CN105288552A - 一种用于红细胞再生的制剂制备方法及其制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药领域，涉及一种用于红细胞再生的制剂制备方法及其制剂。所述制剂包括以下重量份数的原料：黄芪6-15份、当归6-12份、白芍6-15份、熟地9-15份、大枣6-15份、鸡血藤9-15份、人参3-9份、阿胶3-9份、红景天3-9份、番红花1-3份、白茅根9-15份、枸杞子6-12份、五味子2-6份、天门冬1-6份、黄精9-15份、黄鳝藤1-5份、冬青子4-9份、干姜3-9份和紫河车1-3份；制备方法包括将上述原料药煎煮后得到的药物混合液与复合菌液按照1:0.05-0.3的比例混合后进行发酵，经过处理后得到制剂。该制剂具有益气活血、滋阴清热、补肝泻火、补益心脾、温肾健脾、补血生血的功效，还具有疗效好、副作用低、不易复发等优点。

Description

一种用于红细胞再生的制剂制备方法及其制剂

技术领域

本发明属于中药领域，尤其涉及一种用于红细胞再生的制剂制备方法及其制剂。

背景技术

贫血是指人体外周血红细胞容量臧少，低于正常范围下限的一种常见的临床症状。由于红细胞容量测定较复杂，临床上常以血红蛋白（Hb）浓度来代替。我国血液病学家认为在我国海平面地区，成年男性Hb<120g/L，成年女性（非妊娠）Hb<110g/L，孕妇Hb<100g/L就有贫血。

按发病原因，贫血可分为造血不良性、失血性和溶血性三大类，在化疗和放疗过程常常会出现溶血性贫血和造血不良性贫血，溶血性贫血是指红细胞破坏过多；造血不良性贫血是指药物或射线暂时性抑制造血功能，造成贫血。

化疗是指用细胞毒性药物如环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素等抗肿瘤药物治疗恶性肿瘤。由于这些药物选择性作用差，对正常的细胞，特别是骨髓的造血细胞，有一定的抑制和杀伤作用，因此在化疗中会出现对骨髓的抑制，引起红细胞、白细胞及血小板减少，加之化疗反应恶心、呕吐及食欲减退，达到一定程度时就会引起贫血。除了化疗，放疗也会造成贫血。放疗是利用放射线杀伤肿瘤细胞。体内更新增殖快的细胞，如骨髓细胞和胃肠粘膜细胞，对放射线特别敏感，因此在实施放疗时，特别是大面积多部位同时放疗，容易造成骨髓损伤、造血抑制，从而诱发贫血。

贫血的症状表现在以下几个方面：

1.神经系统。头昏、耳鸣、头痛、失眠、多梦、记忆减退、注意力不集中等，乃是贫血缺氧导致神经组织损害所致常见的症状。

2.皮肤黏膜。苍白是贫血时皮肤、黏膜的主要表现。贫血时机体通过神经体液调节进行有效血容量重新分配，相对次要脏器如皮肤、黏膜则供血减少；另外，由于单位容积血液内红细胞和血红蛋白含量减少，也会引起皮肤、黏膜颜色变淡。粗糙、缺少光泽甚至形成溃疡是贫血时皮肤、黏膜的另一类表现，可能还与贫血的原发病有关。溶血性贫血，特别是血管外溶血性贫血，可引起皮肤、黏膜黄染。

3.呼吸循环系统。贫血时红细胞内合成较多的2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG），以降低血红蛋白对氧的亲和力，使氧解离曲线右移，组织获得更多的氧。气急或呼吸困难，大都是由于呼吸中枢低氧或高碳酸血症所致。故轻度贫血无明显表现，仅活动后引起呼吸加快加深并有心悸、心率加快。贫血愈重，活动量愈大，症状愈明显。重度贫血时，即使平静状态也可能有气短甚至端坐呼吸。长期贫血，心脏超负荷工作且供氧不足，会导致贫血性心脏病，此时不仅有心率变化，还可有心律失常和心功能不全。

4.消化系统。贫血时消化腺分泌减少甚至腺体萎缩，进而导致消化功能减低、消化不良，出现腹部胀满、食欲减低、大便规律和性状的改变等。长期慢性溶血可合并胆道结石和脾大。缺铁性贫血可有吞咽异物感或异嗜症。巨幼细胞贫血或恶性贫血可引起舌炎、舌萎缩、牛肉舌、镜面舌等。

5.泌尿生殖内分泌系统。血管外溶血出现无胆红素的高尿胆原尿；血管内溶血出现血红蛋白尿和含铁血黄素尿，重者甚至可发生游离血红蛋白堵塞肾小管，进而引起少尿、无尿、急性肾衰竭。长期贫血会影响各内分泌腺体的功能和红细胞生成素的分泌。

