CN112341355B - 一种绿原酸衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种绿原酸衍生物及其制备和应用，涉及药物化学和治疗学领域。该种绿原酸衍生物，以绿原酸为原料，保留绿原酸的骨架结构，以氨基酸酯盐酸盐对绿原酸进行修饰，合成了新型的具有降脂活性的绿原酸衍生物。其相对于之前的绿原酸衍生物，合成方法简便、制备过程安全，产物纯度高、稳定性好，且具有更高的降血脂活性，从而能够更好的应用到高血脂疾病的治疗中。

Description

一种绿原酸衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物化学和治疗学领域，涉及一种绿原酸衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
露兜簕，为露兜树科露兜树属植物露兜树的果实，由于其形态奇特，形似菠萝，在我国岭南地区习称野菠萝。露兜簕作为一种民间药用植物已有悠久的应用历史，中国海南省部分地区黎族人民常使用它治疗高血脂症，已成为黎族当地医院制剂，且临床治疗显著。药理研究表明，露兜簕中的咖啡酰奎宁酸类成分为降血脂的主要成分。
咖啡酰奎宁酸类化合物，是一类有奎宁酸与数目不等的咖啡酸通过酯键连接而成的的酚酸类天然成分，广泛存在于植物界。目前已发现50余种咖啡酰奎宁酸类化合物，其具有抗氧化、抗炎、抗菌抗病毒、免疫调节、抗高血糖高血脂和抗癌等药理活性。除此之外，该种化合物还可以通过阻滞细胞生长周期、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等机制发挥抗肿瘤作用。
前期研究发现，咖啡酰奎宁酸类成分具有显著的抗肿瘤、抗高血糖高血脂作用，目前以咖啡酰奎宁酸为主要成分的金芪降糖颗粒已经上市。在此基础上，课题组深入研究发现咖啡酰奎宁酸类成分中的活性单体化合物绿原酸具有显著的降血脂作用。
绿原酸又名3-O-咖啡酰奎宁酸，属于咖啡酰奎宁酸类化合物，普遍分布于忍冬科忍冬属和菊科蒿属植物，其抗氧化、抗菌和抗辐射等生物学功能已广泛应用于食品、美容、医药和化工等领域。绿原酸虽然是一种具有较好生物活性的天然产物，但其也存在着一些缺点：作为天然产物，从植物中提取分离的绿原酸常伴有异构体的存在，其中以5-O-咖啡酰奎宁酸为主。虽然具有多种生物活性，但其结构不稳定，易发生氧化和异构化反应，且见光、受热易使其活性丧失。
之前的技术对于绿原酸及其衍生物的制备往往是通过从植物中直接提取，如中国专利申请CN104045559A公开了一种从药用植物露兜簕果实降血脂部位中得到15个具有降血脂作用的咖啡酰奎宁酸类化合物的方法：取露兜簕果实，净选、切段，水或醇类溶剂进行提取；提取液经浓缩干燥后得提取物，经大孔树脂层析，以乙醇-水为洗脱剂得到洗脱物；对洗脱物进行系统分离；利用反相MCI柱色谱进行粗分离，以甲醇-水梯度洗脱，得到15-200个流分；对该流分进行层析和色谱分离制得15种天然咖啡酰奎宁酸类化合物。该方法直接从露兜簕果实中提取绿原酸及其衍生物，不仅来源受到限制，而且制备成本高，难以实现大规模生产。
事实上，对于任何一种天然化合物，单纯依靠天然植物资源，均不利于可持续发展，扩大其化学合成途径势在必行。不少研究着眼于通过化工手段制备绿原酸衍生物，但是这些制备往往还存在着制备收率低、作用效果弱、制备原料毒性大等问题。如中国专利申请CN111423407A公布了一种咖啡酰奎宁酸类衍生物及其制备方法，该发明制备中以胺为原料，胺往往有难闻的气味和较大的毒性，处理不当可能会引发中毒。同时该方法制备绿原酸衍生物的收率为60％-85％，收率较低还有待进一步提升。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供一种绿原酸衍生物及其制备方法和用途，该种绿原酸衍生物具有更好的降脂活性，同时制备方法收率高、安全环保。
为实现上述目的，本发明提供一种绿原酸衍生物，其具有通式(Ⅰ)所示的结构：
Figure BDA0002768241420000021
式中：R6为H原子；
R4和R5为H原子；
R2和R3为H原子或丙叉基；
R1具有通式(Ⅱ)所示的结构：
Figure BDA0002768241420000022
式中R选自-H、-CH3、-CH-(CH3)2、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH2-CH3、-CH2-C6H5、
Figure BDA0002768241420000023
-CH2-C6H4-OH、-CH2-COOH、-CH2-CONH2、-(CH2)2-COOH、-(CH2)4-NH2、-(CH2)2-CONH2、-(CH2)2-S-CH3、-CH2-OH、-CH(CH3)-OH、-CH2-SH、-C3H6。
在本发明的一些实施例中，R选自-H、-CH3、-CH-(CH3)2、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH2-CH3、-CH2-C6H5、
Figure BDA0002768241420000031
