CN105315340A - Trp-Trp-Trp七肽修饰的β-咔啉,其制备,活性和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)。公开了它们的制备方法,公开了它们的纳米结构,公开了它们的抗肿瘤作用,公开了它们抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用,阐明了它们在医学中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)。涉及它的制备方法,涉及它的纳米结构,涉及它的体内外抗肿瘤作用,涉及它抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用。因而本发明涉及它在制备抗肿瘤药物,制备抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
技术背景
恶性肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外,恶性肿瘤并发的炎症、血栓和转移进一步恶化患者的预后。例如,超过90%以上的恶性肿瘤患者都是死于肿瘤转移。肿瘤转移依赖于4个因素:1)肿瘤细胞表面形成微血栓,逃避巨噬细胞吞噬,通过血液循环迁移到远端;2)迁移到远端的肿瘤细胞粘附到血管壁;3)细胞粘附到血管壁的肿瘤细胞通过侵袭出血管而进入正常组织;4)炎症使进入正常组织的肿瘤细胞成长为转移的新生肿瘤。
由于现有抗肿瘤药物不具备和抗转移作用,所以疗效不理想。发明同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用的药物是临床的迫切需求。
RGD四肽,即RGDS,RGDF和RGDV是整合素αVβ3的阻断剂,具有抗血栓和抗细胞粘附活性。Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val,Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe具有抑制肿瘤细胞粘附活性。申请人曾经把RGD四肽与雌激素偶联,制备没有凝血副作用的抗骨质疏松剂。申请人曾经把RGD四肽与四氢-β-咔啉-3-羧酸偶联制备高效的抗血栓剂。申请人也曾经用氨基酸修饰四氢-β-咔啉-3-羧酸、β-咔啉-3-羧酸及1-位取代的β-咔啉-3-羧酸,包括1-位取代的四氢-β-咔啉-3-羧酸或1-位取代的β-咔啉-3-羧酸制备高效的抗血栓剂或抗肿瘤剂。下面是发明人创造的结构类型的代表。尽管发明人付出了大量研究精力,筛选了数百种化合物,一直没有得到同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用的化合物。
发明人在分析数百种化合物的结构及活性变化的基础上,认识到将Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser/Val/Phe与1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸偶联,形成的的化合物会同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用。基于这个认识,发明人提出了本发明。
发明内容
本发明的第一个内容是提供下面结构为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)
本发明的第二个内容是提供1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)的制备方法,该方法包括:
(1)在二氯亚砜(SOCl2)的存在下,L-色氨酸和甲醇反应,生成L-色氨酸甲酯;
(2)在三氟醋酸存在下,在水中4-异丙基苯甲醛(枯茗醛)和L-色氨酸甲酯缩合为(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯;
(3)在二氧化硒(SeO2)的存在下,(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯在二氧六环中氧化1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯;
(4)冰浴下在氢氧化钠的水溶液(2M)和甲醇中,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯转化为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸;
(5)采用逐步缩合法,在N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,在干燥四氢呋喃(THF)中反应,得到全保护多肽序列Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl;
(6)冰浴下在氯化氢的乙酸乙酯溶液中(4M),全保护多肽序列Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl脱除Boc得Trp-Trp-Trp-OBzl;
(7)在N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸在无水四氢呋喃(THF)中与Trp-Trp-Trp-OBzl缩合为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl;
(8)冰浴下在氢氧化钠的水溶液(2M)和甲醇中,化合物1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl转化为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp;
(9)采用逐步缩合法,N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,在干燥四氢呋喃中反应,得到全保护多肽序列Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
(10)冰浴下在氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)中,全保护多肽序列Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl,脱除Boc得Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Arg(NO2)Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