中医认为，与造血有关的脏腑主要为心肝脾肾四者。任何内因、外因影响到这些脏腑的造血功能时，均可发生再障。例如：风寒可以直中三阴，三阴包括太阴脾经、少阴肾经及厥阴肝经，使肝脾肾三脏受损；七情妄动、大怒伤肝；思虑过度伤及心脾；饮食不节，伤及脾胃；房劳伤肾，使肾之阴阳亏损；邪毒包括化学、物理、生物因素等有害物质，入血伤髓。当这些致病因素影响上述脏腑的造血功能时，不仅出现本脏症状，还会出现血虚证候。《黄帝内经》记载：“精气内夺则积虚成损，积损成劳”。《类证治裁》记载：“虚损起于脾肾，劳几瘵多起于肾经”也说明这种虚损病因由于精气内夺引起，并与脾肾有关。精气、气血是人体正气的重要组成部分，精气内夺，气血两虚，容易招致感染，如《内经》记载：

“邪之所凑，其气必虚”，“正气内存，邪不可干”，气虚不能摄血，阴虚内热，以及感染发热，热伤血络及迫血妄行，皆可引起出血。这是再障血虚、发热，出血三方面症状的发病机理。

现有补血产品主要有以下三类：纯中药类、纯铁制剂类以及中药加铁类。而单纯铁制剂则起效快，疗效确切，但铁剂普遍存在对胃肠有刺激性的缺陷，且口感差、还会染黑牙齿；现有的中药加铁制剂虽然部分弥补了铁剂刺激胃肠的不足，也仍然可引起便秘。纯中药类补血制剂主要通过提升人体脾胃等机能来促进膳食中铁的吸收，同时还可促进骨髓细胞的造血功能，通过养血进而补血，然而目前存在起效慢以及对缺铁性贫血患者的补铁量不足的缺陷。

公开号为101869609A的中国专利文献公开了一种气血双补药物，包括以下重量份的原材料：绿矾24-36份，大枣20-30份，鹿心血20-30份，紫河车16-24份，按照重量份取各原材料，将绿矾用水泡24小时，晾干研磨成细粉，大枣去核晾干研磨成细粉，鹿心血晾干研磨成细粉，紫河车晾干研磨成细粉，将上述细粉混合后，将混合后的细粉用无菌纯净水做丸后灌制成胶囊，该药物具有养阴助阳，填精补髓，补脾益肾，滋补生血之功效，能够提升血色素，促进红细胞再生，对提升血小板也有一定的效果。但是药物组合不全面，疗效慢，效果不明显。

发明内容

为了解决该技术问题，本发明提供了一种用于红细胞再生的制剂制备方法及其制剂，该制剂具有益气活血、滋阴清热、补肝泻火、补益心脾、温肾健脾、补血生血的功效，药物组合合理且全面，还具有疗效好、副作用低、不易复发等优点，此外，本发明还提供该药物制剂相应的制造工艺。

其中，本发明提供一种用于红细胞再生的制剂制备方法，包含下述步骤：

（100）、按如下重量组份取原料药：

黄芪6-15份、当归6-12份、白芍6-15份、熟地9-15份、大枣6-15份、鸡血藤9-15份、人参3-9份、阿胶3-9份、红景天3-9份、番红花1-3份、白茅根9-15份、枸杞子6-12份、五味子2-6份、天门冬1-6份、黄精9-15份、黄鳝藤1-5份、冬青子4-9份、干姜3-9份和紫河车1-3份；

（200）、煎煮原料药；

对上述原料药加入重量为原料药8-10倍量的水，煎煮1-3小时，得到原料煎液；

（300）、过滤；

对原料煎液进行过滤除杂，得到药物混合液；

（400）、发酵；

（410）将药物混合液装入发酵罐中，升温至121摄氏度进行高温灭菌，灭菌时间为5-10分钟，冷却至25-28摄氏度；

（420）在冷却后的药物混合液中按1:0.05-0.3的重量组份比例加入复合菌液，混合均匀，得到混合药液；

（430）在25-28摄氏度的条件下，发酵罐内保持正压，连续或间歇搅拌，连续地向发酵罐内通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到发酵液；

（500）、破壁处理；

对过滤后的发酵液使用超声波细胞破碎仪进行破壁处理，每次超声1-3s,间隔1-3s,共超声40-50次；

（600）过滤处理

用过滤离心机对破壁处理后的发酵液高速离心，除去大部分杂质，采用反渗透膜过滤法进行精滤，即得到用于红细胞再生的制剂。

作为对本发明的改进，在步骤（420）中，所述复合菌液的制备方法步骤如下；

（1）、培养液的制备，取重量份的麦芽粉20-30份，淀粉60-80份，按下述方法处理；

（11）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度；

（12）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混

合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；

（13）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟；

（14）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，分离出固相物质，被分离后的糖化汁进入发酵罐内；

