CN105283182A - 用谷氨酰胺酶的杂环抑制剂治疗癌症 - Google Patents

用谷氨酰胺酶的杂环抑制剂治疗癌症 Download PDF

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L.陈
B.戈亚尔
G.莱迪
T.F.斯坦顿
E.B.舍格伦
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Abstract

本发明涉及新的杂环化合物及其药物制剂以及使用本发明的化合物治疗或预防癌症的方法。其它方面涉及鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定患者的癌细胞中谷氨酸与谷氨酰胺的比率、谷氨酰胺酶与谷氨酰胺合成酶比率或谷氨酰胺酶活性。

Description

用谷氨酰胺酶的杂环抑制剂治疗癌症
相关申请
本申请要求2012年12月3日提交的美国临时专利申请号61/732,755、2013年1月4日提交的美国临时专利申请号61/749,016、2013年3月14日提交的美国临时专利申请号61/784,984、2013年4月8日提交的美国临时专利申请号61/809,795和2013年5月17日提交的美国临时专利申请号61/824,513的优先权的权益，所述申请通过引用以其整体结合到本文中。
发明背景
谷氨酰胺通过代谢和非代谢机制支持细胞存活、生长和增殖。在活跃增殖的细胞中，谷氨酰胺代谢成为乳酸，亦称为“谷氨酰胺分解(glutaminolysis)”，是呈NADPH形式的能量的主要来源。谷氨酰胺分解中的第一步是谷氨酰胺脱氨基形成谷氨酸和氨，这被谷氨酰胺酶(GLS)催化。因此，通过谷氨酰胺酶脱氨基是谷氨酰胺代谢的控制点。
自Warburg观察到腹水肿瘤细胞在氧气存在下显示高速率的葡萄糖消耗和乳酸分泌以来(Warburg，1956)，研究人员探索了癌细胞如何利用代谢途径以便能够继续活跃增殖。几份报告表明谷氨酰胺代谢如何支持细胞复制所必需的大分子合成(Curthoys，1995；DeBardinis，2008)。
因此，据推理，谷氨酰胺酶为用于治疗特征在于活跃增殖细胞的疾病(例如癌症)的潜在治疗靶标。缺乏合适的谷氨酰胺酶抑制剂使得不可能验证该靶标。因此，是特异性的并且能够配制用于体内使用的谷氨酰胺酶抑制剂的产生可导致新的一类治疗剂。
发明概述
本发明提供治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予式I的化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH＝CH或优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X每次出现时独立地表示S、O或CH＝CH，优选S或CH＝CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立地表示H、烷基、烷氧基或羟基；
R3每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H。
在某些实施方案中，癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、黑素瘤、肾癌和B细胞恶性肿瘤。在其中癌症是乳腺癌的某些这类的实施方案中，乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌(claudin-lowbreastcancer)细胞。在其中癌症是内分泌癌的某些实施方案中，内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。在其中癌症是B细胞恶性肿瘤的某些实施方案中，B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤；白血病，例如急性成淋巴细胞性白血病或慢性成淋巴细胞性白血病；和淋巴瘤，例如伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤。
在某些实施方案中，本发明提供适用于在人类患者中治疗或预防癌症例如乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、黑素瘤、肾癌或B细胞恶性肿瘤的药物制剂，所述制剂包括有效量的本文所述任何化合物(例如本发明的化合物，例如式I的化合物)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物制剂可用于治疗或预防本文所述病况或疾病。在某些实施方案中，药物制剂具有足够低的致热原活性以适于人类患者静脉内使用。
附图详述
图1显示化合物670针对一组乳腺肿瘤细胞系的谷氨酰胺依赖性和抗增殖作用之间的相关性。
图2显示三阴性乳腺癌亚型中谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶的差异性表达。
图3显示MDA-MB-231原位异种移植物模型的单药剂化合物402治疗。
图4显示MDA-MB-231原位异种移植物模型中化合物389和紫杉醇的联合研究。
图5显示在各种癌症类型(包括结肠直肠癌、肾癌、淋巴瘤、黑素瘤和骨髓瘤)中谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶中位表达比的结果。
图6显示在内分泌癌中谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶表达比随亚型变化。
图7显示急性成淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)中的谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶中位表达比。
图8显示B细胞恶性肿瘤类别中几个淋巴瘤亚型的谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶表达比。
图9显示针于一组乳腺肿瘤细胞系而言化合物670的抗增殖作用和谷氨酸:谷氨酰胺浓度比之间的相关性。
图10显示各种原发性肿瘤异种移植物中谷氨酸:谷氨酰胺浓度比与谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶表达比和与谷氨酰胺酶比活之间的相关性。
图11显示将化合物188腹膜内给予小鼠导致HCT116结肠癌异种移植物模型中肿瘤大小减小。
图12显示将化合物670口服给予小鼠导致H2122肺腺癌异种移植物模型中肿瘤大小减小。
图13显示在TNBC与HR+或Her2+细胞系中GLS(KGA或GAC)、GS的mRNA表达水平和KGA:GS和GAC:GS的比率。“箱”描述了第2和第3四分位，其中位值相当于水平线；“须”跨越第10和第90百分位数，其数据在各数据点所示的这个范围之外。
图14显示对化合物670的敏感性和GLS、GS的mRNA表达水平或表达比之间的相关性。对于各二变量图，x轴标绘化合物670敏感性，y轴标绘表达参数，其各点代表各细胞系。
图15显示乳腺癌细胞系中KGA、GAC和GS的蛋白质印迹分析。印迹用识别KGA、GAC和GS的抗体探测。CAG抗体还识别KGA，而且两者在印迹上通过其分子量差异是可区分的。剥离印迹，用作为上样对照的GAPDH再探测。
图16显示谷氨酸:谷氨酰胺浓度比与对谷氨酰胺酶抑制剂化合物670的敏感性之间的相关性。
图17显示在RPMI-8226多发性骨髓瘤异种移植物模型中将化合物670口服给予小鼠导致肿瘤大小减小。
图18显示化合物670与泊马度胺(pomalidomide)或地塞米松协同作用在多发性骨髓瘤细胞中产生抗肿瘤作用。
发明详述
本发明提供治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予式I的化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH＝CH或优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X每次出现时独立地表示S、O或CH＝CH，优选S或CH＝CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立地表示H、烷基、烷氧基或羟基；
R3每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H。
