CN102898502B - 香豆素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及香豆素衍生物及其制备方法和应用。具体而言，本发明涉及通式（I）的化合物，其中AA、n、R₁、R₂、R₃、R₄如说明书中所定义。本发明还涉及通式（I）化合物的制备方法，含有通式（I）化合物的药物组合物以及所述化合物在制备抗肿瘤药物中的用途，尤其是所述化合物对K562、HepG2、A172、BL-7402、A549五种肿瘤细胞增殖的抑制活性。

Description

香豆素衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的香豆素衍生物，它们的制备方法，含有所述化合物的药物组合物以及上述化合物对人体肺腺癌上皮细胞系A549、人慢性粒细胞白血病细胞K562、肝细胞癌细胞HepG2、人胶质母细胞瘤细胞A172、人肝癌细胞BL-7402五株肿瘤细胞增殖的抑制活性及用于制备治疗抗肿瘤药物的用途。

背景技术

以天然来源的、具有抗肿瘤活性的有效成分作为先导化合物，对其进行结构改造，是发现高效低毒的抗肿瘤药物的一条重要途径。香豆素(coumarin)是一类具有苯并α吡喃酮母核的天然产物，广泛存在于植物界。香豆素及其衍生物的生物活性主要是由于其苯并α吡喃酮母核。香豆素类化合物由于具有多种生物活性^3-11而引起了药物化学家的极大兴趣，尤其关于细胞毒活性研究的最为广泛，已从自然界中分离得到大量的香豆素类化合物，并在此基础上通过结构修饰和全合成方法得到很多活性香豆素类化合物，其中一些作为药物已在临床上使用多年。由于香豆素类化合物结构多样性使得它们在天然产物和合成有机化学中占有重要的地位并且作为新药研究的重要先导化合物，近来对于它们抗肿瘤活性的研究引起了人们极大的关注。以天然来源的、具有抗肿瘤活性的有效成分作为先导化合物，对其进行结构改造，是发现高效低毒的抗肿瘤药物的一条重要途径。对于设计和合成新的抗肿瘤药物香豆素结构是一个重要的药效团，香豆素母核中不同的取代基对衍生物的生物活性具有极大的影响，人们已对具有各种的取代基的香豆素衍生物进行抗微生物、抗HIV、抗肿瘤、抗氧化活性的筛选。

A.Maucher,M.Kager等对香豆素在前列腺癌模型研究中，证明香豆素对大鼠体内Noble Nb-R前列腺癌具有显著的抑制作用。7-羟基香豆素（umbelliferone，UMB）和6，7-二羟基香豆素(aescu letin，AES)均与DNA发生结合作用而抑制癌细胞增生起到抗肿瘤作用。与DNA的结合常数分别为2.13x10⁴和5.27x10²L·mol^-1，作用力主要是氢键和范德华力，结合模式均为沟槽结合,且香豆素母核上羟基数目及其所处位置对它们的结合作用有重要影响。R.M.Patel等在4-甲基香豆素7位用不同的基团进行修饰，均表现出很好的抗肿瘤活性。其中对Vero cells和Hep2 cells两种肿瘤细胞活性最强化合物IC₅₀分别为21-23μM和3-5μM。一些研究表明7-羟基香豆素具有极高的细胞毒并且能够有效抑制细胞生长。

据文献报道，W-W-AA-OBzl序列通过肿瘤细胞模型和小鼠S180肉瘤模型评价，显示出确切的抗肿瘤活性，且用药安全，未见毒副反应。氨基酸不仅具有结构多样性的支链而且能够改善化合物的药代动力学，氨基酸的引入可以增加水溶性。天然氨基酸被广泛用于改善药物的吸收和代谢。发明人认识到，用天然氨基酸对香豆素化合物进行结构修饰，试图寻找新的具有更好活性的天然产物的衍生物。从结构的关联应当可以拓展到生物活性的关联。

发明内容

本发明的目的是提供一种通式（I）所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中AA为氨基酸基；

n为0、1、2或3；和

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自氢、羟基、硝基、卤素、氨基、氰基、C_1-10烷基、C_1-10烷氧基或卤代C_1-10烷基。

根据本发明的通式（I）所示的化合物或其药学上可接受的盐，其为通式（II）所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中AA为氨基酸基；

n为0或1；和

R₂选自氢、羟基、C_1-10烷基或C_1-10烷氧基。

根据本发明的通式（I）所示的化合物或其药学上可接受的盐，其为通式（III）所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中AA为氨基酸基；和

n为0或1。

在本发明的化合物或其药学上可接受的盐中，AA优选为谷氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、蛋氨酸或亮氨酸。

本发明的典型化合物或其药学上可接受的盐如下：

另一方面，本发明提供一种通式（I）所示的化合物的制备方法，其包括以下步骤：

1)在哌啶作用下，和缩合为

2)在HCl存在下，在水中加热回流生成

3)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三唑、N-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将叔丁氧羰基保护的色氨酸和色氨酸甲酯偶联，合成叔丁氧羰基色氨酰色氨酸甲酯；

4)在甲醇溶液中加入NaOH溶液，脱去甲酯，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酸；

5)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三唑、N-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将叔丁氧羰基色氨酰色氨酸与苄氧羰基保护的氨基酸进行偶联，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酰氨基酸苄酯；

6)在氯化氢/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基色氨酰色氨酰氨基酸苄酯，脱去叔丁氧羰基，得到通式（V）的盐酸色氨酰色氨酰氨基酸苄酯；

7)在DCC和HOBt存在下，将通式（IV）的化合物在无水THF中与通式（V）的盐酸色氨酰色氨酰氨基酸苄酯缩合为通式（I）的化合物；

其中AA、n、R₁、R₂、R₃、R₄如上对通式（I）所定义，其中优选AA为谷氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、蛋氨酸或亮氨酸；n为0或1；R₁、R₃、R₄分别为氢原子；R₂为羟基。

另一方面，本发明提供一种药用组合物，其含有治疗有效量的通式（I）化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或辅料。

本发明进一步提供一种通式（I）化合物或其药学上可接受的盐或含有其的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。优选地，所述的肿瘤人体肺腺癌上皮细胞系A549、人胶质母细胞瘤细胞A172、人慢性粒细胞白血病细胞K562、人肝癌细胞BL-7402、肝细胞癌细胞HepG2。本发明通过抗肿瘤细胞增殖活性评价实验和体内抗肿瘤腋皮下接种模型评价本发明的化合物5-19的抗肿瘤作用。

本发明的通式（I）化合物或其药学上可接受的盐可以通过多种途径施用给人或者其他哺乳动物，例如经口的、静脉注射、肌肉注射、腹膜内的注射、皮下注射等。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以与合适的药学上可接受的赋形剂或载体制成本领域技术人员所公知的各种剂型，如片剂、胶囊、乳剂、混悬剂等。

本发明化合物的优选给药方式是口服。优选地，该药学制品以独立的剂量单元形式。在该种形式中，制品被分成合适大小的剂量单元，该单元包含预期剂量的活性化合物，例如，对于其目的来说有效的量。