（15）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度；

（2）、接种；

按被分离后的糖化汁的总重量的3-10%接入混合菌种，其中，混合菌种由重量相等的黑根霉、黑曲霉、红曲霉、白地霉和米酒酵母组成；

（3）、发酵；

在25-28摄氏度，发酵罐内保持正压，连续或间歇搅拌，连续地向被分离后的糖化汁通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到复合菌液；

作为对本发明的改进，在步骤（100）中，按如下重量组分取原料药；

黄芪8-13份、当归7-11份、白芍7-13份、熟地10-14份、大枣7-14份、鸡血藤10-14份、人参4-8份、阿胶4-8份、红景天4-8份、番红花1-3份、白茅根10-14份、枸杞子7-11份、五味子3-6份、天门冬1-5份、黄精10-14份、黄鳝藤2-5份、冬青子4-8份、干姜4-8份、紫河车1-3份和绿矾1-3份。

作为对本发明的改进，在步骤（100）中，按如下重量组分取原料药；

黄芪9-12份、当归8-10份、白芍8-12份、熟地11-13份、大枣8-12份、鸡血藤11-13份、人参5-7份、阿胶5-7份、红景天5-8份、番红花1-3份、白茅根11-13份、枸杞子8-10份、五味子3-5份、天门冬2-4份、黄精11-13份、黄鳝藤2-4份、冬青子5-7份、干姜5-7份、紫河车1-3份和绿矾1-3份。

作为对本发明的改进，在步骤（100）中，按如下重量组分取原料药；

黄芪10份、当归9份、白芍10份、熟地12份、大枣9份、鸡血藤12份、人参6份、阿胶6份、红景天7份、番红花2份、白茅根12份、枸杞子9份、五味子4份、天门冬3份、黄精12份、黄鳝藤3份、冬青子6份、干姜6份、紫河车2份和绿矾2份。

作为对本发明的改进，在步骤（2）中，所述混合菌种的制备方法的步骤如下；

（21）、将黑根霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得黑根霉种液；

（22）、将黑曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得黑曲霉种液；

（23）、将红曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得红曲霉种液；

（24）、将白地霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得白地霉种液；

（25）将米酒酵母按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得米酒酵母种液；

（26），将上述制备的黑根霉种液、黑曲霉种液、红曲霉种液、白地霉种液和米酒酵母种液，按等重量混合，即得混合菌种。

作为对本发明的改进，在步骤（1）中的所述淀粉可以是大米粉、小麦粉、红薯粉或马铃薯粉，或者是大米粉、小麦粉、红薯粉和马铃薯粉中的任意两种以上的组合物。

作为对本发明的改进，在第（600）步后，还包括以下步骤：

（700）分装；

将制剂按预定包装容量进行分装。

本发明还公开了一种用于红细胞再生的制剂，该制剂是用上述方法制备得到的。

本发明所用组分的来源、性味、归经及功效：

肉桂：本品为樟科植物肉桂的干燥树皮；味辛、甘，性热；归肾、脾、心、肝经；补火助阳，引火归源，散寒止痛，活血通经。

黄芪：本品为豆科植物红花岩黄芪的干燥根；味甘，性温；归心、肺、脾、肾经；补气固表，利尿，托毒排脓，生肌敛疮。

当归：本品为伞形科植物当归的干燥根；味甘、辛，性温；归肝、心、脾经；补血活血，调经止痛，润肠通便。

白芍：本品为毛茛科植物芍药的干燥根；味苦、酸，性微寒；归肝、脾经；平肝止痛，养血调经，敛阴止汗。

熟地：本品为生地黄的炮制加工品；味甘，性微温；归肝、肾经；滋阴补血，益精填髓。

大枣：本品为鼠李科枣属植物枣的干燥成熟果实，味甘，性温；归脾、胃经；补中益气，养血安神。

鸡血藤：本品为豆科植物密花豆的干燥藤茎；味苦、甘，性温；归肝、肾经；补血，活血，通络

人参：本品为五加科植物人参的干燥根；味甘、微苦，性平；归脾、肺、心经；大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神。

阿胶：本品为马科动物驴的皮经煎煮、浓缩制成的固体胶；味甘，性平；归肺、肝、肾经；补血滋阴，润燥，止血。

红景天：本品为景天科红景天属植物红景天的干燥全草；性寒，味甘、涩；归肺经；补气清肺，益智养心，收涩止血，散瘀消肿。

番红花：本品为鸢尾科植物番红花的柱头；性平，味甘；归心、肝经；活血化瘀，凉血解毒，解郁安神。

白茅根：本品为禾本科植物白茅的干燥根茎；味甘，性寒；归肺、胃、膀胱经；凉血止血，清热利尿。

枸杞子：本品为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实；味甘，性平；归肝、肾经；滋补肝肾，益精明目。

