CN105300997A - 一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，该检测方法由性状、鉴别、检查、含量测定组成。其中对黄柏、苦参进行显微鉴别，并以苦参对照药材、苦参碱和氧化苦参碱对照品作对照、以阿魏酸作对照、以黄柏对照药材作对照、以连翘对照药材作对照，分别对本药物制剂中的苦参、当归、黄柏、连翘进行薄层鉴别；含量测定是照高效液相色谱法对苦参中的苦参碱和氧化苦参碱、黄柏中的盐酸小檗碱进行测定。与现有技术相比，本发明建立了治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，所采用的方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制治疗妇科炎症的药物制剂的质量，能更好地确保该制剂的临床疗效及安全性。

Description

一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及药品的检测方法，特别是涉及一种治疗妇科炎症药物制剂的检测方法，属于药品的技术领域。

背景技术

妇科炎症是女性的常见疾病，主要是指女性生殖器官的炎症，具体包括女性外阴炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎。妇科炎症的常见症状主要是外阴及阴道瘙痒，有的局部发生糜烂，伴灼痛、尿痛、尿频、阴道分泌物增多、红肿等。炎症不及时治疗，除可能导致炎症在各生理部位相互蔓延和交叉感染外，还会带来许多并发症，甚至导致某些部位的恶性病变，还会使身体长时间处于炎症的侵害环境中，对免疫功能、新陈代谢以及内分泌系统都会产生不良影响，对身体健康危害极大；甚至一些妇科炎症不仅危害女性本人，而且还会波及家人，引起宫内感染、产道感染等环节感染新生儿，造成流产、早产、先天发育畸形、智力低下等严重后果。治疗妇科炎症的药物制剂由苦参、杠板归、黄柏、连翘、益母草、赤小豆、艾叶、当归、乌药制备而成，其中抗妇炎胶囊标准收载于国家中成药标准汇编外科妇科分册，编号为WS-10498(ZD-0498)-2002，2012年10月30日转为国家正式标准，编号为WS-10498(ZD-0498)-2002-2012Z，具有活血化瘀、清热燥湿的功效，主要用于湿热下注型盆腔炎、阴道炎、慢性宫颈炎，症见赤白带下、阴痒、出血、痛经等症。

现有质量标准中，仅对苦参、黄柏、当归进行薄层鉴别，其中对苦参的鉴别仅以苦参碱对照品作为对照，鉴别方法不够全面和充分；对黄柏的鉴别项分开成两项，操作有重复,会造成一定的资源浪费，且以正丁醇作为展开剂其展开时间较长；同时连翘作为处方中仅次于苦参、杠板归和黄柏的重要组成部分，对其进行鉴别是非常必要的。另外含量测定方法中，仅对苦参中的苦参碱进行含量测定，未考虑到苦参碱、氧化苦参碱之间的转换，导致含量测定不够准确，另外,还缺乏对黄柏中盐酸小檗碱的含量测定。另外，本领域技术人员知道，药材使用是否准确，各地生长的药材药用成分含量不一定相同，因此，对药材的定性、定量就显得尤为重要。因此现有质量标准对抗妇炎药品的质量控制不够全面和准确，从而造成隐患。

现有技术中，《中国药典》2010年版一部P188公开了苦参的检测方法，对苦参进行显微鉴别，以苦参碱对照品、槐定碱对照品为对照，以甲苯-丙酮-甲醇(8：3：0.5)为展开剂进行薄层鉴别，以氧化苦参碱对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(5：0.6：0.3)10℃以下放置的下层溶液为展开剂进行薄层鉴别，利用乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液(80：10：10)作为流动相对苦参中苦参碱和氧化苦参碱进行含量测定；《中国药典》2010年版一部P285-287公开了黄柏的检测方法，对黄柏进行显微鉴别，以黄柏对照药材、盐酸黄柏碱对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇-水(30：15：4)的下层溶液为展开剂进行薄层鉴别，利用乙腈-0.1％磷酸溶液(50∶50)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)作为流动相对黄柏中盐酸小檗碱进行含量测定；《中国药典》2010年版一部P159公开了连翘的检测方法，以连翘对照药材、连翘苷对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇(8：1)为展开剂进行薄层鉴别。

祝晨蔯等在HPLC法测定黄柏药材中小檗碱与黄柏碱的含量(中药新药与临床药理,2004,15(4)：262～264.)一文中，公开了采用RP-HPLC法梯度洗脱(乙腈-0.3％磷酸二乙胺为流动相，梯度洗脱顺序为：),测定黄柏药材中小檗碱与黄柏碱的含量；高峰等在高效液相色谱法测定关黄柏与川黄柏的有效成分的含量分析(黑龙江医药,2011,24(2)：174～175.)一文中，公开了采用乙腈-0.1％磷酸溶液(50:50)(每100ml加十二烷基硫酸钠0.1g)为流动相对黄柏中盐酸小檗碱进行含量测定。

