CN105352952B - 一种枸杞多糖的快速检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种枸杞多糖的快速检测方法。其主要解决现有硫酸蒽酮法检测枸杞多糖存在水解多糖时间长的问题。其经过下列工艺步骤：吸取葡聚糖标准应用液补水，加入苯酚溶液、浓硫酸混匀，沸水浴，冷却后在485nm处以试剂空白溶液为对照绘制标准曲线；待测样品沸水浴水解并定容，过滤，收集滤液；滤液加热浓缩，冷却后加入无水乙醇，静置，离心，沉淀加入乙醇洗涤后供测定；沉淀用硫酸溶解并定容；吸取样品补水，加入苯酚溶液、浓硫酸混匀，沸水浴，冷却后在485nm处测光密度值，计算得出枸杞多糖含量。本发明的方法水解时间缩短，检测效率高，利于大批量检测。

Description

一种枸杞多糖的快速检测方法
技术领域
本发明涉及用比色法测定来测试材料，尤其是一种枸杞多糖的快速检测方法。
背景技术
杞多糖是枸杞的主要有效成分，它是一种由酸性杂多糖与多肽或蛋白质构成的复合多糖，其分子量大、结构组成极为复杂，具有抗菌、抗肿瘤、抗衰老、保肝护肝的功效，同时也是枸杞子降血糖、降血压、降脂、抗炎等的活性物质。
枸杞多糖在枸杞子中含量为3～5%，水溶性良好，又不被树脂吸附，所以工业生产上枸杞多糖的富集和精制比较困难，而枸杞多糖又由于其提高免疫力和保健功效，价格远远高于其它植物多糖产品，市场上出现了用淀粉、麦芽糊精或其它低价植物多糖冒充枸杞多糖的现象。目前，对于枸杞多糖的检测传统采用硫酸蒽酮法，其是利用糖在浓硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，进行比色测定糖的含量，故可用于糖的定量。但是，其水解多糖时间长达2h，不利于大批量检测。
发明内容
为了克服现有的硫酸蒽酮法检测枸杞多糖存在水解多糖时间长、不利于大批量检测的不足，本发明提供一种多糖水解时间短、检测速度快、利于大批量检测的枸杞多糖的快速检测方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：一种枸杞多糖的快速检测方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：
(1)绘制标准曲线：准确吸取葡聚糖标准应用液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml置比色管中，补水至2.0ml，加入20g/L苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml混匀，沸水浴2min，冷却后用分光光度计在485nm处测光密度值；以试剂空白为参比，以浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线；
(2)多糖提取：称取待测样品1.0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去离子水混匀，沸水浴中加热1h，冷却至室温后定容至200ml，混匀后过滤，收集滤液；
(3)乙醇沉淀多糖：将步骤(2)中得到的滤液置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后加入无水乙醇40ml，静置15min，将溶液转移至离心管中，离心，弃上清液，沉淀用80%乙醇洗涤3次后供测定用；
(4)样品测定：将步骤(3)中得到的沉淀用2.0ml、1.8mol/L硫酸溶解并定容至25ml；准确吸取1.0ml置于比色管中，补水至2.0ml，加入20g/L苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml混匀，沸水浴2min，冷却后在分光光度计上在485nm处测光密度值，以公式
进行计算，得枸杞多糖含量；
其中：在计算公式中，
X —试样中枸杞多糖含量，g/100g；
V1 —样品提取时定容体积，ml；
V2—提取多糖物质取液量，ml；
C —从标准曲线上查的样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V3 —测定葡聚糖定容体积，ml；
V4 —样品比色管取样液体积，ml；
m —试样质量，g。
所述的离心管的转速控制为3500rpm，离心时间5min。
本发明的检测方法中，先是利用水提醇沉法提取多糖物质，再与苯酚-硫酸反应生成有色物质进行比色测定含量，与传统方法比较，本发明利用乙醇沉淀多糖物质将检测时间从2h减少到1h，本方法缩短了样品水解时间，提高了实验效率，利于大批量检测。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
图1是本发明不同水解时间对枸杞多糖含量测定结果的影响曲线图。
具体实施方式
实施例
一种枸杞多糖的快速检测方法，其经过下列工艺步骤：
(1)绘制标准曲线：准确吸取葡聚糖标准应用液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml置比色管中，补水至2.0ml，加入20g/L苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml混匀，沸水浴2min，冷却后用分光光度计在485nm处测光密度值；以试剂空白为参比，以浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线；
(2)多糖提取：称取待测样品1.0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去离子水混匀，沸水浴中加热1h，冷却至室温后定容至200ml，混匀后过滤，收集滤液；
(3)乙醇沉淀多糖：将步骤(1)中得到的滤液置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后加入无水乙醇40ml，静置15min，将溶液转移至离心管中，控制离心管的转速为3500rpm，离心时间5min，弃上清液，沉淀用80%乙醇洗涤3次后供测定用；
(4)样品测定：将步骤(2)中得到的沉淀用2.0ml、1.8mol/L硫酸溶解并定容至25ml；准确吸取1.0ml置于比色管中，补水至2.0ml，加入20g/L苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml混匀，沸水浴2min，冷却后在分光光度计上在485nm处测光密度值，以公式
进行计算，得枸杞多糖含量；其中，
在计算公式中，
X —试样中枸杞多糖含量，g/100g；
V1 —样品提取时定容体积，ml；
V2—提取多糖物质取液量，ml；
C —从标准曲线上查的样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V3 —测定葡聚糖定容体积，ml；
V4 —样品比色管取样液体积，ml；
m —试样质量，g。
本发明在多糖提取时，不同水解时间对枸杞多糖含量测定结果的影响如下表：
沸水浴时间(h) 0.5 1.0 1.5 2.0
检测结果(%) 0.85 1.23 1.26 1.24
与2h比较相对偏差(%) 30 0.81 1.6 0
其多糖提取时，不同水解时间对枸杞多糖含量测定结果的影响曲线，如图1所示。
由图1及附表结果可知，沸水浴提取多糖的时间0.5h与2.0h结果相差较大，而1.0h，1.5h和2.0h结果相差很小，为节省时间，选择1.0h水解时间。
本发明克服了硫酸蒽酮法检测枸杞多糖水解时长的问题，缩短检测时间，利于大批量检测。

