CN101703599A - 栀子提取物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种栀子提取物检测方法，该方法包括鉴别方法和/或指纹图谱和/或含量测定方法，本发明建立了栀子提取物指纹图谱的测定方法，能更全面的控制提取物的质量，在含量测定项下不仅测定了栀子苷的含量，还测定了总环烯醚萜苷的含量；另外供试品的制备本发明采用70％的乙醇提取，较药典用甲醇制备供试品的方法，对操作人员毒性小，对环境污染少。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物的检测方法，特别是涉及栀子提取物检测方法。
背景技术
栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实，为常用中药之一。其性味苦寒，能泻火除烦、清热利尿、凉血解毒、散瘀消肿，可用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、疮疡疔毒、外治扭挫伤痛等。
《药典》2005年版一部公开了栀子药材的检测方法，包括如下鉴别和含量测定方法。
鉴别方法采用的薄层鉴别方法：栀子粉末1g，加50％乙醇10ml，超声处理40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。取栀子苷对照品，加乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(15∶85)为流动相；检测波长为238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；其中对照品溶液采用栀子苷对照品加甲醇制成每1ml含30μg的溶液；供试品溶液的制备采用甲醇溶解药材细粉，经超声处理20分钟的方法。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明提供栀子提取物更全面的质量检测方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种栀子提取物的检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明提供上述栀子提取物检测方法，包括如下鉴别方法和/或指纹图谱和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
取栀子提取物置容量瓶中，加60-80％乙醇稀释，超声10-30min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材粉末0.3-0.9g置于容量瓶中，加入60-80％乙醇25ml，超声提取30-50min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以4-6∶4-7∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-20％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点；
指纹图谱：
照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，梯度洗脱，流速：1ml/min，柱温：15-30℃；所述梯度洗脱是：0min乙腈比例为5％；40min乙腈比例为10％；60min乙腈比例为15％；
供试品溶液的制备：精密称取栀子提取物10mg，置50mL容量瓶中，用60-80％乙醇超声溶解后稀释，为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
含量测定：
A：总环烯醚萜苷：取栀子提取物约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入60-80％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加60-80％乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在220-250nm波长处测定吸光度，计算，即得；本品按干燥品计算，含总环烯醚萜苷以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于80％；
B：栀子苷：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(10-20∶75-95)为流动相；检测波长为220-250nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：称取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取栀子提取物约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入60-80％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加60-80％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；所述栀子提取物按干燥品计算，含栀子苷(C17H24O10)不得少于60％。
本发明提供上述栀子提取物质量检测方法，优选包括如下鉴别方法和/或指纹图谱和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
取栀子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，超声15min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材粉末0.5g置于50ml容量瓶中，加入70％乙醇25ml，超声提取40min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以5∶5∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点；
指纹图谱：
照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，梯度洗脱，流速：1ml/min，柱温：20℃；所述梯度洗脱是：0min乙腈比例为5％；40min乙腈比例为10％；60min乙腈比例为15％；
供试品溶液的制备：精密称取栀子提取物10mg，置50mL容量瓶中，用70％乙醇超声溶解后稀释，为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
