CN114112946A - 一种用于复圆胶囊功效成分检验方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，涉及药品成分检测技术领域，具体包括总黄酮的测定和粗多糖的测定，所述其检验方法如下：总黄酮的测定步骤一、选取定量的样品放入试管中，随后加入乙醇定容至20ml‑30ml；步骤二、摇晃试管，等到摇匀后，超声提取20min，放置；步骤三、吸取上清液1.0ml，将其放入蒸发皿中。通过测定数值和公式计算对总黄酮和粗多糖进行精准测定，从而得到体有效含量，达到了对复圆胶囊中总黄酮和粗多糖的含量进行精确测量的效果，解决了现有对复圆胶囊的检验方法并不准确，测试操作步骤较为简单，其结果偏差较大，因此其含量测定的也为预估值，这种预估值的测试结果只能作为参考，而不能作为最终含量的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种药品成分检测，具体是一种用于复圆胶囊功效成分检验 方法。
背景技术
复圆胶囊是一种保健药物，本品是以灵芝粉、蜂胶粉、鹅血冻干粉为主 要原料制成的保健食品，经功能试验证明，具有免疫调节、抗辐射的保健功 能，【主要原料】灵芝粉、蜂胶粉、鹅血冻干粉，【功效成份及含量】每00g 含：总黄酮1.37g、粗多糖0.61g、铁68.2mg、锌3.24mg，【保健功能】免 疫调节、抗辐射，【适宜人群】免疫力低下者、接触辐射者，【不适宜人群】 少年儿童，【食用方法及食用量】每日3次，每次3-4粒。
现有对复圆胶囊的检验方法并不准确，测试操作步骤较为简单，其结果 偏差较大，因此其含量测定的也为预估值，这种预估值的测试结果只能作为 参考，而不能作为最终含量，这种预估值的检验无法符合国家的测定标准。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，以解决上 述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，包括总黄酮的测定和粗多糖的测 定，所述其检验方法如下：
总黄酮的测定
步骤一、选取定量的样品放入试管中，随后加入乙醇定容至20ml-30ml；
步骤二、摇晃试管，等到摇匀后，超声提取20min，放置；
步骤三、吸取上清液1.0ml，将其放入蒸发皿中，然后加入1g聚酰胺粉 吸附，置于水浴上挥去乙醇，然后转动层析柱；
步骤四、转入层析柱后，先用20ml苯洗，本液弃去，然后用甲醇洗脱黄 酮，定容至20ml-30ml，此液与波长360nm，测定吸收值，同时以芦丁为标准 品来测定标准曲线，求回归方程，计算样品中总黄酮含量。
粗多糖的测定
步骤一、样品提取：称取样品1g-5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却 至室温，定容至200ml(V1)，混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液；
步骤二、沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml(V2)，置于烧杯中， 加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm 离心5min，弃上清液，残渣用80％乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用；
步骤四、沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml(V3)，混匀 后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml(V4)，加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu 应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清 液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用；
步骤五、测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/L H2SO4溶解，用水定 容至100mL(V5)，准确吸取2.0ml(V6)，置于25ml比色管中，加入1.0ml 苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色，从标准曲线上查得 相应含量，计算粗多糖含量；
步骤六、制备标准曲线：精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40， 0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04， 0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg)，补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml， 浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光 度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值(A)，以葡聚糖 浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线；
步骤七、最后通过公式来计算粗多糖含量。
作为本发明进一步的方案：所述总黄酮的测定中选取定量的样品量为6g-10g。
作为本发明进一步的方案：所述芦丁标准溶液为5.0芦丁，加入甲醇溶 解并定容至100ml，即可50μg/ml。
作为本发明进一步的方案：所述苯酚-H2SO4溶液可以和多种糖类进行显 色反应，常用于总糖的测定，测定过程中应注意容器及试剂中其他糖类的干 扰。
作为本发明进一步的方案：所述苯酚-H2SO4溶液和不同类的糖反应，显 色的强度略有不同，反映在标准曲线的斜率不同，如果已知样品中糖的结构， 应尽量以同类糖的纯品做标准品，或以含有已知浓度的同类产品做对照品进 行检测分析；如果样品中糖的类型未知或结构多样，则只能以葡萄糖计或其 他糖计报告结果。
作为本发明进一步的方案：所述试验证明葡萄糖、果糖等单糖，蔗糖、 乳糖等双糖、低聚糖--棉子糖，淀粉、糊精等多糖及甜味剂糖精不干扰粗多 糖测定。
作为本发明再进一步的方案：所述总黄酮的测定用到的工具有试管、胶 头滴管和培养皿，粗多糖的测定用到的仪器有分光光度计、离心机、旋转混 匀器和恒温水浴锅。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