五味子：本品为木兰科植物五味子或华中五味子的干燥成熟果实；味酸、甘，性温；归肺，心、肾经；收敛固涩，益气生津，补肾宁心。

天门冬：本品为为百合科植物天门冬的块根；味甘苦，性寒；归肺、肾经；滋阴，润燥，清肺，降火。

黄精：本品为百合科植物滇黄精、黄精或多花黄精的干燥根茎；味甘，性平；归脾、肺、肾经；补气养阴，健脾，润肺，益肾。

黄鳝藤：本品为鼠李科勾儿茶属植物多花勾儿茶的干燥根；味微涩，性温；归肝、胆经；祛风利湿，活血止痛。

冬青子：本品为冬青科植物冬青的果实；味甘、苦，性凉；归肝、肾经；补肝肾，去风湿，止血敛疮。

干姜：本品为姜科植物姜的干燥根茎；味辛，性热；归脾、胃、肾、心、肺经；干姜温中散寒，回阳通脉，燥湿消痰。

紫河车：本品为健康人的干燥胎盘；味甘、咸，性温；归心、肺、肾经；温肾补精，益气养血。

与现有技术相比，本发明具有如下技术优势：

1、本发明药物组合物与其他红细胞再生的药物相比，在清热解毒、滋补肝肾，益精明目方面，具有更显著的的功效。

2、与当前红细胞再生的化学治疗药物相比，本发明药物组合物为天然纯中药制剂，不良反应和副作用显著降低，且本发明药物组合物作用全面，药物治疗效果更佳。

3、本发明药物组合物还具有配伍科学、制备工艺简单、疗效好、副作用低、不易复发和易于推广应用等优点。

附图说明

图1是本发明制剂的制备原理结构示意图。

图2是图1中复合菌液制备原理结构示意图。

图3是图2中培养液制备的方框结构示意图。

具体实施方式

本领域技术人员应理解，以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术。然而，在所公开的具体实施方案中可以做出许多改变，并仍然获得相同或相似的结果，而不脱离本发明的精神和范围。

请参见图1，图1揭示了一种用于红细胞再生的制剂制备方法，包含下述步骤；

（100）、按如下重量组份取原料药：

黄芪6-15份、当归6-12份、白芍6-15份、熟地9-15份、大枣6-15份、鸡血藤9-15份、人参3-9份、阿胶3-9份、红景天3-9份、番红花1-3份、白茅根9-15份、枸杞子6-12份、五味子2-6份、天门冬1-6份、黄精9-15份、黄鳝藤1-5份、冬青子4-9份、干姜3-9份和紫河车1-3份。

（200）、煎煮原料药；

在煎煮上述原料药之前，对上述原料药进行清除杂质和分离、去除非药用部位，再浸泡、淘洗原料药，必要时适当地切碎或粉碎；

对上述原料药加入重量为原料药8-10倍量的水，煎煮1-3小时，得到原料煎液。

（300）、过滤；

对原料煎液过滤除杂，通常使用的过滤方式是板框过滤或离心过滤，得到药物混合液。板框过滤的设备是板框过滤机，其工作原理是利用浮液用泵送入滤机的每个密闭的滤室，在工作压力的作用下，滤液透过滤膜或其它滤材，经出液口排出，滤渣则留在框内形成滤饼，从而达到固液分离目的。其中滤板采用螺纹网状结构，可根据不同过滤介质和生产工艺的要求，更换不同滤材。还可以根据过滤量的大小，相应减少或增加过滤层数，使之适合生产需要；

离心过滤方式的设备是过滤离心机，其工作原理是，在过滤离心机转鼓壁上有许多孔，转鼓内表面覆盖过滤介质。加入转鼓的悬浮液随转鼓一同旋转产生巨大的离心压力，在压力作用下悬浮液中的液体流经过滤介质和转鼓壁上的孔甩出，固体被截留在过滤介质表面，从而实现固体与液体的分离。悬浮液在转鼓中产生的离心力为重力的千百倍，使过滤过程得以强化，加快过滤速度，获得含湿量较低的滤渣。固体颗粒大于0.01毫米的悬浮液一般可用过滤离心机过滤；

除了板框过滤机和过滤离心机，还可以采用硅藻土过滤机。硅藻土过滤机的结构是，在过滤机内，自下而上水平放置不锈钢过滤圆盘，圆盘的上层是不锈钢滤网，下层是不锈钢支撑板，中间是液体收集腔。工作原理是，过滤时，先进行硅藻土预涂，使盘上形成一层硅藻土涂层，待过滤液体，在泵压力作用下，通过预涂层而进入收集腔内，颗粒及高分子被截流在预涂层，进入收集腔内的澄清液体，通过中心轴，流出容器。

