CN113759026B - 伸筋草及其制剂特征图谱及其构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药检测技术领域，具体提供了伸筋草及其制剂特征图谱及其构建方法，所述伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含酸的水溶液‑有机溶剂为流动相，梯度洗脱，发现仅使用2个洗脱程序即可得到8个或者9个共有特征峰，并实现了这些共有特征峰的很好分离，洗脱程序简单，得到的特征图谱基线平稳，噪音干扰较小，特征峰峰形好、分离度高，为伸筋草及其制剂的质量检测和控制提供依据，实现对伸筋草及其制剂整体成分表征，重现性稳定。
Description
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种伸筋草及其制剂特征图谱及其构建方法。
背景技术
伸筋草为石松科植物石松LycopodiumjaponicumThunb.的干燥全草,茎呈细圆柱形，略弯曲，长可达2m，直径1～3mm，其下有黄白色细根；直立茎作二叉状分枝。叶密生茎上，螺旋状排列，皱缩弯曲，线形或针形，长3～5mm，黄绿色至淡黄棕色，无毛，先端芒状，全缘，易碎断。质柔软，断面皮部浅黄色，木部类白色。气微，味淡。微苦、性辛、温。归肝、脾、肾经。主要含有生物碱、三萜类成分、肉桂酸类成分，伴有少量的黄酮及其他类型的化合物。传统医学认为伸筋草具有祛风除湿，舒筋活络功效。用于关节酸痛，屈伸不利。为《中华人民共和国药典》收载品种。
近年来，国内外医药工作者对伸筋草的研究，尤其是在伸筋草制剂的质量控制方面研究比较简单。《中国药典》2015年版、2020年版一部项下伸筋草标准项下并无关于伸筋草的含量测定项和特征谱图项，仅采用简单的鉴别和检查对伸筋草进行整体控制，不能实现对伸筋草产品整体质量进行准确描述和评价。
皱桂欣等人发表的《HPLC法测定伸筋草中α-玉柏碱含量》，提供了伸筋草材中α-玉柏碱的一种含量测定方法，然而中药药效的发挥是多种成分相互作用的结果，只对一种成分进行检验比较单一和局限。
江阴天江药业有限公司发表的《一种基于UPLC-QTOF-MS检测伸筋草生物碱成分的方法》，采用UPLC-QTOF-MS技术对伸筋草中生物碱成分进行检测定性，洗脱程序涉及8个梯度，洗脱程序复杂，谱图中大多数特征峰很小，且分离度较差，整体重现性不稳定(见图1)。另外质谱使用和维护费用较高，方法不适用于广泛普及推广。
杨烨等发表的《伸筋草药材UPLC指纹图谱的鉴别研究》，建立了伸筋草药材UPLC对照特征图谱共有模式。该方法洗脱程序复杂，标定的19个共有峰中11个峰峰高与峰基线噪音峰高相似，特征峰易丢失，准确性较低，剩下的8个有6个峰分离度低于1.5，不满足分析要求，有效特征峰个数少。而且整体方法也不适用于伸筋草制剂的检测，用于检测伸筋草配方颗粒时，峰形差，峰高低，分离度低，检测效果不佳。
发明内容
因此，本发明的目的在于解决现有技术中伸筋草指纹图谱的构建方法得到的指纹图谱的准确性较低、分离度不佳以及无法适用于检测伸筋草制剂的问题，提供了一种伸筋草及其制剂特征图谱及其构建方法。
具体的，本发明公开了伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法，包括以下步骤，
(1)伸筋草供试品溶液的制备；
(2)取伸筋草供试品溶液采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含酸的水溶液-有机溶剂为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0→34-36分钟→40分钟，流动相中有机溶剂的体积百分比为1％→16-17％→100％。
根据本发明任一项所述的构建方法，其中，步骤(1)包括：
1)称取伸筋草供试品，加溶剂提取，得到提取液；
2)将提取液固液分离，取液体，即为供试品溶液。
根据本发明任一项所述的构建方法，步骤(1)满足A-C中任意一项或者多项：
A、步骤1)中，溶剂选自水或者甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数不大于30％；加入50-200倍量溶剂，所述倍量表示每克伸筋草供试品中加入溶剂的毫升数。
B、提取方式为回流提取或者超声提取，提取时间为20min-5h。
优选的，提取时间为20-60min。
优选的，伸筋草供试品经粉粹处理得到粉末。
C、所述固液分离独立地选自离心或者过滤；
根据本发明任一项所述的构建方法，所述步骤(1)包括：取本品0.1-0.3g，加溶剂15-20ml，回流提取或者超声提取20-40min，取出放凉，过滤，取续滤液，即得。
根据本发明任一项所述的构建方法，所述步骤(2)包括：检测波长252-256nm，流速为0.28-0.32ml/min，柱温33-37℃，进样量为2-20μl。
根据本发明任一项所述的构建方法，所述步骤(2)中，所述有机溶剂选自乙腈和甲醇中的至少一种；所述含酸溶液为磷酸水溶液、乙酸水溶液和甲酸水溶液中的至少一种；更优选的，所述含酸溶液中所含酸的体积百分数为0.08％-0.12％。
更优选的，采用乙腈或者含有5vt％以上的乙腈与甲醇的混合溶剂为有机溶剂，特征图谱有9个共有特征峰。而采用甲醇为有机溶剂或者乙腈体积百分数不足5％时，特征图谱有8个共有特征峰。
某些优选的实施方式中，构建方法还包括，采用香草酸、α-玉柏碱和阿魏酸的至少一种制备对照品溶液的步骤，以及按照上述任一所述的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤。
根据本发明任一项所述的构建方法，所述伸筋草及制剂选自伸筋草药材、伸筋草饮片和伸筋草制剂中的至少一种；其中伸筋草制剂是由伸筋草提取后得到的提取液(例如煎煮后得到的汤剂)按照药学上常规工艺，加入或者不加药学上常规辅料制成的中药制剂。
优选地，所述伸筋草制剂可以但不局限于干粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、溶液剂等。
更优选地，本发明提供的伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法可以同时适用于伸筋草药材、伸筋草饮片、伸筋草标准汤剂冻干粉和伸筋草配方颗粒，即所述伸筋草及其制剂选自伸筋草药材、伸筋草饮片、伸筋草标准汤剂冻干粉和伸筋草配方颗粒中的至少一种。
根据本发明任一项所述的构建方法，所述对照品溶液的制备方法包括如下步骤：取香草酸、α-玉柏碱和阿魏酸对照品，加溶剂制成每1ml含香草酸0.005-0.02mg、α-玉柏碱0.005-0.02mg、阿魏酸0.005-0.02mg的对照品溶液。
优选的，所述溶剂选自水或者甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不大于30％。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的特征图谱，由上述任一所述的构建方法得到。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的特征图谱，所述特征图谱的特征峰至少包括阿魏酸峰，以及香草酸峰和/或α-玉柏碱峰。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的特征图谱，所述特征图谱的特征峰包括9个特征峰，1-6号峰为共有峰，7号峰为香草酸，8号峰为α-玉柏碱，9号峰为阿魏酸。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的特征图谱，所述特征图谱的特征峰包括9个特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.08(峰1)、0.12(峰2)、0.22(峰3)、0.34(峰4)、0.42(峰5)、0.48(峰6)、0.58(峰7)、0.65(峰8)。