含量测定：
A：总环烯醚萜苷：取栀子提取物0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，精密量取该溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在238nm波长处测定吸光度，计算，即得；本品按干燥品计算，含总环烯醚萜苷以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于80％；
B：栀子苷：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取栀子提取物0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；栀子提取物按干燥品计算，含栀子苷(C17H24O10)不得少于60％。
所述栀子提取物的制备方法包括常规的水提取或醇提取或先水提取再醇提取或先醇提取后再水提取，经上述常规提取后还可以过活性炭或大孔树脂柱进一步富集有效成分；
上述常规工艺水提取方法可以为：每次10-30倍量，提取1-4次，每次1-3小时；
上述常规工艺醇提取方法可以为：30-80％乙醇、4-15倍量、分别提取1-3小时；
所述过大孔树脂柱方法为：提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用2-6倍柱体积量水或20％以下浓度的乙醇洗脱，洗脱液弃取，再用加30-60％乙醇1-6倍柱体积洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液。
本发明进一步提供栀子提取物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：取栀子药材，水煎煮提取2-4次，每次加6-30倍量的水，浓缩；
步骤2：加入乙醇使药液含醇量达50％-80％，放置，抽滤，滤液回收乙醇，加水调节药液浓度以栀子原药材的重量与药液的体积比计为栀子药材∶药液＝1-2∶1-2(g/ml)；
步骤3：采用静态吸附法进行活性炭净化处理；上样量以栀子原药材的重量与活性炭重量比计算为栀子药材∶活性炭＝1∶1-3，将活性炭置药液中，搅拌，静态吸附3-6小时，上柱，先用水洗，再用50％-80％乙醇洗脱，洗脱流速为0.6-1倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇至相对密度0.5-1.05，得栀子提取液A或干燥得栀子提取物B；
步骤4：取大孔树脂，装柱；将上述栀子提取液A直接上样或提取物B加水制成浓度为0.03-0.1g/mL的药液后上样；上样体积为1-3倍柱体积，以0.2-1.0倍柱体积/小时的流速吸附，1-3倍柱体积水、1-3倍柱体积的3％-10％乙醇洗脱，3-8倍柱体积的20％-50％乙醇以0.2-0.5倍柱体积/小时的流速洗脱，收集20％-50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
优选为，所述步骤1中栀子药材加8-12倍量的水煎煮，每次1-3小时；
优选为，所述步骤2中加入乙醇后放置18-48小时，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为药材∶药液＝1∶1，即1g/ml；
优选为，所述步骤3中栀子提取液A60℃减压干燥得栀子提取物B；加水制成浓度为0.07g/mL的药液，
优选为，所述步骤3中静态吸附法进行活性炭净化处理，活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味；
优选为，所述步骤3中上样量为栀子药材∶活性炭＝1∶1.2，静态吸附4小时，上柱，先用水洗至洗脱液Molish反应为阴性，再改用20倍生药量的70％乙醇洗脱，洗脱流速为0.8倍生药量/小时；
优选为，所述步骤4中量取H103、HPD450、HPD600、HPD750或D101型大孔树脂中的任意一种装柱，径高比为：1/8-1/4；水洗至无醇味；
优选为，所述步骤4上样体积为2.5倍柱体积，以0.4倍柱体积/h的流速吸附，2倍柱体积水、2倍柱体积7％乙醇洗脱，30％乙醇5倍柱体积以0.3倍柱体积/h的流速洗脱；
进一步优选地，收集25-35％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥。
所述步骤3中栀子原药材的重量与活性炭重量比计算是指药液先折算出被提取的栀子原药材的重量后与活性炭的比值为1∶1-3；
所述步骤3中洗脱流速以“倍生药量/小时”为单位计算是指：药液折算被提取的栀子原药材的重量与时间的比。
所述重量/体积为g/ml。
最优选地，栀子提取物制备的方法包括如下步骤：
步骤1：取栀子药材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)；
步骤2：加入95％乙醇使药液含醇量达70％，放置24h，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为药材∶药液＝1∶1，即1g/ml；
步骤3：采用静态吸附法进行活性炭纯化处理：活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味；上样量为栀子药材∶活性炭＝1∶1.2，将活性炭置药液中，搅拌，静态吸附4小时，上柱，先用水洗至洗脱液Molish反应为阴性，再改用20倍生药量的70％乙醇洗脱，洗脱流速为0.8倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，60℃减压干燥得栀子提取物；
步骤4：量取已处理好的H103型大孔树脂，装柱，水洗至无醇味；将上述栀子提取物加水制成浓度为0.07g/mL的药液，上样体积为2.5倍柱体积，以0.4倍柱体积/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱体积水、2倍柱体积7％乙醇洗脱，30％乙醇5倍柱体积以0.3倍柱体积/h的流速洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥。
上述栀子提取物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂、颗粒剂、鼻腔吸入剂、滴鼻剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、填充剂、稀释剂、吸收剂、表面活性剂、吸附剂、基质等.