（400）、发酵。

（410）将药物混合液装入发酵罐中，升温至121摄氏度进行高温灭菌，灭菌时间为5-10分钟，冷却至25-28摄氏度；

（420）在冷却后的药物混合液中按1:0.05-0.3的重量组份比例加入复合菌液，混合均匀，得到混合药液；

（430）在25-28摄氏度的条件下，发酵罐内保持正压，连续或间歇搅拌，连续地向发酵罐内通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到发酵液。

（500）、破壁处理；

对过滤后的发酵液使用超声波细胞破碎仪进行破壁处理，每次超声1-3s,间隔1-3s,共超声40-50次；

超声波细胞破碎仪的工作原理是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用。超声波细胞破碎仪包括超声波发生器，信号发生器的作用是产生一个特定频率的信号，这个特定频率就是换能器的频率，一般应用在超声波设备中的超声波频率为20KHz、25KHz、28KHz、33KHz、40KHz、60KHz；换能器组件，换能器组件主要由换能器和变幅杆组成；隔音箱，作用是可以有效地的降低工作过程中的所发出的噪音；

除了超声波细胞破碎的方法，还可以使用渗透压冲击法，即将发酵液先置于高渗透压的溶液当中，用于提高发酵液中细胞的体内渗透压，再离心分离菌体，重悬于水中，利用细胞内外渗透压的压差，可释放细胞内的有效成分。

（600）过滤处理；

用过滤离心机对破壁处理后的发酵液高速离心，除去大部分杂质，采用反渗透膜过滤法进行精滤，即得到用于治疗眼病的制剂；

反渗透是一种借助于选择透过性膜的功能以压力为推动力的膜分离技术，当系统中所加的压力大于发酵液渗透压时，发酵液中的分子不断地透过膜，经过流道流入中心管，然后在另一端流出发酵液中的杂质，如离子、病毒等，被截留在膜的进液侧，然后在出液端流出，从而达到分离净化目的。反渗透膜过滤的设备包括精细过滤器、颗粒活性炭过滤器、压缩活性炭过滤器等，发酵液依次经过上述设备，再通过泵加压，利用反渗透膜，使较高浓度的发酵液变为低浓度发酵液，同时将杂质全部隔离，从而达到净化和过滤的效果。

在第（600）步后，还包括以下步骤：

（700）分装。将制剂按预定包装容量进行分装,制剂为口服剂的，按照注射剂工艺要求，灌封于安瓿或易拉盖瓶中，通常是每瓶10毫升，灭菌后即可服用。

其中，在步骤（420）中，所述复合菌液的制备方法步骤如下（如图2和图3）：

（1）、培养液的制备，取重量份的麦芽粉20-30份，淀粉60-80份，按下述方法处理：

（11）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度；

（12）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；在糖化过程中可以用碘作检测，如果碘检测不出现碘与淀粉的反应，则说明糖化过程结束，可以进行下一步动作；

（13）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟；

（14）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，在旋涡分离器内实现固液分离，被分离后的糖化汁进入发酵罐内；

（15）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，达到消灭杂菌的效果，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度；

（2）、接种；

按被分离后的糖化汁的总重量的3-10%接入混合菌种，其中，混合菌种由重量相等的黑根霉、黑曲霉、红曲霉、白地霉和米酒酵母组成；

（3）、发酵；

在25-28摄氏度，保持发酵罐内正压，连续或间歇搅拌，且连续地向被分离后的糖化汁通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到发酵液；

优选的，在所述第（3）步之后，还可以包括如下步骤，

（4）、过滤；

用过滤器将发酵液中的固态物滤除，得到复合菌液。

优选的，所述混合菌种是按如下方法制备的：

（21）、将黑根霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得黑根霉种液；

（22）、将黑曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得黑曲霉种液；

（23）、将红曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得红曲霉种液；

（24）、将白地霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得白地霉种液；

（25）、将米酒酵母按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得米酒酵母种液；

（26）、将上述制备的黑根霉种液、黑曲霉种液、红曲霉种液、白地霉种液和米酒酵母种液，按等重量混合，即得混合菌种；

制备菌种的麦芽汁是直接用麦芽，按麦芽与水的比例，重量份1：3-5调匀后，在64-66摄氏度范围内，糖化4-6小时得到，高压灭菌（1个大气压，121摄氏度，60分钟）后，冷却得到；

上述黑根霉菌种、黑曲霉菌种、红曲霉菌种和白地霉菌种，均从中国微生物菌种保藏管理委员会武汉大学保藏中心获得；米酒酵母菌种从市面上购得。

优选的，所述淀粉可以大米粉，尤其是应用米厂扎米时剩下的碎米，磨成粉为最佳；小麦粉可以包含麦麸在内；红薯粉可以用红薯制作，马铃薯粉是用马铃薯制作的。本发明中，也可以采用大米粉、小麦粉、红薯粉和马铃薯粉中的任意两种以上的组合物。本明中的大米粉、小麦粉、红薯粉和马铃薯粉最好是磨成100目以上的细粉。