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的特征图谱，所述特征图谱的特征峰包括8个特征峰，1-5号峰为共有峰，6号峰为香草酸，7号峰为α-玉柏碱，8号峰为阿魏酸。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的特征图谱，所述特征图谱的特征峰包括8个特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.12(峰1)、0.20(峰2)、0.25(峰3)、0.36(峰4)、0.57(峰5)、0.60(峰6)、0.78(峰7)；或规定值为：0.11(峰1)、0.13(峰2)、0.16(峰3)、0.18(峰4)、0.37(峰5)、0.72(峰6)、0.95(峰7)。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的对照特征图谱，其具有9个共有特征峰，保留时间分别为2.06min、3.16min、5.92min、9.10min、11.24min、13.05min、15.59min、17.51min、26.91min；或者其保留时间与上述各保留时间的RSD<10％、<5％或者3％；
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的对照特征图谱，其具有8个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.12(峰1)、0.20(峰2)、0.25(峰3)、0.36(峰4)、0.57(峰5)、0.60(峰6)、0.78(峰7)；或规定值为：0.11(峰1)、0.13(峰2)、0.16(峰3)、0.18(峰4)、0.37(峰5)、0.72(峰6)、0.95(峰7)；
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的对照特征图谱，其具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.08(峰1)、0.12(峰2)、0.22(峰3)、0.34(峰4)、0.42(峰5)、0.48(峰6)、0.58(峰7)、0.65(峰8)。
本发明还提供了另一种伸筋草及其制剂的对照特征图谱，其具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10％、±5％或者±3％的范围之内；规定值为：0.08(峰1)、0.12(峰2)、0.22(峰3)、0.34(峰4)、0.42(峰5)、0.48(峰6)、0.58(峰7)、0.65(峰8)；而且其中有1-3个特征峰分别与1-3个对照品参照峰相对应，所述对照品参照图谱为本发明所述的对照品参照图谱。
本发明中，相对应是指两个峰的保留时间的RSD<5％、<3％或者1％。和/或，相对应是指两个峰重合度不小于50％。
本发明中，伸筋草及其制剂的对照特征图谱还可以使用单批次或者多批次伸筋草药材、伸筋草饮片或者伸筋草制剂按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱；可选的，伸筋草及其制剂的对照特征图谱还可以使用多批次伸筋草、伸筋草饮片或者伸筋草制剂按照本发明任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。
可选的，至少采用2批伸筋草药材、伸筋草饮片或者伸筋草制剂得到对照特征谱图，例如采用3个批次、5个批次、11个批次、15个批次的伸筋草药材、18批伸筋草标准汤剂冻干粉。
本发明还提供了本发明的伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法和/或本发明的伸筋草及其制剂的对照特征图谱在伸筋草产品的质量检测中的用途。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的质量检测方法，包括将待测伸筋草产品的特征图谱与伸筋草及其制剂的对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测伸筋草产品的特征图谱为使用待测伸筋草产品按照本发明任一所述的构建方法得到，所述伸筋草及其制剂的对照特征图谱为本发明所述的伸筋草及其制剂的对照特征图谱。
根据本发明任一项所述的构建方法，所述伸筋草产品选自伸筋草药材、伸筋草饮片和伸筋草制剂中的至少一种；其中伸筋草制剂是由伸筋草提取后得到的提取液(例如煎煮后得到的汤剂)按照药学上常规工艺，加入或者不加药学上常规辅料制成的中药制剂。
优选地，所述伸筋草制剂可以但不局限于干粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂、溶液剂等。
更优选地，本发明提供的伸筋草产品选自伸筋草药材、伸筋草饮片、伸筋草标准汤剂冻干粉和伸筋草配方颗粒中的至少一种。
某些实施方式中，利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成伸筋草及其制剂的对照特征图谱。
待测伸筋草产品的特征图谱与伸筋草及其制剂的对照特征图谱的相似度如果不低于0.90-0.95(例如0.90)，则为质量合格；如果低于0.90-0.95(例如0.90)，则为不合格；具体地，所述相似度通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件得到。
某些优选的实施方式中，利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成伸筋草及其制剂的对照特征图谱后还包括标记共有特征峰的步骤。
本发明还提供了一种伸筋草及其制剂的质量检测方法，包括将待测伸筋草产品的特征图谱与伸筋草及其制剂的对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测伸筋草产品的特征图谱为使用待测伸筋草产品按照本发明任一所述的构建方法得到，所述伸筋草及其制剂的对照特征图谱为本发明所述的伸筋草及其制剂的对照特征图谱。
在伸筋草药材和制剂特征图谱方法构建中基于伸筋草药材与冻干粉成分的研究基础，在现有技术分离梯度复杂且效果不佳的情况下，怎样建立能同时表征生物碱及有机酸两大类成分的特征图谱方法，使其分离效果良好，简便易行是技术难点。现有技术条件色谱方法(柱温、洗脱梯度)均对操作、仪器有很高的要求，但特征峰分离度仍不理想，理论上如需要进一步改善分离度，需要在现有色谱方法上进一步复杂化，实际开发过程，克服了进一步将色谱方法复杂化的趋势，最终建立了方法简单，分离效果良好的特征图谱。
本发明中，0.1％磷酸是指含0.1％(体积百分数)磷酸的磷酸水溶液。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为含磷酸的水溶液和乙腈，梯度洗脱，发现仅使用2个洗脱程序即可得到8个或者9个共有特征峰，并实现了这些共有特征峰的很好分离，洗脱程序简单，得到的特征图谱基线平稳，噪音干扰较小，特征峰峰形好、分离度高，为伸筋草及其制剂的质量检测和控制提供依据，实现对伸筋草及其制剂整体成分表征，重现性稳定。
2.本发明提供的伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法，特征峰的峰形和分离度较好及特征峰的重复性较好，具有更好的分离效率、峰容量和灵敏度；该方法工作效率高，具有简便、稳定、精密度高、重复性好的优点，且该方法科学可靠，能适用于伸筋草不同的制剂类型，能够控制伸筋草制剂质量的一致性，快速实现不同类型伸筋草制剂的质量控制。
本发明提供的伸筋草制剂的检测方法，通过控制色谱条件可以更好的反应表征出伸筋草制剂中化学成分整体性物质成分的种类和数目的特征峰，从而能根据各个特征峰的相对保留时间，实现对伸筋草制剂的质量控制。