(11)在N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp在无水四氢呋喃中分别与Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl,缩合为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
(12)冰盐浴下在三氟乙酸和三氟甲磺酸混合液(4∶1)中,化合物1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2-)Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应分别得到1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val。
本发明的第三个内容是测定1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)的纳米结构。
本发明的第四个内容是评价1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)体外抑制肿瘤细胞增殖的作用。
本发明的第五个内容是评价1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)对荷S180小鼠肿瘤生长的抑制作用。
本发明的第六个内容是评价1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)体外抑制肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用。
附图说明
图1.发明人创造的抗血栓或抗肿瘤活性化合物的结构类型代表,式中AA为L-氨基酸或甘氨酸。
图2.1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-(Ser/Val/Phe)的合成路线.i)甲醇,氯化亚砜;ii)三氟醋酸,水;iii)二氧化硒,75℃;iv)氢氧化钠水溶液(2M),甲醇;v)苯并三氮唑四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU),N-甲基吗啉,N,N-二甲基甲酰胺;vi)N,N-二环己基碳二亚胺(DCC),N-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉,四氢呋喃;vii)三氟醋酸,三氟甲磺酸;viii)氯化氢/乙酸乙酯(4M)。
图3.化合物8a-c在纯水溶液中1×10-7M浓度下的透射电镜照片。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述,不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备L-色氨酸甲酯盐酸盐(1)
量100mL甲醇加入250mL茄瓶中,冰浴下向茄瓶中加入25.5mLSOCl2,塞上干燥管,搅拌30min后,加入称好的20.400g(100mmol)L-色氨酸。室温搅拌48h,TLC监测反应,当原料点消失后终止反应,减压浓缩除去溶剂,加入30mL甲醇,混匀后再次减压浓缩除去溶剂,重复操作2次。最后加入50mL乙醚,混悬30min后过滤,滤饼干燥后称量,得22.98g(90.2%)目标化合物,为灰色粉末。ESI-MS(m/e):219[M+H]+。
实施例2制备(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2)
量100mL蒸馏水加入250mL茄瓶中,冰浴下加入10mL三氟乙酸,搅拌5min后加入20.320g(80mmol)L-色氨酸甲酯盐酸盐,搅拌至溶解,加入10.672g(88mmol)对异丙基苯甲醛,室温搅拌24h,TLC显示原料点消失,终止反应。反应物减压过滤,滤饼用乙酸乙酯溶解,用饱和NaHCO3水溶液调节pH至8。乙酸乙酯层用饱和NaCl水溶液萃洗3次,再用5%KHSO4水溶液萃洗1次,乙酸乙酯层静置,析出无色固体,干燥后用甲醇重结晶,得16.704g(60%)目标化合物,为无色晶状固体。ESI-MS(m/e):349.2[M+H]+。
实施例3制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯(3)
称13.92g(40mmol)(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯和5.772g(52mmol)二氧化硒加入到250mL茄瓶中,加入100mL二氧六环溶解,置于油浴中加热至75℃,反应10h,TLC监测原料点消失后终止反应。反应物冷却至室温,减压过滤,滤液减压浓缩至干,得12.384g(95%)目标化合物,为黄色固体。ESI-MS(m/e):345.2[M+H]+。
实施例4制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸(4)
称10.320g(30mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯加入250mL茄瓶中,用100mL甲醇溶解,滴加氢氧化钠水溶液(2M)至pH12,室温反应24h。TLC监测原料消失后终止反应。冰浴下,反应液用饱和硫酸氢钾水溶液调pH至7,减压浓缩除去溶剂,残留物加20mL蒸馏水溶解,再用饱和硫酸氢钾水溶液调pH至2,用乙酸乙酯萃取3次,合并的乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液萃洗3次。乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥。减压过滤,滤液减压浓缩至干,得9.11g(92%)目标化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):329.2[M-H]-。
实施例5制备HCl·Trp-Trp-Trp-OBzl
1)制备L-色氨酸苄酯磷酸盐
向500mL茄瓶中依次加入16.900g(50mmol)多聚磷酸,80mL苯甲醇和10.200g(50mmol)L-色氨酸。置于油浴中加热至75℃,48h后TLC监测原料点消失,终止反应。反应物冷却至室温,加入300mL无水乙醚,冰浴下搅拌30min,过滤得15.96g(89%)目标化合物,为无色粉末。ESI-MS(rn/e):295[M+H]+。
2)制备Boc-Trp-Trp-OBzl