姚敦武等在抗妇炎片质量标准研究(湖南中医杂志，2006,22(4)：73.)一文中，公开了以苦参碱对照品为对照、氯仿-甲醇-浓氨试液(5:0.6:0.3)为展开剂对抗妇炎片中苦参进行薄层鉴别，以盐酸小檗碱对照品为对照、正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂对抗妇炎片中黄柏进行薄层鉴别，以连翘对照药材为对照、氯仿-甲醇(3:1)为展开剂对抗妇炎片中连翘进行薄层鉴别，以苦参碱对照品为对照、甲醇-水-三乙胺(48:52:0.05)为流动相对抗妇炎片中苦参进行含量测定；该文献中对苦参、黄柏的鉴别与抗妇炎胶囊现有质量标准相同。李蔚等在抗妇炎软胶囊质量标准研究(安徽医药，2011,15(10)：1220.)一文中，公开了以连翘苷对照品为对照、三氯甲烷-甲醇-甲酸(9:2:0.1)为展开剂对抗妇炎软胶囊中连翘进行薄层鉴别，以盐酸小檗碱对照品为对照、甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6:3:1.5:1.5:0.3)为展开剂对抗妇炎软胶囊中黄柏进行薄层鉴别，以苦参碱对照品为对照、甲苯-丙酮-甲醇(9:2:5)为展开剂对抗妇炎软胶囊中苦参进行薄层鉴别，以苦参碱对照品为对照、乙腈-0.02mol/l磷酸二氢钠溶液(82:18)为流动相对抗妇炎软胶囊中苦参进行含量测定。

以上文献虽然报道了苦参等药材的单一检测方法以及抗妇炎片、软胶囊质量标准研究方法，但是按照上述方法进行操作，首先对于单一药材的鉴别或含量测定方法和种类比较多，针对性不强，会造成重复操作或指标选择复杂等现象，且未考虑复方制剂的相互干扰因素；另一方面对于现有片剂或软胶囊的研究过程中，部分与抗妇炎胶囊的方法相同，另外在进行方法学验证时还会出现或分离度不佳，或分析时间较长，还有其他色谱峰干扰等现象，且制剂质量标准研究中也未体现对黄柏等重要组成药材的含量测定内容，因此现有对治疗妇科炎症的药物制剂的检测不能满足要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，包括性状、鉴别、检查和含量测定；该检测方法能全面有效地控制治疗妇科炎症药物制剂的质量，从而确保该药物的临床疗效和用药安全性。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，所述的制剂是由以下重量配比的药物制备而成：苦参200-300g、杠板归200-300g、黄柏100-200g、连翘30-70g、益母草20-40g、赤小豆20-40g、艾叶20-40g、当归20-40g、乌药20-40g；该检测方法由性状、鉴别、检查、含量测定组成，其特征在于：鉴别是对黄柏、苦参进行显微鉴别，以苦参对照药材、苦参碱和氧化苦参碱对照品作对照、以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝3-7:0.4-0.8:0.2-0.4为展开剂对苦参进行薄层鉴别，以阿魏酸作对照、以甲苯:冰醋酸:甲醇＝20-40:0.5-1.5:2-4为展开剂对当归进行薄层鉴别，以黄柏对照药材、盐酸小檗碱对照品作对照、以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝4-8:2-4:1-3:1-2:0.2-0.4为展开剂对黄柏进行薄层鉴别，以连翘对照药材作对照、以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝10-30:0.2-0.4:0.03-0.07为展开剂对连翘进行薄层鉴别；含量测定是照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法，以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝80-84:8-10:8-10为流动相、对苦参中的苦参碱和氧化苦参碱进行测定，以乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝40-60:40-60为流动相，对黄柏中的盐酸小檗碱进行测定。

前述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其中鉴别由以下组成：

(1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝3-7:0.4-0.8:0.2-0.4在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10-15分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2-5g，加乙醚30ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝20-40:0.5-1.5:2-4为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝4-8:2-4:1-3:1-2:0.2-0.4为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15-20分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝10-30:0.2-0.4:0.03-0.07为展开剂，预饱和15-20分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

进一步地，所述鉴别方法如下：

(1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝5:0.6:0.3在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2-5g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝30:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇:甲酸＝20:0.3:0.05为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

前述的治疗妇科炎症的胶囊制剂的检测方法，其中含量测定方法如下：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝80-84:8-10:8-10为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5-10分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝40-60:40-60为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

进一步地，所述含量测定方法如下：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3％磷酸溶液＝82:9:9为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50∶50为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

为了研究治疗妇科炎症的胶囊制剂的检测方法，申请人进行了大量的实验以筛选最佳方案，具体如下：

1、苦参、黄柏定性鉴别研究

苦参为豆科植物苦参SophoraflavescensAit.的干燥根，黄柏为芸香科植物黄皮树PhellodendronchinenseSchneid.的干燥树皮。原标准中未对处方中苦参、黄柏药材进行显微鉴定，容易造成鉴别方法不够全面、准确，因此根据2010版药典对苦参、黄柏的性状描述，结合10批样品实际镜检结果，确认本发明药物制剂处理后，置显微镜下观察：柱纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔。