在本发明的一些实施例中，R1选自以下六种基团之一：
Figure BDA0002768241420000032
本发明还提供一种上述绿原酸衍生物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将绿原酸与2,2-二甲氧基丙烷反应生成中间体7，反应式如下：
Figure BDA0002768241420000033
(2)将中间体7与氨基酸酯盐酸盐发生缩合反应生成绿原酸衍生物(I)-1，反应式如下：
Figure BDA0002768241420000034
在步骤(2)之后还包括：
(3)将绿原酸衍生物(I)-1进行脱保护反应，反应式如下：
Figure BDA0002768241420000035
在本发明的一些实施例中，步骤(1)和(2)具体为：
(1)以对甲苯磺酸为催化剂，绿原酸和2,2-二甲氧基丙烷在无水丙酮中反应生成中间体7；
(2)中间体7在BOP和N,N-二异丙基乙胺的缩合条件下，在无水乙腈和四氢呋喃的混合溶剂中，与氨基酸酯盐酸盐发生缩合反应生成绿原酸衍生物(I)-1。
在本发明的一些实施例中，步骤(3)具体为：
(3)将绿原酸衍生物(I)-1在三氟乙酸、二氯甲烷和水的混合溶液中脱去丙酮叉保护，得到绿原酸衍生物(I)-2。
本发明还提供一种药物组合物，包括上述绿原酸衍生物和药用载体。
所述药用组合物，其剂型为胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂，或者为注射剂型。
本发明还提供上述绿原酸衍生物在制备预防和/或治疗高血脂症药物中的用途。
本发明以绿原酸为原料，保留绿原酸的结构骨架，以氨基酸酯盐酸盐对绿原酸进行修饰，合成了新型的具有降血脂等作用的绿原酸衍生物。相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)制备过程更绿色、安全。在中间体上引入胺基取代基时，氨基酸酯盐酸盐以其低毒、无毒的特性，克服以往使用胺为原料制备过程中气味刺鼻、毒性大的缺陷，是一种更为绿色、安全的制备方式。
(2)来源易得，合成路线简便，提高了制备效率和收率。化学途径合成绿原酸衍生物，相比于直接从露兜簕果实中提取，以化学品为原料，制备仅需2-3步化学反应，成本低，操作简单，更适应大规模制备，且制备过程中收率基本上可以达到70％-90％，高于之前制备中的60％-85％。
(3)合成得到的12个氨基酸偶联衍生物均为结构新颖的绿原酸衍生物，不仅丰富了绿原酸衍生物的种类，使得后续制药过程有更多的选择，而且相比于绿原酸原型及其他类型的绿原酸衍生物，具有较好的生物活性和稳定性，在药用过程中有更好的降血脂效果。
附图说明
图1为绿原酸和其衍生物的细胞活力检测实验结果；其中CA为绿原酸，5a、5b、5c、5d、5e、5f、6a、6b、6c、6d、6e、6f为12个绿原酸衍生物，Ctrl为空白对照。
图2为油红O降脂活性筛选实验结果；其中CA为绿原酸，5a、5b、5c、5d、5e、5f、6a、6b、6c、6d、6e、6f为12个绿原酸衍生物，Ctrl为空白对照，-为油酸，S为辛伐他汀。
图3为TG含量测定结果；其中CA为绿原酸，5a、5b、5c、5d、5e、5f、6a、6b、6c、6d、6e、6f为12个绿原酸衍生物，Ctrl为空白对照，-为油酸，S为辛伐他汀。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。为了清楚，不描述实际实施例的全部特征。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例涉及的化学反应式如下：
Figure BDA0002768241420000051
实施例1绿原酸衍生物5a的制备
(1)中间体7的合成
准确称取21.0g(60.0mmol)绿原酸，加入到500mL圆底烧瓶中。室温条件下依次加入150mL干燥丙酮、120mL2,2-二甲氧基丙烷，反应液为混悬状态，加入150mg对甲苯磺酸进行催化，室温下搅拌1h。TLC检测反应，展开剂为乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水(100：5：5：13)。反应结束后，加入饱和碳酸钠，中和剩余的对甲苯磺酸，抽滤，滤液浓缩即得淡黄色中间体7，收率为83.5％。
(2)绿原酸衍生物5a的合成
将395.0mg(1.0mmol)中间体7，443.0mg(1.1mmol)BOP置于50mL圆底烧瓶中，抽真空，氮气保护。加入乙腈-THF溶解至澄清，再滴入N,N-二异丙基乙胺(3mmol)，用针管向反应液中加入甘氨酸乙酸乙酯盐酸盐(1mmol)，室温反应3小时，得到绿原酸衍生物5a，白色粉末，收率为86％。
