式中，培养温度例如可以通常设定为约25℃～约40℃，优选设定为约27℃～约35℃，培养时间例如可以设定为约12小时～约48小时。另外，在本发明的一个方式中，乳酸菌的培养可以利用通气振荡来实施。另外，培养基的pH没有特别限定，在本发明的一个方式中，可以通常设定为约pH3～6，优选设定为约pH4～6。
本发明中使用的乳酸菌的菌体可以是活菌体，也可以是死菌体，没有特别限定，但从稳定性和操作容易性等观点考虑，优选使用死菌体。
对制备上述乳酸菌的死菌体的方法进行具体说明。
在本发明中，关于上述死菌体的制备方法，只要不丧失本发明的效果则没有特别限定，例如，可以通过以下方法中的任意一种方法进行制备：(I)在培养结束后将乳酸菌的活菌体从培养液中分离后，对上述活菌体进行杀菌处理，使其形成死菌体的状态的方法；(II)在培养液中对乳酸菌的活菌体进行杀菌处理，使其形成死菌体的状态，然后，将上述死菌体从培养液中分离的方法；等。
作为从培养液中分离菌体的方法，可以采用本领域中通常使用的各种方法，没有特别限定。在本发明的一个方式中，具体而言，例如，可以采用通过在向培养液中加入蒸馏水后利用离心分离等手段除去上清而将培养液与菌体分离的方法等。需要说明的是，在该方式中，在向培养液中加入蒸馏水并进行离心分离后，除去上清，然后，根据需要，可以将在除去上清后的残留物中进一步加入蒸馏水并进行离心分离的操作反复多次进行。在本发明的一个方式中，作为分离操作，也可以包含过滤工序。
接着，对乳酸菌的活菌体的杀菌处理方法进行具体说明。作为上述杀菌处理方法，没有特别限定，可以列举例如加热、紫外线照射、福尔马林处理等。需要说明的是，上述杀菌处理可以对收集的活菌体进行，也可以对包含活菌体的培养液进行。
在进行上述加热处理时，加热温度没有特别限定，例如，可以通常设定为约60℃～约100℃，优选设定为约70℃～约90℃。作为加热手段，可以使用公知的方法，没有特别限定，例如，可以是加热器等手段。关于加热时间，只要能够充分完成杀菌处理，则没有特别限定，例如，加热时间可以设定为在达到期望温度后通常约5分钟～约40分钟、优选约10分钟～约30分钟。
以上述方式得到的上述死菌体可以进一步进行磨碎、粉碎或冷冻干燥处理等，制成死菌体处理物。在本发明中，上述死菌体处理物也可以适合作为死菌体使用。
另外，在本发明中，可以使用乳酸菌菌体的提取物来代替乳酸菌的菌体，或者与菌体一起使用乳酸菌菌体的提取物。上述提取物的提取方法没有特别限定，可以根据公知方法、本身公知的方法或以它们为基准的方法来进行。具体而言，可以列举例如：(i)将乳酸菌的活菌体或死菌体在常压或加压下加入到室温或加温后的提取溶剂中，进行浸渍、搅拌的同时进行提取的方法；(ii)将乳酸菌的活菌体或死菌体在提取溶剂中进行回流的同时进行提取的方法；等。提取温度、提取时间、使用的提取溶剂的种类可以根据提取条件适当选择。
作为上述提取溶剂，没有特别限定，例如，可以使用水、有机溶剂或将它们以任意比例混合的混合溶剂。作为上述有机溶剂，没有特别限定，可以列举例如：低级醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和正丁醇等)、多元醇(例如，1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等)等在室温下为液体的醇类；醚类(例如，乙醚、丙醚等)；酯类(例如，乙酸乙酯、乙酸丁酯等)；酮类(例如，丙酮、甲乙酮等)；烃类(例如，己烷、二甲苯、甲苯等)；氯仿等。这些溶剂可以单独使用，也可以组合使用两种以上。上述有机溶剂中，从操作性、对环境的影响等观点考虑，优选使用在室温下为液体的醇类，例如碳原子数为1～4的低级醇，从残留溶剂的安全性的观点考虑，更优选使用乙醇。
在本发明中，可以根据需要将通过上述提取操作而得到的包含提取液和残渣的混合物供于过滤或离心分离等，除去作为残渣的固体成分，将所得到的提取液直接用于本发明的上述载体的制备中，也可以将上述提取液利用浓缩、冷冻干燥或喷雾干燥等方法进行干燥、粉末化后使用。