3.本发明提供的伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法，经对照品指认，7号峰为香草酸、8号峰为α-玉柏碱、9号峰为阿魏酸。其中阿魏酸峰分离良好，面积适中，以它为参照可通过定性方式实现伸筋草质控的精确性。特征图谱中确定的这9个特征峰为18批不同产地不同批次的伸筋草制剂的稳定共有峰，能很好的保证该方法应用于伸筋草质控方面的准确性；并且这9个特征峰峰形、峰的分离效果和峰对称性均较好，能很好的对特征峰的保留时间和相对保留时间进行控制，大大提升了该方法的重现性与适用性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为现有技术《一种基于UPLC-QTOF-MS检测伸筋草生物碱成分的方法》的色谱图；
图2为本发明实验例1中伸筋草制剂的特征图谱；
图3为本发明实验例1中不同提取溶剂的色谱图；
图4为本发明实验例1中不同提取浓度的柱形图；
图5为本发明实验例1中不同提取方式的柱形图；
图6为本发明实验例1中不同提取时间的柱形图；
图7为本发明实验例1中3D扫描图；
图8为本发明实验例1中方法一的梯度条件下的色谱图；
图9为本发明实验例1中方法二的梯度条件下的色谱图；
图10为本发明实验例1中方法三的梯度条件下的色谱图；
图11为本发明实验例1中方法四-七的梯度条件下的色谱图；
图12为本发明实验例1中方法八的梯度条件下的色谱图；
图13为本发明实验例1中方法九的梯度条件下的色谱图；
图14为本发明实验例1中伸筋草标准汤剂冻干粉延迟性谱图；
图15为本发明实验例1中18批伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱及共有模式图；
图16为本发明实施例1中伸筋草药材特征图谱；
图17为本发明实施例2中伸筋草饮片特征图谱；
图18为本发明实施例3中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图19为本发明实施例4中伸筋草配方颗粒特征图谱；
图20为本发明实施例5中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图21为本发明实施例6中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图22为本发明实施例7中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图23为本发明实施例8中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图24为本发明实施例9中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图25为本发明实施例10中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图26为对比例1中伸筋草药材特征图谱；
图27为对比例2中伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱；
图28为对比例3中伸筋草配方颗粒特征图谱。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实验例1
1、仪器：
Waters ACQUITY
H-Class超高效液相色谱仪，PDA Detector检测器；TUVDetector紫外检测器，Empower 3色谱工作站，ME104E电子天平(梅特勒·托利多)，JY20002电子天平(梅特勒·托利多)DZKW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；KQ-300DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)
2、试药：
伸筋草对照药材(批号：121109-201604，中国食品药品检定研究院)
香草酸对照品(批号：110776-201503，中国食品药品检定研究院，纯度，99.8％)
α-玉柏碱对照品(批号：DST200511-438，乐美天医药科技有限公司)
阿魏酸对照品(批号：110773-201614，中国食品药品检定研究院，纯度，99％)
试剂：乙腈(默克)、磷酸(Fisher Chemical)为色谱纯，甲醇、乙醇、均为分析纯，水为屈臣氏蒸馏水。
伸筋草药材来源：云南省云沧市临县、云南省临沧市云县、云南省普洱市思茅区。
伸筋草饮片采用上述伸筋草药材按照《中国药典》的方法制备。
伸筋草标准汤剂冻干粉的制备方法如下：
取伸筋草饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量18倍水，武火煮沸后，文火煎煮30分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量14倍水，武火煮沸后，文火煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，浓缩(65℃)，浓缩至料液比约为1:1(相对密度为1.05-1.10(65℃))，冷冻干燥，即得。
伸筋草配方颗粒的制备方法如下：
提取篮投料，每罐220Kg，一煎14倍量水，沸腾后提取1小时；二煎12倍量水，沸腾后提取1小时，浓缩至相对密度：1.05-1.10(65℃-80℃，24h内)；喷雾干燥后，干法制粒。
饮片量多少倍水或者倍量均表示每克伸筋草供试品中加入溶剂的毫升数。
3、伸筋草制剂特征图谱的构建
(1)对照品参照物溶液的制备：取香草酸、阿魏酸和α-玉柏碱对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含香草酸20μg、α-玉柏碱50μg、阿魏酸80μg的溶液，即得对照品参照物溶液；
(2)对照药材参照物溶液的制备：取伸筋草对照药材1g，加水20ml，提取60min，取出放凉，过滤，取续滤液作为对照药材参照物溶液；
(3)供试品溶液制备：取伸筋草标准汤剂冻干粉0.2g，精密称定，精密加入水15ml，称定重量，超声处理40min，取出放凉，再称定重量，用水补足减失的重量，过滤，取续滤液，即得。
(4)高效液相法检测：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱(Waters ACQUITYUPLC HSS T3色谱柱2.1*100mm，1.8μm)；以乙腈为流动性A，以含0.1vt％磷酸的水溶液为流动相B，按下表进行洗脱洗脱，柱温35℃，波长254nm，流速0.3ml/min，进样量为2μL，理论塔板数按照阿魏酸计算应不低于8000。
表1梯度洗脱条件
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～35 | 1→16 | 99→84 |
| 35～40 | 16→100 | 84→0 |
得到伸筋草制剂的特征图谱，如图2。
如图2所示，该特征图谱具有9个共有特征峰，以9号峰为参比峰，各特征峰与9号峰的相对保留时间的比值为：0.08(峰1)、0.12(峰2)、0.22(峰3)、0.34(峰4)、0.42(峰5)、0.48(峰6)、0.58(峰7)、0.65(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
4、提取溶剂的选择
取伸筋草标准汤剂冻干粉0.2g，精密称定，分别精密加入水、甲醇、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇各20ml，称定重量，超声处理40min，取出放凉，用各自溶剂补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按照本实验例第3项步骤(4)方法检测；结果见图3所示。其中上述溶剂的百分含量均为体积百分含量。
