CN101597291A - 2-(氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具有抗肿瘤活性的通式I化合物及其制备方法，本发明还公开了它们作为抗肿瘤剂的应用。通式I中，AA选自缬氨酸、天冬氨酸－4－环己酯、谷氨酰胺、叔丁氧羰基赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、O－苄基丝氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、叔丁氧羰基组氨酸、蛋氨酸、谷氨酸－5－环己酯、天冬酰胺、脯氨酸、硝基精氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基。本发明采用细胞模型评价了通式I化合物的体外抗肿瘤活性，实验结果表明通式I化合物具有优秀的抗肿瘤细胞增殖活性。采用S180小鼠模型评价了通式I化合物的抗肿瘤作用，实验结果表明通式I化合物具有优秀的抗肿瘤作用，临床上可作为抗肿瘤剂应用。
Description
技术领域
本发明涉及咔啉羧酸的衍生物，尤其涉及具有抗肿瘤活性的2-(氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯及其制备方法，本发明还涉及它们作为抗肿瘤抑制剂的应用，属于生物医药领域。
背景技术
恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因恶性肿瘤而引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放射治疗和药物治疗(化学治疗)。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段。寻找抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。发明人认识到，将四氢咔啉羧酸和L-色氨酸偶联后再羧基端引入氨基酸可能产生抗肿瘤作用。按照这种构想，发明人提出本发明。
发明内容
本发明目的之一是提供一类具有抗肿瘤活性的化合物；
本发明目的之二是提供一种制备上述具有抗肿瘤活性化合物的方法；
本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的：
具有抗肿瘤活性的通式I化合物：
其中，AA选自缬氨酸残基、天冬氨酸-4-环己酯、谷氨酰胺残基、叔丁氧羰基赖氨酸残基、亮氨酸残基、丙氨酸残基、色氨酸残基、O-苄基丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、甘氨酸残基、叔丁氧羰基组氨酸残基、蛋氨酸残基、谷氨酸-5-环己酯、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、硝基精氨酸残基、苏氨酸残基或酪氨酸残基。
一种制备上述通式I化合物的方法，该方法包括：
(1)(在NaOH、(Boc)2O和二氧六环存在下)将色氨酸转变为Boc-色氨酸；
(2)(在稀H2SO4和甲醛的存在下)将色氨酸转变为β-四氢咔啉-3-羧酸；
(3)(在多聚磷酸和苄醇存在下加热)将β-四氢咔啉-3-羧酸转变为β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；
(4)(在SOCl2和甲醇存在下)将L-色氨酸转变为L-色氨酸甲酯；
(5)(在DCC、HoBt存在下)将Boc-L-氨基酸与L-色氨酸甲酯缩合制备Boc-氨基酰色氨酸甲酯；
(6)(在NaOH、甲醇的存在下，冰浴条件下)将Boc-氨基酰色氨酸甲酯转化为Boc-氨基酰色氨酸；
(7)(在DCC、HoBt存在下)将Boc-氨基酰色氨酸和β-四氢咔啉羧酸苄酯缩合为2-(Boc-氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；
(8)(在HOAc、氯化氢和乙酸乙酯的存在下)将2-(Boc-氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯转变为2-(氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯。
其中，步骤(6)中所述的Boc-L-氨基酸选自Boc-L-缬氨酸、Boc-L-天冬氨酸-4-环己酯、Boc-L-谷氨酰胺、Boc-L-叔丁氧羰基赖氨酸、Boc-L-亮氨酸、Boc-L-丙氨酸、Boc-L-色氨酸、Boc-L-O-苄基丝氨酸、Boc-L-苯丙氨酸、Boc-L-异亮氨酸、Boc-甘氨酸、Boc-L-叔丁氧羰基组氨酸、Boc-L-蛋氨酸、Boc-L-谷氨酸-5-环己酯、Boc-L-天冬酰胺、Boc-L-脯氨酸、Boc-L-硝基精氨酸、Boc-L-苏氨酸或Boc-L-酪氨酸。
本发明的又一目的是提供一种治疗肿瘤的药用组合物，该药用组合物由治疗上有效剂量的本发明通式I化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂组成，即将有效量的本发明通式I化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法。该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等液体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有0.1％-99％重量，优选10-60％重量的本发明化合物。
本发明在肿瘤细胞模型和小鼠S180肉瘤模型上评价本发明通式I化合物(4a-t)的抗肿瘤活性。实验结果表明，本发明通式1化合物具有优秀的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂应用。
附图说明
图1本发明通式1化合物的结构式。
图2本发明通式1化合物的合成路线图。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1.制备Boc-L-氨基酸
冰浴下2mmol先将L-氨基酸溶于10ml NaOH水溶液(2N)，然后加入4.9g(2.2mmol)(Boc)2O与5ml 1，4-二氧六环的溶液。搅拌反应。反应过程中需要减压抽去生成的CO2气体。反应约需要48小时。TLC检测反应结束后，减压蒸去1，4-二氧六环，残留物用饱和KHSO4水溶液调pH 2，50ml乙酸乙酯萃取三次，合并的乙酸乙酯层用饱NaCl水溶液洗三次后用无水NaSO4干燥过夜，过滤、滤液减压浓缩得到的无色固体用乙酸乙酯-石油醚重结晶。产率在80％-96％之间。依此通法合成了Boc-L-缬氨酸、Boc-L-谷氨酰胺、Boc-L-(Boc)赖氨酸、Boc-L-亮氨酸、Boc-L-丙氨酸、Boc-L-色氨酸、Boc-L-O-苄基丝氨酸、Boc-L-苯丙氨酸、Boc-L-异亮氨酸、Boc-L-甘氨酸、Boc-L-(Boc)组氨酸、Boc-L-蛋氨酸、Boc-L-天冬酰胺、Boc-L-脯氨酸、Boc-L-苏氨酸和Boc-L-酪氨酸等16种叔丁氧羰基保护的L-氨基酸。
实施例2制备β-四氢咔啉-3-羧酸
将400ml水置于500的圆底烧瓶中，缓慢加入0.2浓硫酸摇匀.在得到的稀硫酸溶液中加入5.0g(24.5mmol)L-色氨酸。搅拌至L-色氨酸完全溶解，往得到的溶液中加入10ml浓度为35％的甲醛，搅拌10min后析出大量固体，TLC板检测L-色氨酸原料点消失，停止搅拌，在反应液中缓慢滴入8ml氨水，调pH7，静置6h，减压滤出生成的沉淀，用水冲洗几次，干燥得4.9g(95％)标题化合物，为浅黄色固体。MP：ESI-MS(m/z)：217[M+H]+.