制备培养液的具体实施方式如下：

实施例一

培养液的制备包括以下重量份数的原料：

麦芽粉20份，淀粉60份，按下述方法处理，

（201）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度。

（202）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；在糖化过程中可以用碘作检测，如果碘检测不出现碘与淀粉的反应，则说明糖化过程结束，可以进行下一步动作。

（203）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟。

（204）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，在旋涡分离器内实现固液分离，被分离后的糖化汁进入发酵罐内。

（205）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，达到消灭杂菌的效果，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度，得到培养液。

实施例二

培养液的制备包括以下重量份数的原料：

麦芽粉25份，淀粉65份，按下述方法处理。

（201）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度。

（202）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；在糖化过程中可以用碘作检测，如果碘检测不出现碘与淀粉的反应，则说明糖化过程结束，可以进行下一步动作。

（203）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟。

（204）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，在旋涡分离器内实现固液分离，被分离后的糖化汁进入发酵罐内。

（205）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，达到消灭杂菌的效果，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度，得到培养液。

实施例三

培养液的制备包括以下重量份数的原料：

麦芽粉30份，淀粉70份，按下述方法处理。

（201）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度。

（202）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；在糖化过程中可以用碘作检测，如果碘检测不出现碘与淀粉的反应，则说明糖化过程结束，可以进行下一步动作。

（203）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟。

（204）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，在旋涡分离器内实现固液分离，被分离后的糖化汁进入发酵罐内。

（205）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，达到消灭杂菌的效果，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度，得到培养液。

实施例四

培养液的制备包括以下重量份数的原料：

麦芽粉25份，淀粉75份，按下述方法处理。

（201）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度。

（202）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；在糖化过程中可以用碘作检测，如果碘检测不出现碘与淀粉的反应，则说明糖化过程结束，可以进行下一步动作。

（203）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟。

（204）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，在旋涡分离器内实现固液分离，被分离后的糖化汁进入发酵罐内。

（205）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，达到消灭杂菌的效果，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度，得到培养液。

实施例五

培养液的制备包括以下重量份数的原料：

麦芽粉30份，淀粉80份，按下述方法处理。

（201）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度。

（202）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；在糖化过程中可以用碘作检测，如果碘检测不出现碘与淀粉的反应，则说明糖化过程结束，可以进行下一步动作。

（203）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟。

（204）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，在旋涡分离器内实现固液分离，被分离后的糖化汁进入发酵罐内。

（205）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，达到消灭杂菌的效果，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度，得到培养液。

（4）、二次发酵。

（41）将药物混合液装入二次发酵罐中，高温灭菌，冷却至25-28摄氏度。

（42）将复合菌液15份加入到药物混合液中，混合均匀。

（43）将培养液加入二次发酵罐中，混合均匀，在25-28摄氏度的条件下，二次发酵罐内保持正压，连续或间歇搅拌，连续地向发酵罐内通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到二次发酵液。

本发明还公开了一种用于红细胞再生的制剂，该制剂是用上述方法制备得到的。

该制剂的原料重量份数的具体实施方式如下；

实施例1：

本发明实施例1包括以下重量份数的原料：

黄芪6份、当归6份、白芍6份、熟地9份、大枣6份、鸡血藤9份、人参3份、阿胶3份、红景天3份、番红花1份、白茅根9份、枸杞子6份、五味子2份、天门冬1份、黄精9份、黄鳝藤1份、冬青子4份、干姜3份和紫河车1份。

实施例2：

本发明实施例2包括以下重量份数的原料：

黄芪8份、当归7份、白芍7份、熟地10份、大枣7份、鸡血藤10份、人参4份、阿胶4份、红景天4份、番红花1份、白茅根10份、枸杞子7份、五味子3份、天门冬1份、黄精10份、黄鳝藤2份、冬青子4份、干姜4份和紫河车1份。

实施例3：

本发明实施例3包括以下重量份数的原料：

黄芪9份、当归8份、白芍8份、熟地11份、大枣8份、鸡血藤11份、人参5份、阿胶5份、红景天5份、番红花1份、白茅根11份、枸杞子8份、五味子3份、天门冬2份、黄精11份、黄鳝藤2份、冬青子5份、干姜5份和紫河车1份。

实施例4：

本发明实施例4包括以下重量份数的原料：

黄芪10份、当归9份、白芍10份、熟地12份、大枣9份、鸡血藤12份、人参6份、阿胶6份、红景天7份、番红花2份、白茅根12份、枸杞子9份、五味子4份、天门冬3份、黄精12份、黄鳝藤3份、冬青子6份、干姜6份和紫河车2份。