本发明建立了栀子提取物指纹图谱的测定方法，能更全面的控制提取物的质量。在含量测定项下不仅测定了栀子苷的含量，还测定了总环烯醚萜苷的含量；另外供试品的制备本发明再用70％的乙醇，较《药典》甲醇制备供试品的方法对操作人员毒性小，对环境污染少。本发明质量检测方法专属性强，快速，能够准确控制产品的质量。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 栀子提取物指纹图谱研究
乙腈-水流动相梯度的考察，应用DAD检测器进行了检测波长的确定并对柱温的影响进行了考察。最终确定条件为：Agilent 1100高效液相色谱仪，Diamonsil(TM)钻石C18柱5μm(250×4.6mm)，检测波长：238nm，流动相：乙腈-水梯度洗脱，见下表，流速：1ml/min，柱温：20℃。
表1 洗脱梯度
1、栀子提取物与栀子原料药材指纹图谱相关性比较
按本发明指纹图谱测定方法，测定栀子药材和提取物，获得二者的指纹图谱进行比较。结果表明，栀子提取物与栀子原料药材指纹图谱相关性较好。
2、120min指纹图谱全信息考察实验
进样栀子提取物溶液和栀子药材溶液，分别按照按本发明的流动相梯度程序运行后，继续用乙腈运行至120min，记录色谱图，考察全信息情况。结果表明，记录图谱60min，信息已经完全。在确定色谱条件下，栀子药材、中间体供试液中所有化学成分在60min内洗脱完全，空白无干扰。
3、精密度实验
精密称取按本发明实施例1制备的批号为080609的栀子中间体浸膏粉0.01g，制备中间体供试液溶液，分别精密吸取10μl共5份，注入高效液相色谱仪，记录60min色谱(命名为1、2、3、4、5)，并通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件计算相似度。结果见表2。
表2 中间体指纹图谱精密度实验结果
由表知，各色谱图相互间相似度S＞0.99，各色谱峰相对保留时间和峰面积RSD均小于3％，表明该方法的精密度良好。
4、稳定性实验
精密称取按本发明实施例1制备的批号为080609的栀子中间体浸膏粉0.01g，制备中间体供试液溶液，分别在0、1、2、4、12h精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，记录60min色谱，并通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件计算相似度。结果见表3。
表3 中间体指纹图谱稳定性实验结果
由表知，各色谱图相互间相似度S＞0.99，各色谱峰相对保留时间和峰面积RSD均小于3％，中间体供试液溶液在12h内稳定性符合要求。
5、重复性实验
分别精密称取批号为080609的栀子中间体浸膏粉0.01g，制备5份中间体供试液溶液，各精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，记录60min色谱(命名为S1、S2、S3、S4、S5)，并通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件计算相似度。结果见表4。
表4 中间体指纹图谱重复性实验结果
由表知，各色谱图相互间相似度S＞0.99，各色谱峰相对保留时间和峰面积RSD均小于3％，故中间体指纹图谱重复性良好，符合要求。
6、样品测定
按照确定的HPLC方法对样品进行了测定，记录60min，分别测定两次(命名为(S11，S12，S21，S22，S31，S32，S41，S42)，并通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会，2004A版)计算相似度。各样品相似度计算结果见表5。
表5 样品指纹图谱测定结果
由图中结果可以看出各批次样品之间的相似度均大于0.99。
实验例2 栀子苷含量测定实验
1、含量测定指标成分的选择
药典中要求测定栀子苷的含量。规定栀子苷的含量测定方法为采用甲醇超声提取，HPLC测定，最低限度为1.8％。在实验过程中发现这种方法提取效率较低，测定结果偏低。用70％乙醇做溶剂可提高提取效率，减少有机溶剂对人的毒害和对环境的污染。
2、仪器与试药
Agilent 1100系列高效液相色谱仪(四元泵，紫外检测器)；电子天平(北京分析仪器厂)；CX-300型超声波清洗器(50w-3000w)(北京医疗设备二厂)；UV-2000紫外-可见分光光度计(日本日立)。
栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所批号0749-200507)，甲醇为分析纯(北京化工厂)，乙腈为色谱纯(美国merck公司)，水(娃哈哈纯净水杭州娃哈哈集团)
所用栀子药材购自樟树天齐堂中药饮片厂(批号040421)，经生药学鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实即栀子。
3、栀子苷含量测定方法与结果
3.1色谱分析条件
色谱柱：C18色谱柱(DiamonsilTM钻石250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈∶水(14∶86)；检测波长：238nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温。栀子苷可基线分离。
3.2样品处理方法确定
3.2.1对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥恒重的栀子苷对照品适量，用甲醇溶解，制成每1ml含栀子苷0.1344mg的溶液，即得。
3.2.2样品溶液的制备
采用与药材相同的处理方法进行试验，考察了超声时间，结果见表6。
表6 超声不同时间确定(n＝2)