本发明的上述载体含有上述菌体或上述提取物，由此被高效地摄入到吞噬细胞中。因此，本发明的上述载体是非常适合作为用于将期望的物质高效地运输到吞噬细胞的载体的载体。
需要说明的是，在本发明中，作为吞噬细胞，没有特别限定，优选含有巨噬细胞、单核细胞、多核白细胞和树突状细胞等。
作为利用本发明的载体运输到吞噬细胞的物质，没有特别限定，例如可以列举功能性物质等。作为上述功能性物质，优选为具有通过被运输到吞噬细胞而发挥某些效果的功能的物质，可以列举例如原子、分子、化合物、肽、蛋白质、核酸、媒介物、病毒、细胞等。上述“某些效果”没有特别限定，可以是希望或有用的效果，也可以是带来有害作用的作用。上述“有害作用”可以用于试验、研究中，另外，在存在对生物体产生不希望的作用的吞噬细胞时，可以用于抑制或消除这些功能。即，可以根据使用本发明的载体的目的来选择上述功能性物质。
在本发明的一个方式中，作为上述功能性物质，可以列举例如：对巨噬细胞具有抗泡沫化作用的化合物(例如，esculeogeninA、PPARγ激动剂、脂联素等)；承担因氧化型LDL的摄入而蓄积在巨噬细胞内的胆固醇的代谢、分解的酶(例如，胆固醇氧化酶ChoA等)；有助于吞噬细胞的活化的炎性细胞因子(例如，IL-1β等)；以及对检测和识别细胞有用的荧光色素(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)等)等。
在本发明的一个优选方式中，上述功能性物质是在吞噬细胞相关疾病的诊断、预防和/或治疗中使用的物质。
作为上述吞噬细胞相关疾病，没有特别限定，可以列举例如：动脉粥样硬化、充血性心力衰竭、缺血性疾病、再狭窄、高血压、纤维性血管障碍(糖尿病、系统性红斑狼疮等)、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病、脊髓小脑变性病、肌萎缩性侧索硬化症等)、脑损伤、脑血管事件(例如，中风、发作、神经损伤和中枢神经系统内部的再生等)、造血功能障碍、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、癌症(特别是包括成人T细胞白血病的白血病)和实体瘤、自身免疫疾病、感染(例如，HIV感染和AIDS等)、纤维增生障碍(例如，牛皮癣等)、慢性和急性炎症疾病(例如，关节风湿、克罗恩病、炎性肠病综合征等)、肾小球疾病、败血症、移植物排斥反应、移植物抗宿主病、骨病、以变形性纤维增生/炎症应答为特征的心血管和心血管以外的血管的病态、例如以白细胞向氧或葡萄糖缺乏组织等因病受损的部位浸润为特征的疾病(例如，脑中风和心肌梗塞等)等。
在本发明的一个方式中，对于在上述吞噬细胞相关疾病的诊断、预防和/或治疗中使用的物质，例如，在以动脉粥样硬化的预防改善效果为目的的情况下，可以列举esculeogeninA、PPARγ激动剂、脂联素和ChoA等。
在本发明中，运输到上述吞噬细胞的物质可以负载于本发明的上述载体上，另外，也可以仅将运输到上述吞噬细胞的物质与本发明的上述载体混合使用。
对使运输到上述吞噬细胞的物质负载于本发明的载体上的方法进行说明。
关于上述负载方法，只要不丧失本发明的效果，则没有特别限定，例如，可以使运输到上述吞噬细胞的物质结合在上述乳酸菌的菌体表面和/或菌体内部或者上述乳酸菌提取物。作为上述结合方法，没有特别限定，例如，可以采用共价键、极性共价键、离子键、静电键、配位共价键、芳香键、氢键、包含偶极子或范德华相互作用的化学键。另外，也可以利用基因工程在上述菌体表面和/或菌体内部进行表达、产生，由此使运输到上述吞噬细胞的物质负载于菌体上。
接着，对上述负载方法更具体地进行说明。
在本发明的一个方式中，在使荧光标记剂(例如，FITCisomer-I(同仁化学制))负载于上述乳酸菌上的情况下，使上述乳酸菌和上述荧光标记剂在遮光下反应，由此，能够使上述荧光标记剂负载于菌体表面上。作为上述反应条件，例如，可以设定为约30℃～约45℃下、约10分钟～约120分钟。