在其中烷基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基被取代的某些实施方案中，它们被选自以下的一个或多个取代基取代：取代或未取代的烷基例如全氟烷基(例如三氟甲基)、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、芳基烷氧基、芳氧基、芳氧基烷基、羟基、卤素、烷氧基例如全氟烷氧基(例如三氟甲氧基)、烷氧基烷氧基、羟基烷基、羟基烷基氨基、羟基烷氧基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、氨基烷基烷氧基、氨基烷氧基、酰氨基、酰氨基烷基例如全氟酰氨基烷基(例如三氟甲基酰氨基烷基)、酰氧基、环烷基、环烷基烷基、环烷基烷氧基、杂环基、杂环基烷基、杂环基氧基、杂环基烷氧基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基、杂环基氨基烷基、杂环基氨基烷氧基、酰氨基、酰氨基烷基、脒、亚胺、氧代、羰基(例如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基包括全氟酰基(例如C(O)CF3))、羰基烷基(例如羧基烷基、烷氧基羰基烷基、甲酰基烷基或酰基烷基包括全氟酰基烷基(例如-烷基C(O)CF3))、氨基甲酸酯基、氨基甲酸酯基烷基、脲、脲烷基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨基磺酰基、砜、磺酰胺、磺酰胺烷基、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫代羰基(例如硫酯、硫代乙酸酯基或硫代甲酸酯基)、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基或亚膦酸酯基。
在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2或CH2NHCH2，其中CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换。在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2。在某些实施方案中，L表示CH2CH2。在某些实施方案中，L不是CH2SCH2。
在某些实施方案中，Y表示H。
在某些实施方案中，X表示S或CH＝CH。在某些实施方案中，一个或两个X表示CH＝CH。在某些实施方案中，每个X表示S。在某些实施方案中，一个X表示S，另一个X表示CH＝CH。
在某些实施方案中，Z表示R3(CO)。在其中Z为R3(CO)的某些实施方案中，R3的每次出现不相同(例如式I的化合物不是对称的)。
在某些实施方案中，R1和R2各自表示H。
在某些实施方案中，R3表示芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。在某些实施方案中，R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，例如芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基，例如羟基、羟基烷基或烷氧基。
在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，例如CH2CH2、CH2S或SCH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且每个R3表示芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。在某些这样的实施方案中，R3的每次出现是相同的。
在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且每个R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，例如芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，且R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基，例如羟基、羟基烷基或烷氧基。在某些这样的实施方案中，R3的每次出现是相同的。
在某些实施方案中，L表示CH2CH2，Y表示H，X表示S或CH＝CH，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且每个R3表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。在某些这样的实施方案中，每个X表示S。在其它实施方案中，X的一次或两次出现表示CH＝CH，例如X的一次出现表示S，X的另一次出现表示CH＝CH。在前述某些实施方案中，R3的每次出现是相同的。在其中X的一次出现表示S和X的另一次出现表示CH＝CH的前述其它实施方案中，R3的两次出现不相同。
在某些实施方案中，L表示CH2CH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且每个R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，且R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基。在某些这样的实施方案中，R8表示芳基，R10表示羟基烷基。在某些这样的实施方案中，R3的每次出现是相同的。
在其中L表示CH2、CH2CH2CH2或CH2CH2，X表示O，Z表示R3(CO)的某些实施方案中，两个R3基团均不是烷基例如甲基或C(R8)(R9)(R10)，其中R8、R9和R10各自独立地为氢或烷基。
在其中L表示CH2CH2，X表示S，Z表示R3(CO)的某些实施方案中，两个R3基团均不是苯基或杂芳基，例如2-呋喃基。
在其中L表示CH2CH2，X表示O，Z表示R3(CO)的某些实施方案中，两个R3基团均不是N(R4)(R5)，其中R4为芳基，例如苯基，R5为H。
在其中L表示CH2SCH2，X表示S，Z表示R3(CO)的某些实施方案中，两个R3基团均不是芳基，例如任选取代的苯基、芳烷基例如苄基、杂芳基例如2-呋喃基、2-噻吩基或1、2、4-三唑基、取代或未取代的烷基例如甲基、氯甲基、二氯甲基、正丙基、正丁基、叔丁基或己基、杂环基例如嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或烷氧基例如甲氧基、戊氧基或乙氧基。
在其中L表示CH2SCH2，X表示S，Z表示R3(CO)的某些实施方案中，两个R3基团均不是N(R4)(R5)，其中R4为芳基，例如取代或未取代的苯基(例如苯基、3-甲苯基、4-甲苯基、4-溴苯基或4-硝基苯基)，R5为H。
在其中L表示CH2CH2CH2，X表示S，Z表示R3(CO)的某些实施方案中，两个R3基团均不是烷基例如甲基、乙基或丙基、环烷基例如环己基或C(R8)(R9)(R10)，其中R8、R9和R10的任一个与它们所连接的C一起形成前述任一种。
在某些实施方案中，化合物不是以下之一：
本发明还提供治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予式Ia化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH＝CH或优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X表示S、O或CH＝CH，优选S或CH＝CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立地表示H、烷基、烷氧基或羟基，优选H；
R3表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H；
R11表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或C(R12)(R13)(R14)、N(R4)(R14)或OR14，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R12和R13各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，其中R12和R13两者不是H；和
R14表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基。
