CN113759028B - 一种烫狗脊制剂及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药质量控制技术领域，具体提供了一种烫狗脊制剂及其制备方法和质量控制方法，所述烫狗脊制剂是采用密度为0.43‑0.60g/cm3的烫狗脊饮片为原料制备得到，该方法能够显著提高烫狗脊制剂在制备各环节中所含原儿茶酸的含量，包括但不局限于提取环节、浓缩环节和干燥环节，使得最终得到的烫狗脊制剂中原儿茶酸有效成分的含量明显提高，从而得到高品质的烫狗脊制剂。

Description

一种烫狗脊制剂及其制备方法和质量控制方法
技术领域
本发明属于中药质量控制技术领域，特别是涉及一种烫狗脊制剂及其制备方法和质量控制方法。
背景技术
烫狗脊为蚌壳蕨科植物狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的炮制品，主要含有芳香族类、酚酸类、黄酮类、皂苷类、糖苷类及氨基酸类等成分，多年来的研究结果表明其具有多种药理作用，包括防治骨质疏松、抑制血小板聚集、止血与镇痛、抑菌、抗炎、抗风湿、保肝、抗氧化及抗癌等，极具应用前景和开发价值。
随着社会老龄化的进一步加剧，老年性疾病日渐增多，烫狗脊的临床用量也越来越多。烫狗脊的质量也越来越受到关注，原儿茶酸是烫狗脊中最重要的有效成分之一，目前各国药典通常以原儿茶酸含量作为烫狗脊饮片的衡量指标，难以全面反映烫狗脊产品的质量状况，且现有技术中并未见任何相关烫狗脊全面质量控制方法的报道。
而且，通过文献及市场调研后发现，市售狗脊质量参差不齐，使得以烫狗脊饮片为原料的烫狗脊制剂的品质无法得到保证，有效成分的含量低下，严重影响这些烫狗脊制剂的品质和临床应用。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术生产的以烫狗脊为原料的烫狗脊制剂中原儿茶酸含量低下的缺陷。
为此，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种烫狗脊制剂，其原料药包括密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片。
进一步地，所述烫狗脊饮片的密度按照如下公式计算：
ρ＝M/V
其中，ρ为密度；M为烫狗脊饮片的质量；V为烫狗脊饮片的体积。
进一步地，所述烫狗脊饮片的体积的测定包括如下步骤：
取固体介质置于圆柱形容器中，震荡使固体介质的界面水平，测量并记录容器中固体介质的高度H2、以及固体介质的水平界面与圆柱形容器形成的截面半径R，然后将固体介质倒出，备用；
将烫狗脊饮片置于上述同一圆柱形容器中，倒入上述固体介质，震荡使固体介质界面水平且烫狗脊饮片完全淹没在固体介质下面，测定并记录圆柱形容器中固体介质的高度H1，根据如下公式计算烫狗脊饮片的体积，
V＝[(H1-H2)×πR2。
进一步地，所述烫狗脊饮片的体积的测定包括如下步骤：
取固体介质置于圆柱形容器中，震荡使固体介质的界面水平，测量并记录容器中固体介质的高度H2、以及固体介质的水平界面与圆柱形容器形成的截面半径R，然后将固体介质倒出，备用；
将部分沙土置于上述同一圆柱形容器中，震荡保证沙土覆盖烧杯的底部，将烫狗脊饮片倒入上述圆柱形容器中，倒入剩余的固体介质，震荡使固体介质界面水平且烫狗脊饮片完全淹没在固体介质下面，测定并记录圆柱形容器中固体介质的高度H1，根据如下公式计算烫狗脊饮片的体积，
V＝[(H1-H2)×πR2。
进一步地，所述固体介质的粒径为50-100目；和/或，可先将固体介质的15-21wt％覆盖圆形容器底部，然后再放入烫狗脊饮片；和/或，所述固体介质为河砂、土或固体树脂；和/或，所述圆柱形容器为烧杯或量筒；和/或，所述烫狗脊饮片与固体介质的质量比为1:10-20。
进一步地，所述烫狗脊制剂还包括药学上可接受的辅料和/或还包括其他原料药。
可选的，所述药学上可接受的辅料包括但不局限于药学上可接受的溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗粘合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂、高分子骨架材料和成膜材料中的至少一种。
所述烫狗脊制剂选自烫狗脊配方制剂、烫狗脊药对制剂或者包含烫狗脊的复方制剂。其中烫狗脊配方制剂的原料药仅包括烫狗脊，烫狗脊药对制剂是指除了烫狗脊之外还可以包括任意一种其他原料药，包含烫狗脊的复方制剂是指除了烫狗脊之外还可以包括任意多种其他原料药。
可选的，其他原料药包括但不局限于萆薢、杜仲、续断、芡实、白果、白蔹、当归、茯苓等。
可选的，所述制剂为配方颗粒剂、片剂、凝胶剂、乳霜剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、溶液剂、糖浆剂、煎膏剂、栓剂、气雾剂、贴膏剂、软膏剂、注射剂、喷剂、搽剂、酊剂、湿敷剂、糊剂或洗剂。
本发明还提供了一种烫狗脊制剂的制备方法，取密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片加入或者不加药学上可接受的辅料，按照常规工艺制备得到。
具体的，所述烫狗脊制剂为烫狗脊配方颗粒，所述烫狗脊配方颗粒的制备方法包括，取本发明的烫狗脊饮片，加溶剂提取，滤过，滤液浓缩，得浸膏，干燥，制粒，即得。
进一步地，所述烫狗脊制剂的制备方法还满足如下(1)-(6)中的任意一项或者多项：
(1)提取步骤中，溶剂为水，可以但不局限于选自自来水、蒸馏水、注射用水、纯化水、纯净水、矿物质水等；
(2)提取步骤中，提取方式为煎煮提取、热回流提取或者超声波热回流提取；
(3)提取步骤中，提取的次数为至少1次，每次加溶剂的体积与烫狗脊的质量比为1：10-15，每次提取的时间为0.5-2小时；
(4)干燥方式选自喷雾干燥、冷冻干燥、烘干或减压干燥；
(5)制粒之前还包括取干燥后的浸膏与填充剂混合的步骤，优选地，填充剂选自糊精、可溶性淀粉、麦芽糊精、乳糖等常规填充剂。考虑糖尿病患者、乳糖不耐受人群，乳糖和可溶性淀粉不能作为辅料添加；
(6)制粒方式选自干法制粒或者湿法制粒。
在某些具体的实施方式中，可以仅采用上述烫狗脊饮片制备烫狗脊制剂，该烫狗脊制剂为烫狗脊配方制剂。也可以采用上述烫狗脊饮片，以及除了烫狗脊之外的任意一种其他原料药制备烫狗脊制剂，该烫狗脊制剂为烫狗脊药对制剂。也可以采用上述烫狗脊饮片，以及除了烫狗脊之外的任意多种其他原料药制备烫狗脊制剂，该烫狗脊制剂为烫狗脊复方制剂。
可选的，其他原料药包括但不局限于萆薢、杜仲、续断、芡实、白果、白蔹、当归、茯苓等。
本发明要解决的技术问题在于克服现有技术烫狗脊的构建方法得到的指纹图谱的准确性较低、分离度不佳以及无法适用于检测烫狗脊制剂的问题，从而提供了一种烫狗脊及其制剂特征图谱的构建方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备；