绿原酸衍生物5a的氢谱、碳谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.57(d，J＝15.8Hz，1H，H-7′)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95(dd，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.28(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.48-5.44(m，1H，H-3)，4.56-4.54(m，1H，H-4)，4.22-4.16(m，3H，H-5，COOCH2CH3)，3.95(s，2H，NH-CH2)，2.38-2.35(m，1H，H-2)，2.19-2.16(m，1H，H-2)，2.02-1.99(m，1H，H-6)，1.94-1.89(m，1H，H-6)，1.53(s，3H，CH3-C-O)，1.35(s，3H，CH3-C-O)，1.26(t，J＝7.1Hz，3H，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:178.5，171.2，168.6，149.6，147.2，146.8，127.7，123.1，116.5，115.1，115.0，110.4，78.6，76.1，75.5，72.5，62.4，42.0，37.7，35.3，28.4，26.2，14.4；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C23H29NNaO10:502.1689，found 502.1691.
实施例2绿原酸衍生物6a的制备
准确称取479mg(1.0mmol)绿原酸衍生物5a，加入三氟乙酸-二氯甲烷-水(体积比为9:1:1)中，反应1小时，得到绿原酸衍生物6a，白色粉末，收率为89％。
绿原酸衍生物6a的氢谱、碳谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.57(d，J＝15.8Hz，1H，H-7′)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95-6.94(m，1H，H-6′)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.29(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.44-5.39(m，1H，H-3)，4.25-4.24(m，1H，H-4)，4.19-4.15(m，2H，COOCH2CH3)，3.97-3.90(m，2H，NH-CH2)，3.72-3.70(m，1H，H-5)，2.19-2.17(m，1H，H-2)，2.09-2.06(m，1H，H-2)，2.02-1.98(m，2H，H-6)，1.27-1.24(m，3H，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:177.5，171.2，169.1，149.6，147.0，146.8，127.8，123.0，116.5，115.4，115.1，77.8，74.4，72.6，71.9，62.4，42.0，39.9，38.7，14.4；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C20H25NNaO10:462.1376，found462.1378.
实施例3绿原酸衍生物5b的制备
具体步骤同上述实施例1，不同之处在于将加入的甘氨酸乙酸乙酯盐酸盐换为丙氨酸乙酸乙酯盐酸盐。得到绿原酸衍生物5b，白色粉末，收率为81％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.57(d，J＝15.8Hz，1H，H-7′)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95(dd，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.28(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.47-5.43(m，1H，H-3)，4.56-4.53(m，1H，H-4)，4.37(q，J＝7.3Hz，1H，NHCHCH3)，4.21-4.16(m，3H，H-5，COOCH2CH3)，2.35-2.31(m，1H，H-2)，2.18-2.15(m，1H，H-2)，1.97-1.90(m，2H，H-6)，1.53(s，3H，CH3-C-O)，1.42(d，J＝7.3Hz，3H，NHCHCH3)，1.35(s，3H，CH3-C-O)，1.27(t，J＝7.2Hz，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:177.6，173.9，168.6，149.7，147.2，146.8，127.7，123.0，116.5，115.1，115.0，110.4，78.6，76.0，75.4，72.5，62.5，49.5，37.6，35.3，28.4，26.2，17.5，14.4；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C24H31NNaO10:516.1846，found516.1846.