以本发明化合物7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰氨基酸苄酯5-19的制备为例说明本发明化合物的制备方法，该化合物可以通过方案1制备，其包括以下步骤：在哌啶存在下2，4-二羟基苯甲醛与丙二酸二乙酯发生Knoevenagel反应生成7-羟基-香豆素-3-羧酸乙酯；然后在HCl存在下，7-羟基-香豆素-3-羧酸乙酯在水中加热回流8个小时，脱乙酯生成7-羟基-香豆素-3-羧酸；在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三唑、N-甲基吗啉存在下在无水四氢呋喃中将叔丁氧羰基保护的色氨酸和色氨酸甲酯偶联，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酸甲酯；在甲醇溶液中加入4NNaOH溶液，脱去甲酯，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酸；在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三唑、N-甲基吗啉存在下在无水四氢呋喃中将叔丁氧羰基色氨酰色氨酸与苄氧羰基保护的氨基酸进行偶联，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酰氨基酸苄酯；4N氯化氢-乙酸乙酯溶液中脱去叔丁氧羰基，得到色氨酰色氨酰氨基酸苄酯；在DCC和HOBt存在下，7-羟基-香豆素-3-羧酸在无水THF中与色氨酰色氨酰氨基酸苄酯缩合为7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰氨基酸苄酯。

试剂和条件：I:哌啶;II:HCl;III:NH₂-Trp-Trp-AA-OBzl,NMM,DCC,HOBt。

方案1、香豆素衍生物5-19的合成路线

具体实施方式

以下通过具体实施例说明本发明。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

本发明的固体试剂购自北京化学试剂公司；

NMM购自国药集团化学试剂有限公司；

DMSO购自北京兴津化工厂；

Et₃N、1,4-二氧六环购购自天津福晨化学试剂厂；

苯甲醇、HCHO购自北京益利精细化学品有限公司；

其它液体试剂均为北京化工厂生产的分析纯试剂。

显微熔点测定仪：北京科仪电光仪器厂，SM/XMT型，

全自动旋光仪：Jasco P-1020；

红外光谱仪：SHMADZU公司，ZRPrestige-21傅里叶变换红外光谱仪；

核磁共振仪：Bruker Advance300 MHz NMR；

质谱仪：Trace MS System(Thermo Finnigan)；

高效液相色谱仪：安捷伦公司，1200Series。

本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。

制备例1 7-羟基香豆素-3-甲酸乙酯的制备

在90℃温度，将2，4-二羟基苯甲醛（0.50g，3.60mmol）和丙二酸二乙酯（0.70ml，4.00mmol）溶于95%乙醇（20mL）中，加入哌啶（0.4mL，4mmol），反应液变为棕色，回流6h。冷却，将反应混合物过滤，少量冷乙醇洗，得化合物3（0.758g，3.24mmol）为淡黄色固体，产率90%。

IR(cm^-1,KBr,neat):3464,3094,1751,1573;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.67(1H,s,CH),7.76(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),6.84(1H,dd,J₁=8.7Hz,J₂=2.1Hz,Ar-H),6.73(1H,d,J=2.1Hz,Ar-H),4.26(2H,q,J=7.2Hz,CH₂),1.29(2H,t,J=7.2Hz,CH₃);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ164.5,163.4,157.6,156.9,132.6,114.5,112.6,110.9,102.6,61.3,14.6;

ESIMS m/z 233(M-1),234(M);

HRMS：理论值:(C₁₂H₉O₅-1),m/z(233.045547);实测值:m/z(233.0444)。

制备例2 7-羟基香豆素-3-羧酸的制备

在90℃温度，将7-羟基香豆素-3-甲酸乙酯（2.00g，8.55mmol）溶于20mL水中，反应液成淡红色，加入6mL浓盐酸，瞬间有黄色固体生成，回流8h。冷却，将反应混合物过滤，少量冷水洗涤，得7-羟基香豆素-3-羧酸（1.32g，3.24mmol）为淡红色固体，产率75%。

IR(cm^-1,KBr,neat):3132,3039,1713,1574;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.19(1H,s,OH),8.70(1H,s,CH),7.76(1H,d,J=8.6Hz,Ar-H),7.86(1H,dd,J₁=8.5Hz,J₂=2.0Hz,Ar-H),6.77(1H,d,J=2.0Hz,Ar-H);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ164.6,164.3,158.1,157.5,150.0,132.6,114.4,112.9,111.1,102.2,6;

ESIMS m/z 205(M-1),206(M);

HRMS：理论值:(C₁₀H₅O₅-1),m/z(205.014247);实测值:m/z(205.0131)。

制备例3Boc-Trp-Trp-OBzl的制备

冰浴冷却下向置于250ml茄瓶中的由5.00g(12.6mmol)盐酸L-色氨酸苄酯、4.22g(1.39mmol)Boc-L-色氨酸和1.87g(1.39mmol)HOBt与100mlTHF构成的溶液中滴入3.43g(1.67mmol)DCC的THF溶液。通过向得到的溶液中滴入NMM调PH值到8。反应混合物常温搅拌24小时后抽滤，滤液减压浓缩至干。得到的残余物用150ml乙酸乙酯溶解，置于250ml分液漏斗中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液（30ml×3）、饱和氯化钠水溶液（30ml×3）、5%硫酸氢钾水溶液（30ml×3）、饱和氯化钠水溶液（30ml×3）洗涤。将合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到7.04g（12.1mmol，96%）标题化合物，为无色固体。

制备例4 HCl·Trp-Trp-OBzl的制备

将2.00g(3.44mmol)Boc-Trp-Trp-OBzl置于250ml茄瓶中并用5ml干燥乙酸乙酯溶解。冰浴下向得到的溶液中缓慢滴入16ml 4N HCl/EtOAc。反应混合物于0°C搅拌1.5小时后，向其中加入无水乙醚使产物析出，静置，倾出上清液，反复数次后，过滤得到1.74g(3.37mmol，98%)标题化合物，为无色固体。MP 189-191°C；ESI⁺/MS（m/e）481[M+H]⁺。

制备例5 Boc-Trp-Trp-OH的制备

将1g(1.72mmol)Boc-Trp-Trp-OBzl溶于10ml甲醇中，在冰浴条件下，缓慢加入2N NaOH水溶液10ml，薄层层析检测原料点消失，终止反应。用1N HCl调节PH值至7，减压浓缩除去甲醇，再用1N HCl调节PH值到5，用乙酸乙酯萃取（30ml×6），将合并乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到1.52g（1.55mmol，90%）标题化合物，为无色固体。MP 200-202°C；ESI⁺/MS（m/e）491[M+H]⁺。

制备例6 Boc-Trp-Trp-OMe的制备

冰浴冷却条件下，用四氢呋喃50.0ml溶解Boc-Trp(6.69g,22mmol)，依次加入N-羟基苯并三唑(HOBt)(2.97g，22.0mmol)，二环己基羰二亚胺(DCC)(4.53g，22.0mmol)，反应20min。加入用四氢呋喃50mL溶解的Trp-OMe(5.09g，20.0mmol)，加入N-甲基吗啉(NMM)调pH值至8，室温反应8h。将反应混合物过滤，减压浓缩至干。得到的残余物用150mL乙酸乙酯溶解，置于250ml分液漏斗中、依次用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL×3)、饱和氯化钠水溶液(30mL×3)、5%硫酸氢钾水溶液(30mL×3)、饱和氯化钠水溶液(30mL×3)、饱和碳酸氢钠水溶液(30mL×3)、饱和氯化钠水溶液(30mL×3)洗涤；将合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到标题化合物（10.0g，19.8mmol），为无色固体，产率为99%。

制备例7Boc-Trp-Trp-OH的制备

在100ml茄瓶中加入（3.00g，5.95mmol）Boc-Trp-Trp-OMe，分别加入30mLCH₃OH，20mL CH₂Cl₂，超声溶解后为淡黄色澄清溶液，冰浴下用4M NaOH调PH至13，开始反应。点板监测反应，大约四小时左右反应完全。用硫酸氢钾水溶液将反应液PH调至中性，减压蒸除甲醇，用硫酸氢钾水溶液将反应液PH调至2，用乙酸乙酯进行萃取（30mL×3），用饱和氯化钠洗至中性，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到标题化合物（2.89g，5.90mmol），为无色固体，产率为99%，MP 200-202°C；ESI⁺/MS（m/e）491[M+H]⁺。