实施例3制备β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯
取2g多聚磷酸加热搅拌使之溶于20ml苄醇(加热温度不高于50℃)，待完全溶解后加入1g β-四氢咔啉-3-羧酸，升温至80℃搅拌使之溶解，反应液由黄绿色逐渐变棕色，TLC板检测反应12小时，β-四氢咔啉-3-羧酸消失后冷却，加入50ml乙醚和70ml水强力搅拌过夜，有大量黄色固体析出，过滤，得到的黄色块状固体用乙醚和水反复洗，得到1.3g粉末状浅黄色咔啉羧酸苄酯磷酸盐。该盐混悬于乙酸乙酯和水的混合液中，冰浴下滴加三乙胺溶液至反应液中无不溶颗粒且反应液透明。继续搅拌6h，分出的乙酸乙酯层用5％碳酸氢钠水溶液洗6次，饱和氯化钠水溶液洗3次，分出乙酸乙酯层用无水硫酸钠固体干燥、过滤、滤液减压浓缩，残留物重结晶得0.9g(67％)标题化合物，为浅黄白色粉末。ESI(m/e)307[M+H]+。
实施例4制备L-色氨酸甲酯盐酸盐
50ml无水甲醇在冰浴下滴加3.75ml(50mmol)氯化亚砜，30min内滴加完毕后，分批加入10g(42mmol)L-色氨酸，室温搅拌24h，TLC(CHCl3/MeOH＝2∶3)监测至原料消失终止反应。水泵抽走未反应完的氯化亚砜SOCl2和HCl，用乙醚反复研磨得无色固体，甲醇-乙醚重结晶，得14.8g(95％)L-色氨酸甲酯盐酸盐为无色固体。
实施例5制备Boc-氨基酰色氨酸甲酯的通法
将11.8mmol Boc-AA溶于35ml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里加1.4g(14.2mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)、2.1g(14.2mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)和15ml无水四氢呋喃(THF)的溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟后加入2.9g(9.5mmol)L-色氨酸甲酯与6ml无水四氢呋喃(THF)并用N-甲基吗啉调节(NMM)调pH9的溶液。得到的混合液室温反应24h，TLC(展开剂CHCl3∶MeOH＝10∶1)显示咔啉羧酸苄酯消失。停止反应，滤除二环己基脲(DCU)，滤液减压浓缩至干。残留物用乙酸乙酯溶解，乙酸乙酯溶液分别用饱和NaHCO3水溶液，5％KHSO4水溶液，饱和NaCl水溶液洗5次。分出的乙酸乙酯溶液用无水Na2SO4干燥过夜。滤除Na2SO4，滤液减压浓缩，得到无色固体，收率在70％-86％之间。
实施例6Boc-氨基酰色氨酸的制备通法
在50ml的圆底烧瓶中加入1.12mmol化合物Boc-氨基酰色氨酸甲酯，适量甲醇，搅拌至澄清。冰浴冷却下加入氢氧化钠水溶液(2)，冰浴反应10h.，TLC监测原料斑点消失，缓慢加入2N盐酸调节反应液pH 7，减压回收溶剂，残留物用20ml乙酸乙酯和20ml水溶解，继续缓慢加入2N盐酸调节水相pH 2，水相用乙酸乙酯提取(20ml×3)，乙酸乙酯层弃去，水层用固体氢氧化钠调节pH 7，析出大量固体，过滤，滤饼用水洗涤，干燥，得标题化合物。
实施例7 2-(Boc-氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯的制备通法
冰浴下往2.4mmol Boc-氨基酰色氨酸与15ml无水四氢呋喃(THF)的溶液中里加600mg(2.5mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)、800mg(2.5mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)和10ml无水四氢呋喃(THF)的溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟后加入3.6g(2.4mmol)咔啉羧酸苄酯和6ml无水四氢呋喃(THF)并用N-甲基吗啉调节pH9的溶液。得到的反应混合物室温反应过夜。TLC(展开剂CHCl3∶MeOH＝10∶1)显示咔啉羧酸苄酯消失。停止反应，滤除二环己基脲(DCU)，滤液减压浓缩至干。残留物用乙酸乙酯溶解，乙酸乙酯溶液分别用饱和NaHCO3水溶液，5％KHSO4水溶液，饱和NaCl水溶液洗5次。分出的乙酸乙酯溶液用无水Na2SO4干燥过夜。滤除Na2SO4，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析纯化得标题化合物。
实施例8 2-(Boc-缬氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3a)的数据
1.31g(63.3％)。Mp 111-114℃；ESI(m/e)364[M+H]+；[α]D 20＝41.00(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.87(d，J＝10Hz，1H)，8.33(t，J＝7.5Hz，1H)，7.67(d，J＝5Hz，1H)，7.51(d，J＝10Hz，1H)，7.41(m，4H)，7.21(m，4H)，4.95(s，1H)，4.33(m，4H)，4.18(m，2H)，4.03(t，J＝10Hz，1H)，3.305(d，J＝5Hz，1H)，3.14(m，2H)，1.38(s，3H)，0.83(s，3H)。
实施例9 2-(Boc-γ-环己酯基谷氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3b)的数据
1.06g(60.6％)。Mp 121-124℃；ESI(m/e)364[M+H]+；[α]D 20＝36.33(c＝1.0，甲醇)1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.80(s，1H)，8.01(s，1H)，8.65(d，J＝5Hz，1H)，8.27(d，J＝5Hz，1H)，7.65(d，J＝10Hz，1H)，7.515(d，J＝10Hz，1H)，7.20(m，4H)，7.18(m，4H)，5.64(d，J＝10Hz，2H)，4.99(m，2H)，4.22(s，1H)，3.26(s，1H)，3.12(m，2H)，1.35(s，4H)。
实施例10 2-(Boc-谷氨酰胺酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(1c)的数据
0.53g(74.6％)。Mp 165-167℃；ESI(m/e)721[M+H]+；[α]D 20＝16.86(c＝1.0，甲醇)1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.93(s，1H)，8.33(s，1H)，7.63(m，5H)，7.31(m，4H)，7.11(t，J＝10Hz，1H)，5.64(d，J＝10Hz，2H)，5.61(d，J＝5Hz，2H)，5.14(q，J＝15Hz，1H)，4.27(d，J＝15Hz，2H)，3.15(m，2H)，2.27(q，J＝5Hz，2H)，2.10(s，2H)，1.26(t，1H)。