Claims (1)

1.一种枸杞多糖的快速检测方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：
(1)绘制标准曲线：准确吸取葡聚糖标准应用液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml置比色管中，补水至2.0ml，加入20g/L苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml混匀，沸水浴2min，冷却后用分光光度计在485nm处测光密度值；以试剂空白为参比，以浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线；
(2)多糖提取：称取待测样品1.0g置于200ml容量瓶中，加入100ml去离子水混匀，沸水浴中加热1h，冷却至室温后定容至200ml，混匀后过滤，收集滤液；
(3)乙醇沉淀多糖：将步骤(2)中得到的滤液置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后加入无水乙醇40ml，静置15min，将溶液转移至离心管中，离心，弃上清液，沉淀用80％乙醇洗涤3次后供测定用；
(4)样品测定：将步骤(3)中得到的沉淀用2.0ml、1.8mol/L硫酸溶解并定容至25ml；准确吸取1.0ml置于比色管中，补水至2.0ml，加入20g/L苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml混匀，沸水浴2min，冷却后在分光光度计上在485nm处测光密度值，以公式进行计算，得枸杞多糖含量；
其中：在计算公式中，
X—试样中枸杞多糖含量，g/100g；
V1—样品提取时定容体积，ml；
V2—提取多糖物质取液量，ml；
C—从标准曲线上查的样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V3—测定葡聚糖定容体积，ml；
V4—样品比色管取样液体积，ml；
m—试样质量，g；
所述的离心管的转速控制为3500rpm，离心时间5min。
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