制备例8 Boc-Trp-Trp-Ala-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和772mg(2.2mmol)TOS·Ala-OBzl制得标题化合物1.282g(1.97mmol，98%)，为无色固体。Mp202-2040°C，ESI/MS(m/e)652[M+H]⁺。

制备例9 Boc-Trp-Trp-Gly-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和742mg(2.2mmol)TOS·Gly-OBzl制得标题化合物828mg(1.30mmol，65%)，为无色固体。Mp206-208°C，ESI/MS(m/e)638[M+H]⁺。

制备例10 Boc-Trp-Trp-Phe-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和940mgTOS·Phe-OBzl(2.2mmol)制得标题化合物1.364g(2.14mmol，94%)，为无色固体。Mp200-202°C，ESI/MS(m/e)638[M+H]⁺。

制备例11 Boc-Trp-Trp-Leu-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Tr和864mg(2.2mmol)TOS·Leu-OBzl制得标题化合物1.350g(1.95mmol，94%)，为无色固体。Mp 206-208°C，ESI/MS(m/e)694[M+H]⁺。

制备例12 Boc-Trp-Trp-Ile-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和864mgTOS·Ile-OBzl(2.2mmol)制得标题化合物1.374g(1.98mmol，99%)，为无色固体。Mp212-214°C，ESI/MS(m/e)694[M+H]⁺。

制备例13 Boc-Trp-Trp-Val-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和864mgTOS·Val-OBzl(2.2mmol)制得标题化合物1.284g(1.89mmol，95%)，为无色固体。Mp210-212°C，ESI/MS(m/e)680[M+H]⁺。

制备例14 Boc-Trp-Trp-Ser-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和808mg(2.2mmol)TOS·Ser-OBzl制得标题化合物1.374g(2.06mmol，84%)，为无色固体。Mp195-197°C，ESI/MS(m/e)668[M+H]⁺。

制备例15 Boc-Trp-Trp-Thr-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和838mg(2.2mmol)TOS·Thr-OBzl制得标题化合物1.16g(1.70mmol，85%)，为无色固体。Mp190-192°C，ESI/MS(m/e)682[M+H]⁺。

制备例16 Boc-Trp-Trp-Tyr-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和974mg(2.2mmol)TOS·Tyr-OBzl制得标题化合物1.416g(1.91mmol，95%)，为无色固体。Mp220-222°C,ESI/MS(m/e)744[M+H]⁺。

制备例17 Boc-Trp-Trp-Pro-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和532mg(2.2mmol)TOS·Pro-OBzl制得标题化合物1.308g(1.93mmol，96%)，为无色固体。Mp182-184°C，ESI/MS(m/e)678[M+H]⁺。

制备例18 Boc-Trp-Trp-Met-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和904mg(2.2mmol)TOS·Met-OBzl制得标题化合物1.384g(1.95mmol，97%)，为无色固体。Mp218-220°C，ESI/MS(m/e)712[M+H]⁺。

制备例19 Boc-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和1.098g(2.2mmol)TOS·Glu(OBzl)-OBzl制得标题化合物942mg(1.18mmol，59%)，为无色固体。Mp 202-204°C，ESI/MS(m/e)800[M+H]⁺。

制备例20 Boc-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和1.066g(2.2mmol)TOS·Asp(OBzl)-OBzl制得标题化合物946mg(1.21mmol，60%)，为无色固体。Mp 208-210°C，ESI/MS(m/e)786[M+H]⁺。

制备例21 Boc-Trp-Trp-Trp-OBzl的制备

按照制备Boc-Trp-Trp-OBzl的操作，由980mg(2.0mmol)Boc-Trp-Trp和726mg(2.2mmol)TOS·Trp-OBzl制得标题化合物1.328g(1.73mmol，87%)，为无色固体。Mp180-182°C，ESI/MS(m/e)767[M+H]⁺。

制备例22 HCl·Trp-Trp-Ala-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.56mmol)Boc-Trp-Trp-Ala-OBzl制得标题化合物898mg(1.53mmol，98%)，为无色固体。Mp 205-207°C，ESI/MS(m/e)552[M+H]⁺。

制备例23 HCl·Trp-Trp-Gly-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.58mmol)Boc-Trp-Trp-Gly-OBzl制得标题化合物892mg(1.56mmol，99%)，为无色固体。Mp 201-203°C，ESI/MS(m/e)538[M+H]⁺。

制备例24 HCl·Trp-Trp-Phe-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.38mmol)Boc-Trp-Trp-Phe-OBzl制得标题化合物864mg(1.34mmol，97%)，为无色固体。Mp 199-201°C，ESI/MS(m/e)628[M+H]⁺。

制备例25 HCl·Trp-Trp-Leu-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.44mmol)Boc-Trp-Trp-Leu-OBzl制得标题化合物900mg(1.43mmol，99%)，为无色固体。Mp 222-224°C,ESI/MS(m/e)594[M+H]⁺。

制备例26 HCl·Trp-Trp-Ile-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.44mmol)Boc-Trp-Trp-Ile-OBzl制得标题化合物858mg(1.43mmol，99%)，为无色固体。Mp 228-230°C，ESI/MS(m/e)594[M+H]⁺。

制备例27 HCl·Trp-Trp-Val-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.48mmol)Boc-Trp-Trp-Val-OBzl制得标题化合物880mg(1.44mmol，97%)，为无色固体。Mp 200-202°C，ESI/MS(m/e)580[M+H]⁺。

制备例28 HCl·Trp-Trp-Ser-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.50mmol)Boc-Trp-Trp-Ser-OBzl制得标题化合物880mg(1.46mmol，97%)，为无色固体。Mp 218-220°C，ESI/MS(m/e)568[M+H]⁺。

制备例29 HCl·Trp-Trp-Thr-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.46mmol)Boc-Trp-Trp-Thr-OBzl制得标题化合物858mg(1.39mmol，95%)，为无色固体。Mp 195-197°C，ESI/MS(m/e)582[M+H]⁺。

制备例30 HCl·Trp-Trp-Tyr-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.34mmol)Boc-Trp-Trp-Tyr-OBzl制得标题化合物898mg(1.31mmol，98%)，为无色固体。Mp 207-209°C，ESI/MS(m/e)644[M+H]⁺。

制备例31 HCl·Trp-Trp-Pro-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.48mmol)Boc-Trp-Trp-Pro-OBzl制得标题化合物451mg(1.47mmol，99%)，为无色固体。Mp 182-184°C，ESI/MS(m/e)578[M+H]⁺。

制备例32 HCl·Trp-Trp-Met-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1000mg(1.40mmol)Boc-Trp-Trp-Met-OBzl制得标题化合物902mg(1.37mmol，98%)，为无色固体。Mp 215-217°C，ESI/MS(m/e)612[M+H]⁺。

制备例33 HCl·Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.26mmol)Boc-Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl制得标题化合物455mg(1.25mmol，99%)，为无色固体。Mp 214-216°C，ESI/MS(m/e)700[M+H]⁺。

制备例34 HCl·Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.28mmol)Boc-Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl制得标题化合物910mg(1.25mmol，98%)，为无色固体。Mp 210-212°C，ESI/MS(m/e)686[M+H]⁺。

制备例35 HCl·Trp-Trp-Trp-OBzl的制备

按照制备HCl·Trp-Trp-OBzl的操作，由1g(1.30mmol)Boc-Trp-Trp-Met-OBzl制得标题化合物832mg(1.18mmol，91%)，为无色固体。Mp 212-214°C，ESI/MS(m/e)667[M+H]⁺。