2、TLC鉴别研究

2.1苦参鉴别研究

原抗妇炎胶囊质量标准和片剂质量控制方法研究中，单一对苦参碱进行鉴别不够专属，因为其他药材也可能含有苦参碱，同时，为防止不按质量标准制法工艺，直接外加提取物的方式吻合标准的检验要求，生产假药。因此增加苦参对照药材及氧化苦参碱对照品作为对照，全面控制苦参的质量。此外，苦参薄层鉴别项提取溶剂及展开溶剂均含三氯甲烷，对人体有毒害作用，需要进行替代研究。

因此将样品制备改成：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

展开系统的筛选：选择展开系统1——苦参碱对照品为对照、三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(5:0.6:0.3)在10℃以下放置的下层溶液为展开剂(原标准)；展开系统2——甲苯-丙酮-甲醇(8：3：0.5)为展开剂(药典2010年版)；展开系统3——苦参对照药材、苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品为对照、二氯甲烷-甲醇-浓氨试液＝5:0.6:0.3在10℃以下放置的下层溶液为展开剂；展开系统4——苦参碱对照品为对照、甲苯-丙酮-甲醇(9:2:5)为展开剂；展开剂系统5——三氯甲烷-丙酮-甲酸＝4∶1∶2。结果显示，除展开系统1、3以外，其余系统在同时比对对照药材色谱和对照品色谱时，会出现斑点不清晰、斑点少，或斑点Rf值较低等情况。且鉴于三氯甲烷具有毒性，因此选择展开系统3进行进一步研究。

对展开系统3进行进一步的考察，发现在二氯甲烷-甲醇-浓氨试液＝3-7:0.4-0.8:0.2-0.4范围内，预饱和15-20min，斑点分离较好，较清晰，阴性无干扰，其中二氯甲烷-甲醇-浓氨试液＝5:0.6:0.3，且预饱和15min，斑点分离度最好，显色清晰。

通过上述方法比较，优选以苦参对照药材、苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品为对照，二氯甲烷-甲醇-浓氨试液＝5:0.6:0.3为展开剂；选择治疗妇科炎症药物制剂的样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。方法简单，溶剂毒害影响降低，鉴别全面，易点样，斑点清晰，故选用。

2.2当归鉴别研究

通过薄层方法学验证，原抗妇炎胶囊中对当归的鉴别方法合理，专属性、耐用性均理想，因此未作改进。

2.3黄柏鉴别研究

原抗妇炎胶囊中对黄柏的薄层鉴别项有两个，分别为鉴别(2)及鉴别(4)，操作重复，且在实验中发现，采用原标准处理，其薄层点样量过大，同时以正丁醇作为展开剂其展开时间较长；另外供试品采用乙醇提取，溶剂不够准确，处理量大，时间短，对活性成分的处理不够充分。因此，对该药材的鉴别方法进行筛选。

供试样品制备研究：分别以甲醇、无水乙醇、盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液、三氯甲烷、二氯甲烷作为本制剂、对照药材的提取溶剂和盐酸小檗碱对照品的溶解液，进一步选择本制剂、对照药材超声处理25-40分钟。

展开系统的筛选：选择展开系统1——以黄柏对照药材、盐酸黄柏碱对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇-水(30：15：4)的下层溶液为展开剂(药典2010年版)；展开系统2——以盐酸小檗碱对照品为对照，以正丁醇-冰醋酸-水(7：1：2)为展开剂(原标准)，展开系统3——以黄柏对照药材、盐酸小檗碱对照品为对照，以正丁醇-冰醋酸-水(7：1：2)为展开剂(原标准)；展开系统4——以黄柏对照药材、盐酸小檗碱对照品为对照，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3为展开剂；展开系统5——以盐酸小檗碱对照品为对照、甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6:3:1.5:1.5:0.3)为展开剂。

结果显示，选择盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液作为溶剂，活性成分溶出效果好，样品点样后，分离较好，斑点较清晰。展开系统1-3分离效果、斑点清晰程度不够理想，系统5对照选择不够全面，斑点对比不够理想，因此选择展开系统4进行进一步研究。

结果显示，对展开系统4进行进一步的考察，发现在甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝4-8:2-4:1-3:1-2:0.2-0.4范围内，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15-20分钟，斑点分离好，清晰，阴性无干扰，其中甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3，加浓氨试液后预平衡15分钟，斑点分离度最好，显色清晰。

通过上述方法比较，优选黄柏对照药材、盐酸小檗碱对照品为对照，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3为展开剂；选择盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液作为溶剂，优选超声30分钟，方法简单，鉴别全面，易点样，斑点清晰，故选用。