实施例11 2-(Boc-赖氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3d)的数据
1.43g(79.4％)。Mp 109-111℃；ESI(m/e)830[M+H]+；[α]D 20＝49.43(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.90(d，J＝15Hz，1H)，8.45(d，J＝5Hz，1H)，8.36(d，J＝10Hz，1H)，7.36(d，J＝10Hz，1H)，7.22(m，5H)，7.19(m，4H)，7.13(m，3H)，5.74(d，J＝5Hz，2H)，4.99(m，2H)，4.49(d，J＝5Hz，2H)，3.09(d，J＝5Hz，1H)，2.88(m，3H)，1.37(s，3H)，1.22(s，6H)，1.05(m，9H)。
实施例13 2-(Boc-亮氨酰-色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3e)的数据
1.31g(63.3％).Mp：123-155℃；ESI(m/e)707[M+H]+；[α]D 20＝72.93(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.94(d，J＝15Hz，1H)，8.31(d，J＝10Hz，1H)，7.56(dd，J＝10Hz，J＝5Hz，1H)，7.23(m，5H)，7.19(m，5H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，5.88(s，2H)，5.33(dd，J＝20Hz，J＝15Hz，1H)，4.86(m，2H)，2.97(m，2H)，1.41(m，2H)，1.38(s，3H)，0.87(d，J＝5Hz，3H)。
实施例14 2-(Boc-丙氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3f)的数据
1.66g(73.2％)；Mp 115-117℃；ESI (m/e)664[M+H]+；[α]D 20＝71.16(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.95(d，J＝15Hz，1H)，8.58(d，J＝5Hz，1H)，7.226(t，J＝10Hz，1H)，7.22(m，5H)，7.16(m，4H)，6.76(dd，J＝10Hz，J＝5Hz，1H)，5.68(d，J＝5Hz，1H)，5.30(s，2H)，5.08(m，2H)，4.25(t，J＝7.5Hz，2H)，3.97(m，2H)，1.41(s，3H)，1.38(s，3H)。
实施例15 2-(Boc-色氨酰-色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3g)的数据
1.22g(69.23％)；Mp 137-139℃；ESI(m/e)801[M+H]+；[α]D 20＝20.90(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.91(d，J＝10Hz，1H)，8.43(d，J＝10Hz，1H)，8.23(d，J＝5Hz，1H)，7.66(d，J＝5Hz，1H)，7.51(m，4H)，7.25(m，4H)，7.03(m，4H)，6.37(s，1H)，5.21(d，J＝5Hz，2H)，5.03(d，J＝5Hz，2H)，4.50(t，J＝7.5Hz，1H)，4.26(q，J＝5Hz，1H)，3.00(q，J＝5Hz，2H)，1.40(s，3H)。
实施例16 2-(Boc-O-苄基丝氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3h)的数据
0.89g(79.4％)；Mp：100-104℃；ESI(m/e)758[M+H]+；[α]D 20＝20.36(c 1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.92(s，1H)，10.85(s，1H)，8.42(q，J＝5Hz，1H)，7.53(d，J＝10Hz，1H)，7.47(t，J＝7.5Hz，1H)，7.22(m，4H)，7.19(m，4H)，6.84(d，J＝5Hz，1H)，6.34(s，1H)，5.19(t，J＝5Hz，1H)，5.01(d，J＝5Hz，2H)，4.73(q，J＝5Hz，2H)，3.54(t，J＝？？Hz，2H)，1.37(s，3H)。
实施例17 2-(Boc-异亮氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3i)的数据
1.20g(73.3％)；Mp 100-103℃；ESI(m/e)706[M+H]+；[α]D20＝-40.93(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.88(s，1H)，8.14(d，J＝5Hz，1H)，8.13(s，1H)，7.55(d，J＝10Hz，1H)，7.35(t，J＝7.5Hz，1H)，7.33(t，J＝7.5Hz，1H)，7.17(m，4H)，7.14(m，4H)，7.09(d，J＝5Hz，1H)，6.99(s，1H)，5.43(d，J＝5Hz，2H)，5.01(d，J＝10Hz，2H)，4.98(t，J＝10Hz，2H)，3.90(t，J＝5Hz，1H)，3.26(d，J＝10Hz，1H)，2.99(m，1H)，1.37(s，3H)1.28(m，2H)，1.155(d，J＝5Hz，2H)，0.78(t，J＝5Hz，3H)。
实施例18 2-(Boc-苯丙氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3j)的数据
1.32g(73.1％)；Mp：101-103℃；ESI(m/e)740[M+H]+；[α]D 20＝75.53(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.99(s，1H)，10.87(d，J＝5Hz，1H)，8.37(d，J＝5Hz，1H)，7.94(d，J＝10Hz，1H)，7.36(t，J＝7.5Hz，1H)，7.30(m，4H)，7.21(m，4H)，6.99(m，4H)，5.08(s，2H)，5.00(d，J＝5Hz，2H)，4.88(q，J＝5Hz，1H)，4.31(t，J＝5Hz，1H)，4.25(d，J＝5Hz，1H)，3.17(d，J＝5Hz，2H)，2.50(s，2H)，1.37(s，3H)。
实施例19 2-(Boc-甘氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3k)的数据