先后将3.344g(11mmol)Boc-L-Trp,1.782g(13.2mmol)N-羟基苯骈三氮唑(HOBt)和2.719g(13.2mmol)N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)加入250mL茄瓶中,冰浴下加入无水四氢呋喃,搅拌30分钟得到反应液。2.940g(10.0mmol)色氨酸苄酯磷酸盐用无水四氢呋喃溶解,用N-甲基吗啉(NMM)调pH至8,加入刚刚得到的反应液中,用N-甲基吗啉调节pH至9,0℃搅拌6小时,室温搅拌6小时,TLC监测原料点消失结束反应,反应液减压过滤,滤液减压浓缩,残留物加乙酸乙酯溶解,冰浴下搅拌1h。减压过滤,滤液依次用饱和NaHCO3水溶液,饱和NaCl水溶液,5%KHSO4水溶液,饱和NaCl水溶液,5%NaHCO3水溶液,饱和NaCl水溶液萃洗,各萃洗重复3次。乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂,残留物经硅胶柱层析纯化(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1),得4.756g(82%)目标化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):581[M+H]+。
3)制备HCl·Trp-Trp-OBzl
将4.000g(6mmol)Boc-Trp-Trp-OBzl置于250mL茄瓶中,冰浴搅拌下缓慢向反应瓶中滴加50mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M),冰浴搅拌下反应2小时后TLC监测原料点消失,终止反应。搅拌下用水泵将反应液减压抽干,加乙酸乙酯溶解后再次用水泵减压抽干,重复三次。残留物加无水乙醚充分混悬后静置,倾倒出乙醚,抽干产物,重复三次,得2.940g(95%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):481[M+H]+。
4)制备Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.824g(6mmol)Boc-Trp和2.583g(5mmol)HCl·Trp-L-Trp-OBzl得3.14g(82%)目标化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e)767[M+H]+。
5)制备HCl·Trp-Trp-Trp-OBzl
按制备HCl·Trp-Trp-OBzl的方法,由3.14g(4.1mmol)Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl得2.74g(95%)目标化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):667[M+H]+。
实施例6制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl(5)
将1.19g(3.6mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸和1.629g(4.3mmol)苯并三氮唑四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)加入250mL茄瓶中,冰浴下加入无水N,N-二甲基甲酰胺,搅拌30分钟,得到反应液。2.81g(4mmol)HCl·Trp-Trp-Trp-OBzl用无水二甲基甲酰胺溶解,用N-甲基吗啉(NMM)调pH至8,加入刚刚得到的反应液中,用N-甲基吗啉调节pH至9,0℃搅拌6小时,室温搅拌6小时,TLC显示原料点消失,结束反应。反应液减压过滤,滤液减压浓缩,残留物用乙酸乙酯溶解,冰浴下搅拌1h,减压过滤,滤液依次用饱和NaHCO3水溶液,饱和NaCl水溶液,5%KHSO4水溶液,饱和NaCl水溶液,5%NaHCO3水溶液,饱和NaCl水溶液各洗3次。乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩,得到的无色固体经硅胶柱层析纯化(石油醚/丙酮=1∶1),得1.76g(45%)目标化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):979[M+H]+。
实施例7制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp(6)
将0.98g(1mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl溶解在甲醇中,冰浴下滴加氢氧化钠水溶液(2M)至反应体系pH为12,搅拌4h后原料完全消失。反应化合物用5%KHSO4水溶液调节pH至中性,减压浓缩,残留物加入5mL蒸馏水溶解,溶液用5%KHSO4水溶液调节pH至4,用乙酸乙酯萃取三次,合并乙酸乙酯层。减压浓缩除去溶剂,得8.36g(95%)目标化合物,为灰白色固体。ESI-MS(m/e):889[M+H]+。
实施例8制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl
1)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl
按制备Boc-Trp-Trp-Obzl的方法,由1.60g(5.0mmol)Boc-Arg(NO2)和1.69g(5.0mmol)Gly-Obzl得2.26g(97%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):466[M+H]+。
2)制备Boc-Arg(NO2)-Gly
将1.63g(3.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl溶于15mL甲醇,冰浴搅拌下将刚得到的溶液用氢氧化钠水溶液(2M)调pH至12,反应2h后,TLC显示原料点消失。用稀盐酸(2M)调节反应液pH至7,减压浓缩除去甲醇,残留物用2N稀盐酸调节pH至2,用乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯层,用饱和NaCl水溶液洗至中性,无水Na2SO4干燥,减压过滤,滤液减压浓缩至干,得1.24g(94%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):375[M-H]-。
3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制备
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.62g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.29g(5.0mmol)Ser(Bzl)-OBzl得2.87g(97%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):592[M+H]+。
4)Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制备