另外，在本发明的另一个方式中，在使胆固醇氧化酶ChoA负载于上述乳酸菌上的情况下，将使来源于上述乳酸菌的质粒与导入有choA基因的来源于大肠杆菌的质粒任意融合而制作的质粒pWK7(例如，参照JBiosciBioeng.2001；92(5):459-65.)等利用电穿孔法等导入到乳酸菌中，进行转化，由此，可以使胆固醇氧化酶ChoA负载于上述乳酸菌上。
通过应用基因工程技术，能够使例如脂联素(例如，参照Atherosclerosis.2013；228(1):124-35.)、IL-1β(例如，参照ClinVaccineImmunol.2010；17(1):43-8.)负载于乳酸菌上。
本发明的上述载体除了上述乳酸菌菌体和/或提取物之外，也可以含有乳酸菌以外的成分。只要不丧失本发明的效果，则该成分没有特别限定，例如，可以使用在医药、药学和食品等领域中已知的任意成分。在本发明的一个方式中，上述乳酸菌以外的成分优选为与上述乳酸菌菌体和/或提取物的亲和性高的成分、或者可以与上述乳酸菌菌体和/或提取物结合的成分等。作为这样的成分，可以列举例如脂质、甾醇、植物油、矿物油、卵磷脂类等。
此外，本发明的上述载体也可以含有靶向剂等促进向吞噬细胞的摄入的物质。此处，上述“靶向剂”优选是指，对特定的靶器官或组织显示出选择性的化合物。作为上述靶向剂，可以使用通常在本领域中使用的各种化合物，没有特别限定，可以列举例如类视色素等。
本发明的上述载体中，关于上述乳酸菌菌体和/或提取物的含量，只要能发挥本发明的效果，则没有特别限定，在上述药物载体100质量％中，例如可以为约1质量％～约100质量％的范围。另外，关于负载于本发明的上述载体上或与上述载体混合的向上述吞噬细胞运输的物质的量，只要不妨碍本发明的效果，则没有特别限定，相对于本发明的上述载体100质量份，例如可以为约10质量份～约300质量份。
本发明的另一个方式涉及含有本发明的上述载体和运输到上述吞噬细胞的物质的组合物。运输到上述吞噬细胞的物质优选为上述的功能性物质。本方式中的该组合物没有特别限定，例如，可以为医药品、饮食品、饲料、食品添加剂和饲料添加剂等，优选为医药品等。
另外，本发明的上述载体在医药制造中的使用也包含在本发明中。
对本发明的上述医药品进行说明。
上述医药品的给药途径没有特别限定，例如，可以以经口或非经口中的任意一种途径对哺乳动物给药。
上述医药品的剂型没有特别限定，可以根据其给药途径来选择。作为剂型，例如，可以为经口剂、非经口剂中的任意一种形态。
作为上述经口剂，可以列举颗粒剂、散剂、片剂(包括糖衣片)、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、乳剂、悬浊剂等。作为非经口剂，没有特别限定，可以列举例如注射剂(例如，皮下注射剂、静脉内注射剂、肌肉内注射剂、腹腔内注射剂等)、点滴剂、外用剂(例如，经鼻给药制剂、经皮制剂、软膏剂等)、栓剂(例如，直肠栓剂、阴道栓剂等)等。
本发明的上述医药品可以通过本领域中通常使用的方法来制造。另外，上述医药品除了本发明的上述载体、上述功能性物质之外，还可以含有例如药学上容许的载体。作为上述药学上容许的载体，可以列举例如：赋形剂、粘合剂、稀释剂、添加剂、香料、缓冲剂、增稠剂、着色剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、助悬剂、防腐剂等。更具体而言，作为上述药学上容许的载体，可以列举例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、砂糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等，这些载体可以使用一种，也可以组合使用两种以上。
