CN103450332B - 苯乙烯-β-咔啉修饰的三肽苄酯，其制备，抗肿瘤活性和应用 - Google Patents
苯乙烯-β-咔啉修饰的三肽苄酯，其制备，抗肿瘤活性和应用 Download PDFInfo
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Landscapes
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Abstract
本发明涉及苯乙烯-β-咔啉修饰的三肽苄酯，其制备，抗肿瘤活性和应用，提供了通式I代表的17种化合物，提供了它们的制备方法，进一步提供了它们在肿瘤细胞模型和移植性小鼠S180肉瘤模型上的抗肿瘤作用。因而本发明提供的通式I代表的17种化合物具有作为抗肿瘤剂的临床应用前景。式中AA选自Gly，Ala，Leu，Ile，Phe，Ser，Trp，Glu(OBzl)，Thr，Val，Pro，Lys(Z)，Asp(OBzl)，Gln，Asn，Tyr和Met。
Description
技术领域
本发明涉及了通式I代表的17个化合物，涉及它们的制备方法，进一步涉及它们它们在肿瘤细胞模型和移植性小鼠S180肉瘤模型上的抗肿瘤作用和作为抗肿瘤剂的应用，本发明属于生物医药领域。
背景技术
恶性肿瘤是全球致死率最高的病因之一。DNA嵌插剂类抗肿瘤药物以DAN为直接靶点，是临床应用的抗肿瘤药物的重要类型。临床应用的DNA嵌插剂类抗肿瘤药物虽然疗效明确，但神经毒性强。寻找疗效好，没有神经毒性的新型DNA嵌插剂是肿瘤药物研究的热点。
发明人在长期的研究中发现β-咔啉-3-羧酸不仅能够嵌插到肿瘤的DNA中，而且没有明显的神经毒性(结构1)。
发明人在长期的研究中还发现1位苯乙烯基取代的β-咔啉-3-羧酸嵌插到肿瘤的DNA中的性能比β-咔啉-3-羧酸优秀(结构2)。
发明人在长期的研究中进一步发现将1位苯乙烯基取代的β-咔啉-3-羧酸与色氨酰色氨酸苄酯偶联，可以进一步增强肿瘤DNA嵌插活性并进一步降低神经毒性(结构3)。
发明人在长期的研究中进一步发现在N-(1位苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰)色氨酰色氨酸苄酯中插入氨基酸，可以改善药代动力学性质(结构4)。结构4就是本发明的一系列N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰)-Trp-Trp-AA-OBzl。它们的特征在于抗肿瘤作用强，毒副作用弱。
发明内容
本发明的第一个内容是提供通式I代表的17种N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰)-Trp-Trp-AA-OBzl：
式中AA选自Gly，Ala，Leu，Ile，Phe，Ser，Trp，Glu(OBzl)，Thr，Val，Pro，Lys(Z)，Asp(OBzl)，Gln，Asn，Tyr和Met.
本发明的第二个内容是提供通式I代表的17种N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰)-Trp-Trp-AA-OBzl的制备方法，该方法包括：
2.权利要求1的通式I代表的17种化合物的制备，该方法由以下步骤构成：
1)在浓盐酸催化存在下Trp-OMe在甲醇中与苯丙烯醛进行Pictet-Spengler缩合生成1-苯乙烯基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-甲酯；
2)在浓盐酸催化存在下Trp-OBzl在甲醇中与苯丙烯醛进行Pictet-Spengler缩合生成1-苯乙烯基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-苄酯；
3)1-苯乙烯-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-甲酯在无水THF中与二氯二氰基苯醌芳构化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酯；
4)1-苯乙烯-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-苄酯在无水THF中与二氯二氰基苯醌芳构化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-苄酯；
5)在二氧六环中将1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酯皂化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-羧酸；
6)在二氧六环中将1-苯乙烯基-β-咔啉-3-苄酯皂化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-羧酸；
7)在DCC和HOBt存在下Boc-Trp在无水THF中与Trp-OMe缩合为Boc-Trp-Trp-OMe；
8)在甲醇中将Boc-Trp-Trp-OMe皂化为Boc-Trp-Trp；
9)在DCC和HOBt存在下在无水THF中Boc-Trp-Trp分别与Gly-OBzl，Ala-OBzl，Val-OBzl，Leu-OBzl，Ile-OBzl，Pro-OBzl，Phe-OBzl，Trp-OBzl，Ser-OBzl，Thr-OBzl，Lys(Z)-OBzl，Tyr-OBzl，Glu(OBzl)-OBzl，Asp(OBzl)-OBzl，Gln-OBzl，Asn-OBzl，Met-OBzl缩合为Boc-Trp-Trp-Gly-OBzl，Boc-Trp-Trp-Ala-OBzl，Boc-Trp-Trp-Val-OBzl，Boc-Trp-Trp-Leu-OBzl，Boc-Trp-Trp-Ile-OBzl，Boc-Trp-Trp-Pro-OBzl，Boc-Trp-Trp-Phe-OBzl，Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl，Boc-Trp-Trp-Ser-OBzl，Boc-Trp-Trp-Thr-OBzl，Boc-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl，Boc-Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl，Boc-Trp-Trp-Tyr-OBzl，Boc-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl，Boc-Trp-Trp-Gln-OBzl，Boc-Trp-Trp-Asn-OBzl，Boc-Trp-Trp-Met-OBzl；
10)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中步骤10)中所得的产物分别脱除Boc生成Trp-Trp-Gly-OBzl，Trp-Trp-Ala-OBzl，Trp-Trp-Val-OBzl，Trp-Trp-Leu-OBzl，Trp-Trp-Ile-OBzl，Trp-Trp-Pro-OBzl，Trp-Trp-Phe-OBzl，Trp-Trp-Trp-OBzl，Trp-Trp-Ser-OBzl，Trp-Trp-Thr-OBzl，Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl，Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl，Trp-Trp-Tyr-OBzl，Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl，Trp-Trp-Gln-OBzl，Trp-Trp-Asn-OBzl，Trp-Trp-Met-OBzl；