实施例1 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯5的制备

冰浴冷却条件下，用四氢呋喃20mL溶解化合物7(0.50g，2.43mmol)，依次加入N-羟基苯并三唑(HOBt)(0.33g，2.43mmol)，二环己基羰二亚胺(DCC)(0.50g，2.43mmol)，反应20min。加入用四氢呋喃20mL溶解的7-羟基香豆素-3-羧酸(114g，2.21mmol)，加入N-甲基吗啉(NMM)调pH值至8。室温反应8h。过滤，减压浓缩至干，得到的残余物直接用硅胶柱层析分离纯化（二氯甲烷：甲醇=50：1），得到（0.950g，1.42mmol,64%）标题化合物，为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+169.6(c 0.1,CHCl₃);

IR(cm^-1,KBr,neat):3410,3317,1701,1519,740;¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.98(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.78(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.75(1H,s,CH),7.8(1H,d,J=8.5Hz,Ar-H),7.56(1H,d,J=8.0Hz,Ar-H),7.51(1H,d,J=7.5Hz,Ar-H),7.32(5H,m,Ar-H),7.18(2H,d,J=7.5Hz,Ar-H),7.17(1H,s,Ar-H),7.13(1H,s,Ar-H),7.05(2H,m,Ar-H),6.99(1H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.90(2H,m,Ar-H),6.78(1H,s,Ar-H),5.05(2H,dd,J₁=27Hz,J₂=12.5Hz,CH₂Ph),4.87(1H,dd,J₁=13Hz,J₂=7.5Hz,H-α₁),4.65(1H,dd,J₁=14.5Hz,J₂=7.5Hz,H-α₂),3.22(2H,m,CH₂),3.12(1H,dd,J₁=14.5Hz,J₂=7.5Hz,CH₂),3.03(1H,dd,J₁=14.5Hz,J₂=7.5Hz,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.0,171.5,164.1,161.5,161.4,156.8,148.7,136.4,136.3,136.1,132.6,128.8,128.4,128.2,127.9,127.9,127.5,124.2,124.1,121.5,121.4,119.0,118.9,118.6,118.5,114.8,113.6,111.8,111.7,111.6,109.6,102.2,66.5,53.8,53.7,28.8,27.6;

ESIMS m/z 667(M-1),668(M)；

HRMS：理论值:(C₃₉H₃₂N₄O₇-1),m/z(667.218726);实测值:m/z(667.2157)。

实施例2 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰丙氨酸苄酯6的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.54g，2.61mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.40g，2.38mmol)HCl·Trp-Trp-Ala-OBzl制得标题化合物（0.90g，1.22mmol，51%），为淡黄色固体。

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3286,1705,741;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ11.06(1H,s,OH),10.78(2H,d,J=8.7Hz,N-H),8.94(1H,d,J=7.2Hz,N-H),8.71(1H,s,CH),8.46(1H,d,J=6.9Hz,N-H),8.32(1H,d,J=9.1Hz,N-H),7.78(1H,d,J=8.4Hz,Ar-H),7.54(1H,d,J=7.5Hz,Ar-H),7.50(1H,d,J=8.1Hz,Ar-H),7.55-7.24(7H,m,Ar-H),7.15(2H,dd,J₁=9.6Hz,J₂=1.4Hz,Ar-H),7.03-6.86(5H,m,Ar-H),6.78(1H,d,J=1.8Hz,Ar-H),5.15(2H,s,CH₂Ph),4.76(1H,m,H-α₁),4.63(1H,m,H-α₂),4.41(1H,t,J=7.2Hz,H-α₃),3.04(4H,m,CH₂),1.34(3H,d,J=7.5Hz,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.8,171.9,170.9,164.1,161.6,161.3,156.8,148.6,136.5,136.4,136.3,136.2,132.5,128.9,128.5,128.2,127.9,127.7,124.4,124.2,124.1,123.9,121.3,118.8,118.7,118.6,114.8,113.5,111.7,111.5,110.4,110.3,109.6,109.5,102.2,66.4,54.1,53.4,48.3,28.4,28.0,17.3;

ESIMS m/z 739(M);

HRMS：理论值:(C₄₂H₃₈N₅O₈+1),m/z(740.271490);实测值:m/z(740.2669)。

实施例3 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰甘氨酸苄酯7的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.780g，3.78mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.97g，3.44mmol)HCl·Trp-Trp-Gly-OBzl制得标题化合物（1.70g，2.34mmol，68%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+260.8(c 0.2,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3286,1705,741;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.07(1H,s,OH),10.79(2H,brs,N-H),8.95(1H,d,J=7.2Hz,N-H),8.74(1H,s,CH),8.41(1H,d,J=5.9Hz,N-H),8.38(1H,d,J=8.0Hz,N-H),7.79(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),7.54(2H,dd,J₁=7.7Hz,J₂=5.3Hz,Ar-H),7.41-7.32(5H,m,Ar-H),7.28(2H,dd,J₁=10.1Hz,J₂=8.0Hz,Ar-H),7.13(2H,dd,J₁=16.7Hz,J₂=2.1Hz,Ar-H),7.01(2H,t,J=7.8Hz,Ar-H),6.95(1H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.80(1H,d,J=1.8Hz,Ar-H),5.16(2H,s,CH₂Ph),4.78(1H,dd,J₁=12.3Hz,J₂=7.2Hz,H-α₁),4.64(1H,dd,J₁=13.2Hz,J₂=58.1Hz,H-α₂),3.94(2H,m,H-α₃),3.20(2H,dd,J₁=14.9Hz,J₂=4.9Hz,CH₂),3.03(1H,dd,J₁=14.5Hz,J₂=5.9Hz,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.4,171.1,170.0,164.2,161.6,161.3,156.8,148.7,136.5,136.4,136.3,132.5,128.9,128.5,128.4,127.9,127.8,124.4,124.0,121.3,121.2,118.9,118.8,118.7,118.6,114.8,113.6,111.7,111.6,110.4,109.8,102.3,66.4,54.2,53.8,41.4,28.5,28.1;

ESIMS m/z 724(M-1),725(M);

HRMS：理论值:(C₄₁H₃₄N₅O₈-1),m/z(724.241287);实测值:m/z(724.2525)。

实施例4 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰苯丙氨酸苄酯8的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.680g，3.24mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.96g，2.95mmol)HCl·Trp-Trp-Phe-OBzl制得标题化合物（1.64g，2.00mmol，68%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+305.1(c 0.3,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3294,1705,1528,741;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.77(1H,brs,N-H),8.92(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.69(1H,s,CH),8.45(1H,d,J=7.2Hz,N-H),8.30(1H,d,J=8.1Hz,N-H),7.76(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),7.54(1H,d,J=7.2Hz,Ar-H),7.51(1H,d,J=6.3Hz,Ar-H),7.37-7.17(12H,m,Ar-H),7.10(1H,s,Ar-H),7.08(1H,s,Ar-H),6.99(3H,m,Ar-H),6.89(2H,m,Ar-H),6.79(1H,d,J=2.1Hz,Ar-H),5.06(2H,dd,J₁=16.8Hz,J₂=12.6Hz,CH₂Ph),4.76(1H,dd,J₁=12.3Hz,J₂=7.5Hz,H-α₁),4.63(1H,dd,J₁=13.5Hz,J₂=8.4Hz,H-α₂),4.59(1H,dd,J₁=14.7Hz,J₂=7.5Hz,H-α₃),3.04(6H,m,CH₂);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ172.0,171.6,171.0,164.1,161.6,161.3,156.8,148.6,137.3,136.5,136.4,136.3,136.1,132.5,129.6,128.8,128.7,128.5,128.4,127.9,127.8,127.0,124.1,123.8,121.3,118.9,118.8,118.7,118.6,114.8,113.5,111.7,111.3,109.7,102.2,66.5,54.4,54.0,53.6,37.2,28.6,28.1;

ESIMS m/z 815(M);

HRMS calcd for:(C₄₈H₄₀N₅O₈-1),m/z(814.288237);实测值:m/z(814.2858).