实验结果表明提取时间长短无显著性差异，故确定样品超声10min。
3.2.3测定法
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液5ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.3线性关系考察
精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl，按上述色谱条件进行色谱分析，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得到回归(加原点)方程为Y＝1631X+3.995，相关系数r＝0.99998，结果见表7。
表7 栀子线性数据
结果表明，栀子苷在0.228-1.14μg范围内线性关系良好。
3.4稳定性试验
取同一供试品(080601)，分别于配制后0，2，4，6，10小时，依上法测定，结果见表8。
表8 稳定性试验(n＝5)
结果表明，平均峰面积为936.2，RSD％为1.43，供试品溶液在10小时内基本稳定。
3.5精密度试验
精密吸取同一对照品溶液样品5μl，重复进样5次，结果见表9。
表9 表精密度试验(n＝5)
结果表明，平均峰面积为929.24，RSD％为1.37，精密度良好。
3.6重现性试验
按正文方法处理同一批号(080601)样品5份，依法测定，结果见表10。
表10 重现性试验(n＝5)
结果：测得样品平均含量66.89％，RSD％为0.84，表明方法重现性良好。
实验例3 总环烯醚萜苷含量测定实验
1、对照品溶液制备
取栀子苷对照品3mg，精密称定，加甲醇25mL使溶解，取1mL用甲醇稀释至10mL，即得。
2、供试品溶液制备
取栀子提取物10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加70％乙醇稀释，超声10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，取续滤液1mL用70％乙醇稀释至10mL即得。
3、最大吸收波长确定
取对照品、供试品溶液在200～400nm进行扫描，随行空白。结果表明在238nm处均有最大吸收，故确定238nm为测定波长。
4、线性关系考察
精密吸取对照品溶液(148.8μg·mL-1)1、2、3、4、5、6mL，分别置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，238nm测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得计算得到回归方程(过原点)：y＝0.021x+0.0166，r＝0.9999，结果见表11。
表11 栀子线性数据
结果表明，栀子苷在5.592～35.712μg·mL-1范围内线性关系良好。
5、精密度实验
取对照品溶液，238nm测定吸收度，重复8次，计算RSD为0.178％，结果表明仪器有较高精密度。
6、稳定性实验
取对照品溶液和供试品溶液，于0，2，4，6，8，10h在238nm测定吸收度，计算RSD分别为0.37％，0.37％，表明对照品溶液和供试品溶液在10h内稳定。
7、重复性实验
取栀子提取物(批号080601)6份，制备供试品溶液，238nm测定吸收度，计算平均栀子总环烯醚萜苷含量为87.44％，RSD为1.25％。
8、回收率实验
采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批号(批号080601，含量87.44％)的样品粉末约0.005g，精密称定，置50mL量瓶中，加70％乙醇稀释，超声10min，取出，，放冷，加70％乙醇至刻度，取1mL至10mL容量瓶中，精密加入0.0672mg、0.0872mg、0.1048mg栀子苷对照品，再加70％乙醇至刻度，238nm下测定吸光度，按下式计算回收率。结果见表12。
表12 回收率试验
以上结果表明，回收率平均值为100.11％，RSD＝1.34％，本法具有良好的回收率。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
具体实施方式
实施例1：
取栀子药材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)，加入95％乙醇使药液含醇量达70％，放置24h，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，减压干燥得栀子提取物；
含量测定：
A：总环烯醚萜苷：精密量取栀子苷测定项下供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在238nm波长处测定吸光度，计算，即得；
B：栀子苷：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例2：
取栀子药材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)，加入95％乙醇使药液含醇量达70％，放置24h，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，减压干燥得栀子提取物；
指纹图谱：
照高效液相色谱法(附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，度洗脱，见下表，流速：1ml/min，柱温：20℃；
供试品溶液的制备精密称取栀子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70％乙醇超声溶解后稀释至刻度，为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会，2004A版)计算相似度，各批次样品之间的相似度应不小于0.95。