(2)高效液相检测：将供试品溶液注入液相色谱仪，检测，即得；其中，色谱条件包括：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以含磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下：0min→5min，1％流动相A，99％流动相B；5min→15min，1％→3％流动相A，99％→97％流动相B；15min→35min，3％→5％流动相A，97％→95％流动相B。
在某些优选的实施方式中，步骤(2)的检测波长为310nm。
在某些优选的实施方式中，步骤(2)的色谱条件还包括：柱温为30-40℃，流速为0.3-0.4mL/min。
在某些优选的实施方式中，步骤(2)的含磷酸水溶液中磷酸的体积百分数为0.1-0.2％。
在某些具体的实施方式中，步骤(1)中，供试品溶液的制备方法包括，取烫狗脊配方颗粒与溶剂混合，超声提取，滤过，取续滤液，即得。
在某些优选的实施方式中，所述供试品溶液的制备方法包括，取烫狗脊配方颗粒0.2-0.6g，加入体积比为80：20-60：40的甲醇与0.5-2vt％醋酸水溶液构成的混合溶液20-30ml，超声处理20-40分钟，放冷，再成定重量，用所述混合液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
根据本发明任一项所述的构建方法，所述烫狗脊及制剂选自烫狗脊药材、烫狗脊饮片和烫狗脊制剂中的至少一种；其中烫狗脊制剂是由烫狗脊提取后得到的提取液(例如煎煮后得到的汤剂)按照药学上常规工艺，加入或者不加药学上常规辅料制成的中药制剂。
优选地，所述烫狗脊制剂可以但不局限于干粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、溶液剂等。
更优选地，本发明提供的烫狗脊及其制剂特征图谱的构建方法可以同时适用于烫狗脊药材、烫狗脊饮片、烫狗脊标准汤剂冻干粉和烫狗脊配方颗粒，即所述烫狗脊及其制剂选自烫狗脊药材、烫狗脊饮片、烫狗脊标准汤剂冻干粉和烫狗脊配方颗粒中的至少一种。
在某些优选的实施方式中，所述构建方法还包括对照品溶液的制备步骤和按照上述所述的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤。
所述对照品包括咖啡酸对照品，还包括原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶醛和咖啡酸中的至少一种。
在某些优选的实施方式中，取原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶醛和咖啡酸加溶剂制备得到混合溶液。
在某些优选的实施方式中，所述对照品溶液的制备方法包括，取原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶醛、咖啡酸对照品加溶剂溶解，制成每1ml含5-羟甲基糠醛0.1-0.5mg、原儿茶醛2-8μg、咖啡酸6-12μg的混合溶液。
在最优选的实施方式中，所述溶剂选自体积比为80：20-60：40的甲醇与0.5-2vt％醋酸水溶液构成的混合溶液。
可选的，所述构建方法还包括烫狗脊对照特征图谱的构建，利用中国药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批烫狗脊特征图谱进行分析，生成烫狗脊对照特征图谱。
本发明还提供了一种上述的构建方法得到的烫狗脊及其制剂的特征图谱。
本发明还提供了一种烫狗脊及其制剂的特征图谱，所述特征图谱的特征峰包括5-羟甲基糠醛峰、原儿茶酸峰、原儿茶醛峰和咖啡酸峰；具体的，峰1为5-羟甲基糠醛峰，峰2为原儿茶酸峰，峰3为原儿茶醛峰，峰4为咖啡酸峰。
所述特征图谱的特征峰包括对照品峰(具体为5-羟甲基糠醛峰、原儿茶酸峰、原儿茶醛峰或者咖啡酸峰)是指：该特征图谱中的特征峰与对照品参照图谱中的对照品峰相对应。本发明中，相对应是指两个峰的保留时间的RSD<5％、<3％或者1％。和/或，相对应是指两个峰重合度不小于50％。
其中，对照品参照图谱为本发明任一所述的对照品参照图谱，优选为与特征图谱相同色谱条件下得到的对照品参照图谱。
本发明还提供了一种烫狗脊及其制剂的特征图谱，其具有4个共有特征峰，以原儿茶酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的土15％、土10％或者土5％范围之内；规定值为0.75(峰1)、1.0(峰2)、1.65(峰3)、3.10(峰4)。
本发明还提供了一种烫狗及其制剂的对照特征图谱，其含有4个特征峰，分别为5-羟甲基糠醛峰、原儿茶酸峰、原儿茶醛峰和咖啡酸峰；具体的，峰1为5-羟甲基糠醛峰，峰2为原儿茶酸峰，峰3为原儿茶醛峰，峰4为咖啡酸峰。各特征峰与对照品参照图谱中的对照品峰相对应。
本发明还提供了一种烫狗及其制剂的对照特征图谱，其含有4个特征峰，以原儿茶酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的土15％、土10％或者土5％范围之内；规定值为0.75(峰1)、1.0(峰2)、1.65(峰3)、3.10(峰4)。
本发明中，烫狗脊及其制剂的对照特征图谱还可以使用单批次或者多批次烫狗脊药材、烫狗脊饮片或者烫狗脊制剂按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱；可选的，烫狗脊及其制剂的对照特征图谱还可以使用多批次烫狗脊、烫狗脊饮片或者烫狗脊制剂按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。
可选的，至少采用2批烫狗脊药材、烫狗脊饮片或者烫狗脊制剂得到对照特征谱图，例如采用3个批次烫狗脊饮片、6个批次烫狗脊饮片、12个批次烫狗脊配方颗粒、15个批次的烫狗脊药材、18批烫狗脊标准汤剂冻干粉。
本发明解决的另一技术问题在于，现有技术的方法难以全面反映烫狗脊产品的质量状况，且现有技术中并未见任何相关烫狗脊全面质量控制方法。
为此，本发明还提供了一种烫狗脊及其制剂的质量控制方法，包括取密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片制备烫狗脊制剂的步骤；和/或，使用待测烫狗脊产品按照本发明任一所述的构建方法构建待测烫狗脊产品的特征图谱的步骤。
作为优选的实施方式，还包括将待测烫狗脊产品的特征图谱与烫狗脊及其制剂的对照特征图谱进行比较的步骤；所述烫狗脊及其制剂的对照特征图谱为本发明所述的烫狗脊及其制剂的对照特征图谱。
本发明还提供了一种烫狗脊及其制剂的质量控制方法，包括采用高效液相法测定原儿茶酸含量的方法。
进一步地，所述质量检测方法还包括原儿茶酸的含量测定方法，包括如下步骤：