1.25g(73.7％)；Mp 102-105℃；ESI(m/e)650[M+H]+；[α]D 20＝18.50(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.87(d，J＝5Hz，1H)，10.82(s，1H)，8.43(dd，J＝10Hz，J＝5Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.52(d，J＝5Hz，1H)，7.41(d，J＝10Hz，1H)，7.22(m，4H)，7.18(m，4H)，7.01(d，J＝15Hz，1H)，6.38(d，J＝5Hz，2H)，5.01(d，J＝5Hz，1H)，4.87(d，J＝5Hz，2H)，4.27(s，1H)，4.03(s，1H)，3.06(dd，J＝10Hz，J＝5Hz，2H)，1.39(s.3H)。
实施例20 2-(Boc-组氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3l)的数据
1.65g(59.66％)；Mp 115-116℃；ESI(m/e)730[M+H]+；[α]D 20＝19.67(c＝1.0，甲醇)；1HNMR(CDCl3)：δ/ppm＝13.1(s，1H)，10.94(s，1H)，10.86(s，1H)，10.80(s，1H)，7.45(s，1H)，7.41(d，J＝5Hz，1H)，7.22(m，5H)，7.19(m，4H)，5.89(s，1H)，5.81(d，J＝7.5Hz，1H)，5.65(d，J＝5Hz，1H)，4.87(s，2H)，4.59(d，J＝7.5Hz，2H)，3.61(s，2H)，3.81(t，J＝7.5Hz，1H)，3.06(d，J＝5Hz，2H)，3.00(d，J＝10Hz，2H)，2.51(m，1H)，1.99(s，2H)，1.39(s，9H)。
实施例21 2-(Boc-蛋氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3m)的数据
0.99g(58.0％)；Mp 96-97℃；ESI(m/e)746[M+H]+；[α]D 20＝43.30(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.91(d，J＝15Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.57(d，J＝10Hz，1H)，7.30(m，5H)，7.18(m，4H)，6.97(d，J＝5Hz，1H)，5.88(d，J＝5Hz，2H)，4.63(t，J＝7.5Hz，2H)，3.45(d，J＝5Hz，2H)，2.95(q，J＝10Hz，2H)，2.32(s，3H)，1.39(s，3H)。
实施例22 2-(Boc-γ-环己酯谷氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3n)的数据
1.11g(66.3％)；Mp 72.6-76.3℃；ESI(m/e)834[M+H]+；[α]D 20＝11.36(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.95(d，J＝10Hz，1H)，8.46(d，J＝5Hz，1H)，8.37(d，J＝5Hz，1H)，7.47(d，J＝5Hz，1H)，7.35(t，J＝5Hz，1H)，7.22(m，4H)，7.18(m，4H)，5.62(d，J＝5Hz，2H)，5.13(m，1H)，4.92(s，2H)，3.36(m，2H)，1.31(s，3H)。
实施例23 2-(Boc-天冬酰氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3o)的数据
1.03g(44.4％)；Mp 101-102℃；ESI(m/e)726[M+H]+；[α]D 20＝7.70(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.89(s，1H)，10.72(s，1H)，8.14(d，J＝5Hz，1H)，7.54(d，J＝5Hz，1H)，7.47(d，J＝5Hz，1H)，7.22(m，5H)，7.18(m，4H)，5.18(d，J＝10Hz，2H)，4.52(t，J＝7.5Hz，1H)，4.12(t，J＝7.5Hz，1H)，4.08(s，2H)，3.58(t，J＝5Hz，1H)，3.35(d，J＝10Hz，2H)，3.12(m，2H)，2.46(d，J＝5Hz，2H)，1.39(s，3H)。
实施例24 2-(Boc-脯氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3p)的数据
0.89g(77.1％)；Mp 126-127℃；ESI(m/e)690[M+H]+；[α]D 20＝22.46(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.84(d，J＝10Hz，1H)，7.66(d，J＝5Hz，1H)，7.64(m，1H)，7.22(m，4H)，7.20(m，4H)，5.89(d，J＝10Hz，2H)，4.29(m，2H)，4.20(t，J＝10Hz，2H)，3.65(m，2H)，3.08(m，2H)，1.36(s，3H)。
实施例25 2-(Boc-硝基精氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3r)的数据
0.96g(71.3％)；Mp 102-105℃；ESI(m/e)795[M+H]+；[α]D 20＝35.64(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.88(s，1H)，10.85(s，1H)，8.31(d，J＝10Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.64(d，J＝10Hz，1H)，7.54(d，J＝10Hz，1H)，7.47(d，J＝5Hz，1H)，7.22(m，4H)，7.17(m，4H)，5.30(d，J＝10Hz，2H)，5.13(t，J＝7.5Hz，2H)，4.81(m，2H)，4.13(t，J＝5Hz，2H)，3.56(t，J＝5Hz，2H)，2.09(s，1H)，1.41(m，1H)，1.35(s，3H)。
实施例26 2-(Boc-苏氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3s)的数据
1.02g(73.7％)；Mp 115-117℃；ESI(m/e)694[M+H]+；[α]D 20＝21.65(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.89(t，J＝5Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.11(d，J＝10Hz，1H)，7.49(d，J＝10Hz，1H)，7.35(m，5H)，7.18(m，4H)，7.08(q，J＝10Hz，1H)，4.87(d，J＝15Hz，2H)，4.05(m，2H)，3.11(m，2H)，3.09(m，2H)，2.10(s，1H)，1.40(s，3H)，1.01(s，3H)。