由图3可知，不同提取溶剂中，峰1的峰形以水样和30％甲醇样峰形较好，其它溶剂中峰1变形或者分叉；峰2和峰3仅在水样和30％甲醇样中有较好峰，其它溶剂峰形较差或无峰形；峰4、峰5和峰7在乙醇体系中溶剂峰分叉较严重。综上，以水样和30％甲醇样峰形较好，两者比较，以水样峰形稍占优势，因此最终选择水作为特征图谱供试品制备的提取溶剂。
5、提取浓度考察
分别取伸筋草标准汤剂冻干粉0.3g、0.2g、0.2g、0.1g、0.1g，精密称定，分别精密加入水15ml、15ml、20ml、15ml、20ml，称定重量，超声处理40min，取出放凉，用水补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按照本实验例第3项步骤(4)方法检测；结果如下。
表2不同提取浓度各特征峰峰面积
| 提取浓度 | 取样量g | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 0.3-15 | 0.3003 | 1475522 | 126848 | 779258 | 362924 | 82117 | 531834 | 89809 | 82766 | 232483 |
| 0.2-15 | 0.2018 | 994043 | 84568 | 519569 | 246869 | 51623 | 336671 | 62509 | 55777 | 153970 |
| 0.2-20 | 0.2005 | 730324 | 57008 | 384205 | 176201 | 36525 | 246886 | 46439 | 39191 | 115856 |
| 0.1-15 | 0.1015 | 501324 | 37916 | 263197 | 121515 | 23380 | 163445 | 30136 | 25421 | 78174 |
| 0.1-20 | 0.1018 | 371289 | 28902 | 195813 | 90411 | 17502 | 118613 | 22056 | 17973 | 57561 |
按取样量、样品浓度折算成同一条件峰面积下进行比较，并做柱形图，结果如下表和图4所示。
表3同一条件下不同提取浓度各特征峰峰面积均值
| 提取浓度 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 0.3-15 | 73702398 | 6336063.9 | 38923976 | 18128072 | 4101748.3 | 26565135 | 4485964 | 4134165.8 | 11612537 |
| 0.2-15 | 73888231 | 6286025.8 | 38620094 | 18350025 | 3837190.3 | 25025099 | 4646357.8 | 4145961.3 | 11444747 |
| 0.2-20 | 72850274 | 5686583.5 | 38324688 | 17576160 | 3643391.5 | 24627032 | 4632319.2 | 3909326.7 | 11556708 |
| 0.1-15 | 74087291 | 5603349.8 | 38896108 | 17957882 | 3455172.4 | 24154433 | 4453596.1 | 3756798 | 11552808 |
| 0.1-20 | 72944794 | 5678192.5 | 38470138 | 17762475 | 3438506.9 | 23303143 | 4333202.4 | 3531041.3 | 11308644 |
小结：由结果可知，不同的提取浓度特征峰中，各个浓度特征峰峰面积大小差异不大；从整体谱图峰高、提取溶剂量及批次间差异考虑，确定供试品处理的提取浓度为75倍，即称样量0.2g，溶剂量15ml。
6、提取方式的选择
取伸筋草标准汤剂冻干粉0.2g，精密称定，精密加水15ml，称定重量，一份加热回流提取40min(温度为98℃)，一份超声处理40min，取出放凉，用水补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按照本实验例第3项步骤(4)方法检测；结果表4和5。
表4不同提取方式各特征峰峰面积
| 提取方式 | 称样量g | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 超声 | 0.2011 | 965536 | 81177 | 522485 | 239167 | 66470 | 333648 | 51347 | 55355 | 160036 |
| 回流 | 0.2048 | 1034448 | 74875 | 528306 | 245687 | 68995 | 303806 | 64171 | 55067 | 164920 |
按取样量和样品浓度折算秤同一条件下进行比较，并做柱形图，结果如下表和图5所示。
表5同一条件下不同提取方式各特征峰峰面积均值
| 提取方式 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 超声 | 4801273 | 403665 | 2598135 | 1189294 | 330532 | 1659115 | 255331 | 275261 | 795803 |
| 回流 | 5051016 | 365601 | 2579619 | 1199644 | 336890 | 1483428 | 313335 | 268882 | 805273 |
小结：超声和回流两种比较，整体差异不大，考虑到操作简便性，选择超声提取作为供试品处理提取方法。
7、提取时间的考察
取伸筋草标准汤剂冻干粉0.2g，精密称定，精密加水15ml，称定重量，分别超声处理20min、40min、60min，取出放凉，用水补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按照本实验例第3项步骤(4)方法检测；结果如下。
表6不同提取时间各特征峰峰面积
| 提取时间 | 取样量g | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 超声20min | 0.2045 | 984376 | 75740 | 522027 | 246764 | 69280 | 328315 | 57361 | 56275 | 167452 |
| 超声40min | 0.2011 | 965536 | 81177 | 522485 | 239167 | 66470 | 333648 | 51347 | 55355 | 160036 |
| 超声60min | 0.2005 | 962463 | 74372 | 104568 | 234607 | 67708 | 318006 | 55661 | 54674 | 162232 |
按取样量折算同一条件峰面积下进行比较，并做柱形图，结果如下表和图6所示。
表7同一条件下不同提取时间各特征峰峰面积均值
| 峰号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 超声20min | 4813575 | 370367 | 2552699 | 1206670 | 338778 | 1605452 | 280494 | 275183 | 818836 |
| 超声40min | 4801273 | 403665 | 2598135 | 1189294 | 330532 | 1659115 | 255331 | 275261 | 795803 |
| 超声60min | 4800314 | 370933 | 521536 | 1170110 | 337696 | 1586065 | 277611 | 272688 | 809137 |
小结：不同提取时间条件下，9个特征峰的峰面积差异不大，考虑到批次间差异，确定提取时间为超声(功率250W，频率40kHz)处理40min。