对照品溶液的制备：取原儿茶酸对照品适量，精密称定，加甲醇：1vt％冰醋酸水溶液(体积比为70：30)混合溶液制成每1ml含原儿茶酸80μg，摇匀，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇-1vt％冰醋酸水溶液(体积比为70：30)混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇-1vt％冰醋酸水溶液(70：30)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得，其中色谱条件包括，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为100mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm)；以甲醇-0.2vt％磷酸水溶液(3：97)为流动相；流速为0.35ml/min；柱温为35℃，检测波长为260nm；理论板数按原儿茶酸峰计算应均不低于5000。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的烫狗脊制剂，通过采用密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片为原料制备烫狗脊制剂，能够显著提高烫狗脊制剂在制备各环节中所含原儿茶酸的含量，包括但不局限于提取环节、浓缩环节和干燥环节，使得最终得到的烫狗脊制剂中原儿茶酸有效成分的含量明显提高，从而得到高品质的烫狗脊制剂，而以密度值在0.43-0.60g/cm3范围之外的烫狗脊饮片为原料制得的烫狗脊制剂中的原儿茶醛含量低下，烫狗脊制剂的品质较差。
2.本发明提供的烫狗脊制剂，通过采用固体介质作为测量烫狗脊饮片的体积的介质，可避免烫狗脊饮片在液体介质中漂浮，或者有效成分在液体介质中溶出导致测定的密度不准确的情况发生。
3.本发明提供的烫狗脊制剂，通过限定固体介质的粒径为50-100目，可提高测量得到烫狗脊饮片密度的准确性。通过限定所述烫狗脊饮片与固体介质的质量比为1:10-20；可提高测量得到烫狗脊饮片密度的准确性。
4.本发明提供的烫狗脊制剂的制备方法，如前述，通过采用密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片为原料药制备烫狗脊制剂，显著提高了烫狗脊制剂中原儿茶酸有效成分的含量，从而得到高品质的烫狗脊制剂。
5.本发明提供的烫狗脊及其制剂特征图谱的构建方法，经过多次反复试验，采用采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以含磷酸水溶液为流动相B，并在特定的梯度洗脱下构建得到特征图谱，该特征图谱中共有色谱峰的出峰时间适中，色谱峰分离度高，峰形佳且无干扰，容易定位，可以全面反映样品的特征信息，重现性好。尤其是通过对照品参照图谱的制备和检测，可以指认并确定4个特征峰，分别为5-羟甲基糠醛峰、原儿茶酸峰、原儿茶醛峰和咖啡酸峰，检测更加全面可靠。
6.本发明提供的烫狗脊制剂的质量控制方法，通过采用密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片制备烫狗脊制剂，通过本发明的方法构建烫狗脊制剂特征图谱，上述任何单一方面均可以实现烫狗脊制剂产品的质量控制，两方面相结合，使得既可以从饮片的角度实现质量控制，也可以从烫狗脊制剂的角度实现质量控制，更好地、全面地控制烫狗脊质量，有利于得到高质量烫狗脊制剂产品。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例4中原儿茶酸峰纯度的检测中供试品的色谱图；
图2是实施例4中专属性实验色谱图；
图3是实施例4中原儿茶酸的标准曲线；
图4是实施例5中15批烫狗脊标准汤剂冻干粉的液相图谱；
图5是实施例5中对照品与供试品特征峰确认图；
图6是实施例5中不同流动相酸浓度的特征谱图；
图7是实施例5中不同流速的特征谱图；
图8是实施例5中不同柱温的特征谱图；
图9是实施例5中不同色谱柱的特征谱图；
图10是实施例5中不同仪器的特征谱图；
图11是实施例5中重复性考察色谱图；
图12是实施例5中中间精密度考察色谱图；
图13是实施例5中稳定性考察色谱图；
图14是实施例5中配方颗粒的特征图谱；
图15是实施例5中方法1得到的供试品色谱图；
图16是实施例5中方法2得到的供试品的PDA图；
图17是实施例5中方法2的供试品色谱图；
图18是实施例5中方法3供试品色谱图；
图19是实施例5中方法3的咖啡对照品色谱图；
图20是实施例5中方法4得到的供试品色谱图；
图21是对比例1中烫狗脊标准冻干粉的特征图谱；
图22是对比例1中烫狗脊配方颗粒的特征图谱。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
π为圆周率，计算时，取3.14。测量烫狗脊饮片体积的测量方法，不仅限于实施例中的圆柱形容器，只要能够测量得到烫狗脊饮片的体积，任何容器都适用。
实施例1烫狗脊配方颗粒
本实施例提供了一种烫狗脊配方颗粒，其原料包括密度值为0.56g/cm3烫狗脊饮片，该烫狗脊饮片的密度按照如下方法测定：
称取480g粒径为50目的河砂置于500mL烧杯中，轻轻震荡3次，保证砂面水平，测定并记录烧杯中河砂的高度H2，以及河砂的界面与烧杯形成的截面半径R，然后将河砂倒出；备用；
然后将称取的30g烫狗脊饮片放入烧杯中，倒入上述的河砂，轻轻震荡3次，保证砂面水平且烫狗脊饮片完全淹没在河砂下面，测定并记录烧杯中河砂的高度H1；
将上述的数值带入公式ρ＝30g/[(H1-H2)×πR2]中，计算得被测烫狗脊饮片的密度为0.56g/cm3。
上述烫狗脊配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：取上述密度值为0.56g/cm3烫狗脊饮片适量，煎煮一次，一煎加12倍水量(每克烫狗脊饮片加入12ml水)，沸腾后提取1.5小时，滤过，60℃滤液减压浓缩成相对密度为1.08～1.10(60℃)的纯浸膏，喷雾干燥，干法制粒，即得。
实施例2烫狗脊片剂
本实施例提供了一种烫狗脊片剂，其原料包括密度值为0.57g/cm3烫狗脊饮片，该烫狗脊饮片的密度按照如下方法测定：
称取480g粒径为80目的沙土置于500mL烧杯中，轻轻震荡4次，保证沙土面水平，测定并记录烧杯中沙土的高度H2，以及沙土的界面与烧杯形成的截面半径R，然后将沙土倒出；备用；
将上述80g的沙土置于上述同一烧杯的底部，轻轻震荡2次，保证沙土覆盖烧杯的底部，然后将称取的24g烫狗脊饮片放入烧杯中，倒入剩余的沙土，轻轻震荡4次，保证沙土面水平且烫狗脊饮片完全淹没在沙土下面，测定并记录烧杯中沙土的高度H1；
将上述的数值带入公式ρ＝24g/[(H1-H2)×πR2]中，计算得被测烫狗脊饮片的密度为0.57g/cm3。