实施例5：

本发明实施例5包括以下重量份数的原料：

黄芪12份、当归10份、白芍12份、熟地13份、大枣12份、鸡血藤13份、人参7份、阿胶7份、红景天8份、番红花3份、白茅根13份、枸杞子10份、五味子5份、天门冬4份、黄精13份、黄鳝藤4份、冬青子7份、干姜7份和紫河车3份。

实施例6：

本发明实施例6包括以下重量份数的原料：

黄芪13份、当归11份、白芍13份、熟地14份、大枣14份、鸡血藤14份、人参8份、阿胶8份、红景天8份、番红花3份、白茅根14份、枸杞子11份、五味子6份、天门冬5份、黄精14份、黄鳝藤5份、冬青子8份、干姜8份和紫河车3份。

实施例7：

本发明实施例7包括以下重量份数的原料：

黄芪15份、当归12份、白芍15份、熟地15份、大枣15份、鸡血藤15份、人参9份、阿胶9份、红景天9份、番红花3份、白茅根15份、枸杞子12份、五味子6份、天门冬6份、黄精15份、黄鳝藤5份、冬青子9份、干姜9份和紫河车3份。

临床疗效观察

本发明的组合物所制成的制剂，经测试，与对照样品1、对照样品2相比较如下表1和表2所示：

志愿者的挑选：

1、挑选160名溶血性贫血患者，其中男性80名，女性80名，年龄最大75岁，最32岁。将160名溶血性贫血患者随机分成八组，每组20人，每组对应分别饮用对照样品1、对照样品2、实施例1样品、实施例2样品、实施例3样品、实施例4样品、实施例5样品、实施例6样品及其实施例7样品制成的口服液。

2、挑选160名造血不良性贫血患者，其中男性80名，女性80名，年龄最大76岁，最小35岁。将160名造血不良性贫血患者随机分成八组，每组20人，每组对应分别饮用对照样品1、对照样品2、实施例1样品、实施例2样品、实施例3样品、实施例4样品、实施例5样品、实施例6样品及其实施例7样品制成的口服液。其中，对照品1是阿胶补血颗粒（国药准字Z37021196，山东东阿阿胶股份有限公司生产），对照品2是生脉饮（国药准字Z20053079，湖北济安堂药业有限公司生产）。

排除标准：

(1)治疗期间随意终止或更换治疗药物及方法者；

(2)妊娠期、哺乳期妇女；

(3)有神经精神疾病及严重内分泌疾病患者；

(4)合并有严重心、肝、肾等内脏疾病者。

口服的用量：

实施例样品：每人每日2次，每次1瓶（10ml），疗程为两周。

对照品1：每人每日2次，每次1袋，疗程为两周。

对照品2：，每人每日2次，每次1支，疗程为两周。

疗效标准

（1）有效：症状消失或改善；

（2）效果不明显：症状改善轻微、无改善或加重。

上述症状是指：身体乏力倦怠，懒言，头晕目眩，心悸气短，面色无华，自汗或盗汗，健忘失眠，胸闷不舒，形体消瘦，舌淡苔白，脉细弱或结代。

治疗效果的分析：

由上表可知，溶血性贫血患者中，使用本发明中的口服液的，有效率均达到85%以上，即有85%的患者症状得到明显改善；而使用对照样品1和对照样品2的患者，有效率为30%和40%，其他人使用后效果均不明显。

同样地，对于造血不良性贫血患者，使用本发明中的口服液的，有效率也达到85%以上，即有85%的患者症状得到明显改善；而使用对照样品1和对照样品2的患者，有效率均为50%和35%，其他人使用后效果均不明显。

由此可知，相对于对照样品1和对照样品2而言，本发明中的口服液对于溶血性贫血患者和造血不良性贫血患者的病情具有非常明显的改善效果。

其中，采用紫河车、阿胶、熟地、大枣和鸡血藤补血养血，采用干姜、黄芪和当归和胃消食，人参、五味子和黄精补气温肾，与其他药物组合，共同作用，达到全面促进红细胞再生的效果。

由于已经通过以上较佳实施例描述了本发明，在本发明的精神和/或范围内，任何针对本发明的替换/或组合来实施本发明，对于本领域的技术人员来说都是显而易见的，且包含在本发明之中。

Claims (9)

1.一种用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，其步骤如下（100）、按如下重量组份取原料药：

黄芪6-15份、当归6-12份、白芍6-15份、熟地9-15份、大枣6-15份、鸡血藤9-15份、人参3-9份、阿胶3-9份、红景天3-9份、番红花1-3份、白茅根9-15份、枸杞子6-12份、五味子2-6份、天门冬1-6份、黄精9-15份、黄鳝藤1-5份、冬青子4-9份、干姜3-9份和紫河车1-3份；