按制备HCl·Trp-Trp-OBzl的方法,由2.36g(4.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl得1.94g(97%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):500[M+H]+。
5)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制备
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.31g(3.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.87g(3.5mmol)Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl得2.08g(70%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):849[M+H]+。
6)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制备
按制备HCl·Trp-Trp-OBzl的方法,由1.87g(2.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl得1.56g(95%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):747[M+H]+。
实施例9制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
1)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl
方法同实施例8中1)。
2)制备Boc-Arg(NO2)-Gly
方法同实施例8中2)。
3)制备Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.62g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和2.14g(5.0mmol)Phe-OBzl得2.66g(95%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):561[M+H]+。
4)制备Asp(OBzl)-Phe-OBzl
按制备HCl·Trp-Trp-OBzl的方法,由2.24g(4.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得1.77g(96%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):461[M+H]+。
5)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.31g(3.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.74g(3.5mmol)Asp(OBzl)-Phe-OBzl得2.06g(72%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):819[M+H]+。
6)制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl
按HCl·Trp-Trp-OBzl的制备方法,由1.80g(2.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl制得1.50g(95%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):719[M+H]+。
实施例10制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl
1)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl
方法同实施例8中1)。
2)制备Boc-Arg(NO2)-Gly
方法同实施例8中2)。
3)制备Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.62g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.90g(5.0mmol)Val-OBzl得2.48g(97%)标题化合物,为无色油状物。ESI-MS(m/e):513[M+H]+。
4)制备Asp(OBzl)-Val-OBzl
按HCl·Trp-Trp-OBzl的制备方法,由2.05g(4.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl得1.74g(97%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):413[M+H]+。
5)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由1.31g(3.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.57g(3.5mmol)Asp(OBzl)-Val-OBzl得2.10g(78%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):771[M+H]+。
6)制备Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl
按HCl·Trp-Trp-OBzl的制备方法,由1.69g(2.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得1.51g(97%)标题化合物,为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):671[M+H]+。
实施例11制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(7a)
按制备Boc-Trp-Trp-OBzl的方法,由0.627g(0.7mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp与0.635g(0.7mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得0.612g(51.0%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):1716.7[M+H]+。