上述烫狗脊配片剂的制备方法，包括如下步骤：取上述密度值为0.57g/cm3烫狗脊饮片适量，煎煮一次，一煎加8倍水量(每克烫狗脊饮片加入8ml水)，沸腾后提取1.5小时，滤过，50℃滤液减压浓缩成相对密度为1.08～1.10(60℃)的纯浸膏，喷雾干燥，得到干粉，加占干粉质量5wt％的糊精，干法制粒，压片，即得。
实施例3烫狗脊配方颗粒
本实施例提供了一种烫狗脊配方颗粒，其原料包括密度值为0.58g/cm3烫狗脊饮片，该烫狗脊饮片的密度按照如下方法测定：
称取480g粒径为100目的沙土置于500mL烧杯中，轻轻震荡4次，保证沙土面水平，测定并记录烧杯中沙土的高度H2，以及沙土的界面与烧杯形成的截面半径R，然后将沙土倒出；备用；
将上述90g的沙土置于上述同一烧杯的底部，轻轻震荡3次，保证沙土覆盖烧杯的底部，然后将称取的24g烫狗脊饮片放入烧杯中，倒入剩余的沙土，轻轻震荡4次，保证沙土面水平且烫狗脊饮片完全淹没在沙土下面，测定并记录烧杯中沙土的高度H1；
将上述的数值带入公式ρ＝24g/[(H1-H2)×πR2]中，计算得被测烫狗脊饮片的密度为0.58g/cm3。
上述烫狗脊配方颗粒的制备方法，包括如下步骤：取上述密度值为0.58g/cm3烫狗脊饮片适量，煎煮一次，一煎加10倍水量(每克烫狗脊饮片加入10ml水)，沸腾后提取1.5小时，滤过，40℃滤液减压浓缩成相对密度为1.08～1.10(60℃)的纯浸膏，喷雾干燥，干法制粒，压片，即得。
实施例4原儿茶酸的含量测定
1、仪器、试剂及试药
仪器：Waters ACQUITY
Figure BDA0003027764060000101
H-Class超高效液相色谱仪，PDA Detector紫外检测器，Empower 3色谱工作站；ME104E电子天平(梅特勒·托利多)，JY2002电子天平(梅特勒·托利多)，BSA124S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，BT25S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
色谱柱：Waters ACQUITY
Figure BDA0003027764060000111
HSS T3C18(2.1*100mm，1.8μm)
试药：原儿茶酸对照品(批号：110809-201205，中国食品药品检定研究院)试剂：甲醇(MERCK)、磷酸(Fisher Scientific)为色谱纯；水为蒸馏水(屈臣氏)；其它试剂均为分析纯。
烫狗脊标准汤剂冻干粉：采用不同批次的烫狗脊饮片按照如下方法制备，具体为：取烫狗脊饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量9倍水(每克烫狗脊饮片加入9ml水)，武火(500w)煮沸后，文火煎煮30分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量7倍水(每克烫狗脊饮片加入7ml水)，武火煮沸后，文火(200w)煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，浓缩(50℃以下)，浓缩至料液比约为1:1(相对密度为1.05-1.10(50℃))，冷冻干燥，即得。各批次烫狗脊标准汤剂冻干粉的批号分别为：190117-535400-01、190117-535400-02、190117-537000-03、190125-511500-05、190125-532600-08、190125-537000-10、190125-513000-11、190117-537000-12、190117-537000-13、190125-650000-15、190321-537600-18、190321-537500-19、190321-537700-20、190521-514100-21、190617-524400-22。
烫狗脊配方颗粒：采用不同批次的烫狗脊饮片，按照本发明实施例1的方法制得烫狗脊配方颗粒，批号：KL190117-535400-01、KL190521-514100-21、KL190617-524400-22。
2、测试方法
(1)色谱条件
方法：Waters ACQUITY
Figure BDA0003027764060000112
HSS T3C18(2.1*100mm，1.8μm)色谱柱，以甲醇-0.2vt％磷酸水溶液(甲醇与磷酸水溶液的体积比为3：97)为流动相，检测波长为260nm，柱温35℃，流速0.35ml/min。
(2)供试品溶液的制备
取供试品适量，研细，取约0.4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇与体积百分数为1％的冰醋酸水溶液(甲醇与冰醋酸水溶液的体积比为70：30)的混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇与体积百分数为1％的冰醋酸水溶液(甲醇与冰醋酸水溶液的体积比为70：30)的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)峰纯度的检验
取实施例1的配方颗粒，按照本实施例第2(2)项下方法制备得到供试品溶液，利用PDA检测器对原儿茶酸进行峰纯度检验，见图1、表1。
表1供试品溶液色谱中原儿茶酸峰纯度表
名称 纯度角度 纯度阈值 最大不纯度
原儿茶酸峰 1.097 4.170 8.077
结果显示，供试品溶液的色谱图中，原儿茶酸的峰纯角度小于纯度阈值1.097＜4.170，表明该方法获得的原儿茶酸峰纯度符合分析要求。
(4)系统适用性
在选定条件下，进行系统适用性试验，其结果见表2。
表2原儿茶酸系统适用性试验结果
测定次数 1 2 3 4 5 平均值 RSD％
理论板数 9964 9865 9945 9861 9994 9926 -
分离度 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 -
重复性 1791314 1795590 1794969 1795556 1792352 1793956.2 0.1
结果显示，原儿茶酸理论板数为均值为9926、分离度为3.2，重复性RSD值为0.1％，系统适用性符合分析要求。
3、方法学验证
(1)准确度
取原儿茶酸对照品适量，精密称定，加甲醇与体积百分数为1％的冰醋酸水溶液(甲醇与冰醋酸水溶液的体积比为70：30)的混合溶液制成每1ml含有原儿茶酸108.94μg的对照品溶液。取已知含量的供试品(烫狗脊配方颗粒，批号为190117-535400-01，原儿茶酸含量为0.534％)9份，每份约0.2g，精密称定，每三份分别精密依次加入原儿茶酸对照品溶液5ml、10ml、15ml，再分别加入甲醇与体积百分数为1％的冰醋酸水溶液(甲醇与冰醋酸水溶液的体积比为70：30)的混合溶液各20ml、15ml、10ml使其甲醇与体积百分数为1％的冰醋酸水溶液(甲醇与冰醋酸水溶液的体积比为70：30)的混合溶液加入量为25ml，余下操作同本实施例第2项下的方法，按照下式计算回收率，结果见表3。