在其中烷基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基被取代的某些实施方案中，它们被选自以下的一个或多个取代基取代：取代或未取代的烷基例如全氟烷基(例如三氟甲基)、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、芳基烷氧基、芳氧基、芳氧基烷基、羟基、卤素、烷氧基例如全氟烷氧基(例如三氟甲基烷氧基)、烷氧基烷氧基、羟基烷基、羟基烷基氨基、羟基烷氧基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、氨基烷基烷氧基、氨基烷氧基、酰氨基、酰氨基烷基例如全氟酰氨基烷基(例如三氟甲基酰氨基烷基)、酰氧基、环烷基、环烷基烷基、环烷基烷氧基、杂环基、杂环基烷基、杂环基氧基、杂环基烷氧基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基烷氧基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基、杂环基氨基烷基、杂环基氨基烷氧基、酰氨基、酰氨基烷基、脒、亚胺、氧代、羰基(例如羧基、烷氧基羰基、甲酰基、或酰基、包括全氟酰基(例如C(O)CF3))、羰基烷基(例如羧基烷基、烷氧基羰基烷基、甲酰基烷基或酰基烷基包括全氟酰基烷基(例如-烷基C(O)CF3))、氨基甲酸酯基、氨基甲酸酯基烷基、脲、脲烷基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨基磺酰基、砜、磺酰胺、磺酰胺烷基、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫代羰基(例如硫酯、硫代乙酸酯基或硫代甲酸酯基)、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基或亚膦酸酯基。
在某些实施方案中，R11表示取代或未取代的芳基烷基，例如取代或未取代的苄基。
在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2或CH2NHCH2，其中CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换。在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，优选CH2CH2。在某些实施方案中，L不是CH2SCH2。
在某些实施方案中，各个Y表示H。在其它实施方案中，至少一个Y为CH2O(CO)R7。
在某些实施方案中，X表示S或CH＝CH。在某些实施方案中，X表示S。
在某些实施方案中，R1和R2各自表示H。
在某些实施方案中，Z表示R3(CO)。在其中Z为R3(CO)的某些实施方案中，R3和R11不相同(例如式I的化合物不是对称的)。
在某些实施方案中，Z表示R3(CO)和R3表示芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。在某些实施方案中，Z表示R3(CO)，R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基例如芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基，例如羟基、羟基烷基或烷氧基。在某些实施方案中，Z表示R3(CO)，R3表示杂芳基烷基。
在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，例如CH2CH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基，且R11表示芳基烷基。在某些这样的实施方案中，R3表示杂芳基烷基。
在某些实施方案中，L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，例如CH2CH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，例如芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基，例如羟基、羟基烷基或烷氧基，且R11表示芳基烷基。在某些这样的实施方案中，R8表示杂芳基。
在某些实施方案中，L表示CH2CH2，Y表示H，X表示S或CH＝CH，例如S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基，且R11表示芳基烷基。在某些这样的实施方案中，R3表示杂芳基烷基。
在某些实施方案中，L表示CH2CH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基，且R11表示芳基烷基。在某些这样的实施方案中，R8表示芳基，且R10表示羟基烷基。在某些这样的实施方案中，R8表示杂芳基。
在某些实施方案中，癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、黑素瘤、肾癌和B细胞恶性肿瘤。在其中癌症是乳腺癌的某些这类的实施方案中，乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。在其中癌症是内分泌癌的某些实施方案中，内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。在其中癌症是B细胞恶性肿瘤的某些实施方案中，B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤；白血病，例如急性成淋巴细胞性白血病或慢性成淋巴细胞性白血病；和淋巴瘤，例如伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤。
在某些实施方案中，化合物选自表3公开的化合物的任一种。优选，化合物选自化合物1、2、6、7、8、11、13、14、15、16、17、18、19、20、21、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、35、36、38、39、40、41、43、44、47、48、50、51、52、54、55、58、63、64、65、67、68、69、70、71、72、73、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、92、93、94、95、97、99、100、102、105、107、111、112、114、115、116、117、118、120、121、122、123、126、127、133、135、136、138、140、141、143、146、147、148、152、153、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、168、169、170、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、185、186、187、188、189、190、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、208、210、211、213、214、216、217、219、220、226、227、228、229、231、232、234、235、236、237、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、273、274、275、276、278、279、280、281、282、283、285、286、287、288、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、302、304、1038、306、307、308、309、310、311、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、327、329、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、527、347、348、349、350、351、352、353、354、355、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、638、639、640、641、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、707、708、709、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729或730。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以是式I或式Ia的化合物的前药，例如，其中母体化合物中的羟基作为酯或碳酸酯出现，或母体化合物中存在的羧酸作为酯出现。在某些这样的实施方案中，前药在体内代谢为活性母体化合物(例如酯水解成相应的羟基或羧酸)。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以是外消旋的。在某些实施方案中，本发明的化合物可富含一种对映异构体。例如，本发明的化合物可具有大于30％对映体过量(ee)、40％ee、50％ee、60％ee、70％ee、80％ee、90％ee或甚至95％或更大的ee。在某些实施方案中，本发明的化合物可具有多于一个立构中心。在某些这样的实施方案中，本发明的化合物可富含一种或多种非对映体。例如，本发明的化合物可具有大于30％非对映体过量(de)、40％de、50％de、60％de、70％de、80％de、90％de或甚至95％或更大的de。