8、波长的确定
取适量伸筋草标准汤剂冻干粉，按照第3项步骤(3)方法制备供试品溶液，然后对供试品溶液进行210-400nm全波长扫面，得到全波长扫描的三维3D色谱图，见图7所示，结果显示，在254nm的峰较为丰富，且峰形较好，优于其他波长，因此，选用254nm作为检测波长。
9、洗脱梯度程序确定
取同一份伸筋草标准汤剂冻干粉供试品溶液，考察不同的梯度程序对本品的分离效果的影响，除了梯度程序之外，其余工艺和条件均与本实验例第3项相同，梯度洗脱条件见表8-16。
表8梯度洗脱表(方法一)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 40 | 100 | 0 |
| 45 | 1 | 99 |
表9梯度洗脱表(方法二)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 40 | 48 | 52 |
| 45 | 1 | 99 |
表10梯度洗脱表(方法三)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 25 | 21 | 79 |
| 40 | 41 | 59 |
| 45 | 100 | 0 |
| 50 | 1 | 99 |
表11梯度洗脱表(方法四)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 25 | 17 | 83 |
| 40 | 41 | 59 |
| 45 | 100 | 0 |
| 50 | 1 | 99 |
表12梯度洗脱表(方法五)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 30 | 16 | 84 |
| 45 | 41 | 59 |
| 50 | 100 | 0 |
| 55 | 1 | 99 |
表13梯度洗脱表(方法六)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 35 | 16 | 84 |
| 55 | 41 | 59 |
| 60 | 100 | 0 |
| 65 | 1 | 99 |
表14梯度洗脱表(方法七)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0.0 | 1 | 99 |
| 35 | 16 | 84 |
| 40 | 29 | 71 |
| 50 | 41 | 59 |
| 55 | 100 | 0 |
| 60 | 1 | 99 |
表15梯度洗脱表(方法八)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0 | 1 | 99 |
| 35 | 17 | 83 |
| 40 | 100 | 0 |
| 45 | 1 | 99 |
表16梯度洗脱表(方法九)
| 时间min | 乙腈％ | 0.1％磷酸 |
| 0 | 1 | 99 |
| 35 | 16 | 84 |
| 40 | 100 | 0 |
| 42 | 1 | 99 |
由图8可知，方法一的梯度条件下，化合物主要集中在前18min，分离度较差。
由图9可知，方法二的梯度条件下，各特征峰峰形和分离度有改善，但前面大极性物质分离仍较差，需要继续进行梯度优化。
由图10可知，与方法二相比，方法三的梯度条件下，前面大极性物质分离有所改善，但是峰分离度还是不好，峰形不佳，需继续进行优化。
由图11可知，方法四-方法七的梯度条件下，比较其色谱图，改变洗脱梯度，色谱图中30分钟后小极性色谱峰始终分离较差。
由图12可知，方法八的梯度条件下，色谱峰的分离有明显改善，可以满足特征图谱分离基本要求，因14-20min的色谱峰分离度稍差，峰形不佳，后续继续进行优化。
由图13可知，方法九的梯度条件下，色谱图基线平稳，分析时间较短，且对香草酸、阿魏酸和α-玉柏碱进行了峰指认。
10、延迟性实验
取本实验例第3项步骤(3)制得的伸筋草标准汤剂冻干粉供试品溶液，按本实验例第3项步骤(4)色谱条件进样，记录2倍流动相保留时间色谱图，结果见图14。
小结：谱图中，在35分钟之后没有明显的滞后峰出现，此色谱方法符合分析要求。
11、特征峰确认
分别吸取本实验例第3项制得的对照品溶液参照物溶液、对照药材参照物溶液和供试品溶液各2μL注入液相色谱仪，按本实验例第3项步骤(4)色谱条件进样，测定，得到特征图谱。
特征图谱如图2所示，共9个特征峰，与对照品参照物溶液图谱进行比对，确定7号峰为香草酸，8号峰为α-玉柏碱，9号峰为阿魏酸，以9号峰为参照峰，计算其它特征峰的相对保留时间，相对保留时间在规定值的±10％之内，相对保留时间分别是：1号峰的相对保留时间为0.08；2号峰的相对保留时间为0.12；3号峰的相对保留时间为0.22；4号峰的相对保留时间为0.34；5号峰的相对保留时间为0.42；6号峰的相对保留时间为0.48；7号峰的相对保留时间为0.58；8号峰的相对保留时间为0.65。
12、相似度评价
取18批伸筋草标准汤剂冻干粉，按照本实验例第3项步骤(3)中的方法制备伸筋草标准汤剂冻干粉供试品溶液，并按照步骤(4)的色谱条件测定，进样量为2μL，以9号峰阿魏酸峰为参照峰，计算相对保留时间和RSD，结果见表17、图15。
表17 18批伸筋草标准汤剂冻干粉的相对保留时间
18批伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱中9个特征峰的相对保留时间差异较小，选择相对保留时间的平均值作为测定值，9个特征峰的相对保留时间(RSD)分别是：1号峰的RSD是5.27，2号峰的RSD是1.77，3号峰的RSD是1.24，4号峰的RSD是2.18，5号峰的RSD是1.00，6号峰的RSD是1.61，7号峰的RSD是0.87，8号峰的RSD是0.86，允许误差：±10％。
将18批伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版本)，得到18批伸筋草标准汤剂冻干粉的特征图谱与共有模式对照特征图谱的相似度，分别是0.986、0.993、0.980、0.996、0.991、0.988、0.962、0.999、0.993、0.998、0.978、0.972、、0.988、0.973、0.989、0.963、0.955、0.950，相似度均在95％以上，说明18批伸筋草标准汤剂冻干粉与共有模式对照图谱契合度较高。9个特征峰较稳定，使用该检测方法，很好的实现了对伸筋草质量的控制。
实验例2方法学验证
1、精密度
1.1重复性：组员一采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器，取伸筋草标准汤剂冻干粉样品适量，研细，取0.2g，取6份，按正文色谱条件测定，获得其特征图谱，以9号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。结果如表18、表19所示。
表18伸筋草重复性考察保留时间及相对保留时间表
表19伸筋草重复性考察峰面积及相对峰面积表
小结：结果显示六个重复性实验样品的9个特征峰的相对保留时间RSD范围为0.06％～0.40％，相对峰面积的RSD范围为0.82％～4.42％，表明该特征图谱重复性较好。
1.2中间精密度：组员二采用Waters UPLC H-Class，TUV检测器，取伸筋草标准汤剂冻干粉样品适量，研细，取0.2g，取6份，按正文色谱条件测定，获得其特征图谱，以9号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。结果如表20、表21所示。
表20伸筋草中间精密度考察保留时间及相对保留时间表
表21伸筋草中间精密度考察峰面积及相对峰面积表
小结：实验结果显示中间精密度实验样品的9个特征峰的相对保留时间RSD范围0.06％～0.30％，相对峰面积的RSD范围0.28％～0.99％，表明该特征图谱中间精密度较好。