Figure BDA0003027764060000121
表3原儿茶酸回收率试验结果表
Figure BDA0003027764060000122
Figure BDA0003027764060000131
小结：回收率试验所测得的原儿茶酸回收率范围为94.26％～99.81％，低浓度平均加样回收率为95.32％，中浓度平均加样回收率为97.92％，高浓度平均加样回收率为99.22％，符合方法学验证回收率要求，表明利用该方法测得的结果准确。
(2)重复性
取烫狗脊标准汤剂冻干粉(190117-535400-01)6份，按本实施例第2(2)项下方法制备供试品溶液，并按照本实施例第2(1)项色谱条件进行检测，结果见表4。
表4原儿茶酸含量测定重复性试验
Figure BDA0003027764060000132
小结：重复性试验所测得原儿茶酸平均含量为0.534％，其RSD为0.2％，符合方法学验证重复性要求。
(3)中间精密度
不同分析人员不同时间不同仪器Waters UPLC H-Class液相色谱仪(TUV检测器)进行中间精密度试验。取烫狗脊标准汤剂冻干粉(190117-535400-01)6份，按按本实施例第2(2)项下方法制备供试品溶液，并按照本实施例第2(1)项色谱条件进行检测，结果见表5。
表5原儿茶酸含量测定中间精密度试验
Figure BDA0003027764060000133
小结：中间精密度试验所测得原儿茶酸平均含量为0.538％，RSD值为0.4％，与重复性试验的检测结果的RSD为0.5％，符合方法学验证精密度要求。
(4)专属性
取供试品溶液、原儿茶酸对照品溶液、阴性对照溶液按照本实施例第2(1)项色谱条件进行检测获得其色谱图，其结果见图2，可见本方法专属性良好，阴性对照无干扰。
(5)线性
取原儿茶酸对照品适量，精密称定，加甲醇：1vt％冰醋酸溶液(体积比为70：30)混合溶液制成每1ml含原儿茶酸0.3433mg对照品溶液，作为线性1；吸取线性1溶液5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇：1vt％冰醋酸溶液(体积比为70：30)混合溶液至刻度，作为线性2；吸取线性2溶液5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇：1vt％冰醋酸溶液(体积比为70：30)混合溶液至刻度，作为线性3，按照上述操作，依次梯度稀释，分别作为线性4、5、6。精密吸取上述对照品溶液2μl，注入超高效液相色谱仪，按照本实施例第2(1)项色谱条件进行检测，获得原儿茶酸色谱峰峰面积，以原儿茶酸色谱峰的峰面积为纵坐标，原儿茶酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得原儿茶酸回归方程为y＝2E+07x+37314，R＝0.9999，其线性范围为0.0107-0.3433mg/ml，结果见下表6、图3。
表6原儿茶酸标准曲线
编号 1 2 3 4 5 6
原儿茶酸浓度(mg/ml) 0.3433 0.1716 0.0858 0.0429 0.0215 0.0107
原儿茶酸峰面积 7111563 3604347 1831444 928027 470584 236219
(6)范围
根据精密度、准确度和线性实验结果及15批批次烫狗脊标准汤剂中原儿茶酸含量的结果，其范围为0.209％～0.588％。
(7)耐用性
稳定性考察：取本品适量(190117-535400-01)，按本实施例第2(2)项下方法制备供试品溶液，按本实施例第2(1)项下色谱条件分别于放置0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h进行测定，记录原儿茶酸峰峰面积的变化情况，结果见表7。
表7原儿茶酸稳定性考察结果表
Figure BDA0003027764060000141
小结：由以上数据可知，24小时内原儿茶酸的峰面积RSD值为1.3％，符合分析要求。
(8)不同柱温的考察：取本品适量(190117-535400-01)，按第2(2)项供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别于不同柱温(33℃、35℃、37℃)下，其余条件均按本实施例第2(1)项下方法进行测定，考察实验方法对于柱温的耐用性。结果如表8所示。
表8不同柱温含量测定
Figure BDA0003027764060000142
Figure BDA0003027764060000151
小结：不同柱温下测得原儿茶酸含量RSD值为0.8％，符合系统适用性要求。表明该方法对柱温耐用性较好。
(9)不同流速的考察
取本品(190117-535400-01)，按本实施例第2(2)项下供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，分别采用不同流速(0.33ml/min、0.35ml/min、0.37ml/min)，其余条件均按本实施例第2(1)项下的色谱条件进行测定，考察该色谱方法对于不同流速的耐用性。结果如表9所示。
表9不同流速含量测定结果表
流速 原儿茶酸含量(mg/g)
0.33ml/min 5.40
0.35ml/min 5.37
0.37ml/min 5.35
均值 5.37
RSD(％) 0.5
小结：采用不同流速测得原儿茶酸含量RSD值为0.5％，符合系统适用性要求。表明该方法对流速有较好的耐用性。
(10)不同酸浓度的考察
取本品适量(190117-535400-01)，按本实施例第2(2)项下供试品溶液制备方法制备供试品，分别于不同浓度酸(0.10％磷酸、0.15％磷酸、0.20％磷酸)下，其余条件均按本实施例第2(1)项下的色谱条件进行测定，考察实验方法对于酸浓度的耐用性。结果如表10所示。
表10不同酸浓度下含量测定
酸浓度 原儿茶酸含量(mg/g)
0.10％磷酸 5.34
0.15％磷酸 5.37
0.20％磷酸 5.37
均值 5.36
RSD(％) 0.3
小结：流动相中不同浓度酸下测得原儿茶酸含量RSD值为0.3％，符合系统适用性要求。表明该方法对流动相中酸浓度耐用性较好。
(11)不同色谱柱的考察
取本品(190117-535400-01)适量，研细，按本实施例第2(2)项下供试品溶液的制备方法进行供试品溶液的制备，采用不同型号色谱柱，其余条件均按本实施例第2(1)项下的色谱条件测定，考察实验方法对于不同色谱柱的耐用性，结果见表11。
固定相1：Waters ACQUITY
Figure BDA0003027764060000161
BEH C18(2.1*100mm，1.7μm)；固定相2：Waters
Figure BDA0003027764060000162
C18(2.1*100mm，1.6μm)；固定相3：Waters ZORBAX SB-C18(2.1*100mm，1.8μm)；