通过测定数值和公式计算对总黄酮和粗多糖进行精准测定，从而得到体 有效含量，达到了对复圆胶囊中总黄酮和粗多糖的含量进行精确测量的效果， 解决了现有对复圆胶囊的检验方法并不准确，测试操作步骤较为简单，其结 果偏差较大，因此其含量测定的也为预估值，这种预估值的测试结果只能作 为参考，而不能作为最终含量的问题。
具体实施方式
本发明实施例中，一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，包括以下实施例：
实施例1
包括总黄酮的测定和粗多糖的测定，所述其检验方法如下：
总黄酮的测定
步骤一、选取定量的样品放入试管中，总黄酮的测定中选取定量的样品 量为6gg，随后加入乙醇定容至20mlml，总黄酮的测定用到的工具有试管、 胶头滴管和培养皿；
步骤二、摇晃试管，等到摇匀后，超声提取20min，放置；
步骤三、吸取上清液1.0ml，将其放入蒸发皿中，然后加入1g聚酰胺粉 吸附，置于水浴上挥去乙醇，然后转动层析柱；
步骤四、转入层析柱后，先用20ml苯洗，本液弃去，然后用甲醇洗脱黄 酮，定容至20ml，此液与波长360nm，测定吸收值，同时以芦丁为标准品来 测定标准曲线，芦丁标准溶液为5.0芦丁，加入甲醇溶解并定容至100ml，即 可50μg/ml，求回归方程，计算样品中总黄酮含量，计算和结果表示：
式中：
X—样品中总黄酮的含量，mg/100g；
A—由标准曲线算得被测液中黄酮量，μg；
M—样品质量，g；
V1—测定用样品体积，ml；
V2—样品定容总体积，ml。
计算结果保留二位数字。
粗多糖的测定
步骤一、样品提取：称取样品1g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至 室温，定容至200ml(V1)，混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液，粗多糖 的测定用到的仪器有分光光度计、离心机、旋转混匀器和恒温水浴锅；
步骤二、沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml(V2)，置于烧杯中， 加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm 离心5min，弃上清液，残渣用80％乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用；
步骤四、沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml(V3)，混匀 后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml(V4)，加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu 应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清 液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用；
步骤五、测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/LH2SO4溶解，用水定容 至100mL(V5)，准确吸取2.0ml(V6)，置于25ml比色管中，加入1.0ml 苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色，从标准曲线上查得 相应含量，计算粗多糖含量；
步骤六、制备标准曲线：精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40， 0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04， 0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg)，补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml， 浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光 度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值(A)，以葡聚糖 浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线；
步骤七、最后通过公式来计算粗多糖含量：
从标准曲线上查得样品相应含量，计算粗多糖含量。
葡聚糖(％)＝(c×V5×V3×V1×0.1)/(V6×V4×V2×m)＝(c×250) /m………………………(1)
公式中：c--从标准曲线上查得样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V1--样品提取时定容体积，ml；
V2--沉淀高分子物质取液量，ml；
V3--沉淀葡聚糖时定容量，ml；
V4--沉淀葡聚糖时取液量，ml；
V5--测定葡聚糖时定容体积，ml；
V6--样品比色管中取样液体积，ml；
m--样品称量质量，g；
0.1--将mg/g换算成g/100g的系数。
实施例2
包括总黄酮的测定和粗多糖的测定，所述其检验方法如下：
总黄酮的测定
步骤一、选取定量的样品放入试管中，总黄酮的测定中选取定量的样品 量为10g，随后加入乙醇定容至30ml，总黄酮的测定用到的工具有试管、胶 头滴管和培养皿；
步骤二、摇晃试管，等到摇匀后，超声提取20min，放置；
步骤三、吸取上清液1.0ml，将其放入蒸发皿中，然后加入1g聚酰胺粉 吸附，置于水浴上挥去乙醇，然后转动层析柱；
步骤四、转入层析柱后，先用20ml苯洗，本液弃去，然后用甲醇洗脱黄 酮，定容至30ml，此液与波长360nm，测定吸收值，同时以芦丁为标准品来 测定标准曲线，芦丁标准溶液为5.0芦丁，加入甲醇溶解并定容至100ml，即 可50μg/ml，求回归方程，计算样品中总黄酮含量，计算和结果表示：
式中：
X—样品中总黄酮的含量，mg/100g；
A—由标准曲线算得被测液中黄酮量，μg；
M—样品质量，g；
V1—测定用样品体积，ml；
V2—样品定容总体积，ml。
计算结果保留二位数字。
粗多糖的测定
步骤一、样品提取：称取样品5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至 室温，定容至200ml(V1)，混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液，粗多糖 的测定用到的仪器有分光光度计、离心机、旋转混匀器和恒温水浴锅；
步骤二、沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml(V2)，置于烧杯中， 加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm 离心5min，弃上清液，残渣用80％乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用；
