CN113759056A - 一种半边莲及其制剂的特征图谱及其构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药检测技术领域，具体提供了一种半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法，包括以下步骤，(1)供试品溶液的制备；(2)取供试品溶液采用高效液相色谱法检测得到特征图谱，检测过程中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为含酸水溶液‑乙腈，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→20min→30min→50min，流动相中乙腈的体积百分数为：12％→14％→22％→35％，得到6个共有特征峰，并实现了香叶木素峰的分离，准确定位香叶木素峰位置，得到的特征图谱基线平稳，噪音干扰较小，特征峰峰形好，充分的反映半边莲及其制剂的整体性和特征性，为半边莲及其制剂的质量检测和控制提供依据。

Description

一种半边莲及其制剂的特征图谱及其构建方法

技术领域

本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种半边莲及其制剂的特征图谱及其构建方法。

背景技术

中药配方颗粒是以符合炮制规范的优质中药饮片为原料，采用现代高新技术提炼而成的单味浓缩颗粒，其性味、归经、功效与原生药基本一致。中药配方颗粒是中药剂型改革的一部分，代替传统饮片使用，要求“源于饮片，高于饮片”。在临床使用中实现了用药的“高效安全、稳定可控、方便卫生”。由于中药配方颗粒具有小剂型、疗效好、见效快，服用、携带、贮藏方便等特点，非常适应现代社会包括国际社会对天然药物的需求和现代社会紧张生活的需要。

半边莲为桔梗科植物半边莲Lobelia chinensis Lour.的干燥全草。具有清热解毒，利尿消肿的功效，用于治疗痈肿疔疮，蛇虫咬伤，臌胀水肿，湿热黄疸，湿疹湿疮。半边莲始载于《本草纲目》，是临床常用的清热解毒药。《中国药典》2020年版对半边莲的质量控制包括原植物品种、药材性状、理化鉴别等项目，然而中药配方颗粒已失去了药材原本的外观性状，其质量控制很大程度依靠有效成分的检测。而在有效成分的含量测定方面，所测成分大多是1-2个指标成分，这与中药所含化学成分复杂，发挥药效时多成分、多靶点协同作用的特性不甚吻合。目前对于半边莲配方颗粒的研究较少，而针对饮片和药材的研究主要集中于化学成分、药理药效学研究、栽培种植。目前尚未有一种简单可行的方法可用于半边莲配方颗粒的质量检测及控制。因此，建立一种能够全面地、快速地检测半边莲配方颗粒的方法，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。

现有技术中，徐金玲等在《复方半边莲注射液HPLC指纹图谱及其安全性研究》中公开了半边莲药材和复方注射液的指纹图谱的建立方法，其采用内标法，操作程序较为麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量，寻找合适的内标物也有一定困难。周颖等在《半边莲药材HPLC指纹图谱的研究》中公开了高效液相色谱法建立了半边莲药材的指纹图谱方法，通过对比峰总面积、相似度控制药材质量情况，但不同产地不同批次药材含量差异大，参考意义不大；且多成分中药制剂中黄酮类成分较为普遍，难以通过峰面积控制半边莲中药制剂质量情况；此外，半边莲存在普适性内容，即有效成分的专属性不强，发挥药效作用的是哌啶类生物碱lobeline、黄酮和黄酮苷等，仅仅测定挥发油的含量不能有效说明半边莲的质量如何，因此较难全面科学的评价半边莲及其制剂的质量。此外，当采用上述两种方法均不适合于半边莲配方颗粒及其其他制剂的特征图谱的构建，方法下香叶木素及野黄芩苷均无法良好分离，在指纹图谱中未见对照品参照峰，无法对特征峰进行准确定位，不能充分的反映半边莲配方颗粒及其其他制剂的整体性和特征性。

发明内容

因此，本发明的目的在于解决现有技术中半边莲的特征图谱无法同时提供半边莲配方颗粒及其他制剂中有效成分的色谱信息和对特征峰进行准确定位，不能充分的反映半边莲配方颗粒及其他制剂的整体性和特征性的问题，提供了一种半边莲及其制剂的特征图谱及其构建方法。

具体的，本发明公开了一种半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法，包括以下步骤，

(1)供试品溶液的制备；

(2)取供试品溶液采用高效液相色谱法检测得到特征图谱，检测过程中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，含酸水溶液-乙腈为流动相，梯度洗脱程序包括：0→20min→30min→50min，流动相中乙腈的体积百分数为：12％→14％→22％→35％。

在某些优选的实施方式中，步骤(2)中，以0.05-0.15vt％磷酸水溶液-乙腈或者0.05-0.15vt％甲酸水溶液-乙腈为流动相。

在某些优选的实施方式中，步骤(2)中，检测波长为330-350nm，流速为0.18-0.22mL/min，柱温为25-35℃。

优选地，所述半边莲供试品选自半边莲药材、半边莲的水提取物或者半边莲制剂；其中，半边莲制剂为半边莲单方制剂、半边莲与另一种药材共为原料药组成的药对制剂，或者半边莲与至少两种药材共为原料药组成的复方制剂。单方制剂、药对制剂或者复方制剂为采用原料药的提取物按照药学常规工艺制备而成的片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂等；