（200）、煎煮原料药；

对上述原料药加入重量为原料药8-10倍量的水，煎煮1-3小时，得到原料煎液；（300）、过滤；

对原料煎液进行过滤除杂，得到药物混合液；

（400）、发酵；

（410）将药物混合液装入发酵罐中，升温至121摄氏度进行高温灭菌，灭菌时间为5-10分钟，冷却至25-28摄氏度；

（420）在冷却后的药物混合液中按1:0.05-0.3的重量组份比例加入复合菌液，混合均匀，得到混合药液；

（430）在25-28摄氏度的条件下，发酵罐内保持正压，连续或间歇搅拌，连续地向发酵罐内通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到发酵液；

（500）、破壁处理；

对过滤后的发酵液使用超声波细胞破碎仪进行破壁处理，每次超声1-3s,间隔1-3s,共超声40-50次；

（600）过滤处理；

用过滤离心机对破壁处理后的发酵液高速离心，除去大部分杂质，采用反渗透膜过滤法进行精滤，即得到用于红细胞再生的制剂。

2.根据权利要求1所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在步骤（420）中，所述复合菌液的制备方法步骤如下；

（1）、培养液的制备，取重量份的麦芽粉20-30份，淀粉60-80份，按下述方法处理；

（11）、淀粉糊化，将淀粉与水按1：2-3重量份的比例放入糊化锅，升温至90-100摄氏度，在不断搅拌的情况下，直至淀粉成糊状，再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度调到68-73摄氏度；

（12）、将麦芽粉放入糖化锅内，将（11）步制好的浆料移到糖化锅内，在搅拌的情况下，使麦芽粉与浆料充分混合，然后，静置，并保持温度在64-66摄氏度范围内，4-6小时，直到淀粉完全被糖化；

（13）、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内，升温至100摄氏度，煮沸5-10分钟；

（14）、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器，分离出固相物质，被分离后的糖化汁进入发酵罐内；

（15）、在发酵罐内将温度升至121摄氏度，维持1小时，然后，用无菌空气保持发酵罐内正压时，将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度；

（2）、接种；

按被分离后的糖化汁的总重量的3-10%接入混合菌种，其中，混合菌种由重量相等的黑根霉、黑曲霉、红曲霉、白地霉和米酒酵母组成；（3）、发酵；

在25-28摄氏度，发酵罐内保持正压，连续或间歇搅拌，连续地向被分离后的糖化汁通入无菌空气的情况下，发酵5-10小时，得到复合菌液。

3.根据权利要求1或2所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在步骤（100）中，按如下重量组分取原料药；

黄芪8-13份、当归7-11份、白芍7-13份、熟地10-14份、大枣7-14份、鸡血藤10-14份、人参4-8份、阿胶4-8份、红景天4-8份、番红花1-3份、白茅根10-14份、枸杞子7-11份、五味子3-6份、天门冬1-5份、黄精10-14份、黄鳝藤2-5份、冬青子4-8份、干姜4-8份和紫河车1-3份。

4.根据权利要求1或2所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在步骤（100）中，按如下重量组分取原料药；

黄芪9-12份、当归8-10份、白芍8-12份、熟地11-13份、大枣8-12份、鸡血藤11-13份、人参5-7份、阿胶5-7份、红景天5-8份、番红花1-3份、白茅根11-13份、枸杞子8-10份、五味子3-5份、天门冬2-4份、黄精11-13份、黄鳝藤2-4份、冬青子5-7份、干姜5-7份和紫河车1-3份。

5.根据权利要求1或2所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在步骤（100）中，按如下重量组分取原料药；

黄芪10份、当归9份、白芍10份、熟地12份、大枣9份、鸡血藤12份、人参6份、阿胶6份、红景天7份、番红花2份、白茅根12份、枸杞子9份、五味子4份、天门冬3份、黄精12份、黄鳝藤3份、冬青子6份、干姜6份、和紫河车2份。

6.根据权利要求2所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述混合菌种的制备方法的步骤如下；

（21）、将黑根霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得黑根霉种液；

（22）、将黑曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得黑曲霉种液；

（23）、将红曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得红曲霉种液；

（24）、将白地霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得白地霉种液；

（25）将米酒酵母按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内，放在摇床上，在25-28摄氏度，培养5-7小时，即得米酒酵母种液；

（26），将上述制备的黑根霉种液、黑曲霉种液、红曲霉种液、白地霉种液和米酒酵母种液，按等重量混合，即得混合菌种。

7.根据权利要求2所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在步骤（1）中的所述淀粉可以是大米粉、小麦粉、红薯粉或马铃薯粉，或者是大米粉、小麦粉、红薯粉和马铃薯粉中的任意两种以上的组合物。

8.根据权利要求1或2所述的用于红细胞再生的制剂制备方法，其特征在于，在第（600）步后，还包括以下步骤：

（700）分装；

将制剂按预定包装容量进行分装。

9.一种用于红细胞再生的制剂，其特征在于，用权利要求1-8中任何一项权利要求所述的方法制备的制剂。