实施例4绿原酸衍生物6b的制备
准确称取494mg(1.0mmol)绿原酸衍生物5b，加入三氟乙酸-二氯甲烷-水(体积比为9:1:1)中，反应1小时，得到绿原酸衍生物6b，白色粉末，收率为83％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.58(d，J＝15.8Hz，1H，H-7′)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95(m，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.30(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.43-5.39(m，1H，H-3)，4.37(q，1H，NHCH)，4.25-4.24(m，1H，H-4)，4.21-4.13(m，2H，COOCH2CH3)，3.72-3.70(m，1H，H-5)，2.15-2.12(m，1H，H-2)，2.06-1.99(m，3H，H-2，H-6)，1.41(d，J＝7.3Hz，1H，NHCHCH3)，1.26(m，J＝7.3Hz，3H，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:176.6，174.0，169.1，149.6，147.0，146.8，127.8，123.0，116.5，115.3，115.1，77.7，74.3，72.6，71.9，62.5，49.5，39.8，38.6，17.5，14.4；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C21H27NNaO10:476.1533，found476.1537.
实施例5绿原酸衍生物5c的制备
具体步骤同上述实施例1，不同之处在于将加入的甘氨酸乙酸乙酯盐酸盐换为苯丙氨酸乙酸乙酯盐酸盐。得到绿原酸衍生物5c，白色粉末，收率为72％。
具体实施例氢谱、质谱、碳谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.57(d，J＝15.9Hz，1H，H-7′)，7.04(d，J＝1.9Hz，1H，H-2′)，6.95(dd，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.27(d，J＝16.0Hz，1H，H-8′)，5.47-5.43(m，1H，H-3)，4.55-4.53(m，1H，H-4)，4.29(d，J＝5.4Hz，1H，NHCH)，4.25-4.16(m，3H，H-5，COOCH2CH3)，2.36-2.33(m，1H，H-2)，2.22-2.14(m，2H，H-2，NHCHCH)，1.96-1.91(m，2H，H-6)，1.53(s，3H，CH3-C-O)，1.34(s，3H，CH3-C-O)，1.28(t，J＝7.1Hz，COOCH2CH3)，0.97-0.92(m，6H，2×CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:177.7，172.7，168.6，149.7，147.3，146.9，127.6，123.1，116.5，115.1，115.0，110.4，78.6，76.2，75.4，72.4，62.4，58.8，37.9，35.1，32.1，28.4，26.2，19.4，18.2，14.5；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C26H35NNaO10:544.2159，found544.2161.
实施例6绿原酸衍生物6c的制备
准确称取522mg(1.0mmol)绿原酸衍生物5c，加入三氟乙酸-二氯甲烷-水(体积比为9:1:1)中，反应1小时，得到绿原酸衍生物6c，白色粉末，收率为79％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.58(d，J＝15.8Hz，1H，H-7′)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95(m，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.30(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.43-5.39(m，1H，H-3)，4.30-4.27(m，1H，NHCH)，4.25-4.23(m，1H，H-4)，4.22-4.17(m，2H，COOCH2CH3)，3.72-3.70(m，1H，H-5)，2.22-1.96(m，5H，H-2，H-6，NHCHCH)，1.28(t，J＝7.1Hz，COOCH2CH3)，0.95-0.93(m，6H，2×CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:176.7，172.7，169.0，149.6，147.1，146.8，127.7，123.0，116.5，115.3，115.1，77.9，74.3，72.6，71.8，62.4，58.7，40.2，38.5，32.1，19.4，18.2，14.5；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C23H31NNaO10:504.1846，found504.1849.