实施例3：
A栀子提取物制备
取栀子药材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)，加入95％乙醇使药液含醇量达70％，放置24h，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为药材∶药液＝1∶1，即1g/ml。采用静态吸附法进行活性炭纯化处理：活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味。上样量为生药∶活性炭＝1∶1.2，将规定用量的活性炭置药液中，搅拌，静态吸附4小时，上柱，先用水洗至洗脱液Molish反应为阴性，再改用20倍生药量的70％乙醇洗脱，洗脱流速为0.8倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，60℃减压干燥得栀子提取物。量取已处理好的H103型大孔树脂，装柱，水洗至无醇味。将上述栀子提取物加水制成浓度为0.07g/mL的药液，上样体积为2.5倍柱体积，以0.4倍柱体积/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱体积水、2倍柱体积7％乙醇洗脱，30％乙醇5倍柱体积以0.3倍柱体积/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥得栀子提取物。
B：指纹图谱：
照高效液相色谱法(附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，度洗脱，见下表，流速：1ml/min，柱温：20℃；
供试品溶液的制备 精密称取栀子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70％乙醇超声溶解后稀释至刻度，为供试品溶液；测定法精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会，2004A版)计算相似度，各批次样品之间的相似度应不小于0.95；
实施例4：栀子提取物制备及含量测定
A栀子提取物制备
取栀子药材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)，加入95％乙醇使药液含醇量达70％，放置24h，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为药材∶药液＝1∶1，即1g/ml。采用静态吸附法进行活性炭纯化处理：活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味。上样量为生药∶活性炭＝1∶1.2，将规定用量的活性炭置药液中，搅拌，静态吸附4小时，上柱，先用水洗至洗脱液Molish反应为阴性，再改用20倍生药量的70％乙醇洗脱，洗脱流速为0.8倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，60℃减压干燥得栀子提取物。量取已处理好的H103型大孔树脂，装柱，水洗至无醇味。将上述栀子提取物加水制成浓度为0.07g/mL的药液，上样体积为2.5倍柱体积，以0.4倍柱体积/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱体积水、2倍柱体积7％乙醇洗脱，30％乙醇5倍柱体积以0.3倍柱体积/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥得栀子提取物。
含量测定：
A：总环烯醚萜苷：精密量取栀子苷测定项下供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在238nm波长处测定吸光度，计算，即得；本品按干燥品计算，含总环烯醚萜苷以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于80％；
B：栀子苷：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含栀子苷(C17H24O10)不得少于60％。
实施例5：栀子提取物制备及质量检测方法
A栀子提取物制备
取栀子药材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)，加入95％乙醇使药液含醇量达70％，放置24h，抽滤，以3倍生药量70％乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为药材∶药液＝1∶1，即1g/ml.采用静态吸附法进行活性炭纯化处理：活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味.上样量为生药∶活性炭＝1∶1.2，将规定用量的活性炭置药液中，搅拌，静态吸附4小时，上柱，先用水洗至洗脱液Molish反应为阴性，再改用20倍生药量的70％乙醇洗脱，洗脱流速为0.8倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，60℃减压干燥得栀子提取物.量取已处理好的H103型大孔树脂，装柱，水洗至无醇味.将上述栀子提取物加水制成浓度为0.07g/mL的药液，上样体积为2.5倍柱体积，以0.4倍柱体积/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱体积水、2倍柱体积7％乙醇洗脱，30％乙醇5倍柱体积以0.3倍柱体积/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥得栀子提取物.