例如，半边莲的粉剂可以选择水提物干粉，尤其是半边莲标准汤剂冻干粉。半边莲的颗粒剂可以选择半边莲配方颗粒。

在某些优选的实施方式中，步骤(1)包括，取半边莲供试品经过提取、一次固液分离、萃取、加溶剂溶解、二次固液分离步骤得到半边莲供试品溶液。

步骤(1)还满足如下1)-6)中的一项或者多项：

1)所述提取方式选自加热提取或者超声提取；优选采用超声提取，更优选提取时间为20-40分钟。

2)提取溶剂为水，提取时溶剂的体积与半边莲供试品质量之比为30-100：1。

其中，若质量的单位为g，对应的体积的单位为ml。

3)一次固液分离和/或二次固液分离独立地选自离心或者过滤。

4)萃取过程中采用的萃取剂为乙酸乙酯，萃取次数为1-3次，优选地，萃取次数为2次。

5)每次萃取时所采用的萃取剂的体积与半边莲供试品的质量之比为20-100：1。其中，若质量的单位为g，对应的体积的单位为ml。

6)溶解时采用的溶剂为甲醇或者体积百分数不低于60％的甲醇水溶液。

在某些优选的实施方式中，所述的构建方法还包括采用香叶木素对照品制备对照品溶液的步骤，以及按照本发明任一所述的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品图谱的步骤和/或还包括采用半边莲对照药材作为参照物按照本发明任一所述的构建方法制备参照物溶液并按照本发明任一所述的构建方法采用高效液相色谱法检测参照物溶液得到参照物特征图谱的步骤；

优选的，对照品溶液的制备方法包括如下步骤：取香叶木素对照品加溶剂制成每1ml含香叶木素对照品0.01-0.5mg的溶液；

更优选的，所述溶剂选自甲醇水溶液或者纯甲醇；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不小于30％。

所述参照物溶液为按照本发明任一所述的供试品溶液的制备方法制得。

某些优选的实施方式中，还包括半边莲及其制剂的对照特征图谱的构建，对多批半边莲供试品检测得到的特征图谱，利用中药色谱特征图谱相似度评价系统生成半边莲及其制剂的对照特征图谱。至少采用2批半边莲配方颗粒，例如采用3个批次、8个批次、10个批次、15个批次的半边莲配方颗粒。

某些优选的实施方式中，利用中药色谱特征图谱相似度评价软件生成半边莲及其制剂的对照特征图谱后还包括标记共有特征峰的步骤。

本发明还提供了一种半边莲及其制剂的特征图谱，由上述任一所述的构建方法得到。

本发明还提供了一种半边莲及其制剂的特征图谱，其具有香叶木素峰；

本发明还提供了一种半边莲及其制剂的特征图谱，其具有6个特征峰，1-5号峰为共有峰，6号峰为香叶木素峰；

本发明还提供了一种半边莲及其制剂的特征图谱，其具有6个特征峰，以香叶木素峰为参照峰，各特征峰与参照峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.41(峰1)、0.42(峰2)、0.82(峰3)、0.86(峰4)、0.95(峰5)和1.00(峰6)。

本发明还提供了一种半边莲及其制剂的对照特征图谱，其具有6个特征峰，以香叶木素峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.41(峰1)、0.42(峰2)、0.82(峰3)、0.86(峰4)、0.95(峰5)和1.00(峰6)。

本发明中，半边莲及其制剂的对照特征图谱还可以使用单批次或者多批次半边莲及其制剂按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱；可选的，半边莲及其制剂的对照特征图谱还可以使用多批次半边莲供试品按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成特征图谱。

本发明还提供了本发明的半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法和/或本发明的半边莲及其制剂的对照特征图谱在半边莲产品的质量检测中的用途。

半边莲产品选自半边莲及其制剂，所述半边莲制剂选自半边莲的浸提物或者由半边莲的浸提物制成的配方颗粒、粉剂、片剂或者胶囊剂。

本发明还提供了一种半边莲及其制剂的质量检测方法，包括将待测半边莲产品的特征图谱与半边莲的对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测半边莲产品的特征图谱为使用待测半边莲产品按照本发明任一所述的构建方法得到，所述半边莲的对照特征图谱为本发明所述的半边莲及其制剂的对照特征图谱。

采用相似度评价待测半边莲产品的质量，当待测半边莲产品的特征图谱与半边莲及其制剂的对照特征图谱的相似度如果不低于0.90-1.00(例如0.95)，则为质量合格；如果低于0.90-1.00(例如0.95)，则为不合格；具体地，所述相似度通过中药色谱特征图谱相似度评价软件得到。

待测半边莲产品选自半边莲药材、半边莲的水提取或者半边莲制剂；其中，半边莲制剂为半边莲单方制剂、半边莲与另一种药材共为原料药组成的药对制剂，或者半边莲与至少两种药材共为原料药组成的复方制剂。单方制剂、药对制剂或者复方制剂为采用原料药的提取物按照药学常规工艺制备而成的片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂等；