上述经口剂可以是固体制剂(例如，片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂等)。关于上述固体制剂，可以将有效成分与赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、助溶剂等混合并根据常法进行制剂化。作为上述赋形剂，可以列举例如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉等。作为上述粘合剂，可以列举例如羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、偏硅酸铝镁等。作为上述崩解剂，可以列举例如羧甲基纤维素钙等。作为上述润滑剂，可以列举例如硬脂酸镁等。作为上述助溶剂，可以列举例如谷氨酸、天冬氨酸等。另外，根据需要，可以用包衣剂(例如，白糖、明胶、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯等)进行包覆，包覆层可以为两层以上。
上述经口剂可以是液体制剂(例如，水剂、悬浊剂、乳剂、糖浆剂、酏剂等)。关于上述液体制剂，可以将有效成分溶解到通常使用的稀释剂(例如，精制水、乙醇或它们的混合液等)中，进行悬浊或乳化，从而进行制剂化。此外，该液体制剂也可以含有润湿剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、风味剂、芳香剂、防腐剂、缓冲剂等。
本发明的医药品为非经口剂时的上述注射剂包括例如溶液、悬浊液、乳浊液、和使用时溶解或悬浊到溶剂中来使用的固态的注射剂。上述注射剂例如可以通过将有效成分在溶剂中溶解、悬浊或乳化来进行制剂化。作为上述溶剂，可以列举例如注射用蒸馏水、生理盐水、植物油、丙二醇、聚乙二醇、乙醇这样的醇类等，这些溶剂可以单独使用，也可以组合使用两种以上。此外，上述注射剂还可以含有稳定剂、助溶剂(例如，谷氨酸、天冬氨酸、聚山梨酯80(注册商标)等)、助悬剂、乳化剂、无痛化剂、缓冲剂、防腐剂等。上述注射剂还可以在最终工序中包含灭菌或无菌操作。
另外，也可以制造无菌的固体制剂、例如冷冻干燥品，在其使用前溶解到无菌的注射用蒸馏水或其他溶剂中来使用。
本发明的上述医药品的给药量没有特别限定，可以根据其目的来适当选择。给药量可以根据疾病的种类、程度；给药途径；给药对象；给药对象的年龄、性别、状态等；或者负载于本发明的上述载体上或与上述载体混合的上述功能性物质的种类、其他条件来设定。
作为本发明的上述医药品的给药对象，没有特别限定，可以列举任意的动物、例如哺乳动物(人、小鼠、大鼠、马、狗、猫、兔、猪、牛等)等。
接着，对本发明的上述饮食品进行说明。
本发明的上述饮食品中，可以添加有饮食品中普遍使用的食品添加剂、例如甜味剂、着色剂、防腐剂、增稠稳定剂、抗氧化剂、显色剂、漂白剂、防霉剂、胶基、苦味剂、酶、光泽剂、酸味剂、调味剂、乳化剂、强化剂、制造用剂、香料、香辛料提取物等中的一种以上。需要说明的是，本发明的上述饮食品中，包含健康食品、功能性食品、特定保健用食品、婴儿用食品、幼儿用食品、孕妇用食品、患者用食品。
本发明的上述饮食品的形态没有特别限定。具体而言，可以列举例如作为所谓营养辅助食品(补充物)的片剂、颗粒剂、散剂、饮料剂等。除此之外，可以列举例如：茶饮料、清凉饮料、碳酸饮料、营养饮料、果实饮料、乳酸饮料等饮料、荞麦面、乌冬面、中国拉面、方便面等面类、糖块、糖果、口香糖、巧克力、快餐点心、饼干、果冻、果酱、奶油、烤制点心、面包等点心和面包类、鱼糕、火腿、香肠等水产/畜产加工食品、加工乳、发酵乳等乳制品、沙拉油、天妇罗油、人造奶油、蛋黄酱、起酥油、生奶油、调味品等油脂和油脂加工食品、调味汁、佐料汁等调味料、咖喱、炖菜、盖饭、粥、菜粥等软罐头食品、冰淇淋、果汁冰淇淋、刨冰等冰制食品等。