表11不同色谱柱原儿茶酸含量测定结果
色谱柱型号 原儿茶酸含量(mg/g)
BEH柱 5.51
CORTECS柱 5.56
ZORBAX柱 5.53
均值 5.53
RSD(％) 0.5
小结：从上述结果可以看出，不同色谱柱条件下原儿茶酸含量结果的RSD为0.5％，符合系统适用性要求。表明该方法对不同色谱柱耐用性较好。
实施例5特征图谱
1、仪器、试剂及试药
仪器：Waters ACQUITY
Figure BDA0003027764060000163
H-Class超高效液相色谱仪，PDA Detector紫外检测器，Empower 3色谱工作站；ME104E电子天平(梅特勒·托利多)，JY2002电子天平(梅特勒·托利多)，BSA124S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，BT25S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
色谱柱：Waters ACQUITY
Figure BDA0003027764060000164
HSS T3C18(2.1*100mm，1.8μm)。
试药：原儿茶酸对照品(批号：110809-201205，中国食品药品检定研究院)；原儿茶醛对照品(批号：110810-201007，中国食品药品检定研究院)；5-羟甲基糠醛对品(批号：111626-201509，中国食品药品检定研究院)；咖啡酸对照品(批号：110885-201703，中国食品药品检定研究院)；
烫狗脊标准汤剂冻干粉：同实施例4。
烫狗脊配方颗粒：同实施例4。
试剂：乙腈(MERCK)、磷酸(Fisher Scientific)为色谱纯；水为蒸馏水(屈臣氏)；其它试剂均为分析纯。
2、测试方法
本方法研究发现乙腈-0.2vt％磷酸作为流动相色谱峰分离度较好且图谱信息更丰富，故选择乙腈-0.2vt％磷酸作为洗脱系统。
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为100mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm)；以乙腈为流动相A，以0.2vt％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.35ml；柱温35℃；检测波长为310nm；理论板数按原儿茶酸计算应均不低于5000。
表12梯度洗脱表
时间(分钟) A(％) B(％)
0～5 1 99
5～15 1→3 99→97
15～35 3→5 97→95
对照品参照物溶液的制备：取5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸对照品适量，精密称定，加甲醇-1vt％冰醋酸溶液(体积比为70：30)混合溶液制成每1ml含5-羟甲基糠醛0.3mg、原儿茶酸80μg、原儿茶醛5μg、咖啡酸10μg的混合溶液，作为对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备：取供试品适量，研细，取约0.4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇：1vt％冰醋酸溶液(体积比为70：30)混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇：1vt％冰醋酸溶液(体积比为70：30)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3、特征图谱的建立
(1)共有峰的确定
分别取15批烫狗脊标准汤剂冻干粉，按照本实施例第2项下的方法分别获得15批烫狗脊标准汤剂冻干粉的特征图谱(图4)，进行共有峰的标识与确定。将15批烫狗脊标准汤剂冻干粉液相图谱进行对比，确定7个共有峰。同时对比烫狗脊工艺研究各环节谱图，发现7个共有峰均稳定转移，未发生明显变化。
(2)特征峰的确认
取供试品溶液及主要化学成分对照品溶液，按本实施例第2项下的色谱条件进行检测比对，确定供试品溶液特征图谱中各特征峰，结果见图5。
小结：通过对比对照品溶液与供试品的色谱中各特征峰，分析确定了峰2为5-羟甲基糠醛、峰3为原儿茶酸、峰4为原儿茶醛、峰7为咖啡酸。
(3)特征图谱评价方式的确定
通过上述对15批标准汤剂特征图谱的比较，确定了7个共有峰。但其中峰5、6峰面积较小，考虑到产地、采收期等因素产生的含量差异，其不适宜作为评价指标。
对比特征图谱耐用性结果可知(图6-10，表13-17)，在微小的条件变化下，特征图谱中的峰1、2、3、4、7均稳定存在，但其保留时间存在一定差异，表明上述条件的变化对特征图谱存在一定影响，因此以主要活性成分原儿茶酸对应的峰(即峰3)为参照峰，计算其相对保留时间，在流动相酸浓度、流速、柱温条件的微小变化下，和不同色谱柱、不同仪器变化较大的条件下，相对保留时间均出现较大波动，表明相对保留时间也不适宜作为特征图谱的评价标准，且在色谱柱条件变化时，峰1出现肩峰，因此峰1也不适宜作为特征峰。
故选择峰2、峰3、峰4、峰7作为特征峰，并采用5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸对照品作为随行对照，保证方法的重现性。
表13不同流动相酸浓度相对保留时间表
酸浓度 峰1 峰2 峰3(S) 峰4 峰7
0.10％磷酸 0.475 0.786 1.000 1.620 2.955
0.15％磷酸 0.481 0.797 1.000 1.621 2.978
0.20％磷酸 0.467 0.773 1.000 1.622 3.053
RSD(％) 1.5 1.5 0.0 0.1 1.7
表14不同流速相对保留时间表
流速 峰1 峰2 峰3(S) 峰4 峰7
0.33ml/min 0.468 0.766 1.000 1.641 3.163
0.35ml/min 0.467 0.773 1.000 1.622 3.053
0.37ml/min 0.470 0.777 1.000 1.612 2.985
RSD(％) 0.3 0.7 0.0 0.9 2.9
表15不同柱温下相对保留时间表
柱温 峰1 峰2 峰3(S) 峰4 峰7
33℃ 0.444 0.741 1.000 1.643 3.114
35℃ 0.459 0.752 1.000 1.664 3.163
37℃ 0.473 0.765 1.000 1.684 3.235
RSD(％) 3.2 1.6 0.0 1.2 1.9
表16不同色谱柱相对保留时间表
Figure BDA0003027764060000181
表17不同仪器相对保留时间表
仪器 峰1 峰2 峰3(S) 峰4 峰7
仪器1 0.460 0.761 1.000 1.667 3.152
仪器2 0.465 0.743 1.000 1.683 3.353