例如，半边莲的粉剂可以选择水提物干粉，尤其是半边莲标准汤剂冻干粉。半边莲的颗粒剂可以选择半边莲配方颗粒。

本发明中，0.1％甲酸或者磷酸是指体积百分数为0.1％甲酸或者磷酸的水溶液。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明所述的半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为含酸水溶液和乙腈，梯度洗脱，发现仅使用3个洗脱程序即可得到6个共有特征峰，并实现了包括香叶木素峰在内的共有特征峰的分离，洗脱程序简单，得到的特征图谱基线平稳，噪音干扰较小，特征峰峰形好、分离度高，而且可以准确定位香叶木素峰位置，充分的反映半边莲及其制剂的整体性和特征性，为半边莲及其制剂的质量检测和控制提供依据。

2.本发明所述的半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法，通过对供试品提取方法进行考察，确定了经过提取、一次固液分离、萃取、加溶剂溶解、二次固液分离步骤得到半边莲供试品溶液的方法，该方法与上述梯度洗脱条件相配合，使得香叶木素峰在内的共有特征峰的分离效果更高，峰形更好，精密度更高、重复性和稳定性更好，能够更加全面的对半边莲及其制剂进行质量监控。

3.本发明所述的半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法，进一步地通过对柱温、流动相、色谱柱、色谱仪进行考察，确定了最优色谱条件，以及通过对提取时间、提取方式、温度、萃取剂、萃取次数等提取条件进行考察，确定了最佳提取工艺，上述各个单一条件或者组合的优化均能够使构建方法的时间更短，精密度更高、重复性和稳定性更好，能够更加全面的对半边莲及其制剂进行质量监控。

4.本发明所述的半边莲产品的质量检测方法，通过待测半边莲产品的特征图谱与半边莲的对照特征图谱进行比较，可以全面、清楚、有效的对半边莲配方颗粒进行质量检测。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为半边莲标准汤剂冻干粉UPLC 3D色谱图；

图2为方法一条件下的色谱图；

图3为方法二条件下的色谱图；

图4为方法三条件下的色谱图；

图5为方法四条件下的色谱图；

图6为半边莲标准汤剂冻干粉延迟性谱图；

图7为15批半边莲标准汤剂冻干粉的特征图谱；

图8为半边莲标准汤剂冻干粉对照图谱及共有峰标识；

图9为6号峰的确认图；

图10为半边莲对照药材图谱；

图11为半边莲标准汤剂冻干粉与对照药材图谱对比图；

图12为15批半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱与香叶木素对照图谱的对比；

图13为半边莲配方颗粒UPLC 3D色谱图；

图14为半边莲配方颗粒延迟性谱图；

图15为3批半边莲配方颗粒特征图谱与香叶木素对照图谱的对比；

图16为半边莲配方颗粒对照图谱及共有峰标识；

图17为6号峰的确认图；

图18为半边莲配方颗粒与对照药材图谱对比图；

图19为对比例1中半边莲配方颗粒的特征图谱；

图20为对比例2中半边莲配方颗粒内标和外标的特征图谱的对比；

图21为对比例2中半边莲配方颗粒内标的特征图谱；

图22为对比例2中的野黄芩苷对照品图谱；

图23为对比例3中橙皮苷对照品图谱与供试品图谱对比；

图24为对比例3中蒙花苷对照品图谱与供试品图谱对比；

图25为对比例3中迷迭香酸对照品图谱与供试品图谱对比；

图26为对比例3中芹菜素对照品图谱与供试品图谱对比；

图27为对比例3中野黄芩苷对照品图谱与供试品图谱对比；

图28为对比例3中柚皮苷对照品图谱与供试品图谱对比；

图29为对比例4中党参炔苷对照品图谱与供试品图谱对比。

具体实施方式

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。倍量是指每克半边莲配方颗粒饮片加入水的毫升数(ml/g)。

半边莲标准汤剂冻干粉可以采用本领域常规方法制备，例如本发明中按照如下步骤制备：取半边莲饮片，置于砂锅中，煎煮两次，分别加入14倍量水、10倍量水，一煎煎煮20分钟，二煎煎煮10分钟，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩(50℃)，浓缩至料液比约为1：1(相对密度为1.05-1.10(50℃)，冷冻干燥，即得。

半边莲配方颗粒可以采用本领域常规方法制备，例如本发明中按照包括如下步骤制备：取半边莲饮片，煎煮二次，分别加入14倍量水、12倍量水，每次煎煮40分钟，150目滤布趁热过滤，合并滤液，减压浓缩(70℃以下)，至相对密度为1.05-1.10(60℃)、干燥，进风温度为175℃±5℃，干法制粒，包装规格为2g/袋全铝膜、100g/瓶包装、250g/瓶包装，密封储存。

实验例1色谱条件和供试品溶液制备方法的优化

1、仪器、试剂及试药

仪器：Waters ACQUITY

H-Class超高效液相色谱仪；PDA Detector检测器；TUV Detector检测器；Empower 3色谱工作站；ME104E电子天平(梅特勒·托利多)，JY20002电子天平(梅特勒·托利多)，BSA124S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，BT25S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