实施例5 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰亮氨酸苄酯9的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.680g，3.30mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.89g，3.00mmol)HCl·Trp-Trp-Leu-OBzl制得标题化合物（1.98g，2.53mmol，84%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+236.1(c 1.3,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3410,3302,1705,741;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.79(1H,brs,N-H),8.92(1H,d,J=7.2Hz,N-H),8.67(1H,s,CH),8.34(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.30(1H,d,J=8.4Hz,N-H),7.76(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),7.51(1H,d,J=7.5Hz,Ar-H),7.50(1H,d,J=6.6Hz,Ar-H),7.38-7.26(7H,m,Ar-H),7.11(2H,s,Ar-H),7.04-6.86(5H,m,Ar-H),6.79(1H,d,J=2.1Hz,Ar-H),5.13(2H,s,CH₂Ph),4.73(1H,dd,J₁=12.3Hz,J₂=7.8Hz,H-α₁),4.63(1H,m,H-α₂),4.52(1H,dd,J₁=13.2Hz,J₂=7.8Hz,H-α₃),3.05(4H,m,CH₂),1.58(3H,m,CH,CH₂),0.89(3H,d,J=6.0Hz,CH₃),0.85(3H,d,J=6.0Hz,CH₃);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ172.6,171.9,170.9,164.1,161.7,161.3,156.8,148.5,136.4,136.3,132.5,128.9,128.5,128.3,127.9,127.8,124.3,124.1,123.9,123.8,121.3,121.2,118.9,118.8,118.7,118.6,114.8,113.6,111.7,111.6,111.5,110.3,109.7,102.2,66.4,54.1,53.6,51.0,50.9,28.4,27.9,24.6,23.2,21.9;

ESIMS m/z 780(M-1),781(M);

HRMS：理论值:(C₄₅H₄₂N₅O₈-1),m/z(780.303887);实测值:m/z(780.3046)。

实施例6 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰异亮氨酸苄酯10的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.680g，3.30mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.89g，3.00mmol)HCl·Trp-Trp-Ile-OBzl制得标题化合物（1.85g，2.36mmol，79%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+173.4(c 0.9,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3402,3302,1705,1528,741;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.78(2H,brs,N-H),8.92(1H,d,J=6.9Hz,N-H),8.68(1H,s,CH),8.31(1H,d,J=8.1Hz,N-H),8.22(1H,d,J=7.5Hz,N-H),7.76(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),7.50(2H,d,J=7.5Hz,Ar-H),7.37-7.24(7H,m,Ar-H),7.11(2H,s,Ar-H),7.01-6.86(5H,m,Ar-H),6.79(1H,s,Ar-H),5.13(2H,s,CH₂Ph),4.72(2H,m,H-α₁,H-α₂),4.32(1H,t,J=7.2Hz,H-α₃),3.02(6H,m,CH₂),1.82(1H,m,CH),1.20(2H,m,CH₂),0.82(6H,m,CH₃);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.2,171.6,170.9,164.2,161.6,161.3,156.8,148.6,136.5,136.4,136.3,136.2,132.5,128.9,128.6,128.5,127.9,127.8,124.4,124.2,124.0,123.8,121.3,121.2,118.9,118.7,118.6,114.9,113.5,111.7,111.6,111.5,110.3,109.6,102.2,66.4,57.1,54.1,53.6,36.7,28.5,28.0,25.2,15.8,11.6;

ESIMS m/z 765(M);

HRMS：理论值:(C₄₄H₃₈N₅O₈-1),m/z(764.271490);实测值:m/z(764.2708)。

实施例7 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰缬氨酸苄酯11的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.550g，2.68mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.50g，2.44mmol)HCl·Trp-Trp-Val-OBzl制得标题化合物（1.50g，1.96mmol，62%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D-39.4(c 0.6,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3394,3302,1705,741;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.79(1H,d,J=6.9Hz,N-H),8.94(1H,d,J=7.2Hz,N-H),8.70(1H,s,CH),8.31(1H,d,J=8.1Hz,N-H),8.24(1H,d,J=7.8Hz,N-H),7.77(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),7.51(2H,d,J=7.8Hz,Ar-H),7.41-7.24(7H,m,Ar-H),7.12(2H,d,J=3.6Hz,Ar-H),7.04-6.89(5H,m,Ar-H),6.88(1H,d,J=2.4Hz,Ar-H),5.45(2H,s,CH₂Ph),4.74(2H,m,H-α₁,H-α₂),4.28(1H,t,J=7.2Hz,H-α₃),3.20(1H,m,CH₂),2.97(3H,m,CH₂),2.09(1H,m,CH),0.889(6H,d,J=6.6Hz,CH₃);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ172.3,171.6,171.0,164.1,161.6,161.3,156.8,148.6,136.5,136.4,136.3,132.5,128.9,128.5,127.9,127.8,127.7,124.4,124.2,124.0,123.8,121.3,121.2,118.8,118.7,114.8,113.5,111.7,111.6,111.5,110.3,109.6,102.2,66.4,58.2,54.1,53.6,30.4,28.5,28.0,19.4,18.8;

ESIMS m/z 767(M);

HRMS：理论值:(C₄₄H₄₂N₅O₈+1),m/z(768.302790);实测值:m/z(768.2963)。

实施例8 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰丝氨酸苄酯12的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.490g，2.37mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.30g，2.15mmol)HCl·Trp-Trp-Ser-OBzl制得标题化合物（0.950g，1.25mmol，59%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+11.9(c 0.8,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3391,3294,1701,1528,745;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ10.80(1H,brs,N-H),8.95(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.71(1H,s,CH),8.45(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.38(1H,d,J=8.5Hz,N-H),7.79(1H,d,J=9.0Hz,Ar-H),7.57(1H,d,J=8.0Hz,Ar-H),7.52(1H,d,J=8.0Hz,YGAr-H),7.41-7.27(7H,m,Ar-H),7.16(1H,s,Ar-H),7.12(1H,s,Ar-H),7.02(2H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.93(1H,t,J=7.0Hz,Ar-H),6.89(2H,t,J=6.5Hz,Ar-H),6.80(1H,d,J=2.0Hz,Ar-H),5.17(2H,s,CH₂Ph),4.74(2H,m,H-α₁,H-α₂),4.50(1H,m,H-α₃),3.81(1H,dd,J₁=11Hz,J₂=5.0Hz,CH₂OH),3.22(1H,dd,J₁=15Hz,J₂=4.5Hz,CH₂),3.13(1H,dd,J₁=15Hz,J₂=4.5Hz,CH₂),3.03(1H,dd,J₁=15Hz,J₂=7.5Hz,CH₂),2.98(1H,dd,J₁=15Hz,J₂=9.0Hz,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.2,171.0,170.9,164.1,161.6,161.3,156.8,148.7,136.5,136.4,136.3,136.2,132.5,128.9,128.4,128.1,127.9,127.8,124.4,124.2,124.1,123.9,121.3,121.2,118.9,118.7,114.8,113.6,111.7,111.6,111.5,110.4,110.3,109.7,102.2,66.4,61.7,54.1,53.6,49.0,28.5,28.2;

ESIMS m/z 755(M);