11)在DCC和HOBt存在下在无水THF中1-苯乙烯-β-咔啉-3-苄酯分别与步骤11)中所得的产物缩合为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰甘氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰丙氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰缬氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰亮氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰异亮氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰脯氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰苯丙氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰色氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰丝氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰苏氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰赖氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰酪氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰谷氨酸双苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰天冬氨酸双苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰谷氨酰胺苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰天冬酰胺苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰蛋氨酸苄酯。
本发明的第三个内容是评价通式I代表的17种N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰)-Trp-Trp-AA-OBzl的体外和体内抗肿瘤活性。
附图说明
图1N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰)-Trp-Trp-AA-OBzl的合成路线图。i)C6H5OH，H6P4O13；ii)MeOH和SOCl2；iii)MeOH和HCl；iv)DDQ和THF；v)MeOH和4NNaOH(aq)；vi)DCC，HOBt和NMM；vii)HCl/EA。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备1-苯乙烯基-(1，2，3，4)-四氢咔啉-3-羧酸甲酯(1’)
将5.09g(20mmol)HCl·Trp-OMe溶于40ml甲醇中，加入苯丙烯醛3.96g(30mmol)，搅拌均匀后加入浓盐酸催化反应，常温搅拌下反应。48h后TLC(二氯甲烷/甲醇，10∶1)检测显示HCl·Trp-OMe点消失。减压蒸馏除大部分甲醇，剩余液加入100ml饱和NaHCO3溶液，析出深黄色胶状物，加入150ml乙酸乙酯萃取，酯层饱和NaCl洗涤数次，分出酯层无水Na2SO4干燥，过滤，收集滤液，旋除乙酸乙酯，得深黄色固体。产物柱层析(石油醚/丙酮，2∶1)纯化，得到4.45g(67％)目标化合物，为黄色固体粉末。ESI-MS(m/e)333[M+H]+.
实施例2制备1-苯乙烯基-(1，2，3，4)-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(1)
将2.94g(10mmol)Trp-OBzl溶于30ml甲醇中，加入苯丙烯醛1.98g(15mmol)，搅拌均匀后加入浓盐酸催化反应，常温搅拌下反应。48h后TLC(二氯甲烷/甲醇，15∶1)检测显示Trp-OBzl点消失。减压蒸馏除大部分甲醇，剩余液加入50ml饱和NaHCO3溶液，析出深黄色胶状物，加入100ml乙酸乙酯萃取，酯层饱和NaCl洗涤数次，分出酯层无水Na2SO4干燥，过滤，收集滤液，旋除乙酸乙酯，得深黄色固体。产物柱层析(石油醚/丙酮，2∶1)纯化得到2.61g(64％)目标化合物，为黄色粉末。ESI-MS(m/e)409[M+H]+.
实施例3制备1-苯乙烯基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2’)
将3.32g(10mmol)1-苯乙烯-(1，2，3，4)-四氢咔啉-3-甲酯溶于15ml四氢呋喃(THF)中，将溶于15ml四氢呋喃中的4.54g二氯二氰基苯醌(DDQ)溶液滴加反应液中，常温搅拌下反应。12h后TLC(石油醚/丙酮，2∶1)检测显示1-苯乙烯-(1，2，3，4)-四氢咔啉-3-甲酯消失。减压除四氢呋喃，残留物加150ml乙酸乙酯溶解，依次用饱和NaHCO3溶液，5％NaHCO3溶液，饱和NaCl溶液洗涤三次后分出酯层，酯层无水Na2SO4干燥，过滤，收集滤液，减压除乙酸乙酯得到的固体柱层析(石油醚/丙酮，5∶1)纯化，得0.59g(18％)目标化合物，为黄色粉末。Mp118-119℃.[α]D25＝-6.0(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)329[M+H]+.IR(KBr)3730.27，3269.40，3025.37，2945.89，1711.79，1628.97，1560.13，1499.67，1434.93，1351.30，1250.44，1141.10，969.84，748.23，695.83，621.30，509.84.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.34(s，1H)，8.83(s，1H)，8.41(d，J＝4.74Hz，1H)，8.03(d，J＝9.45Hz，1H)，7.91(d，J＝9.45Hz，1H)，7.82(d，J＝4.53Hz，2H)，7.72(d，J＝4.92Hz，1H)，7.64(t，J＝4.32Hz，J＝4.80Hz，1H)，7.50(t，J＝4.53Hz，J＝4.62Hz，2H)，7.43-7.31(m，2H)，3.96(s，3H).
实施例4制备1-苯乙烯基-β-咔啉-3-羧酸苄酯(2)
按照实施例3的方法由4.08g(10mmol)1-苯乙烯-(1，2，3，4)-四氢咔啉-3-苄酯制得0.694g(17％)目标化合物，为黄色固体粉末。Mp109-111℃；[α]D25＝+31.67.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：405[M+H]+.IR(KBr)：3261.06，3056.88，2950.36，1708.45，1629.20，1560.43，1498.46，1451.18，1376.64，1343.72，1248.57，1104.81，971.24，747.86，694.35，589.07，505.98，432.28.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.32(s，1H)，8.86(s，1H)，8.49-8.38(m，1H)，8.00-8.08(m，1H)，7.92(d，J＝9.60Hz，1H)，7.80(d，J＝4.50Hz，1H)，7.22(t，J＝4.80Hz，J＝4.50Hz，1H)，7.69-7.61(m，2H)，7.61-7.53(m，2H)，7.53-7.42(m，4H)，7.42-7.26(m，3H)，5.48(d，J＝3.60Hz，2H).