2.4连翘鉴别研究

抗妇炎胶囊原质量标准中未对连翘进行鉴别，考虑连翘在抗妇炎制剂的整个处方用量中也属于主要组成之一，因此，综合考虑复方制剂药用成分的干扰，对该药材的鉴别方法进行筛选。

供试样品制备研究：分别以甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、作为本制剂、连翘苷对照品的溶剂，进一步选择本制剂甲醇提取后二氯甲烷再提取、乙醇提取后二氯甲烷再提取、超声处理25-40分钟等处理方式。

展开系统的筛选：选择展开系统1——以连翘对照药材、连翘苷对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇(8：1)为展开剂(药典2010年版)；展开系统2——以连翘苷对照品为对照，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(20：0.3：0.05)为展开剂；展开系统3——以连翘对照药材为对照、氯仿-甲醇(3:1)为展开剂；展开系统4——以连翘对照药材为对照，二甲苯-乙酸乙酯(1:1)为展开剂。结果显示，本制剂甲醇提取后二氯甲烷再提取，超声处理25-40分钟，活性成分溶出效果好，样品点样后，分离较好，斑点较清晰。展开系统1、3、4的分离效果、斑点清晰程度不够理想，且增加连翘对照药材对鉴别的结果影响不大，因此选择展开系统2进行进一步研究。

结果显示，对展开系统2进行进一步的考察，发现在二氯甲烷:甲醇:甲酸＝10-30:0.2-0.4:0.03-0.07范围内，展开后斑点分离好，清晰，阴性无干扰，其中二氯甲烷:甲醇:甲酸＝20:0.3:0.05，斑点分离度最好，显色清晰。

通过上述方法比较，优选连翘苷对照品为对照，以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝20:0.3:0.05为展开剂；选择甲醇、二氯甲烷作为溶剂，优选超声30分钟，方法简单，鉴别全面，易点样，斑点清晰，故选用。

2.5杠板归鉴别研究

本发明研究人员在研究过程中，拟建立杠板归的薄层鉴别。杠板归为蓼科植物杠板归的干燥地上部分，夏季开花时采割，晒干。具有清热解毒，利水消肿，止咳的功效。通过文献检索，杠板归主要成分有黄酮及其苷类、醌类、萜类、酚羧酸类化合物如咖啡酸、苯丙素糖酯及其衍生物、酰胺类等，其中以黄酮类化合物和水溶性酚酸类含量较高。因咖啡酸的主要功效为抗菌、抗病毒，与杠板归在抗妇炎胶囊中抗菌消炎的功效一致，拟建立以咖啡酸为指标的薄层鉴别。探索过程如下：

供试品溶液制备：取药物粉末5g，加石油醚(60～90℃)50ml，超声30分钟，滤过，弃去石油醚液，药渣挥干溶剂，加热水25ml，置80℃水浴上热浸30分钟，不时振摇，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸1滴，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液制备：另取缺杠板归的阴性样品同法制成阴性对照溶液，再取咖啡酸对照品加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；

展开系统的筛选：选择展开剂1——甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶3∶1)；展开剂2——甲醇-甲酸(200∶2)；展开剂3——石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6:1)。

结果显示，采用上述展开剂，阴性对照干扰较大，故暂不将该方法列入新修订质量标准正文。

2.6鉴别方法验证：对修改后的苦参、黄柏、连翘鉴别方法进行方法学验证，从专属性、耐用性(薄层板、温度、湿度)方面进行考察，结果显示斑点分离好，阴性无干扰。

3、含量测定研究

3.1苦参含量测定研究

3.1.1仪器与试药

仪器：岛津LC2010高效液相色谱仪，KQ-500DB型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)。

试剂与试药：苦参碱对照品(批号：110805-200508)、氧化苦参碱对照品(批号：110780-201007)，由中国药品生物制品检定所提供；样品：抗妇炎胶囊，由贵州远程制药有限责任公司生产；乙腈、无水乙醇为色谱纯，磷酸、甲醇为分析纯，超纯水。

3.1.2色谱条件的选择

以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝82:9:9为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000。

3.1.2.1色谱柱的考察：

选择氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行测定，苦参碱和氧化苦参碱峰与相邻杂质峰达到基线分离，分离度好，出峰时间短；选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、辛烷基硅烷键合硅胶为填充柱进行测定，出峰时间较长，很难得到较好的峰形，与相邻杂质峰分离度不符合规定。故采用氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行测定。

3.1.2.2流动相的选择：

流动相：乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液(80：10：10)、乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液(82∶9∶9)、甲醇-水-三乙胺(48:52:0.05)、甲苯-丙酮-甲醇(9:2:5)、乙腈-水(80：20)。