实施例27 2-(Boc-酪氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(3t)的数据
1.03g(33.7％)；Mp 111-113℃；ESI-MS(m/e)778[M+H]+；[α]D 20＝19.63(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.06(d，J＝10Hz，1H)，8.00(d，J＝5Hz，1H)，7.72(d，J＝10Hz，1H)，7.54(t，J＝7.5Hz，1H)，7.22(m，5H)，7.18(m，5H)，6.68(d，J＝10Hz，1H)，5.61(d，J＝5Hz，1H)，4.28(m，2H)，3.48(m，2H)，2.93(d，J＝10Hz，2H)，1.43(s，3H)。
实施例28 2-(氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯的制备通法
将3.18mmol 2-(Boc-氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯置于50mL茄形瓶中并用2mL乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中缓慢滴入2mL 4N HCl/EtOAc。反应混合物0℃搅拌3小时后减压浓缩至干，加10ml左右乙醚反复抽取3-4次，甲醇-乙醚重结晶，得到标题化合物。
实施例29 2-(缬氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4a)的数据
0.076g(83.2％)；ESI(m/e)590[M-H]-.[α]D 20＝19.30(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.92(s，1H)，8.19(s，1H)，7.25(t，J＝5Hz，1H)，7.22(m，5H)，7.19(m，4H)，7.14(t，1H)，7.00(d，J＝5Hz，1H)，6.94(d，J＝3Hz，1H)，6.92(s，1H)，5.45(s，2H)，5.00(t，J＝10Hz，1H)，4.98(t，J＝5Hz，1H)，4.96(s，2H)，3.45(m，1H)，3.16(d，J＝7.5Hz，2H)，3.02(d，J＝7.5Hz，2H)，2.51(m，1H)，0.98(d，J＝7.5Hz，6H)。
实施例30 2-(5-环己酯-谷氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4b)的数据
0.113g(84.6％)；ESI(m/e)701[M-H]-.[α]D 20＝11.6(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.95(s，1H)，7.99(s，1H)，7.21(m，5H)，7.18(m，4H)，6.54(d，J＝5Hz，1H)，5.53(s，2H)，4.95(m，1H)，4.70(t，J＝7.5Hz，1H)，4.65(s，2H)，4.20(m，2H)，3.81(m，1H)，3.06(d，J＝5Hz，2H)，2.91(d，J＝10Hz，2H)，2.82(d，J＝7.5Hz，2H)，1.99(s，2H)，1.77(m，2H)，1.47(m，2H)，1.40(m，2H)。
实施例31 2-(赖氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4d)的数据
0.120g(81.3％)；ESI(m/e)619[M-H]-.[α]D 20＝59.36(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.94(s，1H)，8.09(s，2H)，7.20(m，5H)，7.17(m，4H)，7.12(t，J＝10Hz，H)，6.98(d，J＝7.5Hz，1H)，6.93(d，J＝7.5Hz，1H)，5.19(s，2H)，5.01(m，1H)，5.00(s，2H)，8.09(t，J＝7.5Hz，H)，8.09(s，2H)，3.49(m，1H)，3.13(d，J＝7.5Hz，2H)，3.03(d，J＝5Hz，2H)，2.51(m，2H)，2.09(s，2H)，1.79(m，2H)，1.55(m，2H)，1.18(m，2H)。
实施例32 2-(亮氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4e)的数据
0.059g(91.2％)；ESI(m/e)604[M-H]-.[α]D 20＝25.90(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.89(s，1H)，8.18(s，1H)，7.25(t，J＝5Hz，1H)，7.19(m，5H)，7.18(m，4H)，7.14(t，J＝5Hz，1H)，6.98(d，J＝5Hz，1H)，6.94(d，J＝5Hz，1H)，6.92(s，1H)，5.33(d，J＝5Hz，2H)，5.01(s，2H)，4.98(t，J＝7.5Hz，1H)，4.99(m，1H)，3.46(m，1H)，3.16(d，J＝7.5Hz，2H)，3.04(d，J＝5Hz，2H)，2.07(s，2H)，1.92(m，1H)，1.78(t，J＝5Hz，1H)，0.92(d，J＝5Hz，6H)。
实施例33 2-(丙氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4f)的数据
0.074g(89.4％)；ESI(m/e)562[M-H]-.[α]D20＝51.46(c1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.88(s，1H)，8.19(s，1H)，7.25(t，J＝5Hz1H)，7.22(t，J＝7.51H)，7.20(m，5H)，7.19(m，4H)，7.01(d，J＝5Hz，1H)，6.96(d，J＝7.5Hz，1H)，6.94(s，1H)，5.90(s，2H)，5.01(d，J＝7.5Hz，1H)，5.00(m，1H)，4.27(s，2H)，3.81(m，1H)，3.19(d，J＝7.5Hz，2H)，3.04(d，J＝5Hz，2H)，1.99(s，2H)，1.23(d，J＝5Hz，3H)。
实施例34 2-(色氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4g)的数据