HRMS：理论值:(C₄₂H₃₆N₅O₉-1),m/z(754.251851);实测值:m/z(754.2470)。

实施例9 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰苏氨酸苄酯13的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.300g，1.46mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(0.820g，1.33mmol)HCl·Trp-Trp-Thr-OBzl制得标题化合物（0.820g，1.07mmol，82%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D-56.0(c 0.8,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3399,1663,1527,745;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.78(1H,brs,N-H),8.92(1H,d,J=7.2Hz,N-H),8.71(1H,s,CH),8.41(1H,d,J=7.8Hz,N-H),8.18(1H,d,J=8.4Hz,N-H),7.77(1H,d,J=8.7Hz,Ar-H),7.56(1H,d,J=8.1Hz,Ar-H),7.52(1H,d,J=7.8Hz,Ar-H),7.41-7.27(7H,m,Ar-H),7.17(1H,s,Ar-H),7.10(1H,s,Ar-H),7.01(2H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.94(1H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.89(2H,m,Ar-H),6.79(1H,d,J=1.5Hz,Ar-H),5.16(2H,s,CH₂Ph),4.76(2H,m,H-α₁,H-α₂),4.44(1H,m,H-α₃),4.20(1H,m,CH),3.16(2H,m,CH₂),2.99(2H,m,CH₂),1.09(3H,d,J＝6.3CH₃);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ172.5,171.1,170.8,164.1,161.6,161.3,156.8,148.7,136.4,136.3,136.2,132.5,128.8,128.4,128.2,127.9,127.8,124.2,123.9,121.3,121.2,118.8,118.6,114.8,113.6,111.6,111.5,110.4,109.7,102.2,66.8,66.4,58.5,54.1,53.8,28.6,28.0,20.5;

ESIMS m/z 771(M),770(M-1);

HRMS：理论值:(C₄₃H₄₀N₅O₉-1),m/z(770.283151);实测值:m/z(770.3296)。

实施例10 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰酪氨酸苄酯14的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.670g，3.24mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(2.00g，2.95mmol)HCl·Trp-Trp-Tyr-OBzl制得标题化合物（1.90g，2.28mmol，78%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+174.6(c 0.5,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3302,1705,1512,741;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ10.78(2H,brs,N-H),8.93(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.70(1H,s,CH),8.42(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.31(1H,d,J=8.5Hz,N-H),7.76(1H,d,J=9.0Hz,Ar-H),7.53(2H,t,J=7.5Hz,Ar-H),7.35-7.24(7H,m,Ar-H),7.11(1H,s,Ar-H),7.08(1H,s,Ar-H),7.00(5H,m,Ar-H),6.87(2H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.79(1H,d,J=2.0Hz,Ar-H),6.66(1H,d,J=7.5Hz,Ar-H),5.05(2H,dd,J₁=19.0Hz,J₂=12.5Hz,CH₂Ph),4.76(1H,dd,J₁=12.5Hz,J₂=7.5Hz,H-α₁),4.65(1H,dd,J₁=13.5Hz,J₂=8.5Hz,H-α₂),4.50(1H,dd,J₁=14.5Hz,J₂=7.0Hz,H-α₃),4.12(1H,m,OH),3.10-2.87(6H,m,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ171.9,171.7,171.1,164.1,161.6,161.3,156.8,156.4,148.6,136.4,136.3,136.2,132.5,130.5,128.8,128.5,128.3,127.9,127.8,127.3,124.1,124.0,123.8,121.3,121.2,118.9,118.8,118.7,118.6,115.5,114.8,113.6,111.6,111.5,110.4,110.3,109.8,102.2,66.4,54.8,53.6,48.9,36.6,28.5,28.1;

ESIMS m/z 831(M);

HRMS：理论值:(C₄₈H₄₀N₅O₉-1),m/z(830.283151);实测值:m/z(830.2760)。

实施例11 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰脯氨酸苄酯15的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.670g，3.24mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.82g，2.95mmol)HCl·Trp-Trp-Pro-OBzl制得标题化合物（1.56g，2.03mmol，68%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D-7.2(c 0.4,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3410,3302,1705,1528,741;

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆):δ10.82(2H,brs,N-H),8.99(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.78(1H,s,CH),8.65(1H,d,J=7.5Hz,N-H),7.81(1H,d,J=8.1Hz,N-H),7.53(1H,d,J=7.5Hz,Ar-H),7.48(1H,d,J=8.1Hz,Ar-H),7.39-7.27(7H,m,Ar-H),7.15(1H,d,J=1.8Hz,Ar-H),7.03(4H,m,Ar-H),6.88(2H,m,Ar-H),6.80(1H,d,J=2.1Hz,Ar-H),5.14(2H,dd,J₁=14.4Hz,J₂=12.6Hz,CH₂Ph),4.81(2H,m,H-α₁,H-α₂),4.44(1H,m,H-α₃),3.51(1H,m,CH₂),3.31-2.94(5H,m,CH₂),2.15(1H,m,CH₂),1.81(3H,m,CH₂);

¹³CNMR(75MHz,DMSO-d₆)δ172.1,170.8,170.5,164.0,161.4,161.3,156.8,148.7,136.5,136.4,136.3,132.5,128.9,128.5,128.4,128.0,127.7,127.6,124.3,124.2,124.0,121.3,121.2,118.9,118.5,118.4,114.8,113.7,111.8,111.6,110.1,109.6,102.2,66.3,60.2,53.9,51.7,50.0,29.1,28.6,27.6,24.9;

ESIMS m/z 765(M);

HRMS：理论值:(C₄₄H₃₈N₅O₈-1),m/z(764.271490);实测值:m/z(764.2708)。

实施例12 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰蛋氨酸苄酯16的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.450g，2.20mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.30g，2.00mmol)HCl·Trp-Trp-Met-OBzl制得标题化合物（1.09g，1.36mmol，68%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+131.8(c 0.2,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3286,1709,1524,741;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ10.82(1H,d,J=10.5Hz,N-H),8.95(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.69(1H,s,CH),8.39(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.34(1H,d,J=8.0Hz,N-H),7.78(1H,d,J=8.5Hz,Ar-H),7.53(1H,d,J=8.0Hz,Ar-H),7.50(1H,d,J=8.0Hz,Ar-H),7.44-7.25(6H,m,Ar-H),7.21(1H,d,J=10.5Hz,Ar-H),7.13(2H,d,J=2.0Hz,Ar-H),7.05(2H,m,Ar-H),6.93(1H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.89(2H,m,Ar-H),6.80(1H,d,J=2.5Hz,Ar-H),5.16(2H,dd,J₁=16Hz,J₂=13Hz,CH₂Ph),4.73(1H,dd,J₁=12.5Hz,J₂=7.5Hz,H-α₁),4.63(1H,m,H-α₂),4.52(1H,m,H-α₃),3.21(1H,dd,J₁=15Hz,J₂=4.5Hz,CH₂),3.10(1H,dd,J₁=15Hz,J₂=5.0Hz,CH₂),3.00(2H,m,CH₂),2.48(2H,m,CH₂),2.00(3H,s,CH₃),1.98(2H,m,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.2,171.9,171.1,164.2,161.7,161.3,156.8,148.6,136.4,136.3,132.5,128.9,128.6,128.4,127.9,127.7,124.2,123.8,121.3,121.2,118.9,118.7,114.8,113.5,111.7,111.6,111.5,110.3,110.3,109.6,102.2,66.5,54.2,53.7,51.7,31.0,29.9,28.5,27.8,15.0;

ESIMS m/z 799(M);