实施例5制备1-苯乙烯基-β--咔啉-3-羧酸(3)
将3.28g(10mmol)1-苯乙烯-β--咔啉-3-甲酯或者2.04g(5mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-苄酯溶于20ml甲醇中，用10NNaOH调溶液pH至14，常温下搅拌反应。10h后TLC检测显示原料点消失。用浓盐酸调反应液PH至7左右，旋除甲醇，析出黄色沉淀物，过滤得沉淀用蒸馏水充分洗涤后晾干，得黄色粉末2.86g(91％)目标化合物。Mp127-128℃.[α]D25＝-11.8(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)313[M+H]-.IR(KBr)3735.48，3601.26，3440.56，3266.24，3056.59，1626.33，1564.98，1499.56，1370.85，1317.11，1245.75，854.72，749.35，702.21，655.43.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝11.74(s，1H)，8.84(s，1H)，8.43(d，J＝6.90Hz，1H)，8.21-7.50(m，5H)，7.50-6.85(m，5H).13C-NMR(75MHz，DMSO)：δ/ppm＝165.89，142.23，142.03，138.66，136.79，136.29，135.43，135.30，130.14，130.02，129.57，129.43，127.93，123.01，121.42，121.35，116.73，113.01.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝11.85(s，1H)，10.87(d，J＝6.30Hz，2H)，8.95-8.52(m，2H)，8.38(t，J＝9.0Hz，J＝8.4Hz，1H)，8.09-7.49(m，10H)，7.49-6，82(m，17H)，5.14(d，J＝8.1Hz，2H)，5.10-4.85(m，1H)，4.85-4.63(m，1H)，3.31-3.19(m，4H)。
实施例6制备Boc-Trp-Trp-OMe
将3.04g(10mmol)Boc-Trp溶于20ml无水THF。向得到的溶液中加入1.5g(11mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBT)并完全溶解。10分钟后，在冰浴下加入2.46g(12mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)与20ml无水THF的溶液，得到反应液(I)。将2.8g(11mmol)HCl·Trp-OMe悬浮于10ml无水THF并搅拌得到反应液(II)。冰浴下将反应液(II)加入反应液(I)中并室温搅拌12h，TLC(二氯甲烷/甲醇，15∶1)显示Boc-Trp消失。反应混合物过滤除去生成的二环己基脲(DCU)。滤液减压浓缩除去THF，残留物用200ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用饱和NaHCO3水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、5％KHSO4水溶液洗及饱和NaCl水溶液洗。乙酸乙酯相用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，残留物柱层析纯化，得到4.84g(92％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)505[M+H]+.
实施例7制备Boc-Trp-Trp-OBzl
按照实施例6的方法由3.04g(10mmol)Boc-Trp与3.23g(11mmol)Trp-OBzl制得5.68g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)581[M+H]+.
实施例8制备Boc-Trp-Trp
将2.53g(5mmol)Boc-Trp-Trp-OMe溶于20ml甲醇中，将反应液置于冰浴下并搅拌，用2NNaOH调溶液PH至14，冰浴下搅拌反应。8h后TLC(二氯甲烷/甲醇，15∶1)检测显示Boc-Trp-Trp-OMe消失。反应液用饱和KHSO4水溶液调至中性，除去混合液中的甲醇，用饱和KHSO4水溶液调溶液PH至2析出胶状物，加入150ml乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用饱和NaCl水溶液洗3次后用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到2.33g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)488[M-H]-.
实施例9制备Boc-Trp-Trp-Gly-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与1.85g(5.5mmol)Tos·Gly-OBzl制得2.20g(69％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)638[M+H]+.
实施例10制备Boc-Trp-Trp-Ala-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与1.93g(5.5mmol)Tos·Ala-OBzl制得2.90g(89％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)652[M+H]+.
实施例11制备Boc-Trp-Trp-Val-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.16g(5.5mmol)Tos·Val-OBzl制得3..09g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)680[M+H]+.
实施例12制备Boc-Trp-Trp-Ile-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.19g(5.5mmol)Tos·Ile-OBzl制得2.71g(78％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)694[M+H]+.
实施例13制备Boc-Trp-Trp-Leu-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.19g(5.5mmol)Tos·Leu-OBzl制得2.95g(85％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)694[M+H]+.
实施例14制备Boc-Trp-Trp-Pro-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与1.33g(5.5mmol)HCl·Pro-OBzl制得2.74g(81％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)678[M+H]+.
实施例15制备Boc-Trp-Trp-Phe-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.35g(5.5mmol)Tos·Phe-OBzl制得2.96g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)638[M+H]+.
实施例16制备Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与1.81g(5.5mmol)HCl·Trp-OBzl制得3.45g(90％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)767[M+H]+.
实施例17制备Boc-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.76g(5.5mmol)Tos·Glu(OBzl)-OBzl制得2.52g(63％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)800[M+H]+.
实施例18制备Boc-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.67g(5.5mmol)Tos·Asp(OBzl)-OBzl制得3.73g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)786[M+H]+.
实施例19制备Boc-Trp-Trp-Asn-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与1.43g(5.5mmol)HCl·Asn-OBzl制得2.12g(61％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)695[M+H]+.
实施例20制备Boc-Trp-Trp-Gln-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与1.51g(5.5mmol)HCl·Gln-OBzl制得2.10g(59％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)709[M+H]+.
实施例21制备Boc-Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.98g(5.5mmol)Tos·Lys(Z)-OBzl制得3.66g(87％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)843[M+H]+.
实施例22制备Boc-Trp-Trp-Ser-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.02g(5.5mmol)Tos·Ser-OBzl制得2.77g(83％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)668[M+H]+.