实施例7绿原酸衍生物5d的制备
具体步骤同上述实施例1，不同之处在于将加入的甘氨酸乙酸乙酯盐酸盐换为色氨酸乙酸乙酯盐酸盐。得到绿原酸衍生物5d，白色粉末，收率为78％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.56(d，J＝15.9Hz，1H，H-7′)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95(dd，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.27(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.46-5.42(m，1H，H-3)，4.55-4.53(m，1H，H-4)，4.43-4.41(m，1H，NHCH)，4.21-4.14(m，3H，H-5，COOCH2CH3)，2.35-2.31(m，1H，H-2)，2.18-2.15(m，1H，H-2)，1.94-1.92(m，2H，H-6)，1.71-1.64(m，3H，NHCHCH2CH)，1.53(s，3H，CH3-C-O)，1.34(s，3H，CH3-C-O)，1.26(t，J＝7.1Hz，COOCH2CH3)，0.95-0.94(m，3H，CH3)，0.92-0.91(s，3H，CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:177.8，173.9，168.6，149.7，147.3，146.8，127.7，123.1，116.5，115.1，115.0，110.4，78.6，76.1，75.4，72.5，62.4，52.1，41.4，37.7，35.3，28.4，26.2，26.0，23.3，21.9，14.5；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C27H37NNaO10:558.2315，found558.2319.
实施例8绿原酸衍生物6d的制备
准确称取536mg(1.0mmol)绿原酸衍生物5d，加入三氟乙酸-二氯甲烷-水(体积比为9:1:1)中，反应1小时，得到绿原酸衍生物6d，白色粉末，收率为82％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.58(d，J＝15.9Hz，1H，H-7′)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.95(m，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6’)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.30(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.43-5.39(m，1H，H-3)，4.44-4.41(m，1H，NHCH)，4.25-4.23(m，1H，H-4)，4.20-4.14(m，2H，COOCH2CH3)，3.72-3.70(m，1H，H-5)，2.13-2.00(m，4H，H-2，H-6)，1.71-1.63(m，3H，NHCHCH2CH)，0.95-0.94(m，3H，CH3)，0.92-0.91(s，3H，CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:176.8，173.9，169.1，149.6，147.1，146.8，127.8，123.0，116.5，115.3，115.2，77.8，74.3，72.6，71.9，62.4，52.1，41.4，39.9，38.6，26.1，23.3，21.9，14.5；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C23H31NNaO8:518.2002，found518.2009.
实施例9绿原酸衍生物5e的制备
具体步骤同上述实施例1，不同之处在于将加入的甘氨酸乙酸乙酯盐酸盐换为亮氨酸乙酸乙酯盐酸盐。得到绿原酸衍生物5e，白色粉末，收率为81％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.58(d，J＝15.8Hz，1H，H-7′)，7.27-7.24(m，2H，H-ph″)，7.19-7.17(m，3H，H-ph″)，7.06(d，J＝1.9Hz，1H，H-2′)，6.95(dd，J＝8.2Hz，1.9Hz，1H，H-6′)，6.79(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.28(d，J＝15.8Hz，1H，H-8′)，5.40-5.36(m，1H，H-3)，4.67-4.66(m，1H，NHCH)，4.52-4.50(m，1H，H-4)，4.19-4.14(m，3H，H-5，COOCH2CH3)，3.19(dd，J＝13.8Hz，5.6Hz，1H，ph″CH2)，3.06(dd，J＝13.8Hz，8.3Hz，1H，ph″CH2)，2.32-2.29(m，1H，H-2)，2.11-2.08(m，1H，H-2)，1.76-1.68(m，2H，H-6)，1.51(s，3H，CH3-C-O)，1.34(s，3H，CH3-C-O)，1.24(t，J＝7.2Hz，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:177.4，172.7，168.6，149.7，147.3，146.8，137.7，130.4，129.6，128.0，127.7，123.1，116.5，115.2，115.1，110.4，78.5，76.0，75.4，72.5，62.6，54.8，38.4，37.7，35.0，28.4，26.2，14.4；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C30H35NNaO10:592.2159，found592.2163.
实施例10绿原酸衍生物6e的制备
准确称取570mg(1.0mmol)绿原酸衍生物5e，加入三氟乙酸-二氯甲烷-水(体积比为9:1:1)中，反应1小时，得到绿原酸衍生物6e，白色粉末，收率为83％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.58(d，J＝15.9Hz，1H，H-7′)，7.27-7.24(m，2H，H-ph″)，7.19-7.17(m，3H，H-ph″)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.96(m，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.29(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.36-5.32(m，1H，H-3)，4.65-4.62(m，1H，NHCH)，4.21-4.20(m，1H，H-4)，4.18-4.14(m，2H，COOCH2CH3)，3.67-3.65(m，1H，H-5)，3.19-3.16(m，2H，NHCHCH2)，3.07-3.04(m，1H，NHCHCH2)，2.02-1.79(m，4H，H-2，H-6)，1.23(m，J＝7.3Hz，3H，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:176.5，172.6，169.0，149.6，147.0，146.8，137.8，130.4，129.5，128.0，127.8，123.0，116.5，115.3，115.1，77.7，74.3，72.5，71.8，62.5，54.7，39.9，38.5，38.3，14.4；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C27H31NNaO10:552.1846，found552.1850.
