CN107703080A - 一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法 - Google Patents
一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107703080A CN107703080A CN201711066599.9A CN201711066599A CN107703080A CN 107703080 A CN107703080 A CN 107703080A CN 201711066599 A CN201711066599 A CN 201711066599A CN 107703080 A CN107703080 A CN 107703080A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- sample
- general flavone
- ethanol
- flavone content
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 title claims abstract description 40
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 title claims abstract description 39
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 235000020691 dandelion extract Nutrition 0.000 title claims abstract description 26
- 229940067866 dandelion extract Drugs 0.000 title claims abstract description 25
- 239000001845 taraxacum officinale leaf extract Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 44
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims abstract description 28
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims abstract description 28
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 114
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 54
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 29
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 24
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 11
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims description 2
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 abstract description 7
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 abstract description 7
- 241000292546 Taraxacum mongolicum Species 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 241000245665 Taraxacum Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000005187 Taraxacum officinale ssp. officinale Nutrition 0.000 description 3
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 3
- BAHMQESJBKGPTE-UHFFFAOYSA-N 1,5,8-trimethyl-3a,4-dihydroazuleno[6,5-b]furan-2,6-dione Chemical compound C1C2OC(=O)C(C)=C2C=C2C(C)=CC(=O)C2=C1C BAHMQESJBKGPTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- REDXJYDRNCIFBQ-UHFFFAOYSA-N aluminium(3+) Chemical compound [Al+3] REDXJYDRNCIFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 2
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 2
- XWMMEBCFHUKHEX-MRTCRTFGSA-N (+)-Taraxasterol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CC[C@]1(C)[C@@H]2CC[C@H]2[C@@H]3[C@H](C)C(=C)CC[C@]3(C)CC[C@]21C XWMMEBCFHUKHEX-MRTCRTFGSA-N 0.000 description 1