HRMS：理论值:(C₄₄H₄₀N₅O₈S-1),m/z(798.260308);实测值:m/z(798.2687)。

实施例13 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰谷氨酸苄酯17的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.460g，2.24mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.50g，2.04mmol)HCl·Trp-Trp-Glu(OBzl)-OBzl制得标题化合物（1.25g，1.40mmol，69%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+182.9(c 1.3,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3287,1705,1527,741;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ10.80(2H,d,J=6.0Hz,N-H),8.94(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.68(1H,s,CH),8.41(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.36(1H,d,J=8.0Hz,N-H),7.76(1H,d,J=8.5Hz,Ar-H),7.52(2H,d,J=8.5Hz,Ar-H),7.39-7.25(12H,m,Ar-H),7.13(1H,s,Ar-H),7.11(1H,s,Ar-H),7.01(2H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.95(1H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.89(2H,m,Ar-H),6.79(1H,s,Ar-H),5.14(2H,s,CH₂Ph),5.06(2H,s,CH₂Ph),4.72(1H,dd,J₁=12.0Hz,J₂=7.0Hz,H-α₁),4.62(1H,dd,J₁=13.0Hz,J₂=8.0Hz,H-α₂),4.44(1H,dd,J₁=13.5Hz,J₂=8.0Hz,H-α₃),3.19(1H,dd,J₁=15.0Hz,J₂=4.0Hz,CH₂),3.10(1H,dd,J₁=15.0Hz,J₂=4.0Hz,CH₂),2.98(2H,m,CH₂),2.44(2H,m,CH₂),2.09(1H,m,CH₂),1.94(1H,m,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.5,172.2,171.8,171.0,164.2,161.8,161.3,156.8,148.6,136.6,136.4,136.3,136.2,132.5,128.9,128.5,128.4,128.3,127.8,127.7,124.4,124.2,124.0,123.8,121.3,121.2,118.9,118.8,118.7,118.6,114.9,113.4,111.7,111.5,110.4,110.3,109.7,102.2,66.5,66.0,54.2,53.7,51.9,30.2,28.5,27.8,26.5;

ESIMS m/z 886(M-1),887(M);

HRMS：理论值:(C₅₁H₄₄N₅O₁₀-1),m/z(886.309366);实测值:m/z(886.2928)。

实施例14 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰天冬氨酸苄酯18的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.540g，2.63mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.90g，2.39mmol)HCl·Trp-Trp-Asp(OBzl)-OBzl制得标题化合物（1.35g，1.55mmol，60%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+197.1(c 1.8,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3302,1705,1528,741;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ10.80(1H,brs,N-H),8.94(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.70(1H,s,CH),8.60(1H,d,J=8.0Hz,N-H),8.38(1H,d,J=8.0Hz,N-H),7.75(1H,d,J=9.0Hz,Ar-H),7.53(2H,t,J=7.5Hz,Ar-H),7.37-7.26(20H,m,Ar-H),7.14(1H,s,Ar-H),7.12(1H,s,Ar-H),7.01(2H,m,Ar-H),6.94(1H,t,J=7.5Hz,Ar-H),6.89(2H,m,Ar-H),6.79(1H,d,J=2.0Hz,Ar-H),5.11(2H,s,CH₂Ph),5.09(2H,s,CH₂Ph),4.83(1H,t,J=6.5Hz,H-α₁),4.77(1H,dd,J₁=12.0Hz,J₂=7.5Hz,H-α₂,4.64(1H,m,H-α₃),3.22(1H,dd,J₁=15.0Hz,J₂=5.0Hz,CH₂),3.11(1H,dd,J₁=15.0Hz,J₂=4.5Hz,CH₂),2.99(2H,m,CH₂),2.91(1H,dd,J₁=16.5Hz,J₂=7.0Hz,CH₂),2.77(1H,dd,J₁=16.5Hz,J₂=6.5Hz,CH₂);

¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ171.8,171.1,170.8,170.3,164.1,161.6,161.3,156.8,148.6,136.4,136.2,136.1,132.5,128.9,128.8,128.5,128.4,128.2,127.9,127.8,127.3,124.3,124.2,124.0,123.9,121.3,118.9,118.8,118.7,118.6,114.8,113.6,111.7,111.5,110.2,109.7,102.2,66.8,66.4,54.1,53.7,50.0,36.2,28.5,28.1;

ESIMS m/z 873(M);

HRMS：理论值:(C₅₀H₄₂N₅O₁₀-1),m/z(872.293716);实测值:m/z(872.2994)。

实施例15 7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酰色氨酸苄酯19的制备

按照制备7-羟基-香豆素-3-甲酰色氨酰色氨酸苄酯的操作，由(0.450g，2.19mmol)7-羟基香豆素-3-羧酸和(1.40g，1.99mmol)HCl·Trp-Trp-Trp-OBzl制得标题化合物（1.05g，1.23mmol，62%），为淡黄色固体。

[α]²⁵ _D+140.8(c 0.5,MeOH);

IR(cm^-1,KBr,neat):3395,3287,1705,1527,741;

¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ10.91(1H,brs,N-H),10.79(1H,d,J=4.0Hz,N-H),8.93(1H,d,J=7.5Hz,N-H),8.78(1H,s,CH),8.55(1H,d,J=7.0Hz,N-H),8.36(1H,d,J=8.5Hz,N-H),7.74(1H,d,J=8.5Hz,Ar-H),7.52(3H,m,Ar-H),7.34(1H,d,J=9.5Hz,Ar-H),7.28(5H,m,Ar-H),7.15(6H,m,Ar-H),6.95(5H,m,Ar-H),6.85(2H,m,Ar-H),6.80(1H,d,J=1.5Hz,Ar-H),5.00(2H,dd,J₁=33.0Hz,J₂=12.5Hz,CH₂Ph),4.77(1H,dd,J₁=12.5Hz,J₂=7.5Hz,H-α₁),4.68(2H,m,H-α₂,H-α₃),3.12(4H,m,CH₂),2.99(2H,m,CH₂);¹³CNMR(125MHz,DMSO-d₆)δ172.1,172.0,171.1,164.2,161.6,161.3,156.8,148.7,136.6,136.4,136.2,132.5,128.8,128.4,128.2,127.9,124.3,124.0,121.5,119.0,118.9,118.7,118.6,118.5,114.8,113.5,111.7,111.5,110.4,109.6,102.2,66.4,54.0,53.7,53.3,28.5,28.1,27.6;

ESIMS m/z 854(M);

HRMS：理论值:(C₅₀H₄₁N₆O₈-1),m/z(853.299136);实测值:m/z(853.2893)。

实验例1本发明化合物抗肿瘤细胞增殖活性评价实验

1)受试样品

本发明的化合物5-19均用含0.1%DMSO的培养基配制成所需浓度。

2)细胞株

人体肺腺癌上皮细胞系A549、人胶质母细胞瘤细胞A172、人慢性粒细胞白血病细胞K562、人肝癌细胞BL-7402、人胶质母细胞瘤细胞HepG2（上述细胞株均购置于中国医学科学院肿瘤医院）。

