CN103604763A - 一种保健食品功能成份的检测方法 - Google Patents

Abstract

多糖是一类非特异性免疫增强化合物，苯酚—硫酸比色法测定多糖的含量，方法稳定，葡萄糖浓度应控制在510～2510mg/L为宜。苯酚试剂及浓硫酸应精密加入，先静置后振摇，置水浴中加热15min后立即冷却，从线性、精密度、稳定性等试验结果可看出，分光光度法测定保健食品中粗多糖的含量准确性高、重现性好、方法简便易操作。

Description

一种保健食品功能成份的检测方法

技术领域

本发明属于食品分析领域，具体地涉及一种保健食品功能成份的检测方法。 

背景技术

保健食品是食品的一个种类，具有一般食品的共性，能调节人体的机能，适于特定人群食用，但不能治疗疾病。我国保健（功能）食品的兴起是在20世纪80年代末90年代初，经过一、二代的发展，也将迈入第三代，即保健食品不仅需要人体及动物实验证明该产品具有某项生理调节功能，更需查明具有该项保健功能因子的结构、含量、作用机理以及在食品中应有的稳定形态。

保健食品的功能成分主要包括多糖、皂苷类化合物、黄酮类化合物、酶激素及内源性物质、其他类化合物。多糖的功效成分主要包括灵芝多糖、香菇多糖、硫酸软骨素，有缓解体力疲劳、增强免疫力、辅助降血糖、辅助降血脂、辅助降血脂、增强免疫力、保护骨关节、参与制造骨骼的功能。多糖是一类非特异性免疫增强化合物，能提高机体的免疫功能，增强抗病能力，有防老、 防衰、 防癌 、抗癌以及防治肝炎等作用，受到人们的普遍重视，得到了相应的研究和开发。

 

发明内容

本发明的目的是提供一种保健食品功能成份的检测方法，通过使用分光光度计检测方法，建立了一种快速检测保健食品中多糖的方法。

本发明的依据是多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚—硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶液中的糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。由于不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处理，否则结果偏高，处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分离的目的。食品中相对分子质量大于1*104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是，使用分光光度法测定多糖的具体步骤和条件如下：

（1）精密吸取试样测定液2.0ml置于25ml比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0ml。

（2）在旋转混匀器上混匀后，沿管壁小心加入浓硫酸10.0 ml后于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中加热15min，冷却至室温。

（3）用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光值。

本发明的有益效果是：本方法简便、快捷、准确，方法简单，无复杂步骤，易于推广应用，适用于保健食品中水溶性粗多糖的检测。

 

具体实施方式

1、标准曲线的绘制

葡聚糖标准储备溶液制备，精密称取干燥至恒重的葡聚糖对照品0.5007g,加水溶解, 并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存 。

葡聚糖标准使用液制备，吸取葡聚糖标准储备液 1.00ml，置于 100ml量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液每1ml中含葡聚糖0.10mg 。

精密吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 ml (相当于葡聚糖0、0.010、0.020、0.040、0.060、0.080、0.10 m g) 分别置于25ml比色管中，准确补充水至2.0ml，加入50g /L苯酚溶液1.0ml，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0ml后于旋转混匀器上小心混匀，至沸水浴中煮沸2min，冷却至室温后用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。结果见表1。

表 1 　 吸光度值

吸光度 (485nm)	浓度 (mg/m l)
		0. 000	0. 000000
0. 057	0. 000770
		0. 100	0. 001541
0. 161	0. 003081
		0. 271	0. 004622
0. 363	0. 006162
		0. 485	0. 007703

试验表明：葡聚糖浓度在0～0.0077mg/m l范围内线性关系良好，其线性方程为y = 60. 556 x +218 × 10- 2( r = 0. 9982 )。

2、样品测定

称取混合均匀的保健品样品2.0g，精密称定，置于100ml量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，取续滤液供沉淀多糖。

精密取下滤液5.0ml，置于50ml离心管中，加入无水乙醇20ml，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数ml洗涤，离心后弃去上清液，反复3～4次操作。残渣用水溶解并定容至5.0ml，混匀，供沉淀葡聚糖 。

精密取上步溶液2ml置于20ml离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0ml，铜试剂溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2min，冷却后以3000r /min离心5min，弃去上清液。残渣用水洗涤液数毫升洗涤，离心后弃取上清液，反复3次操作后，残渣用100ml/L硫酸溶液2.0ml溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为试样测定液。

精密吸取试样测定液2.0ml置于25ml比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0ml，在旋转混匀器上混匀后，沿管壁小心加入浓硫酸10.0 ml后于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中加热15min，冷却至室温后用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光值。

从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算试样中水溶性粗多糖含量。

表 2　 样品测定结果

称样量W(g)	Abs	C (mg /ml)	X (%)
				2.0608	0.272	0.00445	1.75
2.0270	0.288	0.00471	1.88
				2.0059	0.277	0.00453	1.83
2.0069	0.275	0.00450	1.82
				2.0262	0.279	0.00456	1.83
2.0069	0.283	0.00463	1.87

3、稳定性测试

分别在供试品溶液制成后的10、30、60、90、120、180min内测定，共测6次，测定结果见表3，表明了样品溶液在3h内性质稳定。

表 3　 稳定性试验

10 min	30 mi n	60 min	90 min	120 min	180 min	RSD(%)
							0.292	0.291	0.292	0.291	0.293	0.292	0.25

4、精密度

取同一样品溶液重复测定6次，其测定值分别为0.290、0.289、0.292、0.294、0.293、0.290，RSD =0.8%。

多糖是一类非特异性免疫增强化合物,能提高机体的免疫功能，增强抗病能力，有防老、 防衰、 防癌 、抗癌以及防治肝炎等作用， 受到人们的普遍重视，得到了相应的研究和开发。苯酚—硫酸比色法测定多糖的含量，方法稳定，葡萄糖浓度应控制在510～2510mg/L为宜。苯酚试剂及浓硫酸应精密加入，先静置后振摇，置水浴中加热15min后立即冷却。从线性、精密度、稳定性等试验结果可看出，用苯酚-硫酸显色，分光光度法测定保健食品中粗多糖的含量准确性高、重现性好、方法简便易操作。

Claims (2)

1.一种保健食品功能成份的检测方法，其特征在于，使用分光光度法测定保健食品中粗多糖的含量。

2.根据权利要求1所述一种保健食品功能成份的检测方法，其特征在于，该检测方法的具体步骤和条件如下：

（1）精密吸取试样测定液2.0ml置于25ml比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0ml；

（2）在旋转混匀器上混匀后，沿管壁小心加入浓硫酸10.0 ml后于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中加热15min，冷却至室温；

（3）用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光值。