本发明的上述饮食品的摄取量没有特别限定，可以根据饮食品的形态；摄取饮食品的对象的年龄、性别、状态等；或者负载于本发明的上述载体上或与上述载体混合的上述功能性物质的种类、其他条件来设定。
接着，对本发明的上述载体的向吞噬细胞运输物质的路径进行说明。
本发明的上述载体的向吞噬细胞运输物质的过程优选由清道夫受体介导。该清道夫受体没有特别限定，优选为A类的清道夫受体。作为该A类的清道夫受体，可以列举AI和AII(被单克隆抗体Clone2F8识别的CD204抗原受体)等。
另外，本发明也包含使用本发明的上述载体向吞噬细胞运输物质的方法。向吞噬细胞运输的物质可以如上所述，并且运输可以由上述清道夫受体介导。
实施例
以下，基于实施例对本发明更详细地进行说明，但本发明不限于这些实施例，本领域技术人员可以在本发明的技术构思内进行大量变形。
(实施例1)
在MRS(deMan,Rogosa,Sharpe)液体培养基中接种植物乳杆菌L-137(保藏编号FERMBP-08607)株，在32℃下培养24小时。培养后，将培养液在4200×g、4℃下进行10分钟离心分离，收集菌体。将得到的菌体充分地分散在生理盐水中，在4200×g、4℃下进行10分钟离心分离，然后除去上清，收集菌体。进而，将收集的菌体充分地分散在生理盐水中，在上述条件下反复进行3次离心分离操作。然后，使得到的菌体分散在离子交换水中，在80℃下加热20分钟。在4200×g、4℃下进行10分钟离心分离，对沉淀进行冷冻干燥，由此得到加热死菌体(实施例品1)。
(实施例2)
除了使用植物乳杆菌JCM1149株来代替上述植物乳杆菌L-137株以外，与实施例1同样地得到加热死菌体(实施例品2)。
(试样的制备)
将实施例品1和2以5mg/mL的浓度悬浊到50mM碳酸钠缓冲液(pH9.6)1mL中。以使终浓度达到5μg/mL的方式向菌体悬浊液中添加异硫氰酸荧光素(FITC)isomer-I(同仁化学)，使其在37℃、遮光下反应60分钟，将菌体用FITC进行标记。将用FITC标记后的菌体在19000×g、4℃的条件下进行10分钟离心分离，将沉淀悬浊于1mL的磷酸缓冲液中，然后，在与上述相同的条件下进行离心分离。将向磷酸缓冲液中的悬浊和离心分离的操作反复进行3次，然后，将离心分离得到的残留物悬浊到1mL的磷酸缓冲液中，用含有10％FBS的RPMI1640培养基稀释500倍。
(吞噬细胞的制备)
吞噬细胞使用来自小鼠脾脏的吞噬细胞。
从小鼠(BALB/c、雌性、6～12周龄)摘出脾脏，在含有10％FBS的RPMI1640培养基中压碎。以使终浓度达到0.75％的方式在0.017M的Tris缓冲液(pH7.65)中加入氯化铵而制作溶液，在所得到的溶液中，将得到的细胞群在4℃下处理5分钟，将红细胞破坏，然后，过#200筛，得到脾脏细胞悬浮液。脾脏细胞悬浮液中的细胞数使用自动血细胞测量装置(CDA-500，希森美康公司制造)来测定。以使脾脏细胞的浓度达到1×107(细胞数)/mL的方式，使上述脾脏细胞悬浮液悬浊到含有10％FBS的RPMI1640培养基中，然后，在24孔培养板中每孔添加1mL，在5％二氧化碳培养器内，在37℃下培养90分钟。然后，将培养液进行移液，小心地除去含有非贴壁细胞的培养液，得到含有大量吞噬细胞的贴壁细胞群。除去培养液后，添加500μL的含有10％FBS的RPMI1640培养基。
(试验例1)
在含有大量上述(吞噬细胞的制备)中得到的吞噬细胞的贴壁细胞群500μL中，将用含有10％FBS的RPMI1640培养基制备成10μg/mL的浓度的实施例品1和实施例品2的FITC标记菌体(试样1和2)、或者不含菌体而仅用含有10％FBS的RPMI1640培养基制备成的对照试样(试样3)500μL添加到含有大量吞噬细胞的贴壁细胞群500μL中。将上述试样1～3在5％二氧化碳培养器内、在37℃下培养4小时或24小时，然后，回收吞噬细胞。使用流式细胞仪(贝克曼库尔特)，对回收的吞噬细胞中的摄入有FITC标记菌体的吞噬细胞的比例进行检测，并算出吞噬细胞摄入菌后的比例。将结果示于表1。