- BNGXYYYYKUGPPF-UHFFFAOYSA-M (3-methylphenyl)methyl-triphenylphosphanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC1=CC=CC(C[P+](C=2C=CC=CC=2)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 BNGXYYYYKUGPPF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QMKPCZNFLUQTJZ-UHFFFAOYSA-N (4aR)-10c-Hydroxy-1t.2c.4ar.6at.6bc.9.9.12ac-octamethyl-(8atH.12btH.14acH.14btH)-docosahydro-picen Natural products CC1CCC2(C)CCC3(C)C(CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C)C2C1C QMKPCZNFLUQTJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 description 1
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 description 1
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 description 1
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 1
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 1
- HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N flavonol Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002216 flavonol derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 235000011957 flavonols Nutrition 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000020688 green tea extract Nutrition 0.000 description 1
- 229940094952 green tea extract Drugs 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000003808 methanol extraction Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- NGFFRJBGMSPDMS-UHFFFAOYSA-N psi-Taraxasterol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1(C)C2CCC2C3C(C)C(C)=CCC3(C)CCC21C NGFFRJBGMSPDMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000010129 solution processing Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- HUTYZQWCTWWXND-NCTFTGAASA-N taraxasterol Natural products C[C@H]1[C@H]2C3=CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]4(C)[C@]3(C)C[C@H](O)[C@@]2(C)CCC1=C HUTYZQWCTWWXND-NCTFTGAASA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/34—Purifying; Cleaning
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明公开了一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其经过以下步骤：（I）配制芦丁对照品、（II）配制样品溶液、（III）绘制标准曲线、（IV）样品测定、（V）计算。本发明将蒲公英总黄酮的测定方法中样品及对照品溶液处理的步骤简化，即可简便、准确的测定蒲公英总黄酮的含量，其样品测定的试剂换为无毒试剂。本发明具有操作简便、步骤简化、结果准确的优点，适用于以蒲公英提取物为原料的保健品、医药品中总黄酮含量的测定。
Description
技术领域
本发明涉及利用光学手段来测试材料，尤其是一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法。
背景技术
蒲公英属菊科多年生草本植物，含有多种活性成分，如蒲公英甾醇、蒲公英苦素、黄酮类、咖啡酸、绿原酸和多糖等。其中，总黄酮为黄酮醇类，主要结构为5-OH黄酮与2-OH查耳酮，对宛式拟青霉菌和枯草杆菌具有良好的抑菌作用，并具有重要的抗氧化作用，能有效清除超氧阴离子自由基、抗炎、提高机体免疫力、抗自由基、抗氧化、抗病毒等作用。蒲公英提取物为蒲公英经过提取分离，浓缩其总黄酮有效成分，因此总黄酮含量的测定为评价提取物好坏的重要指标，也是以蒲公英为原料的保健品与药品中评价其功效的重要指标。
目前，公开报道的总黄酮的测定方法主要为分光光度计法与薄层色谱扫描法。其中，分光光度计法最为普遍。目前国标与《保健食品检验与评价技术规范》中总黄酮的测定方法并不适用于蒲公英黄酮的测定。现发表的用分光光度计法原理为利用三价铝离子作为显色剂，样品的处理方式主要分为两种：一种前处理用石油醚回流提取1h,甲醇提取2.5h后分别加入亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠溶液。此方法前处理时间过长，步骤繁琐，试剂对人体有损害。另一种方法前处理用60%乙醇加热溶解，后面所用试剂仍然相同，虽缩短了时长，但试剂仍然对人体有毒。总之，目前报道的分光光度计法仍然存在步骤繁琐、耗时长、试剂有毒等不足。薄层色谱法因对仪器要求高、应用不普遍。
发明内容
为了克服现有分光光度计法存在步骤繁琐、耗时长、试剂有毒以及薄层色谱法对仪器要求高、应用不普遍的不足，本发明的目的在于提供一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，该测定方法采用分光光度计法，原理为利用母核中含有的碱性氧原子，与铝离子产生黄色络合物，以芦丁为对照品，三氯化铝作为显色剂在波长270nm处比色。所用试剂有无水乙醇、醋酸、醋酸钠 、三氯化铝，均对人体无害，而且方法简单可行，无加热与回流步骤，适用于蒲公英提取物原料、保健品、药品中蒲公英总黄酮的检测。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：其经过以下步骤：