在某些实施方案中，本发明涉及用式I或式Ia化合物或其药学上可接受的盐治疗或预防癌症例如乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、黑素瘤、肾癌或B细胞恶性肿瘤的方法。在某些实施方案中，可富集治疗制剂以主要提供化合物(例如式I或式Ia的化合物)的一种对映异构体。对映异构体富集的混合物可包含例如一种对映异构体的至少60mol％，或更优选至少75、90、95或甚至99mol％。在某些实施方案中，富含一种对映异构体的化合物基本不含另一种对映异构体，其中基本不含意指与例如组合物或化合物混合物中的另一种对映异构体的量相比，所述物质占小于10％，或小于5％，或小于4％，或小于3％，或小于2％，或小于1％。例如，如果组合物或化合物混合物含有98克的第一对映异构体和2克的第二对映异构体，则可陈述为含有98mol％的第一对映异构体和仅2％的第二对映异构体。
在某些实施方案中，可富集治疗制剂以主要提供化合物(例如式I或式Ia的化合物)的一种非对映体。非对映体富集的混合物可包含例如至少60mol％的一种非对映体，或更优选至少75、90、95或甚至99mol％。
在某些实施方案中，本发明提供适用于人类患者的药物制剂，其包含如上所示化合物的任一种(例如本发明的化合物，例如式I或式Ia化合物)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物制剂可用于治疗或预防本文所述病况或疾病。在某些实施方案中，药物制剂具有足够低的致热原活性以适用于人类患者。
上述结构的任一个的化合物可用于制备治疗本文公开的任何疾病或病况的药物。
酶抑制剂的用途
作为氮、碳和能量的载体，谷氨酰胺起着重大作用。它用于肝脲合成、肾生氨作用、糖异生并作为许多细胞的呼吸燃料。细胞通过称为谷氨酰胺合成酶(GS)的酶内部合成谷氨酰胺或从环境中外源地得到其谷氨酰胺。
谷氨酰胺向谷氨酸的转化由线粒体酶即谷氨酰胺酶引发。有两种主要形式的酶，K型和L型，通过其对谷氨酰胺的Km值和对谷氨酸的反应来区分，其中Km值，或Michaelis常数，是达到最大速度一半所需要的底物浓度。L型，亦称为“肝型”或GLS2，对谷氨酰胺具有高Km，并且是抗谷氨酸的。K型，亦称为“肾型”或GLS1或“KGA”，对谷氨酰胺具有低Km，并被谷氨酸抑制。最新鉴定出GLS1的可变剪接形式，称为谷氨酰胺酶C或“GAC”。
除了作为蛋白质合成基本结构单元以外，已表明氨基酸促进对生长和分裂细胞是决定性的许多过程，而且对癌细胞尤其如此。几乎所有的癌症定义都包括提及增殖失调。对癌症中的谷氨酰胺代谢的许多研究表明许多肿瘤是急切的谷氨酰胺消耗者(Souba,Ann.Surg.,1993；Collins等,J.Cell.Physiol.,1998；Medina,J.Nutr.,2001；Shanware等,J.Mol.Med.,2011)，这包括但不限于乳腺癌。本发明的某些实施方案涉及本文所述化合物用于治疗乳腺癌的用途。
虽然许多癌细胞依靠外源谷氨酰胺赖以生存，但肿瘤细胞亚型中谷氨酰胺依赖程度可使细胞群对谷氨酰胺减少更敏感。例如，乳腺癌的基因表达分析已鉴定出5个固有亚型(腔(luminal)A、腔B、基底型、HER2+和正常样)(Sorlie等,ProcNatlAcadSciUSA,2001)。虽然谷氨酰胺剥夺对细胞生长和成活率有影响，但基底样细胞(basal-likecell)似乎对外源谷氨酰胺减少更敏感(Kung等,PLoSGenetics,2011)。这支持谷氨酰胺在基底样乳腺癌细胞系中是非常重要的能量来源的观点，并且表明抑制谷氨酰胺酶可有益于治疗由基底样细胞组成的乳腺癌。图1进一步支持依赖于外源谷氨酰胺的细胞易受谷氨酰胺酶抑制剂的存在的影响的关联性。本发明的某些实施方案涉及治疗基底样乳腺癌细胞的方法，所述方法包括给予本申请的谷氨酰胺酶抑制剂。
可按多种方式测定酶表达水平，根据各个测定法的具体标准，定量是相对的。结果可用来提供遗传概况，其中某些基因、mRNA或所得表达产物的水平形成可用来表征细胞类型的特征模式(signaturepattern)。Kun等人证实，表明谷氨酰胺依赖性的基底样乳腺癌细胞显示出这样的遗传概况，其中GLS表达相对高，而GS表达相对低。此外，GLS2的表达水平相对低。原发性乳腺肿瘤mRNA表达数据集分析(TheCancerGenomeAtlas；N＝756)支持基底型细胞一般具有相对于GS表达的高的GLS表达。
三阴性乳腺癌(TNBC)的特征在于缺乏雌激素受体(ER)、黄体酮受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达。其比起其它乳腺癌亚型，具有在化学疗法后较高的复发率和较差的预后(Dent等,ClinCancerRes,2007)。引人关注的是，在TNBC细胞和基底样乳腺癌细胞间的代谢概况分析中似乎有显著相似性。具体地说TNBC细胞似乎具有高GLS表达和低GS表达的相似遗传特征(图2)。乳腺癌细胞系中更具体的GLS表达分析显示，当与激素受体(HR)阳性或Her2阳性细胞系相比时，TNBC细胞表达较高水平的GLS1的两种剪接变体KGA和GAC，以及显著较低水平的GS(图13和15)。本发明的方面提供用于治疗包含TNBC细胞的乳腺癌的方法，所述方法包括给予本申请的谷氨酰胺酶抑制剂。
最近，鉴定出另一种乳腺癌细胞类型，称为紧蛋白-低(Prat等,BreastCancerRes,2010)。该细胞类型的遗传概况也显示相对高的GLS表达和低GS表达。几个紧蛋白-低乳腺癌细胞系的分析显示，这些细胞一般依赖于外源谷氨酰胺，并且还对谷氨酰胺酶抑制敏感。本发明的方面提供用于治疗包含紧蛋白-低细胞的乳腺癌的方法，所述方法包括给予本申请的谷氨酰胺酶抑制剂。
本发明的另一个方面是本文所述化合物用于治疗包含选自基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞和紧蛋白-低乳腺癌细胞的细胞的乳腺癌的用途。
这就产生了这样的设想，即高GLS表达和低GS表达概况可用作遗传特征以鉴定可能特别依赖于外源谷氨酰胺并因此对谷氨酰胺酶抑制敏感的其它癌症。在分析来自商业数据库的多种原发性人类癌症时，若干癌症显示高GLS至低GS表达模式。除之前注意到的乳腺癌以外，结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤、肾癌和B细胞恶性肿瘤具有明显高的GLS/GS比率(图5和10)。本发明的某些实施方案涉及本文所述化合物治疗选自结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤、肾癌和B细胞恶性肿瘤等癌症的用途。
与乳腺癌一样，这些癌症的一些的某些亚型似乎具有更普遍的GLS/GS表达比。例如，内分泌癌、肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤具有的比率是子宫内膜子宫内膜样腺癌(endometrialentometrioidadenocarcinoma)的3倍(图6)。
在数据集内，B细胞恶性肿瘤包括诸如多发性骨髓瘤、白血病(包括急性成淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性成淋巴细胞性白血病(CLL))和淋巴瘤(包括伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤)的癌症。所有这些癌症显示包括高GLS/GS表达水平比率的遗传概况，进一步说明这些癌症可能对谷氨酰胺酶抑制敏感(图7和8)。图17表明，在多发性骨髓瘤异种移植物模型中，给予谷氨酰胺酶抑制剂化合物减小肿瘤大小，进一步支持这个观点。本发明的某些实施方案涉及本文所述化合物用于治疗多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤的用途。