上述流动相，经试验比较，结果表明：除乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液搭配以外，其余流动相或分离度不佳，或分析时间较长，其中以乙腈与水搭配，苦参碱峰与相邻杂质峰分离度不符合规定，分析时间很长。而采用乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液作为流动相进行洗脱，苦参碱、氧化苦参碱与相邻杂质峰分离完全，峰形较好。经多次试验，选择乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液的组成配比为：乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝80-84:8-10:8-10，优选乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝82:9:9。

3.1.2.3检测波长选择：

参照《中国药典》2010年版苦参药材含量测定项，选择苦参碱、氧化苦参碱的检测波长为220nm。

3.1.3耐用性研究

3.1.3.1提取方式的选择：

取抗妇炎胶囊(20140121)样品，混匀,取2份，每份约0.5g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，其中一份超声(500W40KHz)处理30分钟，另一份回流提取30分钟，取出，放冷，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取上述2份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，结果见表1，超声与回流提取二者含量无明显差别，考虑到超声提取操作更简便，故选择超声提取。

表1提取方法对含量测定的影响

3.1.3.2提取溶剂的选择

取抗妇炎胶囊(20140121)样品，混匀,取3份，每份约0.5g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别采用如下方法：

(1)精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声(500W40KHz)处理30分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

(2)精密加入氨饱和的三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声(500W40KHz)处理30分钟，取出，放冷，用氨饱和的三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

(3)加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声(500W40KHz)处理30分钟，取出，放冷，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

(4)将方法(3)中提取溶剂三氯甲烷改为二氯甲烷，同法操作。

分别精密吸取上述4份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，结果表明采用方法(3)所测含量最高，但三氯甲烷毒性较大，但采用二氯甲烷的方法(4)所测得含量较三氯甲烷低无法代替三氯甲烷。综上所述，最终采用方法(3)。结果见表2。

表2提取溶剂的选择

3.1.3.3提取时间考察

抗妇炎胶囊(20140121)样品，混匀,取5份，每份约0.5g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，分别超声(500W40KHz)处理15、25、30、40、60分钟，考察提取效果。试验结果见表3。

表3提取时间对含量测定的影响

试验结果表明：25分钟后有效成分提取较好，为确保提取完全，提高检验效益，故将提取时间定为25-40分钟，优选提取30分钟，经济合理。

3.1.3.4不同品牌色谱柱的影响

分别采用AgilentEclipseNH2(5μm，4.6×250mm)、资生堂NH2(5μm，4.6×250mm)、WatersNH2(5μm，4.6×250mm)不同品牌氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，分别测定抗妇炎胶囊(20140121)中苦参碱、氧化苦参碱的含量，考察结果表明不同品牌氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。

3.1.3.5稳定性试验

取抗妇炎胶囊(20140121)，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定苦参碱、氧化苦参碱的含量，见表4，结果表明样品稳定性良好。

表4稳定性试验结果

3.1.4方法学验证

3.1.4.1准确度

取已测定含量的抗妇炎胶囊(20140121)(苦参碱平均含量3.8847mg/g；氧化苦参碱平均含量3.5853mg/g)约0.25g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入含苦参碱对照品(0.03897mg/ml)、氧化苦参碱对照品(0.03599mg/ml)的混合溶液25ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定苦参碱、氧化苦参碱的含量，计算回收率，结果显示苦参碱平均回收率为101.5％、RSD为3.4％，氧化苦参碱平均回收率为100.2％、RSD为1.6％，回收率良好。

3.1.4.2重复性

取同一批抗妇炎胶囊(20140121)，按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件测定苦参碱、氧化苦参碱的含量，结果苦参碱平均含量为3.9464mg/g、RSD为1.8％，氧化苦参碱平均含量为3.6970mg/g、RSD为2.2％，说明有较好重复性。

3.1.4.3精密度

精密量取同一混合对照品(苦参碱70.3000μg/ml、氧化苦参碱69.2619μg/ml)10μl，连续进样6次，记录色谱图，苦参碱和氧化苦参碱峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.2％、0.6％，试验结果表明精密度良好。

3.1.4.4专属性

取抗妇炎胶囊(20140121)及缺苦参碱和氧化苦参碱阴性样品按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰。

3.1.4.5线性关系考察

按上述色谱条件，精密取混合对照品溶液(苦参碱70.3μg/ml、氧化苦参碱69.2619μg/ml)1μl，2μl，5μl，10μl，15μl，20μl，25μl依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归计算，绘制工作曲线，得出苦参碱线性回归方程为：Y＝468553X+3766.8,R＝0.9998，拟合过原点方程为：Y＝471581.15X，随机选择一组数据,分别带入线性回归方程和拟合过原点方程进行验证，偏差为0.09％，说明拟合过原点方程成立，苦参碱在0.07030μg～1.75750μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系；氧化苦参碱线性回归方程为：Y＝508698X+1568.8,R＝0.9999，拟合过原点方程为：Y＝509978X，随机选择一组数据分别带入线性回归方程和拟合过原点方程进行验证，偏差为0.04％，说明拟合过原点方程成立，氧化苦参碱在0.06926μg～1.73155μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。