2、稳定性
取伸筋草标准汤剂冻干粉样品适量，研细，取0.2g，按正文方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、10、12、24h按正文方法进行测定，获得其特征图谱，以9号峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算RSD。结果如表22、表23所示。
表22稳定性相对保留时间表
表23稳定性相对峰面积表
小结：实验结果显示，经过考察24小时溶液稳定性，各特征峰的相对保留时间RSD在0.89％～8.09％范围内，在12h内各特征峰峰面积的RSD在0.78％～4.89％范围内。建议本实验所采用的伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱分析方法要在制样后12h内完成检测。
3、耐用性
3.1不同流速的考察：取伸筋草标准汤剂冻干粉样品，按正文供试品溶液的制备方法制备供试品。分别采用不同流速0.28ml/min、0.3ml/min及0.32ml/min按正文方法进行测定，记录各特征峰的相对保留时间，考察实验方法对于不同流速的耐用性。结果如表24。
表24不同流速相对保留时间表
小结：不同流速条件下，各特征峰相对保留时间的RSD值均小于5％，此分析方法对0.28-0.32范围内流速的耐用性较好。
3.2不同柱温的考察：取伸筋草标准汤剂冻干粉样品，按正文供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别于不同柱温33℃、35℃及37℃，按正文方法进行测定，记录各特征峰的相对保留时间，考察实验方法对于不同柱温的耐用性。结果如表25。
表25不同柱温相对保留时间表
小结：不同柱温条件下，各特征峰相对保留时间的RSD值均小于5％，说明该方法对33℃-37℃范围内柱温的耐用性较好。
3.3不同波长的考察：取伸筋草标准汤剂冻干粉样品，按正文供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别于不同波长252nm、254nm及256nm，按正文方法进行测定，记录各特征峰的相对保留时间，考察实验方法对于不同波长的耐用性。结果如表26。
表26不同波长相对保留时间表
小结：不同波长条件下，各特征峰相对保留时间的RSD值均小于5％，说明该方法对252nm-256nm波长范围内耐用性较好。
3.4不同磷酸浓度的考察：取伸筋草标准汤剂冻干粉样品，按正文方法制备供试品。分别采用不同浓度磷酸，0.08vt％磷酸水溶液、0.1vt％磷酸水溶液及0.12vt％磷酸水溶液，按正文方法进行测定，记录各特征峰的相对保留时间，考察实验方法对于不同浓度磷酸的耐用性。结果如表27。
表27不同磷酸浓度相对保留时间表
小结：不同磷酸浓度条件下，各特征峰相对保留时间的RSD值除峰1、峰2外，均小于5％，说明该方法在磷酸浓度0.08％-0.12％范围内耐用性较好。
实施例1伸筋草药材
本实施例提供了一种伸筋草药材特征图谱的构建方法，包括如下步骤
(1)供试品溶液制备：取伸筋草药材粉碎成粉末为供试品，取0.2g供试品，精密加入水15ml，称定重量，超声处理40min，取出放凉，再称定重量，用水补足减失的重量，过滤，取续滤液，即得。对照品参照物溶液的制备：取香草酸、阿魏酸和α-玉柏碱对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含香草酸20μg、α-玉柏碱50μg、阿魏酸80μg的溶液，即得对照品参照物溶液；
(2)高效液相法检测：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱(Waters ACQUITYUPLC HSS T3色谱柱2.1*100mm，1.8μm)；以乙腈为流动性A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表进行洗脱洗脱，柱温35℃，波长254nm，流速0.3ml/min，进样量为2μL。梯度洗脱程序按照如下：0→35分钟，流动相A的体积百分比为1％→16％，流动相B的体积百分比为99％→84％；35→40分钟，流动相A的体积百分比为16％→100％，流动相B的体积百分比为84％→0％；得到伸筋草药材的特征图谱，如图16。
如图16所示，该特征图谱具有9个共有特征峰，峰结果见表28所示。
表28峰结果
由上表和图16可知，上述9个特征峰分离度均在7.0％以上，且各峰高均匀，峰形好。各峰面积占总面积比值在5％～64％之间。
实施例2伸筋草饮片
本实施例提供了一种伸筋草饮片特征图谱的构建方法，与实施例1的区别仅在于供试品采用伸筋草饮片替换掉伸筋草药材，取伸筋草饮片粉碎成粉末为供试品，其余工艺条件均与实施例1相同，得到伸筋草饮片特征图谱，见图17，该特征图谱具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间的比值为：0.08(峰1)、0.13(峰2)、0.25(峰3)、0.36(峰4)、0.43(峰5)、0.49(峰6)、0.59(峰7)、0.65(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
9个特征峰分离度均在7.0％以上，且各峰高均匀，峰形好。各峰面积占总面积比值在3％～37％之间。
实施例3伸筋草标准汤剂冻干粉
本实施例提供了一种伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱的构建方法，与实施例1的区别仅在于采用伸筋草标准汤剂冻干粉替换掉伸筋草药材为供试品，其余工艺条件均与实施例1相同，得到伸筋草饮片特征图谱，见图18，该特征图谱具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间的比值为：0.08(峰1)、0.12(峰2)、0.22(峰3)、0.34(峰4)、0.42(峰5)、0.48(峰6)、0.58(峰7)、0.65(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
9个特征峰分离度均在7.0％以上，且各峰高均匀，峰形好。各峰面积占总面积比值在3％～37％之间。
实施例4伸筋草配方颗粒
本实施例提供了一种伸筋草配方颗粒特征图谱的构建方法，与实施例1的区别仅在于供试品采用伸筋草配方颗粒替换掉伸筋草药材，取伸筋草配方颗粒研磨为粉末为供试品，其余工艺条件均与实施例1相同，得到伸筋草颗粒特征图谱，见图19，该特征图谱具有9个共有特征峰，9号峰为阿魏酸峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间的比值为：0.09(峰1)、0.13(峰2)、0.22(峰3)、0.31(峰4)、0.38(峰5)、0.44(峰6)、0.57(峰7)、0.67(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
9个特征峰分离度均在7.0％以上，且各峰高均匀，峰形好。各峰面积占总面积比值在3％～37％之间。
实施例5
本实施例提供了一种伸筋草特征图谱的构建方法，基本与实施例3相同，区别仅在于流动相B不同，本实施例采用以体积百分数为0.1％的甲酸水溶液为流动相B，得到伸筋草特征图谱，结果见图20。该特征图谱具有9个共有特征峰，9号峰为阿魏酸峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与9号峰的相对保留时间的比值为：0.08(峰1)、0.12(峰2)、0.26(峰3)、0.37(峰4)、0.46(峰5)、0.51(峰6)、0.61(峰7)、0.65(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
实施例6