色谱柱：

Waters ACQUITY

Shield RP C18(2.1*100mm，1.7μm)

Waters

(2.1*100mm，1.6μm)。

试药：半边莲标准汤剂冻干粉：190513-221700-01、190513-223800-02、190613-221700-03、190618-223900-08、190618-221200-11、190708-221700-14、190708-213300-15、190708-226100-16、190708-211600-17、190708-225800-18、190903-221300-19、190903-223400-20、190903-221200-21、190903-223700-22、190903-221300-23。

香叶木素对照品(批号：111788-200801，纯度95.7％，中国药品生物制品检定所)

半边莲对照药材(批号：121142-201605，中国食品药品检定研究院)

试剂：乙腈(Merck)、磷酸(Fisher Scientific)为色谱纯；水为蒸馏水(屈臣氏)；其它试剂均为分析纯。

2、色谱条件与供试品溶液制备方法的优化

(1)检测波长的选择

供试品溶液的制备：取半边莲标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

对半边莲标准汤剂冻干粉供试品溶液进行3D全扫图，如图1所示，结果显示检测波长为340nm左右时特征图谱信息较丰富，故特征图谱选择340nm。

(2)梯度洗脱程序的优化

方法一：供试品溶液的制备，同本实验例第2(1)项的供试品溶液制备。采用高效液相色谱法对供试品溶液进行检测，色谱条件如下：Waters

Shield RPC18(2.1*100mm，1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％甲酸为流动相B，梯度洗脱程序如表1，检测波长为340nm；柱温30℃；流速0.3ml/min。结果见图2和表5。

表1梯度洗脱表

方法二：供试品溶液的制备，同本实验例第2(1)项的供试品溶液制备。采用高效液相色谱法对供试品溶液进行检测，色谱条件如下：Waters

(2.1*100mm，1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％甲酸为流动相B，梯度洗脱程序如表2，检测波长为340nm；柱温30℃；流速0.2ml/min。结果见图3和表5。

表2梯度洗脱表

方法三：供试品溶液的制备，同本实验例第2(1)项的供试品溶液制备。采用高效液相色谱法对供试品溶液进行检测，色谱条件如下：Waters

(2.1*100mm，1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序如表3，检测波长为340nm；柱温30℃；流速0.2ml/min。结果见图4和表5。

表3梯度洗脱表

方法四：供试品溶液的制备：取与本实验例第2(1)项同一批半边莲标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，即得。

采用高效液相色谱法对供试品溶液进行检测，色谱条件如下：Waters

(2.1*100mm，1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸为流动相B，梯度洗脱程序如表4，检测波长为340nm；柱温30℃；流速0.2ml/min。结果见图5和表5。

表4梯度洗脱表

表5梯度优化考察结果

由表5、图2～5可知，利用方法一获得的半边莲配方颗粒色谱图中各峰理论板数、拖尾因子均不符合分析要求，分离度较差。利用方法二获得的半边莲配方颗粒色谱图中各峰均有一定程度的拖尾，分离度欠佳，且峰集中在30min之前。方法一、二，无法定位确定特征峰。利用方法三获得的半边莲配方颗粒色谱图中各峰理论板数、拖尾因子、分离度均符合分析要求，但是没有响应的指标成分对应。利用方法四获得的半边莲配方颗粒色谱图中各峰理论板数、拖尾因子、分离度均符合分析要求，香叶木素峰在图谱中可以对应。且方法重现性好，故确定此方法为半边莲特征图谱最终方法。

(3)萃取次数的考察

取半边莲标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯萃取1次、2次、3次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按本实验例第2(2)项方法四的方法测定，测定各峰峰面积，结果如下。

表6供试品溶液浓度考察表

小结：各供试品溶液峰面积受萃取次数的影响较大，选择色谱峰大小合适并兼顾香叶木素(峰6)的峰面积对萃取次数的要求，确定供试品溶液的萃取次数为2次。

(4)提取时间的考察

分别称取同一批半边莲标准汤剂冻干粉3份约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟、30分钟、40分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按本实验例第2(2)项方法四的方法测定，测定各峰峰面积，结果如下。

表7提取时间考察表

小结：从不同提取时间获得的特征图谱中各峰峰面积的RSD％值可以看出，各峰峰面积受提取时间影响较大，但香叶木素峰波动较小，选择色谱峰大小合适并兼顾香叶木素(峰6)的峰面积，故确定提取时间为30分钟。

(5)不同提取方式考察

分别称取同一批半边莲标准汤剂冻干粉两份，每份约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，不同提取方式[超声处理(功率250W，频率40kHz)、加热回流]30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，精密吸取续滤液2μl，按本实验例第2(2)项方法四的本实验例第2(2)项方法四的方法测定，测定各峰峰面积，结果如下。

表8提取方式考察表

小结：不同提取方式获得的特征图谱中各峰峰面积峰4、峰6的差异较大，兼顾S峰香叶木素(6号峰)的峰面积对提取方式的要求以及提高实验效率方面的考虑，确定采用超声处理进行提取。