质量检测方法
A：指纹图谱：
照高效液相色谱法(附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，度洗脱，见下表，流速：1ml/min，柱温：20℃；
供试品溶液的制备精密称取栀子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70％乙醇超声溶解后稀释至刻度，为供试品溶液；测定法精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会，2004A版)计算相似度，各批次样品之间的相似度应不小于0.95；
含量测定：
A：总环烯醚萜苷：精密量取栀子苷测定项下供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(附录V A)，在238nm波长处测定吸光度，计算，即得；本品按干燥品计算，含总环烯醚萜苷以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于80％；
B：栀子苷：照高效液相色谱法(附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含栀子苷(C17H24O10)不得少于60％。
实施例6：
栀子提取物的制备
步骤1：取栀子药材，加8倍量的水，煎煮提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)；
步骤2：加入乙醇使药液含醇量达65％，放置，抽滤，用乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为栀子药材∶药液＝1∶2(重量/体积)；
步骤3：采用静态吸附法进行活性炭纯化处理，活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味；
步骤4：上样量为栀子药材∶活性炭＝1∶1.5，将活性炭置药液中，搅拌，静态吸附4.5小时，上柱，先用水洗，再改用乙醇洗脱，洗脱流速为0.7倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥得栀子提取物；
指纹图谱：
照高效液相色谱法(附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，度洗脱，见下表，流速：1ml/min，柱温：20℃；
供试品溶液的制备精密称取栀子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70％乙醇超声溶解后稀释至刻度，为供试品溶液；测定法精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会，2004A版)计算相似度，各批次样品之间的相似度应不小于0.95；
鉴别：取栀子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，超声15min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材(过4号筛)粉末0.5g，置于50ml具塞三角瓶中，精密加入70％乙醇25ml，超声提取40min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以5∶5∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点；
实施例7：
栀子提取物的制备
步骤1：取栀子药材，加8倍量的水，煎煮提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃)；步骤2：加入乙醇使药液含醇量达65％，放置，抽滤，用乙醇溶液洗涤沉淀，滤液与洗液合并，回收乙醇至药液没有醇味，加水调节药液浓度为栀子药材∶药液＝1∶2(重量/体积)；步骤3：采用静态吸附法进行活性炭纯化处理，活性炭用乙醇回流法至紫外扫描没有吸收，用蒸馏水洗至含无醇味；上样量为栀子药材∶活性炭＝1∶1.5，将活性炭置药液中，搅拌，静态吸附4.5小时，上柱，先用水洗，再改用乙醇洗脱，洗脱流速为0.7倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇得栀子提取液；步骤4：量取已处理好的H103大孔树脂，装柱，水洗至无醇味；将上述栀子提取液上样，上样体积为2.5倍柱体积，以0.4倍柱体积/h的流速吸附，2倍柱体积水、2倍柱体积7％乙醇洗脱，30％乙醇5倍柱体积以0.3倍柱体积/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥.
鉴别：取栀子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，超声15min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材粉末置于容量瓶中，加入70％乙醇25ml，超声提取40min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以5∶5∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点；
指纹图谱：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，梯度洗脱，流速：1ml/min，柱温：20℃；所述梯度洗脱是：0min乙腈比例为5％；40min乙腈比例为10％；60min乙腈比例为15％；供试品溶液的制备：精密称取栀子提取物10mg，置容量瓶中，用70％乙醇超声溶解后稀释，为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
含量测定：
A：总环烯醚萜苷：精密量取栀子苷测定项下供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在238nm波长处测定吸光度，计算，即得；本品按干燥品计算，含总环烯醚萜苷以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于80％；
B：栀子苷：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(14∶86)为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；栀子提取物按干燥品计算，含栀子苷(C17H24O10)不得少于60％。
Claims (10)
1.一种栀子提取物检测方法，其特征在于指纹图谱检测方法为：
照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，梯度洗脱，流速：1ml/min，柱温：15-30℃；所述梯度洗脱是：0min乙腈比例为5％；40min乙腈比例为10％；60min乙腈比例为15％；
供试品溶液的制备：精密称取栀子提取物10mg，置50mL容量瓶中，用60-80％乙醇超声溶解后稀释，为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下含量测定中方法中的任意一种：
A：总环烯醚萜苷：取栀子提取物0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入60-80％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，取该溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在220-250nm波长处测定吸光度，计算，即得；
B：栀子苷：照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10-20∶75-95的乙腈-水为流动相；检测波长为220-250nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取栀子提取物0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入60-80％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加60-80％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于总环烯醚萜苷的含量测定方法为：
取栀子提取物约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，取该溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在238nm波长处测定吸光度，计算，即得；栀子提取物按干燥品计算，含总环烯醚萜苷以栀子苷计，不得少于80％。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于栀子苷的含量测定方法为：
照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以14∶86的乙腈-水为流动相；检测波长为238nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取栀子提取物约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得；栀子提取物按干燥品计算，含栀子苷不得少于60％。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下鉴别方法：
取栀子提取物置容量瓶中，加60-80％乙醇稀释，超声10-30min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材粉末0.3-0.9g置于容量瓶中，加入60-80％乙醇25ml，超声提取30-50min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以4-6∶4-7∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-20％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点.