步骤四、沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml(V3)，混匀 后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml(V4)，加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu 应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清 液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用；
步骤五、测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/L H2SO4溶解，用水定 容至100mL(V5)，准确吸取2.0ml(V6)，置于25ml比色管中，加入1.0ml 苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色，从标准曲线上查得 相应含量，计算粗多糖含量；
步骤六、制备标准曲线：精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40， 0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04， 0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg)，补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml， 浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光 度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值(A)，以葡聚糖 浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线；
步骤七、最后通过公式来计算粗多糖含量：
从标准曲线上查得样品相应含量，计算粗多糖含量。
葡聚糖(％)＝(c×V5×V3×V1×0.1)/(V6×V4×V2×m)＝(c×250) /m………………………(1)
公式中：c--从标准曲线上查得样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V1--样品提取时定容体积，ml；
V2--沉淀高分子物质取液量，ml；
V3--沉淀葡聚糖时定容量，ml；
V4--沉淀葡聚糖时取液量，ml；
V5--测定葡聚糖时定容体积，ml；
V6--样品比色管中取样液体积，ml；
m--样品称量质量，g；
0.1--将mg/g换算成g/100g的系数。
实施例3
包括总黄酮的测定和粗多糖的测定，所述其检验方法如下：
总黄酮的测定
步骤一、选取定量的样品放入试管中，总黄酮的测定中选取定量的样品 量为8g，随后加入乙醇定容至25ml，总黄酮的测定用到的工具有试管、胶头 滴管和培养皿；
步骤二、摇晃试管，等到摇匀后，超声提取20min，放置；
步骤三、吸取上清液1.0ml，将其放入蒸发皿中，然后加入1g聚酰胺粉 吸附，置于水浴上挥去乙醇，然后转动层析柱；
步骤四、转入层析柱后，先用20ml苯洗，本液弃去，然后用甲醇洗脱黄 酮，定容至25ml，此液与波长360nm，测定吸收值，同时以芦丁为标准品来 测定标准曲线，芦丁标准溶液为5.0芦丁，加入甲醇溶解并定容至100ml，即 可50μg/ml，求回归方程，计算样品中总黄酮含量，计算和结果表示：
式中：
X—样品中总黄酮的含量，mg/100g；
A—由标准曲线算得被测液中黄酮量，μg；
M—样品质量，g；
V1—测定用样品体积，ml；
V2—样品定容总体积，ml。
计算结果保留二位数字。
粗多糖的测定
步骤一、样品提取：称取样品3g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至 室温，定容至200ml(V1)，混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液，粗多糖 的测定用到的仪器有分光光度计、离心机、旋转混匀器和恒温水浴锅；
步骤二、沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml(V2)，置于烧杯中， 加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm 离心5min，弃上清液，残渣用80％乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用；
步骤四、沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml(V3)，混匀 后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml(V4)，加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu 应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清 液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用；
步骤五、测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/L H2SO4溶解，用水定 容至100mL(V5)，准确吸取2.0ml(V6)，置于25ml比色管中，加入1.0ml 苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色，从标准曲线上查得 相应含量，计算粗多糖含量；
步骤六、制备标准曲线：精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40， 0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04， 0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg)，补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml， 浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光 度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值(A)，以葡聚糖 浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线；