在一些实施方案中，治疗或预防例如乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、黑素瘤、肾癌或B细胞恶性肿瘤等癌症的方法，可包括结合一种或多种其它化学治疗剂给予本发明的化合物。可与本发明的化合物联合给予的化学治疗剂包括：ABT-263、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、bcg、比卡鲁胺、博来霉素、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氯喹、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、秋水仙素、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素、脱甲绿胶霉素(demethoxyviridin)、地塞米松、二氯乙酸盐、己二烯雌酚、己烯雌酚、多西他赛、多柔比星、表柔比星、表柔比星、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、非格司亭、氟达拉滨、氟氢可的松、氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、吉西他滨、染料木碱、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康、ironotecan、来那度胺、来曲唑、亚叶酸、亮丙立德、左旋咪唑、洛莫司汀、氯尼达明、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、二甲双胍、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、诺考达唑、奥曲肽、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸盐、喷司他丁、哌立福辛、PF-04691502、普卡霉素、泊马度胺、卟吩姆钠、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、罗米地新、索拉非尼、链佐星、舒尼替尼、苏拉明、他莫昔芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、塞替派、二氯二茂钛、托泊替康、曲妥珠单抗、维A酸、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨和伏林司他(SAHA)。例如，可与本发明的化合物联合给予的化学治疗剂包括：氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、bcg、比卡鲁胺、博来霉素、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氯喹、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、秋水仙素、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素、脱甲绿胶霉素、二氯乙酸盐、己二烯雌酚、己烯雌酚、多西他赛、多柔比星、表柔比星、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、非格司亭、氟达拉滨、氟氢可的松、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、吉西他滨、染料木碱、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康、ironotecan、来那度胺、来曲唑、亚叶酸、亮丙立德、左旋咪唑、洛莫司汀、氯尼达明、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、二甲双胍、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、诺考达唑、奥曲肽、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸盐、喷司他丁、哌立福辛、普卡霉素、泊马度胺、卟吩姆钠、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、索拉非尼、链佐星、舒尼替尼、苏拉明、他莫昔芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、塞替派、二氯二茂钛、托泊替康、曲妥珠单抗、维A酸、长春碱、长春新碱、长春地辛、和长春瑞滨。在其它实施方案中，可与本发明的化合物联合给予的化学治疗剂包括：ABT-263、地塞米松、5-氟尿嘧啶、PF-04691502、罗米地新和伏林司他(SAHA)。在本文所述本发明的方法的某些实施方案中，与本发明的化合物联合给予的化学治疗剂是紫杉烷化学治疗剂，例如紫杉醇或多西他赛。在本文所述本发明的方法的某些实施方案中，与本发明的化合物联合给予的化学治疗剂是多柔比星。在本文所述本发明的方法的某些实施方案中，本发明的化合物与紫杉烷化学治疗剂(例如紫杉醇)和多柔比星联合治疗。
开发了许多组合疗法用于治疗癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物可与组合疗法联合给予。表1包括可与本发明的化合物联合给予的组合疗法的实例。
表1：治疗癌症的示例性组合疗法
癌细胞的增殖需要脂质合成。通常，用于脂质合成的乙酰辅酶A从来源于糖酵解的丙酮酸的线粒体库形成。然而在低氧条件例如通常存在于肿瘤环境的条件下，在线粒体内丙酮酸向乙酰辅酶A的转化被减量调节。Metallo等人(2011)和Mullen等人(2011)的最新研究显示，在所述低氧条件下，细胞反倒大多转变成利用涉及α-酮戊二酸还原羧化以产生用于脂质合成的乙酰辅酶A的途径。该途径的第一步包括通过谷氨酰胺酶使谷氨酰胺转化成谷氨酸。随后，谷氨酸转化为α-酮戊二酸，在异柠檬酸脱氢酶介导的还原羧化步骤中所得α-酮戊二酸转化为异柠檬酸。这种还原羧化途径的转变也发生在含有用于诱导负责使糖酵解丙酮酸转化为乙酰辅酶A的酶的受损线粒体或受损信号的一些肾癌细胞系中(Mullen等，2011)。类似的转变发生在暴露于线粒体呼吸链抑制剂(例如二甲双胍、鱼藤酮和抗霉素)的细胞中(Mullen等，2011)。因此，在本发明的一些实施方案中，我们提出使用线粒体呼吸链抑制剂和谷氨酰胺酶抑制剂的组合同时增加癌细胞对脂质合成的谷氨酰胺酶依赖性途径的依赖性，同时恰好抑制这些途径。
肿瘤细胞中对糖酵解的依赖性增加是可能的，因为低氧肿瘤环境损害线粒体呼吸作用。此外，葡萄糖耗尽诱导用MYC癌基因转化的细胞的凋亡。这些研究结果表明，抑制糖酵解在预防癌细胞增殖中可能具有治疗价值。目前有许多已充分证明的糖酵解抑制剂(Pelicano等，2006)。然而，正如Zhao等(2012)指出的，“可用的糖酵解抑制剂通常不是非常有效，并且需要高剂量，这可能引起高水平的全身毒性”。因为与正常细胞相比癌细胞通常利用较高水平的葡萄糖和谷氨酰胺，所以损害这些代谢物每个的利用可能具有协同效应。因此，在本发明的一些实施方案中，我们提出使用糖酵解途径抑制剂和谷氨酰胺酶抑制剂的组合。所述糖酵解抑制剂包括2-脱氧葡萄糖、氯尼达明、3-溴丙酮酸、伊马替尼、羟基硫胺素、雷帕霉素及其药理学等同物。可通过经由DNA损伤消耗NAD+直接抑制糖酵解，所述DNA损伤通过DNA烷化剂经聚(ADP-核糖)聚合酶激活的途径诱导(Zon等，2004)。因此，在本发明的一些实施方案中，我们提出使用DNA烷化剂和谷氨酰胺酶抑制剂的组合。癌细胞利用戊糖磷酸途径以及糖酵解途径以产生来源于葡萄糖的代谢中间产物。因此，在本发明的一些实施方案中，我们提出使用戊糖磷酸抑制剂(例如6-氨基烟酰胺)以及谷氨酰胺酶抑制剂的组合。
在某些实施方案中，本发明的化合物可与癌症治疗的非化学方法联合给予。在某些实施方案中，本发明的化合物可与放射疗法联合给予。在某些实施方案中，本发明的化合物可与手术、热切除、聚焦超声疗法、冷冻疗法或这些的任何组合联合给予。
在某些实施方案中，本发明的不同化合物可与本发明的一种或多种其它化合物联合给予。此外，所述组合可与其它治疗剂联合给予，所述其它治疗剂例如适于治疗癌症、免疫或神经疾病的其它治疗剂，例如上文鉴定的治疗剂。在某些实施方案中，与本发明的化合物一起联合给予一种或多种其它化学治疗剂提供协同效应，例如图18中所示。在某些实施方案中，联合给予一种或多种其它化学治疗剂提供相加效应。
在某些实施方案中，本发明提供试剂盒，其包含：a)本发明化合物的一个或多个单一剂型；b)上述化学治疗剂的一个或多个单一剂型；和c)给予本发明的化合物和化学治疗剂用于治疗癌症的说明书，其中癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤、肾癌和B细胞恶性肿瘤。
本发明提供试剂盒，其包含：
a)包含本发明的化合物的药物制剂(例如一个或多个单一剂型)；和
b)给予药物制剂例如用于治疗或预防癌症例如乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤、肾癌或B细胞恶性肿瘤的说明书。
本发明提供试剂盒，其包含：
a)包含本发明的化合物的药物制剂(例如一个或多个单一剂型)；和
b)给予药物制剂例如用于治疗或预防乳腺癌的说明书，其中乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。
在某些实施方案中，试剂盒还包含与上述化学治疗剂联合给予包含本发明化合物的药物制剂的说明书。在某些实施方案中，试剂盒还包含含有上述化学治疗剂的第二药物制剂(例如作为一个或多个单一剂型)。