实施例23制备Boc-Trp-Trp-Thr-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.10g(5.5mmol)Tos·Thr-OBzl制得2.63g(77％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)682[M+H]+.
实施例24制备Boc-Trp-Trp-Tyr-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.44g(5.5mmol)Tos·Tyr-OBzl制得3.38g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)744[M+H]+.
实施例25制备Boc-Trp-Trp-Met-OBzl
按照实施例6的方法由2.45g(5mmol)Boc-Trp-Trp与2.26g(5.5mmol)Tos·Met-OBzl制得2.28g(64％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)712[M+H]+.
实施例26制备Trp-Trp-OBzl
将1.16g(2mmol)Boc-Trp-Trp-OBzl溶于10ml乙酸乙酯中，将反应液置于冰浴下并搅拌，向反应液中加入20ml4N盐酸乙酸乙酯，冰浴搅拌下反应。6h后TLC(二氯甲烷/甲醇，15∶1)检测显示Boc-Trp-Trp-OBzl消失。减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复加少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢。最后加少量乙醚将残留物泡洗得1.00g(97％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)481[M+H]+.
实施例27制备Trp-Trp-Gly-OBzl
按照实施例26的方法由1.91g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Gly-OBzl制得1.53g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)538[M+H]+.
实施例28制备Trp-Trp-Ala-OBzl
按照实施例26的方法由1.95g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Ala-OBzl制得1.42g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)552[M+H]+.
实施例29制备Trp-Trp-Val-OBzl
按照实施例26的方法由2.04g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Val-OBzl制得1.67g(96％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)580[M+H]+.
实施例30制备Trp-Trp-Ile-OBzl
按照实施例26的方法由2.08g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Ile-OBzl制得1.64g(92％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)594[M+H]+.
实施例31制备Trp-Trp-Leu-OBzl
按照实施例26的方法由2.08g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Leu-OBzl制得1.66g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)594[M+H]+.
实施例32制备Trp-Trp-Pro-OBzl
按照实施例26的方法由2.03g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Pro-OBzl制得1.58g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)578[M+H]+.
实施例33制备Trp-Trp-Phe-OBzl(2g)
按照实施例26的方法由2.18g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Phe-OBzl制得1.81g(96％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)628[M+H]+.
实施例34制备Trp-Trp-Trp-OBzl
按照实施例26的方法由2.30g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl制得1.94g(97％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)667[M+H]+.
实施例35制备Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl
按照实施例26的方法由2.40g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl制得1.83g(87％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)700[M+H]+.
实施例36制备Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl
按照实施例26的方法由2.36g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl制得1.96g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)686[M+H]+.
实施例37制备Trp-Trp-Asn-OBzl
按照实施例26的方法由2.08g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Asn-OBzl制得1.62g(91％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)595[M+H]+.
实施例38制备Trp-Trp-Gln-OBzl
按照实施例26的方法由2.12g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Gln-OBzl制得1.64g(90％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)609[M+H]+.
实施例39制备Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl
按照实施例26的方法由2.53g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl制得2.07g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)743[M+H]+.
实施例40制备Trp-Trp-Ser-OBzl
按照实施例26的方法由2.01g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Ser-OBzl制得1.58g(93％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)568[M+H]+.
实施例41制备Trp-Trp-Thr-OBzl
按照实施例26的方法由2.04g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Thr-OBzl制得1.57g(90％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)582[M+H]+.
实施例42制备Trp-Trp-Tyr-OBzl
按照实施例26的方法由2.23g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Tyr-OBzl制得1.81g(94％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)644[M+H]+.
实施例43制备Trp-Trp-Met-OBzl(2q)
按照实施例26的方法由2.13g(3mmol)Boc-Trp-Trp-Met-OBzl制得1.74g(95％)目标化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e)612[M+H]+.
实施例45制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Gly-OBzl(3a)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与537mg(1mmol)Trp-Trp-Gly-OBzl制得542mg(65％)目标化合物，为淡黄色粉末。Mp108-109℃.[α]D25＝-27.0(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)834[M+H]+.IR(KBr)3742.57，3391.15，3310.33，3056.45，2929.12，2847.67，1743.69，1657.05，1518.83，1491.03，1454.33，1343.09，1247.49，1196.93，1097.87，1013.90，968.17，746.48，695.42，579.43，479.69，427.93.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.24(s，1H)，10.84(d，J＝12.9Hz，2H)，8.85-8.64(m，2H)，8.58-8.31(m，3H)，8.14-7.47(m，10H)，7.47-7.17(m，12H)，7.10-6.83(m，4H)，5.16(s，2H)，4.95-4.67(m，2H)，4.21-3.82(m，3H)，3.32-2.98(m，4H).
实施例46制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Ala-OBzl(3b)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与551mg(1mmol)Trp-Trp-Ala-OBzl制得517mg(61％)目标化合物，为淡黄色粉末。Mp116℃.[α]D25＝-24.3(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)848[M+H]+.IR(KBr)3738.48，3384.97，3297.16，3055.98，2930.45，2851.76，1738.71，1654.32，1515.55，1499.32，1453.07，1340.29，1247.65，1152.19，1100.97，963.90，746.09，695.53，583.26，478.92，424.41.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.21(s，1H)，10.84(d，J＝18.3Hz，2H)，8.85-8.62(m，2H)，8.54(d，J＝6.6Hz，1H)，8.45(d，J＝8.1Hz，1H)，8.35(d，J＝7.8Hz，1H)，8.18-7.48(m，10H)，7.48-7.15(m，11H)，7.15-6.82(m，4H)，5.16(m，2H)，4.91-4.68(m，2H)，4.60-4.38(m，1H)，3.32-2.97(m，4H)，1.36(d，J＝7.2Hz，3H).