本实施例提供了一种伸筋草特征图谱的构建方法，基本与实施例3相同，区别仅在于流动相B不同，本实施例采用以体积百分数为0.1％的乙酸水溶液为流动相B，得到伸筋草特征图谱，结果见图21。该特征图谱具有8个共有特征峰，8号峰为阿魏酸峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与8号峰的相对保留时间的比值为：0.12(峰1)、0.20(峰2)、0.25(峰3)、0.36(峰4)、0.57(峰5)、0.60(峰6)、0.78(峰7)，这8个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
实施例7
本实施例提供了一种伸筋草特征图谱的构建方法，基本与实施例3相同，区别仅在于流动相A不同，本实施例采用以甲醇为流动相A，得到伸筋草特征图谱，结果见图22。该特征图谱具有8个共有特征峰，1-5号峰为共有峰，6号峰为香草酸，7号峰为α-玉柏碱，8号峰为阿魏酸峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与阿魏酸峰的相对保留时间的比值为：0.11(峰1)、0.13(峰2)、0.16(峰3)、0.18(峰4)、0.37(峰5)、0.72(峰6)、0.95(峰7)，这8个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
实施例8
本实施例提供了一种伸筋草特征图谱的构建方法，基本与实施例3相同，区别仅在于流动相A不同，本实施例采用以体积比为1:1的甲醇与乙腈为流动相A，得到伸筋草特征图谱，结果见图23。该特征图谱具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与9号峰的相对保留时间的比值为：0.09(峰1)、0.13(峰2)、0.33(峰3)、0.48(峰4)、0.53(峰5)、0.60(峰6)、0.69(峰7)、0.72(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
实施例9
本实施例提供了一种伸筋草特征图谱的构建方法，基本与实施例3相同，区别仅在于梯度程序不同，本实施例采用梯度程序为0→36分钟→40分钟→42分钟，流动相中乙腈的体积百分比为0％→16％→100％→1％，得到伸筋草特征图谱，结果见图24。该特征图谱具有9个共有特征峰，1-6号峰为共有峰，7号峰为香草酸，8号峰为α-玉柏碱，9号峰为阿魏酸，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间的比值为：0.12(峰1)、0.16(峰2)、0.36(峰3)、0.51(峰4)、0.58(峰5)、0.67(峰6)、0.78(峰7)、0.84(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
实施例10
本实施例提供了一种伸筋草特征图谱的构建方法，基本与实施例3相同，区别仅在于梯度程序不同，本实施例采用梯度程序为0→34分钟→40分钟→42分钟，流动相中乙腈的体积百分比为0％→16％→100％→1％，得到伸筋草特征图谱，结果见图25。该特征图谱具有9个共有特征峰，9号峰为阿魏酸峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间的比值为：0.09(峰1)、0.11(峰2)、0.29(峰3)、0.41(峰4)、0.48(峰5)、0.54(峰6)、0.63(峰7)、0.68(峰8)，这9个峰构成了伸筋草制剂的指纹特征，可作为伸筋草制剂的对照特征图谱。
对比例1伸筋草药材
本对比例提供了一种伸筋草药材特征图谱的构建方法，基本按照《伸筋草药材UPLC指纹图谱的鉴别研究》文献中公开的方法进行，然而因对比文件1的柱温为15℃，一般液相仪器难以实现，因此，本对比例采用25℃的柱温。
具体包括如下步骤：
(1)供试品溶液制备：取实施例2同一批伸筋草药材粉碎成粉末为供试品，取1.0g供试品，精密加入70％乙醇50ml，超声处理45min，滤过，70％乙醇50ml，超声处理45min，合并滤液，置于蒸发皿中挥干，残渣加入50％甲醇溶解并定容至10ml，微孔滤膜(0.22μm)滤过，取续滤液，即得。
(2)高效液相法检测：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱(Agilent ZORBAXRRHD色谱柱2.1*100mm，1.8μm)；以甲醇-乙腈(1：1)为流动性A，以0.05％磷酸水溶液为流动相B，按下表进行洗脱洗脱，柱温25℃，波长256nm，流速0.1ml/min，进样量为1μL。梯度洗脱程序按照如下：0～3min，1％A；3～5.5分钟，1％A～10％A；5.5～8min，10％A～25％A；8～16min，25％A～30％A；16～18min，30％A～50％A；18～23min，50％A～80％A；23～28min，80％A～100％A；28～35min，100％A；得到伸筋草药材的特征图谱，如图26。
如图26所示，参考上述文献标定19个特征峰，见表29所示。
表29峰结果
在中药材及制剂分析检测中，构建的指纹图谱或特征图谱中特征峰的分离度需要满足的最低要求是大于1.2，峰面积占比是大于3％，此外还需要峰形良好。其中峰面积占比是指各特征峰面积分别占特征峰面积总和的百分比。
从上表中可以看出，采用对比例1的方法构建的19个特征峰中有3个峰丢失，有2个明显并肩峰，峰面积占比＞3％的有7个峰，在这7个峰面积占比大于3％的峰中只有4个峰满足分离度大于1.2的要求，满足要求的有效特征峰个数较少。除阿魏酸外，玉柏碱、香草酸成分存在分离低的问题，无法同时有效分离生物碱和有机酸。
对比例2伸筋草标准汤剂冻干粉
本对比例提供了一种伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱的构建方法，与对比例1的区别仅在于采用伸筋草标准汤剂冻干粉替换掉伸筋草药材为供试品，其余工艺条件均与对比例1相同，得到伸筋草标准汤剂冻干粉特征图谱，见图27。如图27所示，参考上述文献标定19个特征峰，峰结果见表30所示。
表30峰结果
从上表中可以看出，采用对比例2的方法构建的19个特征峰中，峰面积占比＞3％的有13个峰，在这13个峰面积占比大于3％的峰中只有7个峰满足分离度大于1.2的要求，在这7个峰中峰4为平头峰，峰3为包峰，排除，只有5个峰满足要求，满足要求的有效特征峰个数较少。
对比例3伸筋草配方颗粒
本对比例提供了一种伸筋草配方颗粒特征图谱的构建方法，与对比例1的区别仅在于供试品采用伸筋草配方颗粒替换掉伸筋草药材，其余工艺条件均与对比例1相同，得到配方颗粒特征图谱，见图28。如图28所示，参考上述文献标定19个特征峰，峰结果见表31所示。
表31峰结果
从上表中可以看出，采用对比例2的方法构建的19个特征峰中，峰面积占比＞3％的有13个峰，在这13个峰面积占比大于3％的峰中只有7个峰满足分离度大于1.2的要求，在这7个峰中，峰1、峰11、峰12峰形较差，排除，只有4个峰满足要求，满足要求的有效特征峰个数较少。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤，
（1）伸筋草供试品溶液的制备；制备所述供试品溶液的溶剂选自水或者甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不大于30%；
（2）取伸筋草供试品溶液采用超高效液相色谱法检测，色谱柱为Waters ACQUITY UPLCHSS T3色谱柱2.1*100mm，1.8μm，以含酸的水溶液-有机溶剂为流动相进行梯度洗脱，所述有机溶剂选自乙腈和甲醇中的至少一种；所述含酸的水溶液为磷酸水溶液、乙酸水溶液和甲酸水溶液中的至少一种；梯度洗脱程序包括：0→35分钟→40分钟，流动相中有机溶剂的体积百分比为1%→16%→100%。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）包括：
