CN104155250A - 一种粗多糖的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种粗多糖的测定方法，包括以下步骤：提取样品，水解并过滤得到滤液用于沉淀粗多糖；滤液离心后用乙醇洗涤残渣并用水溶解得到溶液，加入氢氧化钠溶液和铜试剂溶液，沸水浴后冷却离心，洗涤残渣后硫酸溶液溶解并定容；吸取葡聚糖标准使用液在分光光度计上测定吸光度，以试剂空白溶液为参比绘制标准曲线；吸取样品测定液吸取样品测定液在分光光度计上测定吸光度，从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量。本发明相比较传统的方法，水解时间缩短1h，更利于大批量检测，节省了时间和能源消耗。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定方法，特别是指一种粗多糖的测定方法。
背景技术
粗多糖是从大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的总称，大豆中的寡糖属于а-半乳糖苷类，包括棉籽糖、水苏糖和Vabascose.具有促进双歧杆菌的增殖，抑制病原菌，防止便秘、腹胀，促进消化，调节胃肠功能，增强免疫功能。
《保健食品功效成分检测方法》利用高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，用碱性二价铜试剂选择性地沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量。水解时间长达2h，时间长，不利于大批量检测，成本高。
发明内容
有鉴于此，本发明提出一种粗多糖的测定方法，可以缩短水解时间，有利于大批量检测，节省了时间和能源消耗。
为解决上述技术问题，本发明的技术采用以下技术方案：
一种粗多糖的测定方法，包括以下步骤：
1）样品提取：取胶囊内容物2.0g混匀，置于100mL容量瓶中，加水78-82mL，于沸水浴上加热1-1.5h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖；样品本来为液体的直接待用即可；
（2）沉淀粗多糖：准确吸取步骤（1）中终滤液或液体样品5.0mL以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用体积分数为80%的乙醇溶液5毫升洗涤，离心后弃上清液，洗涤3-4次；然后残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖；
（3）沉淀葡聚糖：准确吸取步骤（2）中终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL以及铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用洗涤液 5毫升洗涤，离心后弃去上清液，洗涤3次，残渣用体积分数为10%的硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得到样品测定液；
（4）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值；以葡聚糖为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
（5）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值；从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量；同时做以纯水代替样品测定液，同样品测定做空白对照试验。
进一步地，所述步骤（1）中沸水浴上加热时间为1h。
进一步地，所述步骤（3）中铜试剂溶液制备步骤如下，（1）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O和30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀备用；（2）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g，并使其溶解即可。
进一步地，所述步骤（3）中洗涤剂的配置步骤为：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液和10mL氢氧化钠溶液，混匀即可。
本发明与现有技术相比具有的有益效果为：本发明相比较传统的方法，水解时间缩短1h，更利于大批量检测，节省了时间和能源消耗。
具体实施方式
为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本发明，下面将对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种粗多糖的测定方法，包括以下步骤：
（1）样品提取：取胶囊内容物2.0g混匀，置于100mL容量瓶中，加水78-82mL，于沸水浴上加热1h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖；
（2）沉淀粗多糖：准确吸取步骤（1）中终滤液5.0mL以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用体积分数为80%的乙醇溶液5毫升洗涤，离心后弃上清液，洗涤3-4次；然后残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖；
（3）沉淀葡聚糖：准确吸取步骤（2）中终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL以及铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用洗涤液5毫升洗涤，离心后弃去上清液，洗涤3次，残渣用体积分数为10%的硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得到样品测定液；
（4）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值；以葡聚糖为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
（5）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值；从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量；同时以纯水代替样品测定液做空白对照实验。
最后得到如下测定结果：
从以上结果可以看出，0.5h与0.8h同2.0h测定结果相差较大（≥5%），未水解完全；1.0h，1.5h与2.0h相差很近在5%范围内，因此为节省能源，选择1.0h为水解的最佳时间。
实施例2
（1）取待测液体样品待用；
（2）沉淀粗多糖：准确吸取5.0mL液体样品以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用体积分数为80%的乙醇溶液5毫升洗涤，离心后弃上清液，洗涤3-4次；然后残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖；
（3）沉淀葡聚糖：准确吸取步骤（2）中终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL以及铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用洗涤液5毫升洗涤，离心后弃去上清液，洗涤3次，残渣用体积分数为10%的硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得到样品测定液；
（4）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值；以葡聚糖为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
（5）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值；从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量；同时以纯水代替样品测定液做空白对照实验。
最后得到如下测定结果：
从以上结果可以看出，0.5h与0.8h同2.0h测定结果相差较大（≥5%），未水解完全；1.0h，1.5h与2.0h相差很近在5%范围内，因此为节省能源，选择1.0h为水解的最佳时间。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种粗多糖的测定方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）样品提取：取胶囊内容物2.0g混匀，置于100mL容量瓶中，加水78-82mL，于沸水浴上加热1-1.5h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖；样品本来为液体的直接待用即可；
（2）沉淀粗多糖：准确吸取步骤（1）中终滤液或液体样品5.0mL以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用体积分数为80%的乙醇溶液5毫升洗涤，离心后弃上清液，洗涤3-4次；然后残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖；
（3）沉淀葡聚糖：准确吸取步骤（2）中终溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL以及铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液；残渣用洗涤液 5毫升洗涤，离心后弃去上清液，洗涤3次，残渣用体积分数为10%的硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得到样品测定液；
（4）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值；以葡聚糖为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
（5）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值；从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量；同时做以纯水代替样品测定液，同样品测定做空白对照试验。
2.根据权利要求1所述的粗多糖的测定方法，其特征在于：所述步骤（1）中沸水浴上加热时间为1h。
3.根据权利要求2所述的粗多糖的测定方法，其特征在于：所述步骤（3）中铜试剂溶液制备步骤如下，（1）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O和30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀备用；（2）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g，并使其溶解即可。
4.根据权利要求3所述的粗多糖的测定方法，其特征在于：所述步骤（3）中洗涤剂的配置步骤为：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液和10mL氢氧化钠溶液，混匀即可。
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