实施例47制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Val-OBzl(3c)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与549mg(1mmol)Trp-Trp-Val-OBzl制得578mg(66％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp114-115℃.[α]D25＝+23.6(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)876[M+H]+.IR(KBr)3746.65，3382.97，3332.72，3065.01，2960.95，2925.31，1736.54，1658.81，1499.50，1455.33，1341.67，1248.42，1148.97，1079.19，1004.77，963.9，898.52，745.90，695.54，612.94，583.88，489.10.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.20(s，1H)，10.85(d，J＝14.1Hz，2H)，8.85-8.27(m，2H)，8.47(d，J＝8.1Hz，1H)，8.34(t，J＝7.8Hz，J＝8.4Hz，2H)，8.09-7.48(m，10H)，7.48-7.15(m，11H)，7.15-6.80(m，4H)，5.16(s，2H)，4.95-4.72(m，2H)，4.38-4.21(m，1H)，3.32-2.95(m，4H)，2.31-2.05(m，1H)，0.95-0.82(m，6H).
实施例48制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Ile-OBzl(3d)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与593mg(1mmol)Trp-Trp-Ile-OBzl制得560mg(63％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp132-133℃.[α]D25＝-47.8(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)890[M+H]+.IR(KBr)3738.48，3360.11，3255.31，3137.80，3059.39，2961.36，1736.07，1659.14，1519.64，1499.33，1454.92，1188.65，1147.79，1098.75，1011.40，898.52，746.54，695.17，620.66，579.36，481.73，420.55.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.20(s，1H)，10.83(d，J＝15.0Hz，2H)，8.85-8.57(m，2H)，8.57-8.21(m，3H)，8.14-7.47(m，10H)，7.47-7.15(m，11H)，7.15-6.80(m，4H)，5.15(s，2H)，4.95-4.65(m，3H)，3.32-2.90(m，4H)，2.00-1.85(m，1H)，1.50-1.11(m，2H)，0.95-0.75(m，6H).
实施例49制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Leu-Obzl(3e)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与3.23g(1mmol)Trp-Trp-Leu-OBzl制得605mg(68％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp117-118℃.[α]D25＝+28.5(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e).891[M+H]+.913[M+Na]+.IR(KBr)3742.57，3387.06，3307.79，3055.92，2954.77，2864.02，1738.25，1657.61，1499.16，1454.20，1340.15，1247.10，1151.29，1079.81，1004.77，973.97，898.52，745.64，695.10，579.71，477.65.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.21(s，1H)，10.85(d，J＝13.5Hz，2H)，8.88-8.59(m，2H)，8.59-8.21(m，3H)，8.21-7.48(m，10H)，7.48-7.15(m，11H)，7.15-6.82(m，4H)，5.13(d，J＝9.6Hz，2H)，4.95-4.54(m，2H)，4.53-4.21(m，1H)，3.32-2.96(m，4H)，1.77-1.35(m，3H)，0.98-0.65(m，6H).
实施例50制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Pro-OBzl(3f)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与577mg(1mmol)Trp-Trp-Pro-OBzl制得5.68g(67％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp132-134℃.[α]D25＝-60.0(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)874[M+H]+.IR(KBr)3744.32，3382.97，3323.41，3055.62，2951.46，2868.10，1740.37，1640.78，1557.53，1498.33，1449.46，1343.12，1247.04，1174.54，1096.15，1009.93，968.00，745.73，695.63，583.63，481.73，427.08.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.20(s，1H)，10.87(d，J＝3.6Hz，2H)，8.85-8.47(m，3H)，8.37(d，J＝7.8Hz，1H)，8.08-7.48(m，11H)，7.48-7.15(m，12H)，7.15-6.85(m，4H)，5.14(d，J＝1.8Hz，2H)，4.95-4.78(m，2H)，4.50-4.41(m，1H)，3.32-2.95(m，6H)，2.30-2.08(m，2H)，1.92-1.75(m，2H).
实施例51制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Phe-OBzl(3g)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与627mg(1mmol)Trp-Trp-Phe-OBzl制得5.68g(73％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp109-110℃；[α]D 25＝-21.5(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)924[M+H]+.IR(KBr)3738.48，3387.24，3305.33，3055.84，2925.81，1739.50，1656.66，1453.78，1341.76，1247.35，1097.91，1012.94，959.82，745.66，696.90，579.71，482.58，426.39.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.21(s，1H)，10.83(d，J＝12.0Hz，2H)，8.88-8.65(m，2H)，8.47(d，J＝8.1Hz，1H)，8.36(d，J＝9.6Hz，1H)，8.12-7.48(m，10H)，7.48-7.11(m，17H)，7.11-6.82(m，4H)，5.07(d，J＝4.2Hz，2H)，4.92-4.53(m，3H)，3.32-2.95(m，6H).
实施例52制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Trp-OBzl(3h)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与666mg(1mmol)Trp-Trp-Trp-OBzl制得693mg(72％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp111-112℃.[α]D 25＝+19.4(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)963[M+H]+.985[M+Na]+.IR(KBr)3746.65，3406.18，3055.03，2924.34，2855.85，1737.82，1657.66，1499.28，1455.01，1342.89，1247.08，1097.27，1012.94，745.15，695.79，582.46，479.05，426.20.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.20(s，1H)，10.83(d，J＝7.8Hz，2H)，8.88-8.85(m，2H)，8.56(d，J＝15.0Hz，1H)，8.46(d，J＝8.1Hz，1H)，8.33(d，J＝11.1Hz，1H)，8.09-7.48(m，11H)，7.48-6.80(m，20H)，5.02(d，J＝9.6Hz，2H)，4.92-4.58(m，3H)，3.32-2.96(m，6H).