实施例12制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe(8a)
冰盐浴下,将1.0g(0.6mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl溶于4mL三氟乙酸中,加入1mL三氟甲磺酸。搅拌1h。加入100mL无水乙醚,有黄色固体析出,离心弃上清液,沉淀用乙醚洗涤3次。冰浴下,沉淀用蒸馏水溶解,用3%氨水调节pH至7。葡聚糖凝胶脱盐。得到0.266g(91.0%)目标化合物,为无色固体.ESI-MS(m/e):1364.2[M+H]+.mp:237.1-239.5℃; (c=0.10,CH3OH).IR(KBr):3379.29,3059.10,2960.73,2929.87,2872.10,1658.78,1521.84,1496.76,1456.26,1388.75,1350.17,1246.02,1101.35,1060.85,744.52cm-1.1HNMR(300MHz,DMSO-d6:8/ppm=11.83(s,1H),10.85(s,1H),10.81(s,1H),10.76(s,1H),8.73(s,1H),8.59(d,J=9.0Hz,1H),8.42(d,J=9.0Hz,1H),8.33-8.0(m,4H),8.265(s,1H),7.86(d,J=9.0Hz,2H),7.69-7.51(m,7H),7.32-7.17(m,14H),7.06-6.81(m,6H),4.82(m,1H),4.66(m,2H),4.34(m,3H),3.84-2.82(m,20H),1.80(m,1H),1.60-1.40(m,3H),1.34(m,6H)。
实施例13制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(7b)
按制备Boc-Trp-Trp-Obzl的方法,由1.06g(1.2mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp与1.14g(1.2mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl得0.60g(29.0%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):1728.7[M+H]+。
实施例14制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser(8b)
按制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe的方法,由1.0g(0.6mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl得0.26g(91.0%)目标化合物,为无色固体.ESI-MS(m/e):1303.7[M+H]+。mp:225.3-227.2℃;(c=0.10,CH3OH).IR(KBr):3361.93,3059.10,2958.80,2927.94,1660.71,1519.91,1460.11,1442.75,1388.75,1350.17,1282.66,1247.94,1151.50,1099.43,1031.92,744.52cm-1.1HNMR(800MHz,DMSO-d6:6/ppm=11.838(s,1H),10.829(s,1H),10.797(s,1H),10.743(s,1H),8.732(s,1H),8.583(s,1H),8.535(s,1H),8.531(s,1H),8.311(s,1H),8.055(s,1H),8.045(s,1H),8.028(s,1H),7.868(s,1H),7.858(s,1H),7.684-7.498(m,5H),7.382-6.838(m,19H),4.827(m,1H),4.658(m,1H),4.529(m,1H),4.297(m,1H),4.082(m,2H),3.779(m,1H),3.764(m,1H),3.690-3.604(m,4H),3.250(m,3H),3.076(m,3H),3.000(m,3H),2.548(m,2H),1.624-1.454(m,4H),1.350(m,6H)。
实施例15制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(7c)
按制备Boc-Trp-Trp-Obzl的方法,由0.63g(0.7mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp与0.50g(0.7mmol)HCl·Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得0.47g(43.1%),为无色固体。ESI-MS(m/e):1541.7[M+H]+。
实施例16制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val(8c)
按制备1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe的方法,由1.0g(0.6mmol)1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得0.08g(92.0%)目标化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):1316.6[M+H]+.mp:190.0-193.2℃;(c=0.10,CH3OH).IR(KBr):3369.64,3302.13,3059.10,2962.66,2877.29,1649.14,1519.91,1442.75,1348.24,1315.45,1244.09,1170.79,1120.64,740.67,619.15cm-1.1HNMR(800MHz,DMSO-d6:6/ppm=11.826(s,1H),10.840(s,1H),10.803(s,1H),10.744(s,1H),8.735(s,1H),8.582(s,1H),8.406(s,1H),8.318(s,1H),8.265(s,1H),8.209(s,1H),8.125(s,1H),8.100(s,1H),7.959(s,1H),7.857(s,2H),7.674-7.530(m,7H),7.308-7.162(m,9H),7.039-6.843(m,7H),4.817(m,1H),4.657(m,1H),4.340(m,1H),4.132(m,1H),3.803(m,1H),3.612(t,J1=16.0Hz,2H),3.500-2.700(m,16H),2.608(m,1H),2.040(m,1H),1.813(m,1H),1.603-1.535(m,3H),1.421(m,2H),1.341(m,6H),0.867(m,6H)。