RSD(％) 0.8 1.7 0.0 0.7 4.4
4、方法学验证
(1)重复性
取本品(批号：190117-535400-01)6份，按本实施例项2下方法测定，获得其特征图谱(图11)，其各特征峰均稳定存在，表明该特征图谱的重复性较好。
(2)中间精密度
采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器，取供试品(190117-535400-01)6份，按本实施例项2下方法测定，获得其特征图谱，如图12，其各特征峰均稳定存在，表明该特征图谱的在不同仪器间符合分析要求。
(3)稳定性
取供试品(190117-535400-01)，按本实施例项2下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、10、12、24h按本实施例项2下方法进行测定，获得其特征图谱(图13)，各特征峰均稳定存在，表明样品溶液中特征成分在24小时内稳定。
结论：通过对烫狗脊标准汤剂冻干粉进行方法学考察后，确定特征图谱均一致，且特征峰均稳定存在，该特征图谱方法较优，可列入标准。
5、配方颗粒的特征图谱
取实施例1制得的配方颗粒，采用本实施例第2项下供试品溶液制备供试品溶液，并按照本实施例第2项下方法测定，获得其特征图谱，如图14所示。
6、梯度洗脱条件的考察
取同一份烫狗脊标准汤剂冻干粉供试品溶液，考察不同的梯度程序对本品的分离效果的影响，除了梯度程序和检测波长之外，其余工艺和条件均与本实施例第2项下方法相同，其中，方法1-2为全波长扫描，方法2和4的检测波长为310nm。梯度洗脱条件见表18-21和图15-20所示。另取咖啡对照品溶液按照方法3检测得到咖啡酸对照品色谱。
表18方法1
时间/min 乙腈/％ 1vt％醋酸溶液/％
0～6 1 99
6～20 1→30 99→70
20～25 30→95 70→5
表19方法2
时间/min 乙腈/％ 1vt％醋酸溶液/％
0～6 1 99
6～20 1→15 99→85
20～25 15→95 85→5
表20方法3
时间/min 乙腈/％ 0.2vt％磷酸溶液/％
0～5 1 99
5～9 1→2 99→98
9～14 2→10 98→90
14～20 10 90
20～24 10→20 90→80
24～25 20→1 80→99
表21方法4
时间/min 乙腈/％ 0.2vt％磷酸溶液/％
0～5 1 99
5～15 1→3 99→97
15～35 3→5 97→95
其中，方法1得到的色谱峰主要集中在前8分钟内，根据有机相比例可知其主要在1％-20％左右，各峰无法分离。对于方法2，根据PDA图可知其所含成分在310nm下有较强的吸收，因此选用310nm作为特征图谱的检测波长，同时可知烫狗脊配方颗粒中的化学成分主要在有机相比例在1％至15％间出峰，因此需要在此范围内优化洗脱程序。对于方法3，供试品色谱图中咖啡酸峰分离度欠佳，需要优化梯度程序，同时可知5羟甲基糠醛、原儿茶酸及原儿茶醛实现完全分离，且保留时间过长，需要平衡分离度及检测时效。对于方法4，可知供试品色谱图中咖啡酸峰有效分离，检测时间控制在35分钟内，因此，选定方法4的梯度洗脱程序。
对比例1
采用专利文献CN110441441A的方法检测本发明的烫狗脊标准汤剂冻干粉(批号：DGF190117-535400-01)和配方颗粒(批号：KL190117-535400-01)，具体方法为：
(1)供试品溶液制备：分别取上述待测样品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-1％冰醋酸溶液(70：30)混合溶液25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇-1％冰醋酸溶液(70：30)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(2)检测：精密吸取供试品溶液、对照药材溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪，测定。色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱(柱长为150mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.6μm)；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为265nm；柱温35℃；流速0.40ml/min。梯度洗脱条件如下：
表22梯度洗脱表
Figure BDA0003027764060000201
如图21和22所示，特征峰无法分类，且特征峰基本无法指认，因此以对比文件1色谱条件检测烫狗脊标准汤剂冻干粉及颗粒存在缺陷。
实验例1
分别随机选取在市场上采购的第04批、09批、16批、17批、21批和22批烫狗脊饮片，分别按照实施例1的方法测定各批次饮片的密度值，其结果见表23所示。然后，将第21批和22批饮片分别分为两组，包括未控制组(密度值＞0.60g/cm3)与控制组；其中将21批和22批饮片的控制组烫狗脊饮品炒制12min左右，使得其密度值符合要求，按照实施例1的方法测定密度值在0.43-0.60g/cm3，未控制组不处理。然后取控制组、未控制组的饮片以及其他各批次饮片分别按照实施例1的方法制备烫狗脊配方颗粒，并按照《中国药典》中烫狗脊含量测定方法进行检测，对各组配方颗粒制备过程中提取环节、浓缩环节和干燥环节原儿茶酸的含量进行监控，对于提取环节和浓缩环节为分别收集提取、滤过后得到的提取液和浓缩后得到的浓缩液再进行冻干得到冻干粉进行测定，对于干燥环节直接收集喷雾干燥后的干粉进行测定，其结果见表23所示。
表23相同饮片密度值控制前后对比
Figure BDA0003027764060000211
由上表可以看出，相比于组1和组3，本发明组2-控制组得到的配方颗粒的原儿茶酸含量均有明显提高，而且本发明通过对相同饮片的干预，使得其密度值在0.43-0.60g/cm3内，其制得的配方颗粒在制备过程各个环节中原儿茶酸含量都较未控制组所制得的配方颗粒的原儿茶酸含量均有明显提高，表明通过增加密度值对原料的筛选对于生产出优质的烫狗脊配方颗粒的必要性。
因此本发明通过从生产源头质控饮片密度值在0.43-0.60g/cm3之间，能够得到优质配方颗粒，同时建立的特征图谱能够有效的监控烫狗脊配方颗粒中化学成分情况，并通过原儿茶酸含量测定方法有效、全面控制烫狗脊配方颗粒质量的稳定。
实验例2方法的建立
(1)重复性
由同一个分析人员在同一个实验室内，对同一个烫狗脊饮片均按照实施例1中的密度测试方法在一天之内重复测试6次，并计算RSD％，结果如下表所示。
表24重复性实验结果
Figure BDA0003027764060000212
注：实验室内温度恒定为25℃，湿度恒定为35％。