实施例53制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl(3i)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与699mg(1mmol)Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl制得706mg(71％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp96℃.[α]D 25＝-48.1(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)996[M+H]+.1018[M+Na]+.IR(KBr)3746.65，3374.80，3308.94，3056.19，2929.52，1735.01，1657.46，1519.64，1499.23，1415.38，1339.69，1248.38，1094.67，1009.62，967.47，898.52，746.10，695.90，620.66，579.86，485.89.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ/ppm＝12.21(s，1H)，10.85(d，J＝12.9Hz，2H)，8.85-8.27(m，5H)，8.14-6.81(m，30H)，5.23-4.97(m，4H)，4.87-4.38(m，3H)，3.32-2.85(m，4H)，2.33-1.85(m，4H)。
实施例54制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl(3j)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与685mg(1mmol)Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl制得736mg(75％)目标化合物，为淡黄色固体。Mp91-92℃.[α]D 25＝-19.0(c＝1.0，丙酮).ESI-MS(m/e)982[M+H]+.IR(KBr)3746.65，3381.72，3293.08，3055.84，2927.91，1738.02，1658.80，1499.21，1453.04，1380.70，1341.55，1246.98，1096.94，967.88，902.61，745.79，695.79，580.47，477.64，420.43.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.21(s，1H)，10.85(d，J＝10.8Hz，2H)，8.85-8.57(m，3H)，8.50(d，J＝8.1Hz，1H)，8.33(d，J＝7.8Hz，1H)，8.14-7.47(m，10H)，7.47-7.15(m，16H)，7.15-6.82(m，4H)，5.15(d，J＝12.9Hz，4H)，4.95-4.65(m，3H)，3.32-2.70(m，6H).
实施例55制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Asn-OBzl(3k)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与594mg(1mmol)Trp-Trp-Asn-OBzl制得552mg(62％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp113.8-134.7℃；[α]D25＝-16.67.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：891[M+H]+；IR(KBr)：3737.11，3394.73，3277.41，3057.26，2928.88，1729.32，1664.81，1516.83，1454.63，1343.06，1226.51，1098.66，989.45，746.43，698.14，584.40，427.43.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.23(s，1H)，10.86(d，J＝15.3Hz，2H)，8.81-8.35(m，2H)，8.16-.7.83(m，3H)，7.83-7.48(m，9H)，7.48-7.25(m，10H)，7.25-6.91(m，8H)，5.13(s，2H)，4.85-4.68(m，1H)，4.68-4.48(m，2H)，3.31-2.91(m，4H)，2.91-2.81(m，1H)，2.71-2.61(m，1H).
实施例56制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Gln-OBzl(3l)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与608mg(1mmol)Trp-Trp-Gln-OBzl制得543mg(60％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp152.0-153.1℃；[α]D25＝+25.45.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：906[M+H]+；IR(KBr)：3734.83，3360.10，3056.41，2921.98，1709.61，1661.05，1518.83，1454.91，1342.03，1247.06，1194.69，1096.43，747.36，695.32，582.41，477.10，427.94.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.22(s，1H)，10.85(d，J＝12.3Hz，2H)，8.85-8.66(m，2H)，8.66-8.43(m，1H)，8.43-8.31(m，2H)，8.11-7.48(m，11H)，7.48-7.11(m，8H)，7.11-6.82(m，6H)，5.17(s，2H)，4.92-4.61(m，3H)，3.31-2.90(m，4H)，2.32-2.15(m，2H)，2.32-2.15(m，2H)，2.00-1.91(m，2H).
实施例57制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-lys(z)-OBzl(3m)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与742mg(1mmol)Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl制得612mg(59％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp108.9-110.3℃；[α]D25＝-4.33.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：1039[M+H]+；IR(KBr)：3742.57，3387.06，3308.05，3057.66，2933.92，2855.85，1655.52，1520.03，1455.27，1342.41，1249.41，1140.96，1100.24，1012.07，967.99，745.94，697.16，585.55，424.52.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.31(s，1H)，10.85(d，J＝10.8Hz，2H)，8.80-8.52(m，2H)，8.52-8.22(m，3H)，8.08-7.48(m，9H)，7.48-7.12(m，18H)，7.12-6.82(m，5H)，5.14(s，2H)，4.99(s，2H)，4.95-4.68(m，2H)，4.39-4.21(m，1H)，3.23-2.85(m，6H)，2.31-1.95(m，2H)，1.89-1.55(m，4H)。
实施例58制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Ser-OBzl(3n)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与3.23g(1mmol)Trp-Trp-Ser-OBzl制得535mg(62％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp115.5-117.0℃；[α]D25＝+2.42.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：864[M+H]+；IR(KBr)：3741.17，3370.16，3056.27，2931.48，1741.45，1658.77，1498.97，1454.43，1342.30，1244.69，1149.74，1094.78，1042.31，959.82，746.57，695.71，579.80，424.52.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.23(s，1H)，10.82(d，J＝12.6Hz，2H)，8.79-8.64(m，2H)，8.52(d，J＝4.8Hz，1H)，8.36(d，J＝4.5Hz，1H)，8.05-7.85(m，3H)，7.85-7.47(m，10H)，7.47-7.21(m，12H)，7.11-6.85(m，4H)，5.19(d，J＝3.6Hz，2H)，4.89-4.73(m，3H)，4.40-4.29(m，2H)，4.10-4.01(m，1H)，3.32-3.05(m，4H).