实验例1测定化合物8a-c的透射电镜照片
将化合物8a-c按照1×10-7M的浓度配置纯水溶液,均匀的铺在铜网上,在透射电镜(TEM,JEM-1230,JEOL)下观察化合物的自组装性质。得到的照片如图3。结果表明,化合物8a-c在水中可形成纳米颗粒,直径为50-140nm。
实验例2测定化合物8a-c对肿瘤细胞的细胞毒作用
1)本发明的化合物8a-c用含0.1%DMSO的培养基配制成所需浓度。
2)实验用的肿瘤细胞为HepG2(人肝细胞癌细胞),HL60(人早幼粒细胞白血病细胞),Bel-7402(人肝癌细胞),HT-29(人结肠癌细胞),HeLa(人宫颈癌细胞),A549(人肺癌细胞),S180(小鼠腹水瘤细胞),H22(小鼠肝癌细胞),HCT-8(人结肠癌细胞),K562(人白血病细胞),MCF-7(人乳腺癌细胞),SH-sy5y(人神经质细胞瘤),U2OS(人骨肉瘤细胞)和HCCLM3(人高转移肝癌细胞)。
3)实验方法HL-60,HT-29,Bel-7402,A549,K562,HeLa,H22,HCT-8和S180细胞选用RPMI-1640培养基;MCF-7,SH-sy5y,U2OS,HepG2和HCCLM3细胞选用DMEM培养基。培养基中均含10%经灭活的胎牛血清和1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素。
贴壁细胞HepG2,HT-29,Bel-7402,A549,HeLa,HCCLM3,HCT-8,MCF-7,HCCLM3,SH-sy5y,U2OS和半贴壁细胞S180的培养:分别将生长状态良好,处于对数生长期的细胞以4×104个/mL的密度接种于96孔板,每孔100μL,置于37℃和5%CO2的细胞孵育箱中培养4小时,然后按预设的浓度梯度加入经灭菌处理的化合物5与含0.1%DMSO的培养基配制成的溶液,每孔25μL,对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后,每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液,置于37℃和5%CO2的细胞孵育箱中培养4小时。小心除去上清液后每孔加入100μL的DMSO,振荡约10min溶解紫色残留物(甲瓒),立即于酶标仪上检测O.D.(吸光度)值,波长为570nm。
悬浮细胞HL60,K562的培养:分别将生长状态良好,处于对数生长期的细胞以5×104个/mL的密度接种于96孔板,每孔100μL,然后按预设的浓度梯度加入经灭菌处理的化合物8a-c与含0.1%DMSO的培养基配制成的溶液,每孔25μL,对照组加入等体积的溶解样品的溶媒,置于37℃和5%CO2的细胞孵育箱中培养48小时。每孔加入25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液,继续置于条件为37℃和5%CO2的细胞孵育箱中培养4小时。2500rpm离心10min,小心吸出上清液,每孔加入100μLDMSO,振荡约10min溶解紫色残留物(甲瓒),立即于酶标仪上检测O.D.(吸光度)值,波长为570nm。
按下式求出各个浓度下化合物8a-c抑制肿瘤细胞增殖的活性:
细胞增殖(%)=(化合物8a-c组平均O.D.值/对照组平均O.D.值)×100%,实验重复3次,以细胞增殖对药物浓度作图,按作图法求出IC50(半数有效抑制浓度)值。4)结果见表1-3。结果表明,化合物8a-c仅在100μM的高浓度对Bel-7402,HepG2,HL60,HT-29,HeLa,S180,A549和HCCLM3等8株肿瘤细胞显示弱的细胞毒作用。
表1化合物8a-c对HCT-8、HeLa、K562、HL60和A549细胞毒活性(IC50,均值±SDμM)
a)n=6
表2化合物8a-c对SH-sy5y、MCF-7、Bel-7402、HCCLM3和S180细胞毒活性(IC50,均值±SDμM)
a)n=6
表3化合物8a-c对HepG2、U2OS、H22和HT-29细胞毒活性(IC50,均值±SDμM)
a)n=6
实验例3评价化合物8a-c的体内抗肿瘤活性
1)本发明的化合物8a-c用含吐温80的生理盐水溶解,阿霉素和阿糖胞苷用生理盐水溶解作为阳性对照,含吐温80的生理盐水作为阴性对照;
2)化合物8a-c和含吐温80的生理盐水均灌胃给药,化合物8a-c的给药剂量为10nmol/kg,含吐温80的生理盐水的给药剂量为0.2mL/20g,连续给药10天,共给药10次;阿霉素和阿糖胞苷腹腔给药,给药剂量分别为为2μmol/kg和8.2μmol/kg,连续给药10天,共给药10次。
3)实验动物为ICR雄性小鼠(清洁级),体重20±2g,每组15只小鼠。
4)瘤源为小鼠S180肉瘤,购自北京大学医学部动物实验中心,自行传代维持。
5)动物模型与治疗无菌条件下抽取接种生长旺盛的S180腹水瘤瘤液,用生理盐水稀释成(1∶2)的液体充分混合,将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2%台盼蓝染色,混匀后按白细胞计数方法计数,染蓝色者为死细胞,不染色者为活细胞,并按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度=4大方格内活细胞数/4×104×稀释倍数=细胞数/mL
细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%
6)将存活率大于90%的瘤液用匀浆法制备成2.0×107个/mL的细胞悬液,于鼠腋皮下接种,0.2mL/只,制造S180荷瘤小鼠。肿瘤接种24h后,治疗组小鼠每日口服化合物8a-c,剂量为10nmol/kg。空白组小鼠每日口服0.2mL含吐温80的生理盐水。阳性对照组小鼠每日腹腔注射阿霉素,剂量为2μmol/kg。实验进行至第8天,称小鼠体重,乙醚麻醉,脱颈椎处死小鼠,然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位,剪开皮肤,暴露肿瘤,钝性剥离,称重,按如下公式计算抑瘤率:抑瘤率%=(阴性对照组平均瘤重-化合物8a-c组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重×100%。实验数据采用t检验和方差分析,瘤重以(均值±SDg)表示。结果见表4。由表4可以看出,在10nmol/kg的口服剂量下,化合物8a-c治疗组小鼠的瘤重与生理盐水组相比具显著性差异,说明化合物8能明显抑制肿瘤的生长。
7)实验结果
通过建立S180移植性小鼠肉瘤模型,评价了化合物8a-c的体内抗肿瘤活性。由表4可以看出,在灌胃给予10nmol/kg的剂量下,8a-c均具有体内抗肿瘤活性。
表4化合物8a-c对S180小鼠瘤重的影响
n=15;a)与生理盐水组比p<0.01.