（I）配制芦丁对照品：将芦丁对照品减压干燥至恒重，称取干燥后的对照品并且溶解于70%乙醇，制成100-300 mg/1000mL的对照品溶液；
（II）配制样品溶液：精密称取适量样品70%乙醇，超声提取并且摇匀过滤；
（III）绘制标准曲线：精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml，摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，以mg/ml为单位的浓度为横纵标，吸光度为纵坐标做标准曲线；
（IV）样品测定：精密吸取样品续滤液0.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml,摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，从标准曲线上读出样品溶液中芦丁的浓度；
（V）按照下式来计算总黄酮含量：
总黄酮含量（%）=，
式中，C：从标准曲线上读出的样品溶液中芦丁的浓度，单位为mg/ml；W：样品的称样量，单位为mg。
在本发明优选的方面，一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其经过以下步骤：
（I）配制芦丁对照品：将芦丁对照品于102℃减压干燥至恒重，称取干燥后的对照品20mg左右于100ml量瓶中，加70%乙醇溶解定溶；
（II）配制样品溶液：精密称取适量样品于50ml的量瓶中，加入40ml 包含70%乙醇的提取液，超声提取30min，冷却至室温，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀过滤；
（III）绘制标准曲线：精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml，摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，以mg/ml为单位的浓度为横纵标，吸光度为纵坐标做标准曲线；
（IV）样品测定：精密吸取样品续滤液1ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml，摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，从标准曲线上读出样品溶液中芦丁的浓度；
（V）按照下式来计算总黄酮含量：
总黄酮含量（%）=，
式中，C：从标准曲线上读出的样品溶液中芦丁的浓度，单位为mg/ml；W：样品的称样量，单位为mg。
在本发明优选的方面，所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液按照以下的方法配制：准确称取醋酸钠1.8g,加醋酸0.98ml,加水溶解定容至100ml。
在本发明优选的方面，在步骤II中，所述的提取液由质量分数70%的乙醇、10%的丙酮和20%的水所组成。
在本发明优选的方面，在步骤II中，所述的超声提取在氮气保护下进行。
在本发明优选的方面，在步骤III和步骤IV中，在加70%乙醇溶液到刻度之前，还包括步骤：将所得到的溶液吸入试管中，并且使用干燥的氮气鼓泡30-60s，随后加入乙醇溶液定容，并且进行分光光度测量。
通过上述方法，将蒲公英总黄酮的测定方法中样品及对照品溶液处理的步骤简化，即可简便、准确的测定蒲公英总黄酮的含量。样品测定的试剂换为无毒试剂。本发明操作简便、步骤简化、结果准确，适用于以蒲公英提取物为原料的保健品、医药品中总黄酮含量的测定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例中所用试剂包括：
1. 无水乙醇（AR）；
2. 醋酸（AR）；
3. 醋酸钠（AR）；
4. 三氯化铝（AR）；
5. 超纯水；
6.醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH:4.0）：准确称取醋酸钠1.8g,加醋酸0.98ml,加水溶解定容至100ml，混匀即可；
7.0.1mol/l三氯化铝缓冲试液:准确称取三氯化铝2.41g，加水溶解定容至100ml,混匀即可。
实施例1
一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其经过以下步骤：
（I）对照品溶液配制：将芦丁对照品于102℃减压干燥至恒重，称取干燥后的对照品20mg左右于100ml量瓶中，加70%乙醇溶解定溶；
（II）样品溶液制备：精密称取0.5134g蒲公英提取物（陕西嘉禾原料）于50ml的量瓶中，加入40ml70%乙醇，超声提取30min，冷却至室温，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀过滤；
（III）标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml,摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，以浓度（mg/ml)为横纵标，吸光度纵坐标做标准曲线；
（IV）样品测定：精密吸取样品续滤液0.2 ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml,摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，从标准曲线上读出样品溶液中芦丁的浓度为0.0108；
（V）含量计算
总黄酮含量（%）=
式中，C：从标准曲线上读出的样品溶液中芦丁的浓度（mg/ml)；W：样品的称样量（mg)。
测得陕西嘉禾蒲公英提取物总黄酮含量为5.26%。
实施例2
一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其经过以下步骤：
（I）对照品溶液配制：将芦丁对照品于102℃减压干燥至恒重，称取干燥后的对照品20mg左右于100ml量瓶中，加70%乙醇溶解定溶。
（II）样品溶液制备：精密称取0.5532g成品粉末（蒲公英片，本申请人研发制作）于50ml的量瓶中，加入40ml70%乙醇，超声提取30min，冷却至室温，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀过滤。