已表明对外源谷氨酰胺的依赖性和高谷氨酰胺酶(GLS)和低谷氨酰胺合成酶(GS)水平的表达概况两者与癌细胞对谷氨酰胺酶抑制的敏感性相关。利用该信息，可以推理，癌细胞内的代谢物的量可用作预测其对谷氨酰胺酶抑制的敏感性的手段。为了彻底检验这个理论，在之前表明为谷氨酰胺依赖性并对谷氨酰胺酶抑制敏感的TNBC细胞中测定谷氨酸和谷氨酰胺水平(图9)。通过液相色谱法质谱法联用(LC-MS/MS)测定谷氨酸和谷氨酰胺的浓度；然而，可采用测定代谢物浓度的任何方法。谷氨酸:谷氨酰胺比率大于或等于1.5的细胞的确显示对谷氨酰胺酶抑制敏感。当谷氨酸:谷氨酰胺比率大于或等于2时，相关性甚至更强。该结果提供鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法。
几个原发性肿瘤异种移植物的分析表明，除了这些之前论述的癌症以外，表达和代谢物相关性延伸至其它肿瘤类型，例如肺和间皮瘤(图10)。使用HCT116结肠癌细胞(图11)和H2122肺腺癌细胞(图12)的异种移植物研究表明，用本文所述谷氨酰胺酶抑制剂治疗导致肿瘤大小减小。
在某些实施方案中，本发明提供鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定癌症患者的癌细胞中谷氨酸与谷氨酰胺的比率，其中比率大于或等于1.5，例如大于或等于1.6、大于或等于1.7、大于或等于1.8、大于或等于1.9或大于或等于2.0，表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。在某些这样的实施方案中，测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中谷氨酸和谷氨酰胺的量。在某些实施方案中，比率大于或等于2.0。在前述某些实施方案中，谷氨酰胺酶抑制剂是本文所述化合物(例如式I或式Ia化合物)。在某些实施方案中，癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
在某些实施方案中，本发明提供治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中谷氨酸与谷氨酰胺的比率；和2)如果谷氨酸与谷氨酰胺的比率大于或等于1.5，例如大于或等于1.6、大于或等于1.7、大于或等于1.8、大于或等于1.9或大于或等于2.0，则用式I或式Ia化合物治疗患者。在某些这样的实施方案中，测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中谷氨酸和谷氨酰胺的量。在某些实施方案中，谷氨酸与谷氨酰胺的比率大于或等于2.0。在某些实施方案中，癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
如上所述，已表明高谷氨酰胺酶(GLS)和低谷氨酰胺合成酶(GS)表达水平与癌细胞对谷氨酰胺酶抑制的敏感性相关。因此可推论，癌细胞内GLS和GS的水平可用作预测其对谷氨酰胺酶抑制的敏感性的手段。为了彻底验证这个理论，在TNBC细胞(已知其对谷氨酰胺酶抑制更敏感)和在HR+或Her2+细胞(已知其对谷氨酰胺酶抑制较不敏感)中测定GLS(KGA和GAC两者)水平和GS水平(图14和表7)。
观察到谷氨酰胺酶抑制剂敏感性和GLS的GAC同种型的表达之间的相关性。表达GAC的细胞显得对谷氨酰胺酶抑制更敏感。因此，具有可检测水平的GAC的细胞将对谷氨酰胺酶抑制剂(例如本文所述化合物)敏感。还对表达GAC水平等于或高于KGA的细胞观察到相关性。因此，在某些实施方案中，本发明提供鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定癌症患者的癌细胞中GAC和KGA表达的水平，其中GAC的表达水平大于或等于KGA的表达水平，表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。
在谷氨酰胺酶抑制剂敏感性和GAC:GS的比率之间观察到显著相关性。GAC:GS比率大于或等于0.05的细胞显得对谷氨酰胺酶抑制敏感。对于GAC:GS比率大于或等于1的细胞，相关性甚至更强。该结果提供鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的手段。
在某些实施方案中，本发明提供鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定癌症患者的癌细胞中谷氨酰胺酶与谷氨酰胺合成酶的比率，其中比率大于或等于0.05，例如大于或等于0.06、大于或等于0.07、大于或等于0.08、大于或等于0.9或大于或等于1.0，表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。在某些这样的实施方案中，测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶的水平。在某些实施方案中，比率大于或等于1。在前述某些实施方案中，谷氨酰胺酶抑制剂是本文所述化合物(例如式I或式Ia化合物)。在某些实施方案中，谷氨酰胺酶是KGA和GAC两者。在某些实施方案中，谷氨酰胺酶是KGA。在优选的实施方案中，谷氨酰胺酶是GAC。
在某些实施方案中，本发明提供治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中谷氨酰胺酶与谷氨酰胺合成酶的比率；和2)如果谷氨酰胺酶与谷氨酰胺合成酶的比率大于或等于0.05，例如大于或等于0.06、大于或等于0.07、大于或等于0.08、大于或等于0.9或大于或等于1.0，则表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。在某些这样的实施方案中，测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶的量。在某些实施方案中，比率大于或等于1。在某些实施方案中，谷氨酰胺酶是KGA和GAC两者。在某些实施方案中，谷氨酰胺酶是KGA。在优选的实施方案中，谷氨酰胺酶是GAC。
在某些实施方案中，癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
GLS(例如KGA和/或GAC)和GS的水平可采用任何合适的方法测量。一些方法包括测量蛋白质水平，其它方法包括测量mRNA的水平。
蛋白质量可使用抗体测量。适用于本文公开的方法的抗体是市购可获得的，或可按常规制备。在目标蛋白质测定法中制备和使用抗体的方法是常规的，描述于例如Green等,ProductionofPolyclonalAntisera,载于ImmunochemicalProtocols(Manson编辑),(HumanaPress1992)；Coligan等,载于CurrentProtocolsinImmunology,Sec.2.4.1(1992)；Kohler和Milstein(1975),Nature256,495；Coligan等,第2.5.1-2.6.7节；以及Harlow等,Antibodies:ALaboratoryManual,第726页(ColdSpringHarborLaboratoryPub.1988)。
各种抗体的任一种都可用于本发明的方法。所述抗体包括例如多克隆、单克隆(mAb)、重组、人源化或部分人源化、单链、Fab及其片段。抗体可以是任何同种型的，例如IgM，各种IgG同种型例如IgG1、IgG2a等，并且可来自产生抗体的任何动物物种，包括山羊、兔、小鼠、鸡等。术语对蛋白质“有特异性的抗体”意指抗体识别蛋白质中氨基酸的规定序列或表位，并且选择性地结合所述蛋白质而一般不结合非预期结合抗体的蛋白质。可采用本领域的常规方法，按常规确定实现特异性结合所需要的参数。
在本发明的一些实施方案中，将对KGA、GAC和/或GS有特异性的抗体固定在表面(例如是阵列(例如微阵列)上的反应元件，或在另一种表面上，例如用于基于表面等离子体共振(SPR)的技术，例如Biacore)上，通过其特异性结合抗体的能力检测样品中的蛋白质。或者，可使样品中的蛋白质固定在表面上，通过其特异性结合抗体的能力检测。制备表面和进行分析的方法，包括对特异性结合有效的条件，是本领域常规的和众所周知的。
合适免疫测定法的许多类型中有免疫组织化学染色法、ELISA、蛋白质印迹法(免疫印迹)、免疫沉淀法、放射免疫测定法(RIA)、荧光激活细胞分选法(FACS)等。用于本发明的方法的测定法可基于比色读出、荧光读出、质谱学、目测等。