实施例59制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Thr-OBzl(3o)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与581mg(1mmol)Trp-Trp-Thr-OBzl制得570mg(65％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp118.2-119.6℃；[α]D25＝-15.96.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：878[M+H]+；IR(KBr)：3736.88，3351.81，3056.23，2930.90，1740.12，1658.47，1499.23，1454.01，1342.10，1246.64，1150.66，1100.48，1008.85，963.90，746.82，695.53，583.88，477.46，420.43.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.20(s，1H)，10.82(d，J＝9.9Hz，2H)，8.90-8.28(m，5H)，8.28-7.88(m，4H)，7.88-7.48(m，12H)，7.48-6.82(m，8H)，5.17(s，2H)，5.01-4.67(m，3H)，4.55-4.39(m，1H)，4.30-4.15(m，1H)，4.11-3.95(m，1H)，3.23-2.95(m，4H)，1.22-1.05(m，3H).
实施例60制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Tyr-OBzl(3p)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与3.23g(1mmol)Trp-Trp-Tyr-OBzl制得573mg(61％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp112.8-113.2℃；[α]D25＝+7.00.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：940[M+H]+；IR(KBr)：3742.57，3059.58，2931.31，1734.67，1659.32，1513.23，1514.68，1349.57，1246.13，1192.74，1101.27，1008.85，747.62，698.19，592.05，551.19，428.60.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.20(s，1H)，10.84(d，J＝18.0Hz，2H)，9.24(s，1H)，8.80-8.22(m，5H)，8.22-7.15(m，20H)，7.15-6.82(m，6H)，6.66(d，J＝8.1Hz，2H)，5.11(d，J＝5.1Hz，2H)，4.95-4.65(m，3H)，4.65-4.45(m，1H)，3.32-2.83(m，6H).
实施例61制备N-(1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰基)-Trp-Trp-Met-OBzl(3q)
按照实施例6的方法由345mg(1.1mmol)1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸与3.23g(1mmol)Trp-Trp-Met-OBzl制得5.68g(95％)目标化合物，为淡黄色固体粉。Mp102.8-103.8℃；[α]D25＝+37.08.(c＝1.0，丙酮)；ESI-MS(m/e)：909[M+H]+；IR(KBr)：3735.74，3370.72，3304.10，3056.28，2922.39，2847.67，1737.04，1653.70，1517.67，1454.59，1342.61，1248.06，1013.82，967.99，746.02，697.12，586.91，420.67.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.22(s，1H)，10.74(d，J＝8.7Hz，2H)，8.85-8.12(m，5H)，8.12-7.49(m，6H)，7.49-7.12(m，10H)，7.12-6.82(m，4H)，5.05(s，2H)，4.75-4.35(m，3H)，3.11-2.91(m，4H)，2.91-2.68(m，2H)，2.45-2.022.91(m，4H).
实验例12，3，4，3a-3q的体外细胞毒活性
癌细胞K562、HL-60、HT-29、A549选用RPMI-1640培养基；HepG2选用DMEM培养。其中含10％经灭活的胎牛血清和1×105U·L-1青霉素和100mg·L-1链霉素。
1：贴壁细胞HepG2、HT-29、A549的培养：分别将生长状态良好、处于对数生长期的HepG2、HT-29、A549细胞以5×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl，37℃、5％CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/ml的MTT溶液，置于37℃孵育四个小时，小心除去上清液后每孔加入100μl的DMSO(二甲基亚砜)，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上检测O.D.(吸光度)值，波长570nm。
2：悬浮细胞HL60、K562的培养：分别将生长状态良好、处于对数生长期的HL-60、K562、细胞以3-5×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl，按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25μl浓度为5mg/ml的MTT溶液，继续置于37℃孵育四个小时，离心，3000rpm，5min，小心吸出上清液，每孔加入100μl的DMSO溶解紫色残留物(甲瓒)，振荡约15min沉淀全部溶解，于酶标仪上测定O.D.(吸收值)，波长570nm。
以下式求出每一个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率：
生长抑制率＝[(对照组平均O.D.值一样品组平均O.D.值)/空白组平均O.D.值]×100％，实验重复3次，以抑制率对药物浓度作图，按作图法求出IC50(半数有效抑制浓度)值。结果见表1。
表1化合物2，3，4，3a-q的体外细胞毒活性(IC50±SDμM)
实验例22，4，3a-3q的体内抗肿瘤活性
1)剂量设置
受试化合物设为0.1μmol/kg，阳性对照药设为2μmol/kg，均采用腹腔单次给药。
2)药物配制
受试化合物及阿霉素加入少量的吐温80润湿助溶，逐渐加入生理盐水至所需要浓度即可。
3)给药剂量及给药方案
受试化合物均以腹腔单次给药。按相应的给药剂量每天一次，0.1ml/g，连续给药7天，共给药7次。
阴性对照以等体积的相应溶液，均以腹腔给药。按相应的给药剂量每天一次，0.2ml/g，连续给药7天，共给药7次。
4)动物模型的建立
采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型：在无菌条件下抽取接种7d后生长旺盛S180腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1∶2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度＝4大方格内活细胞数/4×104×稀释倍数＝细胞数/ml
细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％
将存活率大于90％的瘤液用匀浆法制备成1×107个/ml的细胞悬液，于相应宿主腋皮下接种0.2ml/鼠，制成实体瘤动物模型。
5)检测指标及方法
a体内神经毒性观察
每日观察给药各组动物的反应小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食，粪便性状。
b实体瘤抑瘤率的测定
各组连续给药7d后，于第8d脱颈椎处死小鼠，称取体重(处死体重)，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率。
抑瘤率％＝[(阴性对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重]×100％
c脑指数、心指数、肝指数、脾指数和肾指数的测定
采用称重法即剥离肿瘤后的小鼠，再解剖取出脑、心、肝、脾、肾，称取脑重、心重、肝重、肾重、脾重，并按如下公式计算脑指数、心指数、肝指数、脾指数和肾指数。
脑指数(g/kg)＝脑重/处死体重。
d统计方法
本实验数据统计均采用t检验和方差分析，以表示。
通过建立移植性小鼠S180肉瘤模型，评价化合物的体内抗肿瘤活性，结果见表2，3。
表2化合物2，4，3a-q体内抗肿瘤实验