3)主要仪器及材料

石英自动双重纯水蒸馏器：1018-B，江苏荣华仪器制造有限公司；

高压灭菌锅：400Ep-Z，H+P公司；

水浴锅：YLE-1000，北京德天佑科技发展有限公司；

超净台：VS-1300-U洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；

细胞孵育箱：INC153，memmer公司；

低温离心机：SPD111V，Thermo公司；

酶标仪：MULTISJKAN MK3，Thermo公司；

平板振荡器：MS2 Minishaker，IKA公司；

96孔细胞培养板、25cm²培养瓶、2mL冻存管：Corning Costar公司；

0.22μm微孔滤膜：上海兴亚净化材料厂。

4)主要试剂

RPMI-1640培养基干粉（Gibco公司，货号11875093）、DMEM培养基干粉：（Gibco公司，货号11995065）；

PBS缓冲液：每1L溶液中含有NaCl 8.2g、KCl 0.2g、Na₂HPO₄·H₂O 1.56g、KH₂PO₄0.2g，PH值7.4；

胎牛血清：Hyclone公司；

0.25%胰酶溶液：Hyclone公司；

青霉素、链霉素：石药集团中诺药业（石家庄）有限公司；

MTT(四噻唑蓝)：solarbio公司，溶于PBS溶液中，制成5mg/mL的溶液，过滤除菌后使用，避光保存；

阿霉素(ADM)：北京华丰联合技术有限公司。

DMSO：二甲基亚枫，Hyclone公司。

5)实验方法

癌细胞A172、K562、A549、BL-7402、HepG2选用RPMI-1640培养基；培养基中均含10%经灭活的胎牛血清和1×10⁵U/L^-1青霉素和100mg/L^-1链霉素。

贴壁细胞HepG2、A172、BL-7402、A549的培养：分别将生长状态良好、处于对数生长期的A549、HT-29细胞以3×10⁴个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL，37°C、5%CO₂培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品，每孔25μL，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37°C孵育四个小时，小心除去上清液后每孔加入100μL的DMSO（二甲基亚砜），振荡约10分钟溶解沉淀。立即于酶标仪上检测O.D.（吸光度）值，波长570nm。

悬浮细胞K562的培养：分别将生长状态良好、处于对数生长期的K562细胞以5×10⁴个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL，按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品，每孔25μL，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续置于37°C孵育四个小时，离心，2500rpm，10分钟，小心吸出上清液，每孔加入100μL的DMSO溶解紫色残留物（甲瓒），振荡约10分钟沉淀全部溶解，于酶标仪上测定O.D.（吸收值），波长570nm。

以下式求出每一个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率：

生长抑制率＝［（对照组平均O.D.值－样品组平均O.D.值）/对照组平均O.D.值］×100%，实验重复3次，以抑制率对药物浓度作图，按作图法求出IC₅₀（半数有效抑制浓度）值。

6)实验结果

表1化合物5-19抗肿瘤细胞增殖活性（IC₅₀±SDμM）^a

aIC₅₀值用表示，n=6

实验例2本发明化合物体内抗肿瘤活性评价

1)实验材料

受试化合物：本发明所得到的化合物5-19；

阳性对照为阿霉素；

实验动物：ICR雄性小鼠(清洁级)，体重20±2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。每12只小鼠一组，空白和阳性对照各一组；

瘤源：小鼠S180肉瘤，由北京大学医学部动物实验中心提供，自行传代维持；

溶剂：生理盐水，吐温80助溶。

2)药物配制

化合物5-19加入少量吐温80助溶，逐渐加入生理盐水至所需浓度即可。阿霉素为生理盐水溶液。

3)给药剂量及给药设置

化合物5-19均以腹腔单次给药，按1μmol/kg的给药剂量，所有化合物均每天给药一次，0.2mL/只，连续给药7天，共给药7次。

阴性对照生理盐水以等体积的相应溶液，腹腔单次给药，0.2mL/只，连续给药7天，共给药7次。

阳性对照阿霉素以腹腔单次给药，按1μmol/kg的给药剂量，每天一次，0.2mL/只，连续给药7天，共给药7次。

4)动物模型的建立

采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型：无菌条件下抽取接种生长旺盛的S180腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2%台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，并按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。

细胞浓度=4大方格内活细胞数/4×10⁴×稀释倍数=细胞数/mL

细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%

将存活率大于90%的瘤液用匀浆法制备成2.0×10⁷个/mL的细胞悬液，于鼠腋皮下接种0.2mL/只，造成实体瘤动物模型。

5)实体瘤抑瘤率的测定

实验进行至第8天，称小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率：抑瘤率％＝(阴性对照组平均瘤重－给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重×100%。

6)统计方法

本实验数据统计均采用t检验和方差分析，瘤重以表示。

7)实验结果

表2、化合物5-19对荷S180小鼠肿瘤重量的影响

a所试化合物为腹腔给药，化合物剂量均为1umol/kg；ADM=1umol/kg；n=12

b与空白组（NS）相比P<0.01；

c与空白组（NS）相比P<0.05；

d与空白组（NS）相比P>0.05。

实验例3化合物14体内抗肿瘤量效关系

1)实验材料

受试化合物：本发明所得到的化合物14；

实验动物：ICR雄性小鼠(清洁级)，体重20±2g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。每12只小鼠一组，空白和阳性对照各一组；

瘤源：小鼠S180肉瘤，由北京大学医学部动物实验中心提供，自行传代维持；

溶剂：生理盐水，吐温80助溶。

2)药物配制

化合物14加入少量吐温80助溶，逐渐加入生理盐水至所需浓度即可。

3)给药剂量及给药设置

化合物14选取高、中、低三个浓度考察化合物的剂量效应依赖关系，剂量为0.1μmol/kg，0.01μmol/kg和0.001μmol/kg，均以腹腔单次给药，0.2mL/只，连续给药7天，共给药7次。阴性对照生理盐水以等体积的相应溶液，腹腔单次给药，0.2mL/只，连续给药7天，共给药7次。

4)动物模型的建立

同实验例2中4)的方法。

5)实体瘤抑瘤率的测定

同实验例2中5)的方法。

6)统计方法

本实验数据统计均采用t检验和方差分析，瘤重以表示。

7)实验结果

表3、化合物14对荷S180小鼠肿瘤重量影响的浓度效应关系

a n=12；空白组NS；阳性组ADM；

b与1umol/kg相比P<0.05，与0.1umol/kg相比P<0.01，与阳性组（ADM）相比P>0.05；

c与0.1umol/kg相比P<0.01，与空白组（NS）相比P<0.01。

Claims (6)

1.一种通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中AA为谷氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、甘氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、蛋氨酸或亮氨酸；

n为0或1；

R₁、R₃、R₄各自独立地选自氢；和

R₂选自羟基。

2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其为下述化合物或其药学上可接受的盐：

3.一种根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

1)在哌啶作用下，缩合为

2)在HCl存在下，在水中加热回流生成

3)在二环己基碳二亚胺、N-羟基苯并三唑、N-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将叔丁氧羰基保护的色氨酸和色氨酸甲酯偶联，合成叔丁氧羰基色氨酰色氨酸甲酯；

4)在甲醇溶液中加入NaOH溶液，脱去甲酯，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酸；

5)在二环己基碳二亚胺、N-羟基苯并三唑、N-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将叔丁氧羰基色氨酰色氨酸与苄氧羰基保护的氨基酸进行偶联，得到叔丁氧羰基色氨酰色氨酰氨基酸苄酯；

6)在氯化氢/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基色氨酰色氨酰氨基酸苄酯，脱去叔丁氧羰基，得到通式(V)的盐酸色氨酰色氨酰氨基酸苄酯；

7)在DCC和HOBt存在下，将通式(IV)的化合物在无水THF中与通式(V)的盐酸色氨酰色氨酰氨基酸苄酯缩合为通式(I)的化合物；

其中AA为谷氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、甘氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、蛋氨酸或亮氨酸；

n为0或1；

R₁、R₃、R₄各自独立地选自氢；和

R₂选自羟基。

4.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或辅料。

5.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求4所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述的肿瘤选自人体肺腺癌上皮细胞系A549、人胶质母细胞瘤细胞A172、人慢性粒细胞白血病细胞K562、人肝癌细胞BL-7402、肝细胞癌细胞HepG2。