0.085g(82.3％)；ESI(m/e)677[M-H]-.[α]D 20＝33.5(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.93(s，1H)，8.13(s，1H)，7.36(t，J＝5Hz，1H)，7.27(t，J＝7.5Hz，1H)，7.19(m，5H)，7.17(m，4H)，6.93(d，J＝5Hz，1H)，6.89(d，J＝7.5Hz，1H)，5.34(d，J＝5Hz，2H)，4.95(m，1H)，4.94(t，J＝7.5Hz，1H)，4.75(s，2H)，4.02(m，1H)，3.16(d，J＝10Hz，2H)，3.06(d，J＝7.5Hz，2H)，2.96(d，J＝7.5Hz，2H)，1.99(s，2H)。
实施例35 2-(O-苄基丝氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4h)的数据
0.103g(85.4％)；ESI(m/e)654[M-H]-.[α]D 20＝19.47(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.97(s，1H)，8.33(s，1H)，7.27(m，1H)，7.19(m，5H)，7.17(m，4H)，7.16(m，1H)，7.02(d，J＝5Hz，1H)，7.01(d，J＝5Hz，1H)，6.97(s，1H)，5.34(s，2H)，5.04(m，1H)，4.89(s，2H)，4.64(s，2H)，4.62(t，J＝7.5Hz，1H)，4.09(m，1H)，3.94(d，J＝5Hz，2H)，3.75(d，J＝7.5Hz，2H)，3.15(d，J＝7.5Hz，2H)，3.08(d，J＝10Hz，2H)，2.18(s，2H)。
实施例36 2-(异亮氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4i)的数据
0.086g(91.0％)；ESI(m/e)604[M-H]-.[α]D 20＝43.60(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.91(s，1H)，8.20(s，1H)，7.27(t，J＝7.5Hz 1H)，7.21(m，5H)，7.18(m，4H)，7.16(t，J＝5Hz，1H)，7.00(d，J＝5Hz，1H)，6.95(d，J＝5Hz，1H)，6.94(s，1H)，5.00(t，J＝7.5Hz，1H)，4.95(m，1H)，4.82(s，2H)，3.63(m，1H)，3.14(d，J＝5Hz，2H)，3.03(d，J＝7.5Hz，2H)，2.50(m，H)，1.92(s，2H)，1.24(m，2H)，1.09(d，J＝10Hz，3H)，0.92(q，J＝7.5Hz，3H)。
实施例37 2-(苯丙氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4j)的数据
0.095g(92.6％)；ESI(m/e)638[M-H]-.[α]D 20＝16.10(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.95(s，1H)，8.22(s，1H)，7.28(t，J＝7.5Hz，1H)，7.24(t，J＝7.5Hz，1H)，7.21(m，5H)，7.18(m，4H)，7.08(t，J＝5Hz，1H)，7.01(d，J＝5Hz，1H)，6.97(d，J＝5Hz，1H)，6.91(s，1H)，5.49(s，2H)，4.96(m，1H)，4.95(m，1H)，4.14(m，1H)，3.15(dd，J＝7.5Hz，J＝5.0Hz，4H)，3.08(d，J＝7.5Hz，2H)，1.92(s，2H)。
实施例38 2-(甘氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4k)的数据
0.063g(90.3％)；ESI(m/e)547[M-H]-[α]D 20＝14.86(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.89(s，1H)，9.92(s，1H)，8.12(s，1H)，7.26(m，1H)，7.23(m，5H)，7.19(m，4H)，7.17(t，J＝7.5Hz，1H)，7.07(q，J＝7.5Hz，J＝7.5Hz，2H)，7.03(s，1H)，8.09(s，2H)，5.06(d，J＝5Hz，2H)，4.95(m，1H)，4.74(s，2H)，3.54(t，J＝7.5Hz，2H)，3.06(d，J＝5Hz，2H)，3.00(d，J＝7.5Hz，2H)，1.99(s，2H)。
实施例39 2-(组氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4l)的数据
0.076g(83.6％)；ESI(m/e)628[M-H]-.[α]D 20＝19.90(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.94(s，2H)，8.45(s，2H)，7.44(d，J＝7.5Hz，1H)，7.21(m，5H)，7.18(m，4H)，7.16(t，J＝7.5Hz，1H)，6.97(d，J＝7.5Hz，1H)，6.90(d，J＝7.5Hz，1H)，6.68(d，J＝5Hz，1H)，5.10(s，2H)，5.04(s，1H)，5.01(m，1H)，3.84(m，1H)，3.18(d，J＝5Hz，2H)，2.90(d，J＝7.5Hz，2H)，2.81(d，J＝7.5Hz，2H)，2.18(s，2H)。
实施例40 2-(蛋氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4m)的数据
0.098g(86.3％)；ESI(m/e)618[M-H]-.[α]D 20＝74.13(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.88(s，1H)，8.28(s，2H)，7.27(t，J＝7.5Hz，1H)，7.19(m，5H)，7.17(m，4H)，7.10(t，J＝7.5Hz，2H)，6.97(d，J＝5Hz，1H)，6.94(d，J＝5Hz，1H)，6.92(s，1H)，5.47(s，2H)，5.01(m，2H)，4.84(s，2H)，4.81(t，J＝7.5Hz，1H)，3.57(m，1H)，3.16(d，J＝5Hz，2H)，3.11(d，J＝7.5Hz，2H)，2.53(m，2H)，2.44(t，J＝5Hz，2H)，2.09(s，3H)，2.00(s，2H)。
实施例41 2-(δ-环己酯基谷氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4n)的数据
0.130g(83.5％)；ESI(m/e)714[M-H]-.[α]D 20＝42.13(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.95(s，1H)，9.96(s，1H)，8.01(s，1H)，7.26(t，J＝5Hz，1H)，7.19(m，5H)，7.18(m，4H)，7.16(t，J＝7.5Hz，1H)，7.10(t，J＝5Hz，1H)，5.45(s，2H)，4.91(m，1H)，4.88(t，J＝5Hz，1H)，4.60(s，2H)，3.72(m，1H)，3.58(m，1H)，3.11(d，J＝5Hz，2H)，3.09(d，J＝5Hz，2H)，2.96(m，2H)，2.51(t，J＝5Hz，2H)，1.99(s，2H)，1.79(m，2H)，1.32(s，2H)。