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述鉴别方法为：
取栀子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，超声15min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材粉末0.5g置于50ml容量瓶中，加入70％乙醇25ml，超声提取40min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以5∶5∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点。
7.栀子提取物检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别、含量测定和指纹图谱方法：
鉴别：取栀子提取物置容量瓶中，加60-80％乙醇稀释，超声10-30min使溶解，作为栀子提取物供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；取京尼平龙胆双糖苷对照品，加甲醇溶解制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液；另称取栀子对照药材粉末0.3-0.9g置于容量瓶中，加入60-80％乙醇25ml，超声提取30-50min，滤过，即得对照药材溶液；参照薄层色谱法，吸取供试品溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以4-6∶4-7∶1∶1醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-20％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照色谱相同的位置上显相同颜色斑点；
指纹图谱：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为238nm；流动相：乙腈-水，梯度洗脱，流速：1ml/min，柱温：15-30℃；所述梯度洗脱是：0min乙腈比例为5％；40min乙腈比例为10％；60min乙腈比例为15％；供试品溶液的制备：精密称取栀子提取物10mg，置容量瓶中，用60-80％乙醇超声溶解后稀释，为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
含量测定：A：总环烯醚萜苷：取栀子提取物约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入60-80％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，取该溶液1ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在220-250nm波长处测定吸光度，计算，即得；B：栀子苷：照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10-20∶75-95的乙腈-水为流动相；检测波长为220-250nm；理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取栀子提取物约0.01g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入60-80％乙醇，超声处理10min，取出，放冷，加60-80％乙醇至刻度，摇匀，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得.
8.如权利要求1-7所述的任意一种方法，其特征在于栀子提取物由栀子药材替代。
9.如权利要求1-8所述的任意一种方法，所述栀子提取物是由如下方法制备：
步骤1：取栀子药材，水煎煮提取2-4次，每次加6-30倍量的水，浓缩；
步骤2：加入乙醇使药液含醇量达50％-80％，放置，抽滤，滤液回收乙醇，加水调节药液浓度以栀子原药材的重量与药液的体积比计为栀子药材∶药液＝1-2∶1-2(g/ml)；
步骤3：采用静态吸附法进行活性炭净化处理；上样量以栀子原药材的重量与活性炭重量比计算为栀子药材∶活性炭＝1∶1-3，将活性炭置药液中，搅拌，静态吸附3-6小时，上柱，先用水洗，再用50％-80％乙醇洗脱，洗脱流速为0.6-1倍生药量/小时，收集乙醇洗脱液，回收乙醇至相对密度0.5-1.05，得栀子提取液A或干燥得栀子提取物B；
步骤4：取大孔树脂，装柱；将上述栀子提取液A直接上样或提取物B加水制成浓度为0.03-0.1g/mL的药液后上样；上样体积为1-3倍柱体积，以0.2-1.0倍柱体积/小时的流速吸附，1-3倍柱体积水、1-3倍柱体积的3％-10％乙醇洗脱，3-8倍柱体积的20％50％乙醇以0.2-0.5倍柱体积/小时的流速洗脱，收集20％-50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得。
10.如权利要求9所述的检测方法，其特征在于栀子提取物的制备方法步骤4中选取H103、HPD450、HPD600、HPD750或D101型大孔树脂中的任意一种；径高比为：1/8-1/4；所述步骤4中洗脱后收集25-35％乙醇洗脱液。
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