实施例11绿原酸衍生物5f的制备
具体步骤同上述实施例1，不同之处在于将加入的甘氨酸乙酸乙酯盐酸盐换为缬氨酸乙酸乙酯盐酸盐。得到绿原酸衍生物5f，白色粉末，收率为67％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.57(d，J＝15.9Hz，1H，H-7′)，7.50-7.49(m，1H，H-Indole″)，7.30-7.29(m，1H，H-Indole″)，7.08(s，1H，H-Indole″)，7.06-7.03(m，2H，H-2′，H-Indole″)，7.00-6.96(m，2H，H-6’，H-Indole″)，6.78(d，J＝8.1Hz，1H，H-5′)，6.27(d，J＝15.8Hz，1H，H-8′)，5.40-5.36(m，1H，H-3)，4.68-4.66(m，1H，NHCH)，4.50-4.48(m，1H，H-4)，4.15-4.09(m，3H，H-5，COOCH2CH3)，2.30-2.29(m，2H，Indole-CH2)，2.30-2.27(m，1H，H-2)，2.10-2.07(m，1H，H-2)，1.74-1.73(m，2H，H-6)，1.50(s，3H，CH3-C-O)，1.31(s，3H，CH3-C-O)，1.18(t，J＝7.3Hz，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:177.5，173.2，168.6，149.7，147.2，146.9，138.0，128.7，127.7，124.6，123.1，122.5，119.9，119.3，116.5，115.1，115.0，112.3，110.4，110.2，78.6，76.0，75.4，72.4，62.6，54.5，37.5，35.1，28.4，28.3，26.2，14.3；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C32H36N2NaO10:631.2268，found631.2269.
实施例12绿原酸衍生物6f的制备
准确称取609mg(1.0mmol)绿原酸衍生物5f，加入三氟乙酸-二氯甲烷-水(体积比为9:1:1)中，反应1小时，得到绿原酸衍生物6f，白色粉末，收率为80％。
具体实施例氢谱、质谱数据如下：
1H-NMR(600MHz，MeOD)δ:7.58(d，J＝15.9Hz，1H，H-7′)，7.50-7.49(m，1H，H-Indole″)，7.31-7.29(m，1H，H-Indole″)，7.07-7.05(m，3H，2H-Indole″，H-2′)，7.01-6.98(m，1H，H-Indole″)，6.96(m，J＝8.2Hz，2.0Hz，1H，H-6′)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H，H-5′)，6.30(d，J＝15.9Hz，1H，H-8′)，5.38-5.33(m，1H，H-3)，4.68-4.65(m，1H，NHCH)，4.20-4.19(m，1H，H4)，4.13-4.08(m，2H，COOCH2CH3)，3.67-3.65(m，1H，H-5)，3.30-3.29(m，2H，NHCHCH2)，2.01-1.85(m，4H，H-2，H-6)，1.17(m，J＝7.1Hz，3H，COOCH2CH3)；13C-NMR(150MHz，MeOD)δ:175.1，171.8，167.6，148.2，145.6，145.4，136.6，127.3，126.4，123.2，121.6，121.1，118.5，117.9，115.1，114.0，113.7，110.9，108.8，76.3，72.9，71.1，70.4，61.1，53.1，38.4，37.1，26.9，12.9；HRMS(ESI):Calcdfor[M+Na]+C29H32N2NaO10:591.1955，found591.1960.