（III）标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml,摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，以浓度（mg/ml)为横纵标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
（IV）样品测定：精密吸取样品续滤液0.2 ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml,摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，从标准曲线上读出样品溶液中芦丁的浓度0.00442mg/mL。
（V）含量计算
总黄酮含量（%）=
式中，C：从标准曲线上读出的样品溶液中芦丁的浓度（mg/ml)；W：样品的称样量（mg)。
测得蒲公英片总黄酮含量为2.00%。
本实施例的测方法回归方程为A=3.95781C-0.00371，r=0.99951，精密度实验相对标准偏差RSD 值为 0.21%、重复性实验相对标准偏差RSD 值为 0.27%、稳定性实验考察相对标准偏差RSD 值为 0.89%。从以上数据及实例中可得出本方法准确、可靠、稳定、简便、易行，适用于测定蒲公英提取物及成品中总黄酮的含量的测定。
实施例3
本实施例的待测样品和实施例1相同，测定方法和实施例1的区别在于：
（1）在步骤II中，所述的超声提取在氮气保护下进行，称重样品为0.5371g。
（2）在步骤III和步骤IV中，在加70%乙醇溶液到刻度之前，还包括步骤：将所得到的溶液吸入试管中，并且使用干燥的氮气鼓泡40s，随后加入乙醇溶液定容，并且进行分光光度测量。
测得陕西嘉禾蒲公英提取物总黄酮含量为5.55%。
实施例4
本实施例的待测样品和实施例1区别在于：在0.5291g的待测样品中加入0.0127g的分析纯芦丁标准品，作为本次的样品。
其测定方法和实施例1的区别在于：
（1）在步骤II中，所述的超声提取在氮气保护下进行，使用的溶剂由质量分数70%的乙醇、10%的丙酮和20%的水所组成。
（2）在步骤III和步骤IV中，在加70%乙醇溶液到刻度之前，还包括步骤：将所得到的溶液吸入试管中，并且使用干燥的氮气鼓泡40s，随后加入乙醇溶液定容，并且进行分光光度测量。
测得陕西嘉禾蒲公英提取物（内标加样后的）总黄酮含量为7.71%。（以加入0.0127g的分析纯芦丁标准品之后的重量为称重总重量）。
实施例5
本实施例的待测样品和实施例1区别在于：在0.4832g的待测样品中加入0.0108g的分析纯芦丁标准品，作为本次的样品。其测定方法和实施例1相同。
测得陕西嘉禾蒲公英提取物（内标加样后的）总黄酮含量为7.18%。（以加入0.0127g的分析纯芦丁标准品之后的重量为称重总重量）
实施例6
本实施例的待测样品和实施例4区别在于：称量样品重量为0.5180g，加入分析纯标准品为0.0115g，测量结果为7.55%。
实施例7
本实施例的待测样品和实施例1区别在于：称量样品重量为0.5427g，加入分析纯标准品为0.0132g，测量结果为7.35%。
实施例8
本实施例的待测样品和实施例4区别在于：称量样品重量为0.5103g，加入分析纯标准品为0.0097g，测量结果为7.27%。
实施例9
本实施例的待测样品和实施例1区别在于：称量样品重量为0.5220g，加入分析纯标准品为0.0124g，测量结果为7.30%。
实施例10
本实施例的待测样品和实施例4区别在于：使用的溶剂由质量分数70%的乙醇、30%的水所组成。称量样品重量为0.5311g，加入分析纯标准品为0.0108g，测量结果为7.15%。
实施例11
本实施例的待测样品和实施例4区别在于：使用的溶剂由质量分数70%的乙醇、30%的水所组成。称量样品重量为0.5311g，不加入分析纯标准，测量结果为5.37%。
一、内标试验
对实施例4-11的内标试验结果进行了分析，结果如表1所示。
其中，“理论上升百分比”按照其各自平行试验来进行计算。例如，实施例4、6、8和实施例3采取相同的试验手段，其理论上升百分比按照实施例3来进行扣除（减去5.55%）。实施例5、7、9和实施例1采取相同的试验手段，其理论上升百分比按照实施例1来进行扣除（扣除5.26%）。通过以上手段，计算得到了理论应当上升的百分比，并且也计算出了加入内标之后实际上升的百分比。最后计算出了实际上升的百分比相对于理论水平的偏差率（以百分数进行计算）。
表1：实施例4-9的内标试验结果分析
从以上的试验结果可见，实施例4、6和8在加入内标之后，其相对于理论应当测量到的上升百分比的偏差较小。然而实施例5、7、9在加入内标之后，其相对于理论应当测量到的上升百分比的偏差较大。
实施例10和11是相同试验条件，唯独区别在于加入或者不加入内标的试验组，因此实施例10在计算理论上升和实际上升的时候，以实施例11为准。最后发现其内标上升百分比的偏差为-5.62%，明显高于实施例4、6和8。这说明在不使用特定的溶剂的情况下，使得样品回收率有所降低。
二、线性、精密度实验、重复性实验、稳定性实验
对实施例2中的方法进行线性、精密度实验、重复性实验、稳定性实验考察。
1、线性方程：按照选定的仪器条件测定系列浓度溶液的吸光度，其结果如表2所示。
表2：系列浓度溶液的吸光度结果
| 浓度/mg | 吸光度（270nm) |
| 0.04126 | 0.1596 |
| 0.08252 | 0.3140 |
| 0.12378 | 0.4862 |
| 0.16504 | 0.6587 |
| 0.20630 | 0.8090 |
| 0.24756 | 0.9761 |
以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标拟合标准曲线，得到回归方程：A=3.95781C-0.00371，r=0.99951。足见其线性很好，在此浓度范围内具有很好的线性。
2、精密度试验：精密吸取同一供试品溶液 6 份，操作同上，相对标准偏差（RSD）值为 0.21%，表明精密度良好，其结果如表3所示。
表3：供试品溶液的精密度试验结果
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(%) |
| 吸光度 | 0.258 | 0.259 | 0.259 | 0.258 | 0.259 | 0.258 | 0.21 |
3、重复性试验：精密吸取 5 份供试溶液，操作同上，RSD 值为 0.27%，表明方法重复性良好，其结果如表4所示。
表4：供试品溶液的重复性试验结果