实验例2半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱的建立

1、确立半边莲标准汤剂冻干粉的特征图谱的构建方法

根据实验例1，确定半边莲标准汤剂冻干粉的特征图谱按如下方法建立：

(1)供试品溶液的制备：取半边莲标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，即得。

(2)液相色谱检测：精密吸取供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(内径2.1mm，柱长100mm，粒径1.6μm)为色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为340nm；柱温30℃；流速0.2ml/min。理论塔板数按香叶木素峰计算应不低于10000。

表9半边莲特征图谱洗脱梯度表

2、延迟性试验

取半边莲标准汤剂冻干粉供试品溶液，按本实验例第1项下的色谱条件进样，记录2倍流动相洗脱时间结果见图6。

小结：结果表明，在50分钟之后没有明显的滞后峰出现，此色谱方法符合分析要求。

3、特征图谱特征峰的确认及指认

取15个批次的半边莲标准汤剂冻干粉样品分别按照本实验例第1项下方法得到15批半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱，见图7所示。使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版本)，以S1液相图谱为参照图谱，按中位数计算，得出半边莲标准汤剂冻干粉对照图谱，并进行共有峰的标识，见图8。

小结：使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版本)，对15批半边莲标准汤剂冻干粉进行共有峰标识，共标识6个共有峰。

4、特征峰的确认

半边莲的主要活性成分为黄酮类化合物，香叶木素为半边莲的专属性成分，且含量较高，因此确定以香叶木素作为参照物，取香叶木素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含香叶木素0.1mg的溶液。分别精密吸取半边莲标准汤剂冻干粉供试品溶液2μl、香叶木素对照品溶液2μl，注入液相色谱仪，按照本实验例第1项下方法测定，对6号峰进行确认，结果见图9。

小结：供试品图谱中6号峰与香叶木素对照品图谱的保留时间一致。因此可确认6号峰为香叶木素。

5、系统适应性试验

在本实验例第1项的条件下，以香叶木素峰为参照，进行系统适用性试验，其结果见表10。

表10系统适用性试验结果

小结：香叶木素峰理论板数、分离度、拖尾因子及重复性均符合分析要求。

6、随行对照药材测定

取半边莲对照药材2g，加入24倍水，煮沸30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。

分别精密吸取半边莲标准汤剂冻干粉供试品溶液2μl、香叶木素对照品溶液2μl，注入液相色谱仪，按照本实验例第1项下方法测定，对6号峰进行确认，结果见图10和11。

结论：由以上图谱可以看出，半边莲对照药材标准汤剂冻干粉相比较，特征峰保留时间与峰数差异较小，可为标准研究制定提供依据。

7、相似度

使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版本)，计算15批半边莲标准汤剂冻干粉的特征图谱与对照特征图谱的相似度，其结果如下。

表11相似度计算结果

小结：15批半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱与对照特征图谱的相似度为0.655～0.996，除190613-221700-03和190903-223400-20外，其余批次均在0.8以上，表明图谱在大部分批次中的差异较小，个别批次可能由于萃取中操作的差异导致图谱相似度略低。

8、相对保留时间和相对峰面积

15批半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱与香叶木素参照物特征图谱峰保留时间一致，见图12。图中下而上依次为香叶木素对照图谱、1～15号半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱。

根据对照品的可获得性及各特征峰所推断的物质在药效方面的代表性，确定了香叶木素为参照物，同时由于其保留时间及峰面积在特征图谱中的情况，确定6号峰(香叶木素)为参照峰，计算各特征峰与6号峰的相对保留时间和相对峰面积，对15批半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱进行数据处理，结果如下。

表12 15批半边莲标准汤剂冻干粉相对保留时间表

表13 15半边莲标准汤剂冻干粉相对峰面积

小结：由15批半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱可知，各特征峰相对保留时间差异较小，均在±10％范围内，符合质量控制要求，选择相对保留时间的平均值作为测定值；规定值为：0.41(峰1)、0.42(峰2)、0.82(峰3)、0.86(峰4)、0.95(峰5)、1.00(峰6)允许误差：±10％。而相对峰面积的差异较大，其RSD值为18.66％～97.92％，不符合质量控制要求，因此对相对峰面积不做规定。

实验例3半边莲标准汤剂冻干粉特征图谱的方法学验证

1、精密度

(1)重复性

取半边莲标准汤剂冻干粉(批号：190513-221700-01)6份，按实验例2第1项下的方法测定，获得其特征图谱，以6号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。结果显示，各特征峰的相对保留时间RSD在0.06～1.59％范围内，相对峰面积的RSD在2.15～5.31％范围内，表明该特征图谱的重复性较好。

(2)中间精密度

采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器，取半边莲标准汤剂冻干粉(批号：190513-221700-01)6份，按实验例2第1项下的方法测定，获得其特征图谱，以6号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。

结果显示，采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器获得的特征图谱中，各特征峰的相对保留时间RSD在0.07～2.88％范围内，相对峰面积的RSD在2.01～4.98％范围内。不同仪器间相对保留时间RSD在0.07～3.50％范围内，相对峰面积在0～11.96％范围内，峰5的相对峰面积在不同仪器间差异略大，可能与检测器的不同有关，故不对相对峰面积做规定。实验结果表明该特征图谱方法在不同仪器间相对保留时间符合分析要求。