试验例1细胞活力检测
使用MTT测定法检查细胞活力。用10μmol/L化合物处理96孔培养板中的HepG2细胞。将细胞孵育24小时，然后根据
Figure BDA0002768241420000101
Aqueous One Solution细胞增殖测定试剂盒(promega corpion，北京，中国)的说明将MTT试剂添加到每个孔中。使用酶标仪(ThermoFisher Ltd.，上海，中国)测量490nm处的吸光度。设定不同的12种绿原酸衍生物(1-12)组以及同等浓度的绿原酸(CA)，外加一个空白组(C)对照，实验结果绘制图1。实验结果显示12种绿原酸衍生物组的细胞活性与空白组相差无几，均近似100％，故12种绿原酸衍生物没有细胞毒性。
试验例2油红O降脂活性筛选
将96孔板中70-80％融合的细胞在无血清DMEM+油酸(OA)(100μmol/L)、10μmol/L绿原酸、绿原酸衍生物5a-f，6a-f中孵育或阳性对照辛伐他汀(10μmol/L)持续24h。然后将细胞在室温下用4％w/v甲酰甲醛固定30分钟，并在室温下用过滤的油红O染色溶液(将两体积的0.5％油红O储备溶液与三体积的ddH2O混合制备)进行染色15分钟，将油红O与DMSO重溶，并通过Tecan Infinite M1000Pro微孔板读数器和分光光度法在358nm下进行测量。油红O染色结果表明，经过24h油酸诱导给药，部分绿原酸衍生物具有显著的降脂活性。如图2所示，用绿原酸衍生物6c、6d、6e和6f比绿原酸(CA)具有更好的调节作用。
试验例3TG含量测定
将6孔板中70-80％融合的HepG2细胞在无血清DMEM+OA(100μmol/L)、10μmol/L绿原酸、绿原酸衍生物5a-f，6a-f或阳性对照辛伐他汀中孵育(10μmol/L)进行24小时。如甘油三酸酯定量试剂盒的方案所述，对细胞进行TG定量。每个实验一式两份，每种化合物有三个孔。测定结果表明，部分绿原酸衍生物能够显著地降低细胞的TG含量。如图3所示，绿原酸衍生物5d、6c、6d、6e和6f降低细胞TG含量的能力优于绿原酸原型(CA)，绿原酸衍生物6c、6d降低细胞TG含量的能力优于辛伐他汀。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种绿原酸衍生物，其特征在于，具有通式(Ⅰ)所示的结构：
Figure FDA0003628753000000011
式中：R6为H原子；
R4和R5为H原子；
R2和R3为H原子或丙叉基；
R1具有通式(Ⅱ)所示的结构：
Figure FDA0003628753000000012
上式中R选自-H、-CH3、-CH-(CH3)2、-CH2-CH(CH3)2、-CH2-C6H5、
Figure FDA0003628753000000013
2.一种如权利要求1所述的绿原酸衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将绿原酸与2,2-二甲氧基丙烷反应生成中间体7，反应式如下：
Figure FDA0003628753000000014
(2)将中间体7与氨基酸酯盐酸盐发生缩合反应生成绿原酸衍生物(I)-1，此时通式(I)中R2和R3为丙叉基，反应式如下：
Figure FDA0003628753000000021
3.根据权利要求2所述的绿原酸衍生物的制备方法，其特征在于，在步骤(2)之后还包括：
(3)将绿原酸衍生物(I)-1进行脱保护反应生成绿原酸衍生物(I)-2，此时通式(I)中R2和R3为H原子，反应式如下：
Figure FDA0003628753000000022
4.根据权利要求2所述的绿原酸衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(1)和(2)具体为：
(1)以对甲苯磺酸为催化剂，绿原酸和2,2-二甲氧基丙烷在无水丙酮中反应生成中间体7；
(2)中间体7在BOP和N,N-二异丙基乙胺的缩合条件下，在无水乙腈和四氢呋喃的混合溶剂中，与氨基酸酯盐酸盐发生缩合反应生成绿原酸衍生物(I)-1。
5.根据权利要求3所述的绿原酸衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(3)具体为：
(3)将绿原酸衍生物(I)-1在三氟乙酸、二氯甲烷和水的混合溶液中脱去丙酮叉保护，得到绿原酸衍生物(I)-2。
6.一种药物组合物，其特征在于，包括根据权利要求1所述的绿原酸衍生物和药用载体。
7.根据权利要求6所述药用组合物，其特征在于：所述的药用组合物为胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂，或者为注射剂型。
8.权利要求1所述的绿原酸衍生物在制备预防和/或治疗高血脂症药物中的用途。
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