3.1.5样品含量测定

按上述条件，分别测定19批样品，含量测定结果见表5。

表5含量测定结果

根据以上19批样品测定结果，暂定每粒抗妇炎胶囊含苦参以苦参碱和氧化苦参碱的总量计，不得少于1.5mg，即1.76mg/g生药。

3.2黄柏含量测定研究

3.2.1仪器与试药

仪器：Waters29982695液相色谱仪，KQ-500DB型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)。

试剂与试药：盐酸小檗碱对照品(批号：110713-201212，含量以86.7％计，110713-200911，含量以86.8％计)，由中国药品生物制品检定所提供；样品：抗妇炎胶囊，由贵州远程制药有限责任公司生产；磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠、磷酸、盐酸、甲醇、乙醇均为分析纯、乙腈为色谱纯、超纯水。

3.2.2色谱条件的选择

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50:50为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

3.2.2.1色谱柱的考察：

选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行考察，盐酸小檗碱峰与相邻杂质峰达到基线分离，分离度好，出峰时间短；选择氨基键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶为填充柱进行测定，出峰时间较长，很难得到较好的峰形，与相邻杂质峰分离度不符合规定。故采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行测定。

3.2.2.2流动相的选择：

流动相：乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)、乙腈-0.1％磷酸溶液(50∶50)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)、RP-HPLC法梯度洗脱(乙腈-0.3％磷酸二乙胺为流动相，梯度洗脱顺序为：)。

上述流动相，经试验比较，结果表明：选择乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)为流动相，待测成分盐酸小檗碱与其他杂质可得到较好分离，且出峰时间合理，效率高；流动相乙腈-0.1％磷酸溶液(50:50)(每100ml溶液加十二烷基磺酸钠0.1g)很难得到好的峰形，与相邻的杂质峰分离度达不到要求，而RP-HPLC法梯度洗脱的效果也不够理想。经多次试验，选择乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝40-60:40-60，优选乙腈－0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50:50。

3.2.2.3检测波长选择：

参照《中国药典》2010年版黄柏药材小檗碱含量测定项，确定盐酸小檗碱的检测波长为265nm。

3.2.3耐用性研究

3.2.3.1提取方法的选择：

取抗妇炎胶囊(20131031)样品，混匀,取2份，每份约0.3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液25ml，其中一份超声(500W40KHz)处理30分钟，另一份回流提取30分钟，取出，放冷，用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液补足减失重量，摇匀，滤过，分别取10μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表6，超声与回流提取二者含量无明显差别，考虑到超声提取操作更简便，故选择超声提取。

表6提取方法对含量测定的影响

3.2.3.2提取溶剂的选择

取抗妇炎胶囊(20131031)样品，混匀,取3份，每份约0.3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别加入乙醇、甲醇、盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液各25ml，超声处理30分钟，取出，放冷，用相应溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，得供试品溶液，分别取上述3份溶液各10μl注入液相色谱仪，计算，结果见表7，说明本品采用盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液作为提取溶剂，含量提取更完全。

表7提取溶剂的选择

3.2.3.3提取时间考察

抗妇炎胶囊(20131031)样品，混匀,取4份，每份约0.3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液25ml，分别超声(500W40KHz)处理10、25、30、40、60分钟，考察提取效果。试验结果见表8。

表8提取时间对含量测定的影响

试验结果表明：25分钟后有效成分提取较好，为确保提取完全，故将提取时间定为25-40分钟，优选提取30分钟，经济合理。

3.2.3.4不同品牌色谱柱的影响

分别采用ThermoC185μm，4.6×250mm、AgilentC185μm，4.6×250mm、WatersC185μm，4.6×250mm不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，分别测定抗妇炎胶囊(20131031)中盐酸小檗碱的含量，考察结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。

3.2.3.5稳定性试验

取抗妇炎胶囊(20131031)，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，见表9，结果表明样品稳定性良好。

表9稳定性试验结果

3.2.4方法学验证

3.1.4.1准确度

取已测定含量的抗妇炎胶囊(批号：20131031)(平均含量8.1088mg/g)约0.15g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.0441mg/ml)25ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算回收率，结果显示盐酸小檗碱平均回收率为101.72％、RSD为0.8％，回收率良好。

3.1.4.2重复性

取同一批抗妇炎胶囊(批号：20131031)，按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，结果盐酸小檗碱平均含量为8.1088mg/g、RSD为0.5％，说明有较好重复性。

3.1.4.3精密度

精密吸取同一盐酸小檗碱对照品溶液(97.5375μg/ml)10μl，连续进样6次，记录色谱图，盐酸小檗碱峰面积相对标准偏差(RSD)为0.14％，试验结果表明精密度良好。