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | RSD(%) |
| 总黄酮含量 | 4.19 | 4.86 | 4.54 | 4.54 | 4.52 | 0.27 |
5、稳定性考察 ：精密称取蒲公英提取物 0.5g，每隔 10min 测定一次，共测定 7 次，其结果如表5所示。
表5：样品的稳定性试验
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | RSD(%) |
| 吸光度 | 0.253 | 0.252 | 0.251 | 0.250 | 0.249 | 0.258 | 0.249 | 0.89 |
结果显示：RSD=0.89%，表明样品在 70min 内稳定。
Claims (6)
1.一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：其经过以下步骤：
（I）配制芦丁对照品：将芦丁对照品减压干燥至恒重，称取干燥后的对照品并且溶解于70%乙醇，制成100-300 mg/1000mL的对照品溶液；
（II）配制样品溶液：精密称取适量样品70%乙醇，超声提取并且摇匀过滤；
（III）绘制标准曲线：精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml，摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，以mg/ml为单位的浓度为横纵标，吸光度为纵坐标做标准曲线；
（IV）样品测定：精密吸取样品续滤液0.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml,摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，从标准曲线上读出样品溶液中芦丁的浓度；
（V）按照下式来计算总黄酮含量：
总黄酮含量（%）=，
式中，C：从标准曲线上读出的样品溶液中芦丁的浓度，单位为mg/ml；W：样品的称样量，单位为mg。
2.根据权利要求1所述的一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：其经过以下步骤：
（I）配制芦丁对照品：将芦丁对照品于102℃减压干燥至恒重，称取干燥后的对照品20mg左右于100ml量瓶中，加70%乙醇溶解定溶；
（II）配制样品溶液：精密称取适量样品于50ml的量瓶中，加入40ml 包含70%乙醇的提取液，超声提取30min，冷却至室温，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀过滤；
（III）绘制标准曲线：精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml，摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，以mg/ml为单位的浓度为横纵标，吸光度为纵坐标做标准曲线；
（IV）样品测定：精密吸取样品续滤液1ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液2.0ml，0.1mol/L三氯化铝2.0ml，摇匀加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm处以试剂为空白测定吸光度，从标准曲线上读出样品溶液中芦丁的浓度；
（V）按照下式来计算总黄酮含量：
总黄酮含量（%）=，
式中，C：从标准曲线上读出的样品溶液中芦丁的浓度，单位为mg/ml；W：样品的称样量，单位为mg。
3.根据权利要求1所述的一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：所述的醋酸-醋酸钠缓冲溶液按照以下的方法配制：准确称取醋酸钠1.8g,加醋酸0.98ml,加水溶解定容至100ml。
4.根据权利要求1所述的一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：在步骤II中，所述的提取液由质量分数70%的乙醇、10%的丙酮和20%的水所组成。
5.根据权利要求1所述的一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：在步骤II中，所述的超声提取在氮气保护下进行。
6.根据权利要求1所述的一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法，其特征在于：在步骤III和步骤IV中，在加70%乙醇溶液到刻度之前，还包括步骤：将所得到的溶液吸入试管中，并且使用干燥的氮气鼓泡30-60s，随后加入乙醇溶液定容，并且进行分光光度测量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711066599.9A CN107703080A (zh) | 2017-11-02 | 2017-11-02 | 一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711066599.9A CN107703080A (zh) | 2017-11-02 | 2017-11-02 | 一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107703080A true CN107703080A (zh) | 2018-02-16 |
Family
ID=61177693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711066599.9A Pending CN107703080A (zh) | 2017-11-02 | 2017-11-02 | 一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107703080A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111812046A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-10-23 | 云南省烟草质量监督检测站 | 一种测定烟草中总黄酮含量的方法 |
| CN113310979A (zh) * | 2021-05-27 | 2021-08-27 | 南京益唯森生物科技有限公司 | 一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法 |