实验例4评价化合物5和8a-c的体外抗肿瘤细胞粘附活性
1)化合物5和8a-c用含0.1%DMSO的DMEM培养基配制成浓度为100μM的溶液。
2)细胞为HCCLM3(高转移人肝癌细胞)。
3)Fn(人纤维连接蛋白)。
4)实验方法
用PBS将Fn配制成浓度为100μg/mL的溶液,按100μL/孔加入96孔培养板中,将培养板置于4℃冰箱过夜。次日,吸除未包被Fn溶液,用PBS洗1次,每孔加入含2%FBS的PBS溶液30μL封板,在37℃和5%CO2的培养箱中孵育3小时,弃去各孔溶液。将生长状态良好、处于对数生长期的HCCLM3细胞以5×104个/mL的密度接种于包被Fn的96孔板中,每孔100μL,同时加入25μL化合物5或8a-c的溶液,使其终浓度为20nM,在37℃和5%CO2培养箱中培养2小时,用PBS洗去未粘附的细胞,弃去PBS后每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液,置于37℃和5%CO2培养箱中孵育4个小时,小心除去上清液后每孔加入100μLDMSO,振荡约10min溶解沉淀,立即于酶标仪570nm波长下检测O.D.(吸光度)值。粘附抑制率的计算公式如下:粘附抑制率(%)=[1-(化合物组细胞的OD值/空白组细胞的OD值)]×100%;实验数据统计均采用t检验和方差分析,粘附抑制率以均值±SD%表示。
5)结果见表5。由表5可以看出,在20nM浓度下,化合物8a-c在20μM剂量下可抑制HCCLM3细胞对FN的粘附,8a、8b、8c抑制率分别为37.83%、48.27%、33.21%。与发明人公开的RGDS,RGDV和RGDF抑制SACC-LM细胞与ECM及血小板粘附的有效浓度为1μM相比,化合物8a-c的有效浓度降低了50倍。
表5.化合物5与8a-c体外抗肿瘤细胞粘附活性
n=5;a)与化合物5组比p<0.01
实验例5评价化合物5和8a-c的体外抗肿瘤细胞侵袭活性
1)化合物5和8a-c用含0.1%DMSO的DMEM培养基配制成浓度为100μM的溶液。
2)细胞为HCCLM3(高转移人肝癌细胞)。
3)基质胶为matrigel。
4)实验方法
将冻存于-20℃冰箱的基质胶matrigel4℃过夜,变成液态;取720μL无血清DMEM培养基,加入180μLMatrigel,混匀,加入至Transwell小室的聚碳酸酯膜上室,100μL/个,放入37℃和5%CO2培养箱中孵育5h。吸除小室中残留液体,每孔加入50μLDMEM培养基,37℃和5%CO2培养箱中孵育30min。
HCCLM3细胞消化之后,用无血清DMEM培养基洗3次,计数,配成细胞悬液,密度为5×105个/mL。每孔加入100μL细胞悬液,同时加入25μL同时加入25μL化合物5或8a-c的溶液,使其终浓度为20nM。空白对照加25μL含0.1%DMSO的DMEM培养基配制的溶液。下室加入600μL无血清DMEM培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养48小时。
用棉签擦去基质胶和上室内的细胞之后,用4%的多聚甲醛固定细胞30min。吸除固定液,用PBS洗3次,用0.1%的结晶紫染液染色30min。吸除染色液,用PBS洗3次。
将Transwell上室放入含有LysisBuffer的6孔板中,室温放置20min,前后震荡使结晶紫充分溶解,用酶标仪测量混合液的O.D.(595nm)值。
侵袭抑制率=(1-给药组O.D.值/空白组O.D.值)×100%
实验数据统计均采用t检验和方差分析,侵袭抑制率以均值±SD%表示。
5)结果见表6。可以看出,在20nM浓度下化合物8a-c可明显抑制HCCLM3细胞对ECM的侵袭,抑制率分别为为31.79%、54.17%、30.28%。与发明人公开的RGDS,RGDV和RGDF抑制SACC-LM细胞侵袭的有效浓度为1μM相比,化合物8a-c的有效浓度降低了50倍。
表6化合物5与8a-c的体外抗肿瘤细胞侵袭活性
n=5;a)与化合物5组比p<0.01.