由上表中的结果可知，重复性的RSD％值为0.73％，说明本发明提供的烫狗脊饮片的密度测定方法重复性良好。
(2)方法精密度
选择6名不同的实验人员，在同一实验室内，对同一烫狗脊饮片均按照实施例1中的密度测试方法进行测试，结果如下表所示。
表25精密度实验结果
Figure BDA0003027764060000221
注：实验室内温度恒定为25℃，湿度恒定为35％。
由上表中的结果可知，不同人员的RSD％值为0.73％，重复性和精密度的RSD％为0.70％，说明本发明提供的烫狗脊饮片的密度测定方法精密度良好。
(3)稳定性
在同一实验室内，同一实验人员对同一烫狗脊饮片均按照实施例1中的密度测试方法进行测试，结果如下表所示。
表26稳定性实验结果
Figure BDA0003027764060000222
注：实验室内温度恒定为25℃，湿度恒定为35％。
由上表中的结果可知，稳定性的RSD％值为0.83％，说明本发明提供的烫狗脊饮片的密度测定方法稳定性良好。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (12)

1.一种烫狗脊及其制剂特征图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备，供试品溶液的溶剂为甲醇-1vt%冰醋酸溶液的混合溶液；
（2）超高效液相色谱法：将供试品溶液注入液相色谱仪，检测，即得；
其中，色谱条件包括：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为100mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm；以乙腈为流动相A，以含磷酸的水溶液为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件如下：0min→5min，1%流动相A，99%流动相B；5min→15min，1%→3%流动相A，99%→97%流动相B；15min→35min，3%→5%流动相A，97%→95%流动相B。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）的检测波长为310nm；和/或，步骤（1）中，供试品溶液的制备方法包括，取烫狗脊配方颗粒与溶剂混合，超声提取，滤过，取续滤液，即得。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括对照品溶液的制备步骤和按照权利要求1所述的超高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤；
所述对照品溶液的制备方法包括，取原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、原儿茶醛、咖啡酸对照品加溶剂溶解，分别制成每1ml含原儿茶酸80μg、5-羟甲基糠醛0.1-0.5mg、原儿茶醛2-8μg、咖啡酸6-12μg的对照品溶液。
4.根据权利要求1-3中任一所述的构建方法，其特征在于，所述烫狗脊及其制剂的特征图谱选自如下（1）-（3）中的任意一项：
（1）所述特征图谱的特征峰包括5-羟甲基糠醛峰、原儿茶酸峰、原儿茶醛峰和咖啡酸峰；
（2）其具有4个共有特征峰，以原儿茶酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的土15%范围之内；峰1-峰4的规定值分别为0.75、1.0、1.65、3.10；
（3）所述烫狗脊及其制剂的特征图谱是由权利要求1-3中任一所述的构建方法得到。
5.根据权利要求1-3中任一所述的构建方法，其特征在于，所述烫狗及其制剂的对照特征图谱选自如下（1）-（4）中的任意一项：
（1）其含有4个特征峰，分别为5-羟甲基糠醛峰、原儿茶酸峰、原儿茶醛峰和咖啡酸峰；
（2）其含有4个特征峰，以原儿茶酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的土15%范围之内；峰1-峰4的规定值分别为0.75、1.0、1.65、3.10；
（3）使用单批次或者多批次烫狗脊药材、烫狗脊饮片或者烫狗脊制剂按照权利要求1-3中任一所述的构建方法得到的特征图谱；
（4）使用多批次烫狗脊药材、烫狗脊饮片或者烫狗脊制剂按照权利要求1-3中任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。
6.一种烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，包括采用权利要求1-5中任一所述的构建方法得到烫狗脊制剂特征图谱的步骤。
7.根据权利要求6所述的烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，包括，取密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片制备烫狗脊制剂的步骤；和/或，包括采用超高效液相法测定烫狗脊制剂中原儿茶酸含量的步骤。
8.根据权利要求7所述的烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，所述烫狗脊饮片的密度按照如下公式计算：ρ=M/V，其中，ρ为密度；M为烫狗脊饮片的质量；V为烫狗脊饮片的体积。
9.根据权利要求8所述的烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，所述烫狗脊饮片的体积的测定包括如下步骤：
取固体介质置于圆柱形容器中，震荡使固体介质的界面水平，测量并记录容器中固体介质的高度H2、以及固体介质的水平界面与圆柱形容器形成的截面半径R，然后将固体介质倒出，备用；
将烫狗脊饮片置于上述同一圆柱形容器中，倒入上述固体介质，震荡使固体介质界面水平且烫狗脊饮片完全淹没在固体介质下面，测定并记录圆柱形容器中固体介质的高度H1，根据如下公式计算烫狗脊饮片的体积，
V=[(H1-H2)×πR2。
10.根据权利要求7所述的烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，所述烫狗脊制剂选自烫狗脊配方制剂、烫狗脊药对制剂或者包含烫狗脊的复方制剂。
11.根据权利要求7所述的烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，取密度为0.43-0.60g/cm3的烫狗脊饮片加入或者不加药学上可接受的辅料，按照常规工艺制备得到。
12.根据权利要求11所述的烫狗脊制剂的质量控制方法，其特征在于，所述烫狗脊制剂为烫狗脊配方颗粒，所述烫狗脊配方颗粒的制备方法包括，取烫狗脊饮片，加溶剂提取，滤过，滤液浓缩，得浸膏，干燥，制粒，即得。
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