2、稳定性

取半边莲标准汤剂冻干粉(190513-221700-01)，按本实验例第2(2)项方法四的方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h按实验例2第1项下的方法进行测定，获得其特征图谱，以6号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。

结果显示：稳定性实验结果可知，溶液中化学成分在24小时稳定性，各特征峰的相对保留时间RSD在0.05～0.67％范围内，相对峰面积的RSD在0.57～1.69％范围内。证明样品在24h内稳定性良好。

3、耐用性

(1)不同柱温的考察：取半边莲标准汤剂冻干粉(批号：190116-113301-01)，按实验例2第1项下供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别于不同柱温(28℃、30℃及32℃)按实验例2第1项下的方法进行测定，考察实验方法对于柱温的耐用性。

结果显示，不同柱温下获得的色谱图，各特征峰的相对保留时间RSD在0.16～2.02％范围内，相对峰面积的RSD在1.30～14.17％范围内。但由于相对峰面积不进行规定，故符合系统适用性要求，表明该方法对柱温耐用性较好。

(2)不同流速的考察：取半边莲标准汤剂冻干粉(批号：190116-113301-01)，按实验例2第1项下供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同流速(0.18ml/min、0.2ml/min及0.22ml/min)按实验例2第1项下的方法进行测定，考察实验方法对于流速的耐用性。结果显示：不同流速下获得的色谱图，各特征峰的相对保留时间RSD在0.20～3.25％范围内，相对峰面积的RSD在2.82～9.98％范围内。相对保留时间RSD值大于3％，故不符合系统适用性要求，表明该方法对流速耐用性差，所以固定流速为0.2ml/min。

实验例4半边莲配方颗粒特征图谱的建立

1、确立半边莲标准汤剂冻干粉的特征图谱的构建方法

根据实验例1，确定半边莲标准汤剂冻干粉的特征图谱按如下方法建立：

(1)供试品溶液的制备：取半边莲配方颗粒适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，即得。

(2)液相色谱检测：精密吸取供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(内径2.1mm，柱长100mm，粒径1.6μm)为色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为340nm；柱温30℃；流速0.2ml/min。理论塔板数按香叶木素峰计算应不低于10000。

表14半边莲特征图谱洗脱梯度表

2、对半边莲配方颗粒供试品溶液进行3D全扫图，结果显示检测波长为340nm左右时特征图谱信息较丰富，故特征图谱选择340nm。结果见图13。检测波长为340nm左右时特征图谱信息较丰富，故特征图谱选择340nm。

3、延迟性试验

取半边莲配方颗粒供试品溶液，按本实验例第1项下的方法色谱条件进样，记录2倍流动相洗脱时间。

小结：结果见图14，在50分钟之后没有明显的滞后峰出现，此色谱方法符合分析要求。

4、提取浓度的考察

取本品适量，研细，分别取约0.25g、0.50g、1.00g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入水25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按本实验例第1项下的方法测定，测定各峰峰面积，结果如下。

表15供试品溶液浓度考察表

小结：各供试品溶液峰面积受样品浓度的影响较大，选择色谱峰大小合适并兼顾香叶木素(峰6)的峰面积对样品浓度的要求，确定供试品溶液的样品浓度为取样0.5g，按照本实验例第1项下的方法制备供试品溶液，稀释倍数为20倍。

5、特征图谱特征峰的确认及指认

分别取3批半边莲配方颗粒，按照本实验例第1项下的方法获得其液相图谱，使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2021.1版本)，以S1液相图谱为参照图谱，按中位数计算，得出半边莲配方颗粒对照图谱，并进行共有峰的标识，结果如下

表16半边莲配方颗粒相似度结果表

表17半边莲三批验证相对保留时间表

小结：使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版本)，对3批半边莲配方颗粒进行共有峰标识，共标识6个共有峰。见图16所示，半边莲颗粒三批生产验证的特征图谱中呈现6个特征峰，各特征峰相对S峰(香叶木素峰)其相对保留时间符合规定，均小于10％。

6、特征峰的确认

半边莲的主要活性成分为黄酮类化合物，香叶木素为半边莲的专属性成分，且含量较高，因此确定以香叶木素作为参照物，取香叶木素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含香叶木素0.1mg的溶液。分别精密吸取半边莲标准汤剂冻干粉供试品溶液2μl、香叶木素对照品溶液2μl，注入液相色谱仪，按照本实验例第1项下方法测定，对6号峰进行确认，结果见图17。

供试品图谱中6号峰与香叶木素对照品图谱的保留时间一致。因此可确认6号峰为香叶木素。

7、随行对照药材测定

取半边莲对照药材(121142-201605)4g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。

分别精密吸取半边莲配方颗粒供试品溶液2μl、对照药材参照物溶液2μl，注入液相色谱仪，按照本实验例第1项下方法测定，对6号峰进行确认，结果见图18。

结论：由以上图谱可以看出，半边莲对照药材配方颗粒相比较，特征峰保留时间与峰数差异较小，可为标准研究制定提供依据。

实验例5半边莲配方颗粒特征图谱的方法学验证

1、精密度

(1)重复性

取半边莲配方颗粒(批号：KL190513-221700-01)6份，按实验例4第1项下的方法测定，获得其特征图谱，以6号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。结果显示，各特征峰的相对保留时间RSD在0.03～0.72％范围内，相对峰面积的RSD在2.16～2.72％范围内，表明该特征图谱的重复性较好。