| CN115508480A (zh) * | 2022-08-09 | 2022-12-23 | 北京康华远景科技股份有限公司 | 一种蒲公英植物及其提取物中总黄酮的检测方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102183517A (zh) * | 2011-03-08 | 2011-09-14 | 广西医科大学 | 一种总黄酮含量测定方法 |
-
2017
- 2017-11-02 CN CN201711066599.9A patent/CN107703080A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102183517A (zh) * | 2011-03-08 | 2011-09-14 | 广西医科大学 | 一种总黄酮含量测定方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 杨玉琼等: "丙酮—乙醇—水三组分体系提取杜仲叶中总黄酮", 《微量元素与健康研究》 * |
| 杭太俊: "《药物分析实验与指导》", 30 August 2003 * |
| 鄢又玉等: "三氯化铝比色测定火棘总黄酮方法的系统考察", 《食品研究与开发》 * |
| 马丽春等: "蒲公英提取工艺优选", 《中国中药杂志》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111812046A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-10-23 | 云南省烟草质量监督检测站 | 一种测定烟草中总黄酮含量的方法 |
| CN113310979A (zh) * | 2021-05-27 | 2021-08-27 | 南京益唯森生物科技有限公司 | 一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法 |
| CN115508480A (zh) * | 2022-08-09 | 2022-12-23 | 北京康华远景科技股份有限公司 | 一种蒲公英植物及其提取物中总黄酮的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Grujic et al. | Effects of different extraction methods and conditions on the phenolic composition of mate tea extracts | |
| Csepregi et al. | On the spectrophotometric determination of total phenolic and flavonoid contents | |
| CN107703080A (zh) | 一种蒲公英提取物总黄酮含量的测定方法 | |
| CN105911154A (zh) | 金银花中绿原酸、木犀草苷和总黄酮含量的测定方法 | |
| CN114594183A (zh) | 一种儿童化妆品中15种禁用唑类的检测方法 | |
| CN109580806A (zh) | 一种用于水产品中利福平药物残留的测定方法 | |
| CN101126708A (zh) | 一种药用蒙脱石及制剂吸附力的测定方法及测定标准 | |
| Al-Tamimi et al. | Kinetic spectrophotometric methods for the determination of alfuzosin hydrochloride in bulk and pharmaceutical formulations | |
| CN102351927A (zh) | Borojo活性提取物及其制备方法和抗菌抗氧化用途 | |
| CN103616339B (zh) | 一种含有灵芝多糖制剂的检测方法 | |
| CN105300945B (zh) | 一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法 | |
| CN107037152A (zh) | 一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法 | |
| CN106168610A (zh) | 高效液相质谱联用测定血浆中氯氮平浓度的方法 | |
| CN106404685B (zh) | 一种保健酒中总皂苷含量的测定方法 | |
| Saha | Colorimetric determination of tetracycline derivatives in pharmaceutical preparations | |
| CN103278498A (zh) | 一种盐酸西布曲明的检测方法及检测试剂盒 | |
| CN102230892B (zh) | 一种检测安胃疡中总黄酮含量的方法 | |
| CN107247092A (zh) | 一种快速定量检测植物及食品中无机硒含量的方法 | |
| CN106918661A (zh) | 一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林c含量的高效液相色谱测定方法 | |
| CN109030445B (zh) | 一种测定壳寡糖含量的方法 | |
| CN104316520A (zh) | 茶多酚中微量铝的检测方法 | |
| CN105067746B (zh) | 化妆品中帕地马酯的测定方法 | |
| CN103869036A (zh) | 药物中番泻苷a、番泻苷b的定量检测方法 | |
| Matyushchenko et al. | Quantitative Determination of the Total Content of Flavonoids in the New Phytopreparation Elima. | |
| RU2792011C2 (ru) | Способ количественного определения суммы антраценпроизводных в свежих листьях алоэ древовидного |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20180216 |