如上所述，可通过测量mRNA的量，测量GLS(KGA和/或GAC)和GS的表达水平。编码KGA、GAC和/或GS的mRNA的量可采用任何合适的方法测量。所述方法的实例包括例如逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)，包括实时PCR、微阵列分析、nanostring、RNA印迹分析、差别杂交和核糖核酸酶保护测定。所述方法是本领域众所周知的，描述于例如Sambrook等,MolecularCloning:ALaboratoryManual,最近版本,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.以及Ausubel等,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&sons,NewYork,N.Y。
在本发明的一些实施方案中，采用本领域已知的任何方法，从受试者(例如肿瘤活检)中获得组织学样品，所述样品包括但不限于组织切片、穿刺活检等。通常样品可以是“临床样品”，其是来源于患者的样品，包括针对组织学目的获取的组织切片，例如冷冻切片或石蜡切片。样品还可来源于来自细胞培养物的(细胞)上清液或细胞本身、来自组织培养和其它培养基的细胞。然后从样品中获得蛋白质或mRNA，并用来量化GLS(KGA和/或GAC)和GS的量。
观察谷氨酰胺酶活性和对谷氨酰胺酶抑制剂的敏感性之间的相关性的一个备选方法见图16，其中0.005μmol/min/mg蛋白质的谷氨酰胺酶活性预测了对谷氨酰胺酶抑制剂的敏感性。在某些实施方案中，本发明提供鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定癌症患者的癌细胞中的谷氨酰胺酶活性，其中活性大于或等于0.005μmol/min/mg蛋白质，例如大于或等于0.006μmol/min/mg蛋白质、大于或等于0.007μmol/min/mg蛋白质、大于或等于0.008μmol/min/mg蛋白质、大于或等于0.009μmol/min/mg蛋白质或大于或等于0.010μmol/min/mg蛋白质，表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。在某些这样的实施方案中，测定谷氨酰胺酶活性的方法包括测量癌症患者的癌细胞中的谷氨酰胺酶活性。在某些实施方案中，谷氨酰胺酶活性大于或等于0.010。在前述某些实施方案中，谷氨酰胺酶抑制剂是本文所述化合物(例如式I或式Ia化合物)。在某些实施方案中，癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
在某些实施方案中，本发明提供治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中的谷氨酰胺酶活性；和2)其中活性大于或等于0.005μmol/min/mg蛋白质，例如大于或等于0.006μmol/min/mg蛋白质、大于或等于0.007μmol/min/mg蛋白质、大于或等于0.008μmol/min/mg蛋白质、大于或等于0.009μmol/min/mg蛋白质或大于或等于0.010μmol/min/mg蛋白质，用式I或式Ia化合物治疗患者。在某些这样的实施方案中，测定的方法测定癌症患者的癌细胞中的谷氨酰胺酶活性。在某些实施方案中，谷氨酸与谷氨酰胺的比率大于或等于2.0。在某些实施方案中，癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
本公开内容还提供检测患有癌症的受试者是否可能对谷氨酰胺酶抑制剂起反应的试剂盒。该试剂盒可包括检测本发明蛋白质的表达的量[例如蛋白质的量和/或编码蛋白质的核酸(例如mRNA)的量]的一种或多种试剂。试剂盒中的试剂可包括例如对蛋白质有特异性的抗体或对mRNA有特异性的探针，其可用来与RNA(或从其产生的cDNA)杂交或进行RT-PCR。试剂盒还可包括适于检测、测量和/或量化蛋白质或核酸的量的其它试剂。在其它用途中，本发明的试剂盒可用于实验应用。技术人员应认识适于实施本发明方法的试剂盒的组分。
任选，本发明的试剂盒可包含实施方法的说明书。本发明的试剂盒的任选要素包括合适的缓冲剂、容器或包装材料。试剂盒的试剂可在其中试剂是稳定的容器中，例如呈冻干形式或稳定液体。试剂还可呈一次使用形式，例如以进行针对单个受试者的测定。
定义
术语“酰基”是本领域公知的，是指用通式烃基C(O)-表示的基团，优选烷基C(O)-。
术语“酰氨基”是本领域公知的，是指被酰基取代的氨基，并可用例如式烃基C(O)NH-表示。
术语“酰氧基”是本领域公知的，是指用通式烃基C(O)O-表示的基团，优选烷基C(O)O-。
术语“烷氧基”是指具有与之连接的氧的烷基，优选低级烷基。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。
术语“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基，可用通式烷基-O-烷基表示。
本文所用术语“烯基”是指含有至少一个双键的脂族基团，并意指包括“未取代的烯基”和“取代的烯基”两者，后者是指具有置换烯基的一个或多个碳上的氢的取代基的烯基部分。所述取代基可存在于包括或未包括在一个或多个双键上的一个或多个碳上。然而，所述取代基包括如下所述对烷基所预期的所有取代基，其中稳定性受抑制除外。例如，预期烯基被一个或多个烷基、碳环基、芳基、杂环基或杂芳基取代。
“烷基”或“烷烃”是完全饱和的直链或支链非芳族烃。通常，直链或支链烷基具有1-约20个碳原子，优选1-约10个，除非另有定义。直链和支链烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、戊基和辛基。C1-C6直链或支链烷基亦称为“低级烷基”基团。
此外，整个说明书、实施例和权利要求书中所用的术语“烷基”(或“低级烷基”)意指包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”两者，后者是指具有置换烃骨架的一个或多个碳上的氢的取代基的烷基部分。若不是另有说明，否则所述取代基可包括例如卤素、羟基、羰基(例如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(例如硫酯、硫代乙酸酯基或硫代甲酸酯基)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨基磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员应了解，适当时，烃链上取代的部分本身可被取代。例如，取代烷基的取代基可包括取代的和未取代的形式的氨基、叠氮基、亚氨基、酰氨基、磷酰基(包括膦酸酯基和亚膦酸酯基)、磺酰基(包括硫酸酯基、磺酰胺基、氨基磺酰基和磺酸酯基)和甲硅烷基以及醚、烷硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸酯和酯)、-CF3、-CN等。下面描述了示例性的取代烷基。环烷基可被烷基、烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、羰基-取代的烷基、-CF3、-CN等进一步取代。
术语“Cx-y”当与例如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基等化学部分联用时，意指包括链中含有x-y个碳的基团。例如，术语“Cx-y烷基”是指取代或未取代的饱和的烃基团，包括链中含有x-y个碳的直链烷基和支链烷基，包括卤代烷基例如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。C0烷基表示其中基团位于末端位置的氢，如果在内部则为键。术语“C2-y烯基”和“C2-y炔基”是指长度和可能取代类似于上述烷基但分别含有至少一个双键或三键的取代或未取代的不饱和脂族基团。
本文所用术语“烷基氨基”是指被至少一个烷基取代的氨基。
本文所用术语“烷硫基”是指被烷基取代的硫醇基，可用通式烷基S-表示。
本文所用术语“炔基”是指含有至少一个三键的脂族基团，并意指包括“未取代的炔基”和“取代的炔基”两者，后者是指具有置换炔基的一个或多个碳上的氢的取代基的炔基部分。所述取代基可发生在包括或未包括在一个或多个三键中的一个或多个碳上。此外，所述取代基包括如上论述的烷基所预期的所有取代基，其中稳定性受抑制除外。例如，考虑炔基被一个或多个烷基、碳环基、芳基、杂环基或杂芳基取代。
本文所用术语“酰胺”是指基团
其中各R10独立地表示氢或烃基，或两个R10与它们所连接的N原子一起完成在环结构中具有4-8个原子的杂环。
术语“胺”和“氨基”是本领域公知的，是指未取代的和取代的胺两者及其盐，例如可用以下表示的部分
其中各个R10独立地表示氢或烃基，或两个R10与它们所连接的N原子一起完成环结构中具有4-8个原子的杂环。
本文所用术语“氨基烷基”是指被氨基取代的烷基。
本文所用术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。