实验例6评价化合物5和8a-c的体外抗肿瘤细胞迁移活性
1)化合物5和8a-c用含0.1%DMSO的DMEM培养基配制成浓度为100μM的溶液。
2)细胞为HCCLM3(高转移人肝癌细胞)。
3)实验方法
HCCLM3细胞消化之后,用无血清DMEM培养基洗3次,计数,配成细胞悬液,密度为2×106个/mL。每孔加入100μL细胞悬液,同时加入25μL同时加入25μL化合物5或8a-c的溶液,使其终浓度为20nM。空白对照加25μL含0.1%DMSO的DMEM培养基配制的溶液。下室加入600μL无血清DMEM培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养6小时。
用棉签擦去上室内的细胞之后,用4%的多聚甲醛固定细胞30min。吸除固定液,用PBS洗3次,用0.1%的结晶紫染液染色30min。吸除染色液,用PBS洗3次。
在每个小室选取9个大致相同的视野观察,拍照,计数。实验数据统计均采用t检验和方差分析,迁移的细胞数以均值±SD表示。
4)结果见表7。可以看出,在20nM浓度下,化合物8a-c可抑制HCCLM3细胞迁移,抑制率分别为38.23%、47.05%、35.29%。与发明人公开的RGDS,RGDV和RGDF抑制SACC-LM细胞迁移的有效浓度为1μM相比,化合物8a-c的有效浓度降低了50倍。
表7化合物5和8a-c的体外抗肿瘤细胞迁移活性
n=9;a)与化合物5组比p<0.01。
Claims (5)
1.下式结构的1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val和1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe。
2.权利要求1的1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val和1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe的制备方法,该方法由以下步骤构成:
(1)在二氯亚砜(SOCl2)的存在下,L-色氨酸和甲醇反应,生成L-色氨酸甲酯;
(2)在三氟醋酸存在下,在水中4-异丙基苯甲醛(枯茗醛)和L-色氨酸甲酯缩合为(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯;
(3)在二氧化硒(SeO2)的存在下,(3S)-1-(4-异丙基苯基)-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯在二氧六环中氧化1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯;
(4)冰浴下在氢氧化钠的水溶液(2M)和甲醇中,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯转化为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸;
(5)采用逐步缩合法,在N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,在干燥四氢呋喃(THF)中反应,得到全保护多肽序列Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl;
(6)冰浴下在氯化氢的乙酸乙酯溶液中(4M),全保护多肽序列Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl脱除Boc得Trp-Trp-Trp-OBzl;
(7)在N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-羧酸在无水四氢呋喃(THF)中与Trp-Trp-Trp-OBzl缩合为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl;
(8)冰浴下在氢氧化钠的水溶液(2M)和甲醇中,化合物1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-OBzl转化为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp;
(9)采用逐步缩合法,N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,在干燥四氢呋喃中反应,得到全保护多肽序列Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
(10)冰浴下在氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)中,全保护多肽序列Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl,脱除Boc得Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Arg(NO2)Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
(11)在N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp在无水四氢呋喃中分别与Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl,缩合为1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
(12)冰盐浴下在三氟乙酸和三氟甲磺酸混合液(4∶1)中,化合物1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg(NO2-)Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应分别得到1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val。
3.权利要求1的1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val和1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe的纳米结构。
4.权利要求1的1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val和1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe在制备抗肿瘤药物中的应用。
5.权利要求1的1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Ser,1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Val和1-(4-异丙基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-Arg-Gly-Asp-Phe在制备抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移药物中的应用。
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---|---|---|---|---|
CN101602791A (zh) * | 2008-06-10 | 2009-12-16 | 首都医科大学 | 整合素受体靶向脂质体药物载体及其制备方法和应用 |
CN103450340A (zh) * | 2012-05-29 | 2013-12-18 | 首都医科大学 | 杂环羧酸修饰的抗肿瘤寡肽,其合成,抗肿瘤作用和应用 |
CN103450335A (zh) * | 2012-06-01 | 2013-12-18 | 首都医科大学 | β-咔啉酰色氨酰色氨酰氨基酸苄酯、其合成、抗肿瘤作用及应用 |
CN103539838A (zh) * | 2012-07-15 | 2014-01-29 | 彭莉 | 1-甲基-四氢-β-咔啉-3-甲酰RGD肽、其合成、纳米结构、抗血栓作用和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
张洁: "RGD序列肽在口腔癌中的作用机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 * |
温再和等: "抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的研究进展", 《内蒙古医学杂志》 * |
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