注：a)n＝12，；b)与生理盐水组比较p＜0.01；c)与生理盐水组比较p＜0.001；d)与生理盐水组比较p＜0.001及与AMD组比较p＞0.05；e)与盐水组比较比较p＞0.05；f)与2，4组比较p＜0.01；
表3化合物0.1μmol/kg剂量下对S180荷瘤小鼠各脏器指标的影响
a)n＝12，；b)与生理盐水组比较p＜0.05；c)与生理盐水组比较p＜0.01；d)与生理盐水组比较p＜0.001；
实验例33d的剂量对体内抗肿瘤活性的影响
按照实验例3的实验方法，选取抗肿瘤效果最好的3d考察0.1μmol/kg，0.01μmol/kg和0.001μmol/kg个三浓度下的抗肿瘤活性。结果表明，3d的体内抗肿瘤作用显示浓度依赖性(表4)。
表43d的剂量对体内抗肿瘤活性的影响a
a)n＝12；b)与生理盐水组比p＜0.001；d)与生理盐水组比p＞0.05。
Claims (3)
1.通式I代表的17种化合物
式中AA选自Gly，Ala，Leu，Ile，Phe，Ser，Trp，Glu(OBzl)，Thr，Val，Pro，Lys(Z)，Asp(OBzl)，Gln，Asn，Tyr和Met。
2.权利要求1的通式I代表的17种化合物的制备，该方法由以下步骤构成：
1)在浓盐酸催化存在下Trp-OMe在甲醇中与苯丙烯醛进行Pictet-Spengler缩合生成1-苯乙烯基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-甲酯；
2)在浓盐酸催化存在下Trp-OBzl在甲醇中与苯丙烯醛进行Pictet-Spengler缩合生成1-苯乙烯基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-苄酯；
3)1-苯乙烯-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-甲酯在无水THF中与二氯二氰基苯醌芳构化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酯；
4)1-苯乙烯-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-苄酯在无水THF中与二氯二氰基苯醌芳构化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-苄酯；
5)在二氧六环中将1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酯皂化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-羧酸；
6)在二氧六环中将1-苯乙烯基-β-咔啉-3-苄酯皂化为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-羧酸；
7)在DCC和HOBt存在下Boc-Trp在无水THF中与Trp-OMe缩合为Boc-Trp-Trp-OMe；
8)在甲醇中将Boc-Trp-Trp-OMe皂化为Boc-Trp-Trp；
9)在DCC和HOBt存在下在无水THF中Boc-Trp-Trp分别与Gly-OBzl，Ala-OBzl，Val-OBzl，Leu-OBzl，Ile-OBzl，Pro-OBzl，Phe-OBzl，Trp-OBzl，Ser-OBzl，Thr-OBzl，Lys(Z)-OBzl，Tyr-OBzl，Glu(OBzl)-OBzl，Asp(OBzl)-OBzl，Gln-OBzl，Asn-OBzl，Met-OBzl缩合为Boc-Trp-Trp-Gly-OBzl，Boc-Trp-Trp-Ala-OBzl，Boc-Trp-Trp-Val-OBzl，Boc-Trp-Trp-Leu-OBzl，Boc-Trp-Trp-Ile-OBzl，Boc-Trp-Trp-Pro-OBzl，Boc-Trp-Trp-Phe-OBzl，Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl，Boc-Trp-Trp-Ser-OBzl，Boc-Trp-Trp-Thr-OBzl，Boc-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl，Boc-Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl，Boc-Trp-Trp-Tyr-OBzl，Boc-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl，Boc-Trp-Trp-Gln-OBzl，Boc-Trp-Trp-Asn-OBzl，Boc-Trp-Trp-Met-OBzl；
10)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中步骤10)中所得的产物分别脱除Boc生成Trp-Trp-Gly-OBzl，Trp-Trp-Ala-OBzl，Trp-Trp-Val-OBzl，Trp-Trp-Leu-OBzl，Trp-Trp-Ile-OBzl，Trp-Trp-Pro-OBzl，Trp-Trp-Phe-OBzl，Trp-Trp-Trp-OBzl，Trp-Trp-Ser-OBzl，Trp-Trp-Thr-OBzl，Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl，Trp-Trp-Lys(Z)-OBzl，Trp-Trp-Tyr-OBzl，Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl，Trp-Trp-Gln-OBzl，Trp-Trp-Asn-OBzl，Trp-Trp-Met-OBzl；
11)在DCC和HOBt存在下在无水THF中1-苯乙烯-β-咔啉-3-羧酸分别与步骤10)中所得的产物缩合为1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰甘氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰丙氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰缬氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰亮氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰异亮氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰脯氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰苯丙氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰色氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰丝氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰苏氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰赖氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰酪氨酸苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰谷氨酸双苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰天冬氨酸双苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰谷氨酰胺苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰天冬酰胺苄酯，1-苯乙烯基-β-咔啉-3-甲酰色胺酰色胺酰蛋氨酸苄酯。
3.权利要求1的通式I代表的17种化合物在制备抗肿瘤剂中的应用。
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| CN101597290A (zh) * | 2008-06-04 | 2009-12-09 | 首都医科大学 | β-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯及其制备方法和应用 |
| CN102146080A (zh) * | 2010-02-10 | 2011-08-10 | 新疆华世丹药业股份有限公司 | β-咔啉碱衍生物类化合物及其应用 |
| CN102250202A (zh) * | 2010-05-19 | 2011-11-23 | 首都医科大学 | 1-对硝基苯基-β-咔啉-3-甲酰氨基酸苄酯及其合成方法和应用 |
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| CN103450332A (zh) | 2013-12-18 |
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