3.1.4.4专属性

取抗妇炎胶囊(20131031)及阴性对照按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰。

3.1.4.5线性关系考察

按上述色谱条件，精密取盐酸小檗碱对照品(97.5375μg/ml)1μl，2μl，6μl，10μl，14μl，18μl，20μl依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归计算，绘制工作曲线，得出线性回归方程为：Y＝4853194.24X-82272.75,R＝0.9999，拟合过原点方程为：Y＝4763664.46X，随机选择一组数据,分别带入线性回归方程和拟合过原点方程进行验证，偏差为0.5％，说明拟合过原点方程成立，盐酸小檗碱在0.0975μg～1.9508μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。

3.1.5样品含量测定

按上述条件，分别测定19批样品，含量测定结果见表10。

表10含量测定结果

根据以上19批样品测定结果，暂定每粒抗妇炎胶囊含黄柏以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不得少于2.5mg，即2.94mg/g生药。

具体实施方式

实施例1

抗妇炎胶囊的检测方法，步骤如下：

性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒和粉末；味苦；

鉴别：(1)取本品内容物置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本品内容物2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝5:0.6:0.3在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品内容物2-5g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝30:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸【含量测定】黄柏项下的供试品溶液与对照品溶液及上述对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本品内容物5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇:甲酸＝20:0.3:0.05为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

检查：符合《中国药典》2010年版一部附录IL胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3％磷酸溶液＝82:9:9为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50∶50为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例2

抗妇炎胶囊的检测方法，步骤如下：

性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒和粉末；味苦；

鉴别：(1)取本品内容物置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本品内容物2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流35分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝6:0.7:0.3在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品内容物2-5g，加乙醚30ml，加热回流35分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝35:1.5:2为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理35分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸【含量测定】黄柏项下的供试品溶液与对照品溶液及上述对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝7:2:1.5:1.5:0.4为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本品内容物5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇:甲酸＝25:0.2:0.07为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

检查：符合《中国药典》2010年版一部附录IL胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3％磷酸溶液＝84:8:8为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置8分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理35分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝45∶55为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理35分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例3

治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，步骤如下：

性状：本品为糖衣片时，去除包衣后内容物显棕色至棕褐色；味苦；

本品为薄膜衣片时，去除包衣后内容物显棕色至棕褐色；味苦；

本品为软胶囊剂时，内容物为棕褐色的液体；味苦；

本品为颗粒剂时，为棕褐色的颗粒；味微甜；

本品为口服液时，为棕褐色的液体；味微甜；

本品为栓剂时，为棕褐色的栓剂。

本品阴道泡腾片，为棕色至棕褐色的片。

鉴别：(1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流25分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝3:0.8:0.2在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2-5g，加乙醚30ml，加热回流25分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝20:1.5:2为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理25分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝4:4:1:2:0.2为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝10:0.4:0.03为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

检查：符合《中国药典》2010年版一部附录IL片剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液等剂型项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝80:10:10为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝40:60为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例4

治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，步骤如下：

性状：本品为糖衣片时，去除包衣后内容物显棕色至棕褐色；味苦；

本品为薄膜衣片时，去除包衣后内容物显棕色至棕褐色；味苦；

本品为软胶囊剂时，内容物为棕褐色的液体；味苦；

本品为颗粒剂时，为棕褐色的颗粒；味微甜；

本品为口服液时，为棕褐色的液体；味微甜；

本品为栓剂时，为棕褐色的栓剂；

本品阴道泡腾片，为棕色至棕褐色的片；

鉴别：(1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝7:0.4:0.2在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2-5g，加乙醚30ml，加热回流40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝40:0.5:4为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝8:2:3:1:0.4为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡20分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝30:0.2:0.07为展开剂，预饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点

检查：符合《中国药典》2010年版一部附录IL软胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝84:8:8为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置10分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝60:40为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例5

取批号为20140121的抗妇炎胶囊，命名为样品1；

样品2：处方：苦参260g、杠板归260g、黄柏140g、连翘55g、益母草35g、赤小豆35g、艾叶35g、当归35g、乌药35g，按照糖衣片的常规制备方法制得；

样品3：处方：苦参300g、杠板归300g、黄柏200g、连翘70g、益母草40g、赤小豆40g、艾叶40g、当归40g、乌药40g，按照薄膜衣片的常规制备方法制得；

样品4：处方：苦参200g、杠板归200g、黄柏100g、连翘30g、益母草20g、赤小豆20g、艾叶20g、当归20g、乌药20g，按照软胶囊剂的常规制备方法制得；

样品5：处方：苦参220g、杠板归220g、黄柏180g、连翘40g、益母草25g、赤小豆25g、艾叶25g、当归25g、乌药25g，按照颗粒剂的常规制备方法制得；

样品6：处方：苦参280g、杠板归280g、黄柏120g、连翘60g、益母草30g、赤小豆30g、艾叶30g、当归30g、乌药30g，按照口服液的常规制备方法制得。

样品7：处方：苦参240g、杠板归240g、黄柏160g、连翘50g、益母草35g、赤小豆35g、艾叶35g、当归35g、乌药35g，按照栓剂的常规制备方法制得。