1）取伸筋草供试品，加溶剂提取，得到提取液；
2）将提取液固液分离，取液体，即为供试品溶液。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）满足如下A-C中的任意一项或者多项：
A、步骤1）中，加入50-200倍量溶剂；
B、步骤1）中，提取方式为回流提取或者超声提取，提取时间为20min-5h；
C、步骤2）中，所述固液分离独立地选自离心或者过滤。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）超高效液相色谱法的色谱条件还包括：检测波长为252-256nm，流速为0.28-0.32ml/min，柱温33-37℃，进样量为2-20μl。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述含酸的水溶液中所含酸的体积百分数为0.08%-0.12%。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括采用香草酸、α-玉柏碱和阿魏酸中的至少一种制备对照品溶液的步骤，以及按照权利要求1所述的构建方法中的超高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品参照图谱的步骤。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述伸筋草及其制剂选自伸筋草药材、伸筋草饮片和伸筋草制剂中的至少一种。
8.根据权利要求1-7中任一所述的构建方法，其特征在于，所述伸筋草及其制剂的特征图谱选自如下（1）-（6）中的任意一项：
（1）所述特征图谱的特征峰至少包括阿魏酸峰，以及香草酸峰和/或α-玉柏碱峰；
（2）所述特征图谱的特征峰包括9个特征峰，1-6号峰为共有峰，7号峰为香草酸，8号峰为α-玉柏碱，9号峰为阿魏酸；
（3）所述特征图谱的特征峰包括9个特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10%的范围之内；峰1-峰8的规定值分别为：0.08、0.12、0.22、0.34、0.42、0.48、0.58、0.65；
（4）所述特征图谱的特征峰包括8个特征峰，1-5号峰为共有峰，6号峰为香草酸，7号峰为α-玉柏碱，8号峰为阿魏酸；
（5）所述特征图谱的特征峰包括8个特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10%的范围之内；峰1-峰7的规定值分别为：0.12、0.20、0.25、0.36、0.57、0.60、0.78；
（6）所述伸筋草及其制剂的特征图谱是由权利要求1-7中任一所述的构建方法得到。
9.权利要求1-8中任一项所述的伸筋草及其制剂特征图谱的构建方法在伸筋草产品的质量检测中的应用。
10.一种伸筋草及其制剂的质量检测方法，其特征在于，包括将待测伸筋草产品的特征图谱与伸筋草及其制剂的对照特征图谱进行比较的步骤；所述待测伸筋草产品的特征图谱为使用待测伸筋草产品按照权利要求1-8中任一所述的构建方法得到，所述伸筋草及其制剂的对照特征图谱选自如下（1）-（6）中的任意一项：
（1）其具有9个共有特征峰，保留时间分别为2.06min、3.16min、5.92min、9.10min、11.24min、13.05min、15.59min、17.51min、26.91min；
（2）其具有8个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10%的范围之内；峰1-峰7的规定值分别为：0.12、0.20、0.25、0.36、0.57、0.60、0.78；
（3）其具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10%的范围之内；峰1-峰8的规定值分别为：0.08、0.12、0.22、0.34、0.42、0.48、0.58、0.65；
（4）其具有9个共有特征峰，以阿魏酸峰为参比峰，各特征峰与参比峰的相对保留时间在规定值的±10%的范围之内；峰1-峰8的规定值分别为：0.08、0.12、0.22、0.34、0.42、0.48、0.58、0.65；而且其中有1-3个特征峰分别与1-3个对照品参照峰相对应；对照品参照图谱为权利要求6所述的对照品参照图谱；
（5）使用单批次或者多批次伸筋草药材、伸筋草饮片或者伸筋草制剂按照权利要求1-8中任一所述的构建方法得到的特征图谱；
（6）使用多批次伸筋草药材、伸筋草饮片或者伸筋草制剂按照权利要求1-8中任一所述的构建方法得到的特征图谱通过平均值或者中位数法制成对照特征图谱。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107362180A (zh) * | 2017-08-25 | 2017-11-21 | 徐自升 | 一种伸筋草鲜榨喷雾干燥粉末饮片的制备工艺 |
| CN108169386A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-06-15 | 吉林修正药业新药开发有限公司 | 一种颈腰康胶囊的hplc特征图谱的构建方法 |
| CN109917066A (zh) * | 2019-04-30 | 2019-06-21 | 江阴天江药业有限公司 | 一种基于uplc-qtof-ms检测伸筋草生物碱成分的方法 |
| KR102083419B1 (ko) * | 2018-08-24 | 2020-03-02 | 재단법인 남원시화장품산업지원센터 | 고성능 액체크로마토그래피를 이용한 19종 페놀 화합물의 동시 분석 방법 |
-
2021
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107362180A (zh) * | 2017-08-25 | 2017-11-21 | 徐自升 | 一种伸筋草鲜榨喷雾干燥粉末饮片的制备工艺 |
| CN108169386A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-06-15 | 吉林修正药业新药开发有限公司 | 一种颈腰康胶囊的hplc特征图谱的构建方法 |
| KR102083419B1 (ko) * | 2018-08-24 | 2020-03-02 | 재단법인 남원시화장품산업지원센터 | 고성능 액체크로마토그래피를 이용한 19종 페놀 화합물의 동시 분석 방법 |
| CN109917066A (zh) * | 2019-04-30 | 2019-06-21 | 江阴天江药业有限公司 | 一种基于uplc-qtof-ms检测伸筋草生物碱成分的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Yong-Qiang Tian 等.Components and Anti-HepG2 Activity Comparison of Lycopodium Alkaloids from Four Geographic Origins.《Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine》.2016,第2016卷1-10. * |
| 杨烨 等.伸筋草药材UPLC指纹图谱的鉴别研究.《中国实验方剂学杂志》.2013,第19卷(第15期),117-120. * |
| 邹桂欣 等 .HPLC法测定伸筋草中α-玉柏碱含量.《中药材》.2010,第33卷(第6期),934-936. * |
| 邹桂欣 等 .不同产地伸筋草紫外可见光谱鉴别.《辽宁中医药大学学报》.2011,第13卷(第12期),14-15. * |
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