实施例42 2-(天冬酰氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4o)的数据
0.123g(86.3％)；ESI(m/e)605[M-H]-.[α]D 20＝44.80(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.95(s，1H)，10.92(s，1H)，8.11(s，1H)，7.25(t，J＝5Hz，1H)，7.20(m，5H)，7.17(m，4H)，7.15(t，J＝7.5Hz，1H)，7.03(d，J＝7.5Hz，1H)，6.76(d，J＝5Hz，1H)，6.79(s，1H)，5.89(d，J＝5Hz，2H)，5.34(s，2H)，5.01(m，1H)，4.83(t，J＝5Hz，1H)，4.72(s，2H)，3.66(s，2H)，3.15(d，J＝10Hz，2H)，3.13(d，J＝7.5Hz，2H)，2.97(d，J＝5Hz，2H)，2.55(d，J＝7.5Hz，2H)，1.99(s，2H)。
实施例43 2-(脯氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4p)的数据
0.0.042g(88.2％)；ESI(m/e)588[M-H]-.[α]D 20＝5.40(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.06(s，1H)，10.05(s，1H)，7.26(t，J＝7.5Hz，1H)，7.20(m，5H)，7.19(m，4H)，7.18(t，J＝7.5Hz，1H)，8.09(s，2H)，6.98(dd，J＝7.5Hz，J＝5Hz，2H)，6.90(d，J＝7.5Hz，1H)，5.19(s，2H)，5.00(s，2H)，4.98(m，1H)，4.97(t，J＝5Hz，1H)，3.52(m，1H)，3.06(d，J＝5Hz，2H)，3.00(m，2H)，1.99(s，1H)，1.68(m，2H)。
实施例44 2-(硝基精氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4r)的数据
0.065g(85.6％)；ESI(m/e)692[M-H]-.[α]D 20＝23.10(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝9.31(s，1H)，8.15(s，1H)，7.26(t，J＝7.5Hz，1H)，7.20(m，5H)，7.19(m，4H)，7.03(t，J＝7.5Hz，1H)，6.98(d，J＝5Hz，1H)，6.95(s，1H)，5.34(d，J＝5Hz，2H)，4.92(m，1H)，4.84(t，J＝5Hz，1H)，4.53(s，2H)，3.45(m，1H)，3.32(d，J＝7.5Hz，2H)，3.12(d，J＝5Hz，2H)，2.51(m，2H)，2.07(s，1H)，1.78(m，2H)，1.52(m，2H)。
实施例45 2-(苏氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4s)的数据
0.101g(86.7％)；ESI(m/e)592[M-H]-.[α]D 20＝21.66(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.99(s，1H)，8.21(s，1H)，7.19(m，5H)，7.18(m，4H)，7.14(t，J＝7.5Hz，1H)，7.11(t，J＝7.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，5.34(s，2H)，5.03(m，1H)，5.02(t，1H)，4.58(s，2H)，3.85(m，1H)，3.65(m，1H)，3.17(d，J＝5Hz，2H)，3.11(d，J＝7.5Hz，2H)，2.50(s，2H)，2.09(s，2H)，1.20(d，J＝5Hz，3H)。
实施例46 2-(酪氨酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(4t)的数据
0.098g(82.6％)；ESI(m/e)654[M-H]-.[α]D 20＝-15.56(c＝1.0，甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)δ＝10.39(s，1H)，8.10(s，1H)，7.34(t，J＝7.5Hz，1H)，7.20(m，5H)，7.19(m，4H)，7.16(t，J＝5Hz，1H)，6.98(d，J＝5Hz，1H)，6.96(d，J＝5Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.71(d，J＝5Hz，1H)，6.67(d，J＝7.5Hz，2H)，5.36(s，2H)，5.31(d，J＝10Hz，1H)，5.72(m，1H)，4.70(t，J＝5Hz，1H)，4.42(s，2H)，4.01(m，1H)，3.17(d，J＝7.5Hz，2H)，3.08(d，J＝5Hz，2H)，2.90(d，J＝10Hz，2H)，1.99(s，2H)。
实验例1本发明化合物(4a-t)抗肿瘤细胞增殖活性评价实验
1)受试样品：本发明实施例29-46所分别制备的化合物4a-t；分别用含1％DMSO的PBS配制成所需浓度溶液。
2)人癌细胞株
S180细胞(腹水型肉瘤细胞)，H22细胞(小鼠腹水型肝癌细胞株)；
3)主要仪器
酶标仪：450，Biorad公司
高压灭菌锅：400Ep-Z，Bruckmanning公司
细胞孵育箱：INC153，memmer公司
低温离心机：SPD111V，Thermo公司
96孔细胞培养板：Costar公司
石英自动双重纯水蒸馏器：1810-B，江苏荣华仪器制造有限公司
4)主要试剂
MTT：四噻唑蓝(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)2，5-diphenyl-tetrazolium bromide)(Flka)，溶于PBS中，浓度为5mg/ml，过滤除菌，4℃避光保存。
PBS：每升溶液中含有NaCl 8.2g，KCl 0.20g，Na2HPO4.H2O1.56g，KH2PO40.2g，pH为7.4
RPMI-1640培养基：Gibco公司
DMEM培养基：Gibco公司
改良的Mccy’s 5A medium+L-Glutamine培养基：Gibco公司
胎牛血清：Hyclone公司
青霉素：石药集团中诺药业(石家庄)有限公司
链霉素：石药集团中诺药业(石家庄)有限公司
DMSO：Hyclone公司。
其余所用试剂均为市售分析纯.