(2)中间精密度

采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器，取半边莲配方颗粒(批号：190513-221700-01)6份，按实验例4第1项下的方法测定，获得其特征图谱，以6号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。

结果显示，采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器获得的特征图谱中，各特征峰的相对保留时间RSD在0.2～0.9％范围内，相对峰面积的RSD在2.0～5.0％范围内。不同仪器间相对保留时间RSD在0.1～4.5％范围内，相对峰面积在2.0～5.0％范围内，表明该特征图谱的中间精密度较好。

2、稳定性

取半边莲配方颗粒(KL190513-221700-01)，按实验例4第1项下的方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h按实验例4第1项下的方法进行测定，获得其特征图谱，以6号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。

结果显示：稳定性实验结果可知，溶液中化学成分在24小时稳定性，各特征峰的相对保留时间RSD在0.05～0.48％范围内，相对峰面积的RSD在1.96～2.94％范围内。证明样品在24h内稳定性良好。

3、耐用性

(1)不同柱温的考察：取半边莲配方颗粒(批号：KL190116-113301-01)，按实验例4第1项下的供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别于不同柱温(28℃、30℃及32℃)按实验例4第1项下的方法进行测定，考察实验方法对于柱温的耐用性。

结果显示，不同柱温下获得的色谱图，各特征峰的相对保留时间RSD在0.17～2.56％范围内，相对峰面积的RSD在1.29～14.07％范围内。但由于相对峰面积不进行规定，故符合系统适用性要求，表明该方法对柱温耐用性较好。

(2)不同流速的考察：取半边莲配方颗粒(批号：KL190116-113301-01)，按实验例4第1项下的供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同流速(0.18ml/min、0.2ml/min及0.22ml/min)按实验例4第1项下的方法进行测定，考察实验方法对于流速的耐用性。结果显示：不同流速下获得的色谱图，各特征峰的相对保留时间RSD在0.35～6.40％范围内，相对峰面积的RSD在4.58～107.67％范围内。相对保留时间RSD值大于3％，故不符合系统适用性要求，表明该方法对流速耐用性差，所以固定流速为0.2ml/min。

对比例1

按照文献《半边莲药材HPLC指纹图谱的研究》中公开的方法测定半边莲配方颗粒，具体包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备

取半边莲药材粉末(过60目筛)1.0g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加甲醇50ml，称重，60℃下加热回流1h，滤过，蒸干，甲醇定容至10ml，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

取半边莲配方颗粒(批号KL190513-221700-01)适量，研细，按照其收膏率进行折算，按标准汤剂冻干粉计取半边莲配方颗粒0.5g，精密称定，加24倍水，煮沸30分钟，滤过，滤液置锥形瓶中，用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并萃取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5ml容量瓶中，滤过，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备

取香叶木素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含香叶木素0.1mg的溶液。取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含野黄芩苷0.1mg的溶液。

(3)测试

分别取供试品溶液和两个对照品溶液10μl，注入色谱仪中，在下述色谱条件下检测，色谱柱：DaisoC₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇(B)-水(A)；洗脱方式：线性洗脱，B相，0-40min(0-100％)，40-60min(100％-100％)，60min(停止)；检测波长：261nm，流速：1.0mL/min，进样量10μl。结果见图19所示。

由结果可知，供试品图谱中无参照峰，文献中对于半边莲药材是仅以峰面积大且稳定为由选取8号峰作为S峰，但半边莲配方颗粒经水提后制成的颗粒剂中该特征峰峰面积极小，且成分未知，无法定位该峰。

此外，该方法下香叶木素及野黄芩苷均无法良好分离，在指纹图谱中未见上述对照品参照峰，该方法不适用于香叶木素的分离鉴别。

对比例2

按照文献《复方半边莲注射液HPLC指纹图谱及其安全性研究》测定半边莲配方颗粒，具体包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备

取半边莲配方颗粒(批号KL190513-221700-01，过三号筛)1.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入纯水25ml，加热回流，保持微沸1h，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液加入参照物溶液，使得每1ml含野黄芩苷39.76μg的加内标的混合溶液，作为半边莲颗粒内标供试品溶液。

取半边莲配方颗粒(批号KL190513-221700-01)0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入纯水25ml，加热回流，保持微沸1h，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得半边莲颗粒外标供试品溶液。

(2)对照品溶液的制备

取香叶木素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含香叶木素0.1mg的溶液。取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含野黄芩苷198.8μg的溶液。