[表1]
4小时培养 24小时培养
试样1(L-137株) 23％ 47％
试样2(JCM1149株) 4％ 23％
试样3(无菌体) 0％ 1％
(试验例2)
在含有大量上述(吞噬细胞的制备)中得到的吞噬细胞的贴壁细胞群500μL中添加抗A类的清道夫受体的单克隆抗体IgG2b(cloneRTK4530，以下，称为抗清道夫A抗体)4μg(试样4)。另外，还制备添加同型对照抗体4μg代替抗清道夫A抗体而得到的试样(试样5)。在5％二氧化碳培养器内，在37℃下培养1小时后，添加用含有10％FBS的RPMI1640培养基制备成10μg/mL的浓度的实施例品1的FITC标记菌体500μL，培养4小时或24小时。在4小时后或24小时后，回收吞噬细胞，使用流式细胞仪对回收的吞噬细胞中的摄入有FITC标记菌体的吞噬细胞的比例进行检测，算出吞噬细胞摄入菌后的比例。将结果示于表2。
[表2]
4小时培养 24小时培养
试样4(抗清道夫A抗体) 1％ 19％
试样5(同型对照抗体) 24％ 45％
由试验例1的结果表明，本发明的载体中使用的乳酸菌菌体(L-137株和JCM1149株)能够被高效地摄入到吞噬细胞中。
另外，由试验例2的结果可知，在使清道夫A受体失活后的吞噬细胞(添加了试样4的细胞)中，乳酸菌菌体的摄入率显著降低。即表明，本发明的载体主要由吞噬细胞的清道夫受体介导而被摄入。
产业上的可利用性
根据本发明，能够将期望的各种物质高效地向吞噬细胞运输，例如，通过使用针对吞噬细胞相关疾病的药物作为功能性物质，能够提供用于在吞噬细胞相关疾病(例如，动脉粥样硬化等)的诊断、预防或治疗中使用的有效的载体或含有该载体的组合物。而且，在本发明中，从安全性的观点、能够大量培养和大量获取的观点、比较容易应用基因重组技术的观点等考虑，使用食品和医药品领域中广泛利用的乳酸菌和/或其提取物，因此，根据本发明，能够廉价地制造安全性高、向吞噬细胞运输的效果高的载体。

Claims (11)

1.一种用于向吞噬细胞运输物质的载体，其特征在于，含有乳酸菌和/或其提取物。
2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌属于乳杆菌(Lactobacillus)属。
3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌属于植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。
4.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌为植物乳杆菌L-137株(LactobacillusplantarumL-137)。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的药物载体，其特征在于，所述乳酸菌为死菌体。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的载体，其特征在于，物质向吞噬细胞的运输由吞噬细胞的清道夫受体介导。
7.根据权利要求6所述的载体，其特征在于，所述清道夫受体为A类的清道夫受体。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的载体，其特征在于，所述物质为在吞噬细胞相关疾病的诊断、预防和/或治疗中使用的物质。
9.根据权利要求8所述的载体，其特征在于，所述吞噬细胞相关疾病为动脉粥样硬化。
10.一种组合物，其含有权利要求1～9中任一项所述的载体和运输到所述吞噬细胞的物质。
11.一种向吞噬细胞运输物质的方法，其特征在于，使用权利要求1～9中任一项所述的载体。
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