样品8：处方：苦参280g、杠板归280g、黄柏120g、连翘60g、益母草30g、赤小豆30g、艾叶30g、当归30g、乌药30g，按照阴道泡腾片常规制备方法制得。

上述样品，其中样品1按照实施例1-2的方法进行检测，样品2-8按照实施例3和4的方法进行检测，结果如下表11。性状：

表11样品质量检查结果

与现有技术相比，本发明所采用的方法科学合理，准确度高，重现性好，易于鉴别的测定，能全面有效地控制治疗妇科炎症药物制剂的质量，能更好地确保该制剂的临床疗效及安全性。

Claims (9)

1.一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，所述的制剂是由以下重量配比的药物制备而成：苦参200-300g、杠板归200-300g、黄柏100-200g、连翘30-70g、益母草20-40g、赤小豆20-40g、艾叶20-40g、当归20-40g、乌药20-40g；该检测方法由性状、鉴别、检查、含量测定组成，其特征在于：对黄柏、苦参进行显微鉴别，并以苦参对照药材、苦参碱和氧化苦参碱对照品作对照、以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝3-7:0.4-0.8:0.2-0.4为展开剂对苦参进行薄层鉴别，以阿魏酸作对照、以甲苯:冰醋酸:甲醇＝20-40:0.5-1.5:2-4为展开剂对当归进行薄层鉴别，以黄柏对照药材、盐酸小檗碱对照品作对照、以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝4-8:2-4:1-3:1-2:0.2-0.4为展开剂对黄柏进行薄层鉴别，以连翘对照药材作对照、以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝10-30:0.2-0.4:0.03-0.07为展开剂对连翘进行薄层鉴别；含量测定是照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法，以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝80-84:8-10:8-10为流动相、对苦参中的苦参碱和氧化苦参碱进行测定，以乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝40-60:40-60为流动相，对黄柏中的盐酸小檗碱进行测定。

2.根据权利要求1所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：鉴别方法如下：

(1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝3-7:0.4-0.8:0.2-0.4在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10-30分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2-5g，加乙醚30ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝20-40:0.5-1.5:2-4为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理25-40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝4-8:2-4:1-3:1-2:0.2-0.4为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15-20分钟，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:甲酸＝10-30:0.2-0.4:0.03-0.07为展开剂，预饱和15-20分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

3.根据权利要求2所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：鉴别方法如下：

(1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝5:0.6:0.3在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品2-5g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝30:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇:甲酸＝20:0.3:0.05为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

4.根据权利要求1所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：含量测定方法如下：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液＝80-84:8-10:8-10为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5-10分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝40-60:40-60为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

5.根据权利要求4所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：含量测定方法如下：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3％磷酸溶液＝82:9:9为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50∶50为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

6.根据权利要求1所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：所述药物制剂是由以下重量配比的药物制备而成：苦参250g、杠板归250g、黄柏150g、连翘50g、益母草30g、赤小豆30g、艾叶30g、当归30g、乌药30g。

7.根据权利要求1或6所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：所述药物制剂为硬胶囊剂、糖衣片、薄膜衣片、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、栓剂、阴道泡腾片。

8.根据权利要求1-7任一项所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：硬胶囊剂是由苦参250g、杠板归250g、黄柏150g、连翘50g、益母草30g、赤小豆30g、艾叶30g、当归30g、乌药30g制成1000粒，所述检测方法如下：

性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒和粉末；味苦；

鉴别：(1)取本品内容物置显微镜下观察：纤维鲜黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜黄色，类圆形或纺锤形，直径35～128μm，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；

(2)取本品内容物2g，加浓氨试液0.3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3μl，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷:甲醇:浓氨试液＝5:0.6:0.3在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品内容物2-5g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:冰醋酸:甲醇＝30:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取黄柏对照药材0.1g，精密加入盐酸:甲醇＝1:100的溶液25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸【含量测定】黄柏项下的供试品溶液与对照品溶液及上述对照药材溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:异丙醇:水＝6:3:2:1.5:0.3为展开剂，试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)取本品内容物5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇:甲酸＝20:0.3:0.05为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐:硫酸＝20:1混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

检查：符合《中国药典》2010年版一部附录IL胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3％磷酸溶液＝82:9:9为流动相；检测波长为220nm；理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml各含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml使湿润，放置5分钟，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

(2)黄柏：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾溶液＝50∶50为流动相,其中流动相溶液每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，精密称定，加盐酸:甲醇＝1:100的混合溶液制成每1ml含90μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液25ml，密塞，称定重量，500W、40KHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用盐酸:甲醇＝1∶100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

9.根据权利要求8所述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其特征在于：硬胶囊剂中，每粒含苦参以苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O)和氧化苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O₂)的总量计，不少于1.5mg；每粒含黄柏以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₇NO₄·HCl)计，不少于2.5mg。