(2)测试

色谱柱：Agient ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：以甲醇-0.05％磷酸(v/v)梯度洗脱，0～25min甲醇从15％升至38％，25～40min甲醇38％不变，40～50％，甲醇从38％升至75％，50～55min甲醇从75％降至15％，55～60min甲醇15％不变，流速：1ml/min；柱温30℃，检测波长335nm，进样量进样量10μl。结果见图20-22所示。

由结果可知，采用内标法进行分析，加入野黄芩苷，但该方法重现性差，转化为外标法检测发现，该方法下，半边莲颗粒中未检出黄芩苷和香叶木素，可能是半边莲颗粒在水提过程中成分转化所导致的，因此，该方法不适用于半边莲颗粒的特征分析。

对比例3

按照实验例4第1项下方法制备供试品溶液，取橙皮苷、蒙花苷、迷迭香酸、芹菜素、野黄芩苷、柚皮苷作为对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.1mg各对照品的溶液，作为对照品溶液。按实验例4第1项下的方法进行液相色谱检测，结果见图23-28所示。

上述对照品均未能够进行峰指认，不能与供试品的峰完全对应，其中橙皮苷色谱峰与供试品保留时间对应，但进一步做加样实验，该峰未增高，故判定该峰不为橙皮苷。

对比例4

按照实验例4第1项下方法制备供试品溶液，取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg对照品的溶液，作为对照品溶液。按实验例4第1项下的方法进行液相色谱检测，区别仅在于检测波长为254nm。结果见图29所示，党参炔苷对照品峰不能与供试品的峰完全对应，未能够进行峰指认。

发明所做的举例，而并非是对本发明实施方法的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备；

(2)取供试品溶液采用高效液相色谱法检测得到特征图谱，检测过程中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，含酸水溶液-乙腈为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→20min→30min→50min，流动相中乙腈的体积百分数为：12％→14％→22％→35％。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，以0.05-0.15vt％磷酸水溶液-乙腈或者以0.05-0.15vt％甲酸水溶液-乙腈为流动相；和/或，检测波长为330-350nm，流速为0.18-0.22mL/min，柱温为25-35℃。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)包括，取半边莲供试品经过提取、一次固液分离、萃取、加溶剂溶解、二次固液分离步骤得到半边莲供试品溶液；

优选地，所述半边莲供试品选自半边莲及其制剂。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)还满足如下1)-6)中的一项或者多项；

1)所述提取方式选自加热提取或者超声提取；

2)提取溶剂为水，提取时溶剂的体积与半边莲供试品质量之比为30-100：1；

3)一次固液分离和/或二次固液分离独立地选自离心或者过滤；

4)萃取过程中采用的萃取剂为乙酸乙酯，萃取次数为1-3次，

5)每次萃取时所采用的萃取剂的体积与半边莲供试品的质量之比为20-100：1；

6)溶解时采用的溶剂为甲醇或者体积百分数不低于60％的甲醇水溶液。

5.根据权利要求1-4中任一所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括采用香叶木素对照品制备对照品溶液的步骤，以及按照权利要求1-4中任一所述的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品图谱的步骤和/或所述的构建方法还包括采用半边莲对照药材制备参照物溶液并按照权利要求1-4中任一所述的构建方法中的高效液相色谱法检测参照物溶液得到参照物特征图谱的步骤。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法包括，取香叶木素对照品加溶剂制备成每1ml含0.01-0.5mg香叶木素对照品的溶液，作为对照品溶液；

所述参照物溶液为按照权利要求1-4中任一所述的供试品溶液的制备方法制得。

7.一种半边莲及其制剂的特征图谱，其特征在于，其选自如下(1)-(4)中任意一项：

(1)其具有香叶木素峰；

(2)其具有6个特征峰，1-5号峰为共有峰，6号峰为香叶木素峰；

(3)其具有6个特征峰，以香叶木素峰为参照峰，各特征峰与参照峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.41(峰1)、0.42(峰2)、0.82(峰3)、0.86(峰4)、0.95(峰5)和1.00(峰6)；

(4)采用半边莲供试品按照权利要求1-6中任一所述的构建方法得到。

8.一种半边莲及其制剂的对照特征图谱，其特征在于，所述半边莲的对照特征图谱选自如下(1)-(3)中的任意一项：

(1)其具有6个特征峰，以香叶木素峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.41(峰1)、0.42(峰2)、0.82(峰3)、0.86(峰4)、0.95(峰5)和1.00(峰6)；

(2)使用单批次或者多批次半边莲供试品按照权利要求1-6中任一所述的构建方法得到的特征图谱；

(3)使用多批次半边莲供试品按照权利要求1-6中任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。

9.权利要求1-6中任一项所述的半边莲及其制剂的特征图谱的构建方法和/或权利要求7所述的半边莲及其制剂的特征图谱和/或权利要求8所述的半边莲及其制剂的对照特征图谱在半边莲产品的质量检测中的用途。

10.一种半边莲产品的质量检测方法，其特征在于，包括将待测半边莲产品的特征图谱与半边莲及其制剂的对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测半边莲产品的特征图谱为使用待测半边莲产品按照权利要求1-6中任一所述的构建方法得到，所述半边莲及其制剂的对照特征图谱为权利要求8所述的半边莲及其制剂的对照特征图谱。

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