步骤七、最后通过公式来计算粗多糖含量：
从标准曲线上查得样品相应含量，计算粗多糖含量。
葡聚糖(％)＝(c×V5×V3×V1×0.1)/(V6×V4×V2×m)＝(c×250) /m………………………(1)
公式中：c--从标准曲线上查得样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V1--样品提取时定容体积，ml；
V2--沉淀高分子物质取液量，ml；
V3--沉淀葡聚糖时定容量，ml；
V4--沉淀葡聚糖时取液量，ml；
V5--测定葡聚糖时定容体积，ml；
V6--样品比色管中取样液体积，ml；
m--样品称量质量，g；
0.1--将mg/g换算成g/100g的系数。
需要注意的是：所述苯酚-H2SO4溶液可以和多种糖类进行显色反应，常 用于总糖的测定，测定过程中应注意容器及试剂中其他糖类的干扰，苯酚 -H2SO4溶液和不同类的糖反应，显色的强度略有不同，反映在标准曲线的斜 率不同，如果已知样品中糖的结构，应尽量以同类糖的纯品做标准品，或以 含有已知浓度的同类产品做对照品进行检测分析；如果样品中糖的类型未知 或结构多样，则只能以葡萄糖计或其他糖计报告结果，试验证明葡萄糖、果 糖等单糖，蔗糖、乳糖等双糖、低聚糖--棉子糖，淀粉、糊精等多糖及甜味 剂糖精不干扰粗多糖测定。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人 员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其 中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何 修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内，且本说明书 中未作详细描述的内容均属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
Claims (7)
1.一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，包括总黄酮的测定和粗多糖的测定，其特征在于，所述其检验方法如下：
总黄酮的测定
步骤一、选取定量的样品放入试管中，随后加入乙醇定容至20ml-30ml；
步骤二、摇晃试管，等到摇匀后，超声提取20min，放置；
步骤三、吸取上清液1.0ml，将其放入蒸发皿中，然后加入1g聚酰胺粉吸附，置于水浴上挥去乙醇，然后转动层析柱；
步骤四、转入层析柱后，先用20ml苯洗，本液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至20ml-30ml，此液与波长360nm，测定吸收值，同时以芦丁为标准品来测定标准曲线，求回归方程，计算样品中总黄酮含量。
粗多糖的测定
步骤一、样品提取：称取样品1g-5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml(V1)，混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液；
步骤二、沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml(V2)，置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80％乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用；
步骤四、沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml(V3)，混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml(V4)，加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用；
步骤五、测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL(V5)，准确吸取2.0ml(V6)，置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色，从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量；
步骤六、制备标准曲线：精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg)，补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值(A)，以葡聚糖浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线；
步骤七、最后通过公式来计算粗多糖含量。
2.根据权利要求1所述的一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，其特征在于，所述总黄酮的测定中选取定量的样品量为6g-10g。
3.根据权利要求1所述的一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，其特征在于，所述芦丁标准溶液为5.0芦丁，加入甲醇溶解并定容至100ml，即可50μg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，其特征在于，所述苯酚-H2SO4溶液可以和多种糖类进行显色反应，常用于总糖的测定，测定过程中应注意容器及试剂中其他糖类的干扰。
5.根据权利要求1所述的一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，其特征在于，所述苯酚-H2SO4溶液和不同类的糖反应，显色的强度略有不同，反映在标准曲线的斜率不同，如果已知样品中糖的结构，应尽量以同类糖的纯品做标准品，或以含有已知浓度的同类产品做对照品进行检测分析；如果样品中糖的类型未知或结构多样，则只能以葡萄糖计或其他糖计报告结果。
6.根据权利要求1所述的一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，其特征在于，所述试验证明葡萄糖、果糖等单糖，蔗糖、乳糖等双糖、低聚糖--棉子糖，淀粉、糊精等多糖及甜味剂糖精不干扰粗多糖测定。
7.根据权利要求1所述的一种用于复圆胶囊功效成分检验方法，其特征在于，所述总黄酮的测定用到的工具有试管、胶头滴管和培养皿，粗多糖的测定用到的仪器有分光光度计、离心机、旋转混匀器和恒温水浴锅。
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