5)实验方法
分别将生长状态良好、处于对数生长期的HL-60细胞以5×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μl，按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25μl MTT溶液浓度为5mg/ml，继续置于37℃孵育四个小时，离心5min(2500rpm)小心吸出上清液，每孔紫色残留物(甲瓒)加入100μl DMSO溶解，振荡约15min沉淀全部溶解，于570nm酶标仪上测定O.D.(吸收值)，波长570nm。
按照公式“相对生存率＝(D含药-D空白)/(D对照-D空白)×100％”计算每一个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率。
实验重复3次，以抑制率对药物浓度作图，按作图法求出IC50(半数有效抑制浓度)值。
6)实验结果
结果见表1。
表1本发明化合物4a-t抗肿瘤细胞增殖活性实验结果(IC50±SDμM)
| 化合物 | S180 | H22 |
| 4a | ＞10 | ＞10 |
| 4b | ＞10 | ＞10 |
| 4c | ＞10 | ＞10 |
| 4d | 8.97± | 7.98±2.45 |
| 4e | ＞10 | ＞10 |
| 4f | 6.02±1.98 | ＞10 |
| 4g | 5.03±2.11 | 6.02±1.35 |
| 4h | ＞10 | 8.81±2.72 |
| 4i | 9.02±1.98 | ＞10 |
| 4j | 4.89±1.31 | 5.03±2.46 |
| 4k | ＞10 | ＞10 |
| 4l | 7.86±2.03 | ＞10 |
| 4m | ＞10 | ＞10 |
| 4n | 4.98±2.01 | 7.38±1.32 |
| 4o | 8.89±3.69 | ＞10 |
| 4p | 8.46±5.32 | ＞10 |
| 4q | ＞10 | ＞10 |
| 4r | 8.96±4.98 | ＞10 |
| 4s | ＞10 | ＞10 |
| 4t | ＞10 | ＞10 |
| Arc | 8.66±2.44 | 5.46±3.98 |
实验例2本发明化合物(4a-t)抗肿瘤活性实验
1)实验材料
受试化合物：本发明实施例29-46所分别制备的化合物4a-t；
阳性对照品：阿糖胞苷
实验动物：SCI小鼠(清洁级)，雄性，体重20±2g(x±s)；由北京大学医学部动物实验中心提供。每12只小鼠一组，空白及阳性对照各一组。
瘤源：小鼠S180肉瘤，由北京大学医学部动物实验中心提供，自行传代维持。
溶剂：生理盐水，0.5％CMC-Na溶液。
2)剂量设置
受试化合物4a-t及阳性对照设为8.9μmol/kg，均采用腹腔单次给药。
3)药物配制
受试化合物4a-t加入少量吐温80润湿助溶，逐渐加入0.5％CMC-Na溶液至所需要浓度即可。阳性对照品阿糖胞苷采用生理盐水溶解。
4)给药剂量及给药方案
受试化合物4a-t以腹腔单次给药。按相应的给药剂量每天一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。
阿糖胞苷以等体积的相应溶液腹腔给药，按8.9μmol/kg剂量每天一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。
5)动物模型
采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型：在无菌条件下抽取接种7d，后取生长旺盛S180腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1∶2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度＝4大方格内活细胞数/4×104×稀释倍数＝细胞数/ml
细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％
将存活率大于90％的瘤液用匀浆法制备成1×107个/ml的细胞悬液，于相应宿主腋皮下接种0.2ml/鼠，制成实体瘤动物模型。
6)实体瘤抑瘤率测定
各组连续给药7天后，于第8天脱颈椎处死小鼠，称取体重(处死体重)，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率。
抑瘤率％＝[(阴性对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重]×100％
体重增长(g)＝处死体重-原始体重-瘤重
7)统计方法
本实验数据统计均采用t检验和方差分析，以(x±SD)表示。
8)实验结果
结果列入表2。
表2受试化合物4a-t抗肿瘤活性实验结果a
a)阿糖胞苷)和4a-t给药剂量为8.9μmol/kg，NS＝溶媒，n＝12，平均瘤重表示为x±SD g；b)与NS比较p＜0.01，与阿糖胞苷比较p＞0.05；c)与NS比较p＜0.01，与阿糖胞苷比较p＜0.05。
Claims (5)
1、具有抗肿瘤活性的通式I化合物：
其中，AA选自缬氨酸残基、天冬氨酸-4-环己酯、谷氨酰胺残基、叔丁氧羰基赖氨酸残基、亮氨酸残基、丙氨酸残基、色氨酸残基、O-苄基丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、甘氨酸残基、叔丁氧羰基组氨酸残基、蛋氨酸残基、谷氨酸-5-环己酯、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、硝基精氨酸残基、苏氨酸残基或酪氨酸残基。
2、一种制备权利要求1所述通式I化合物的方法，该方法包括：
(1)将色氨酸转变为Boc-色氨酸；
(2)将色氨酸转变为β-四氢咔啉-3-羧酸；
(3)将β-四氢咔啉-3-羧酸转变为β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；
(4)将L-色氨酸转变为L-色氨酸甲酯；
(5)将Boc-L-氨基酸与L-色氨酸甲酯缩合制备Boc-氨基酰色氨酸甲酯；
(6)将Boc-氨基酰色氨酸甲酯转化为Boc-氨基酰色氨酸；
(7)将Boc-氨基酰色氨酸和β-四氢咔啉羧酸苄酯缩合为2-(Boc-氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；
(8)将2-(Boc-氨基酰色氨酰)-β-四氢咔啉-3-羧酸苄酯脱去保护基Boc，即得。
3、按照权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(6)中所述的Boc-L-氨基酸选自Boc-L-缬氨酸、Boc-L-天冬氨酸-4-环己酯、Boc-L-谷氨酰胺、Boc-L-叔丁氧羰基赖氨酸、Boc-L-亮氨酸、Boc-L-丙氨酸、Boc-L-色氨酸、Boc-L-O-苄基丝氨酸、Boc-L-苯丙氨酸、Boc-L-异亮氨酸、Boc-甘氨酸、Boc-L-叔丁氧羰基组氨酸、Boc-L-蛋氨酸、Boc-L-谷氨酸-5-环己酯、Boc-L-天冬酰胺、Boc-L-脯氨酸、Boc-L-硝基精氨酸、Boc-L-苏氨酸或Boc-L-酪氨酸。
4、一种治疗肿瘤的药物组合物，由治疗上有效量的权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体或辅料组成。
5、权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
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