本文所用术语“芳基”包括其中环的每个原子是碳的取代或未取代的单环芳族基团。优选环是5元-7元环，更优选6元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环环系，其中两个或更多个碳为两个毗连环公用，其中至少一个环是芳族的，例如另一个环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。芳基包括苯、萘、菲、苯酚、苯胺等。
术语“氨基甲酸酯基”是本领域公知的，是指基团
其中R9和R10独立表示氢或烃基，例如烷基，或R9和R10与间插原子一起完成环结构中具有4-8个原子的杂环。
本文所用术语“碳环”和“碳环的”是指其中环的每个原子是碳的饱和或不饱和环。术语碳环包括芳族碳环和非芳族碳环两者。非芳族碳环包括其中所有碳原子是饱和的环烷烃环和含有至少一个双键的环烯烃环两者。“碳环”包括5-7元单环和8-12元二环。二环碳环的各个环可选自饱和环、不饱和环和芳环。碳环包括其中两个环间共有1、2或3或更多个原子的二环分子。术语“稠合碳环”是指其中每个环与另一个环共有两个邻接原子的二环碳环。稠合碳环的每个环可选自饱和环、不饱和环和芳环。在一个示例性的实施方案中，芳环(例如苯基)可与饱和或不饱和环(例如环己烷、环戊烷或环己烯)稠合。如化合价允许，饱和二环、不饱和二环和芳族二环的任何组合都包括在碳环的定义中。示例性“碳环”包括环戊烷、环己烷、二环[2.2.1]庚烷、1,5-环辛二烯、1,2,3,4-四氢化萘、二环[4.2.0]辛-3-烯、萘和金刚烷。示例性稠合碳环包括萘烷、萘、1,2,3,4-四氢化萘、二环[4.2.0]辛烷、4,5,6,7-四氢-1H-茚和二环[4.1.0]庚-3-烯。“碳环”可在能够携带氢原子的任一个或多个位置上被取代。
“环烷基”基团是完全饱和的环烃。“环烷基”包括单环和二环。通常，单环环烷基具有3-约10个碳原子，更通常3-8个碳原子，除非另有定义。二环环烷基的第二个环可选自饱和环、不饱和环和芳环。环烷基包括其中两个环间共有1、2或3或更多个原子的二环分子。术语“稠合环烷基”是指其中每个环与另一个环共有两个邻接原子的二环环烷基。稠合二环环烷基的第二个环可选自饱和环、不饱和环和芳环。“环烯基”基团是含有一个或多个双键的环烃。
本文所用术语“碳环基烷基”是指被碳环基团取代的烷基。
术语“碳酸酯基”是本领域公知的，是指基团-OCO2-R10，其中R10表示烃基。
本文所用术语“羧基”是指用式-CO2H表示的基团。
本文所用术语“酯”是指基团-C(O)OR10，其中R10表示烃基。
本文所用术语“醚”是指通过氧与另一个烃基连接的烃基。因此，烃基的醚取代基可以是烃基-O-。醚可以是对称或不对称的。醚的实例包括但不限于杂环-O-杂环和芳基-O-杂环。醚包括“烷氧基烷基”基团，其可用通式烷基-O-烷基表示。
本文所用术语“卤代”和“卤素”意指卤素，包括氯、氟、溴和碘。
本文所用术语“杂芳烷基”和“杂芳基烷基”是指被杂芳基取代的烷基。
本文所用术语“杂烷基”是指碳原子和至少一个杂原子的饱和或不饱和链，其中无两个杂原子相邻。
术语“杂芳基(heteroaryl/hetaryl)”包括取代或未取代的芳族单环结构，优选5元-7元环，更优选5-6元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选1-4个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或更多个环的多环环系，其中两个或更多个碳为两个毗邻环公用，其中至少一个环是杂芳族的，例如另一个环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。
本文所用术语“杂原子”意指碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子为氮、氧和硫。
术语“杂环基”、“杂环”和“杂环的”是指取代或未取代的非芳环结构，优选3-10元环，更优选3-7元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选1-4个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂环基”和“杂环的”还包括具有两个或更多个环的多环环系，其中两个或更多个碳为两个毗邻环共用，其中至少一个环是杂环，例如另一个环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂环基包括例如哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、内酯、内酰胺等。
本文所用术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基。
本文所用术语“烃基”是指没有＝O或＝S取代基、通过碳原子键合的基团，且通常具有至少一个碳-氢键和主要的碳骨架，但可任选包括杂原子。因此对于本申请的目的，像甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基和三氟甲基等基团被视为烃基，但取代基例如乙酰基(其在连接碳上具有＝O取代基)和乙氧基(其通过氧而非碳连接)不是。烃基包括但不限于芳基、杂芳基、碳环、杂环基、烷基、烯基、炔基及其组合。
本文所用术语“羟基烷基”是指被羟基取代的烷基。
术语“低级”当与例如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基等化学部分联用时意在包括其中取代基中有10个或更少个非氢原子、优选6个或更少个的基团。例如，“低级烷基”是指含有10个或更少个碳原子、优选6个或更少个的烷基。在某些实施方案中，本文定义的酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基取代基分别是低级酰基、低级酰氧基、低级烷基、低级烯基、低级炔基或低级烷氧基，不论它们是单独或与取代基一起出现，例如在描述羟基烷基和芳烷基(在该情况下，例如，当计算烷基取代基的碳原子时，芳基内的原子不算入)中。
术语“多环基”、“多环”和“多环的”是指两个或更多个环(例如环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基)，其中两个或更多个原子为两个毗邻环共用，例如环为“稠环”。多环的每个环可以是取代或未取代的。在某些实施方案中，多环的每个环在环中含有3-10个原子，优选5-7个。
术语“甲硅烷基”是指具有3个烃基部分与之连接的硅部分。
术语“取代的”是指具有置换骨架的一个或多个碳上的氢的取代基的部分。应了解，“取代”或“被……取代”包括所述取代符合取代原子和取代基的容许的化合价且取代导致稳定化合物的隐含条件，例如所述化合物不会自发地进行例如通过重排、环化、消除等的转化。本文所用术语“取代的”预期包括有机化合物的所有容许的取代基。从大的方面来看，可容许的取代基包括有机化合物的无环和环状、支链和无支链的、碳环和杂环、芳族和非芳族的取代基。对于适宜的有机化合物，可容许的取代基可为一个或多个、相同或不同的。对于本发明的目的，杂原子(例如氮)可具有满足杂原子化合价的本文所述有机化合物的氢取代基和/或任何可容许的取代基。取代基可包括本文所述的任何取代基，例如卤素、羟基、羰基(例如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(例如硫酯、硫代乙酸酯基或硫代甲酸酯基)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、亚膦酸酯基、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨基磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员应了解，适当时，取代基本身可被取代。除非明确规定为“未取代的”，否则本文提及化学部分要理解为包括取代的变体。例如，提及“芳基”基团或部分无疑包括取代和未取代的变体两者。
术语“硫酸酯基”是本领域公知的，是指基团-OSO3H或其药学上可接受的盐。
术语“磺酰胺”是本领域公知的，是指用以下通式表示的基团
其中R9和R10独立表示氢或烃基，例如烷基，或R9和R10与间插原子一起完成环结构中具有4-8个原子的杂环。
术语“亚砜”是本领域公知的，是指基团-S(O)-R10，其中R10表示烃基。
术语“磺酸酯基”是本领域公知的，是指基团SO3H或其药学上可接受的盐。
术语“砜”是本领域公知的，是指基团-S(O)2-R10，其中R10表示烃基。
本文所用术语“硫烷基”是指被硫醇基取代的烷基。
本文所用术语“硫酯”是指基团-C(O)SR10或-SC(O)R10，其中R10表示烃基。
本文所用术语“硫醚”相当于醚，其中氧被硫置换。
术语“脲”是本领域公知的，可用以下通式表示
其中R9和R10独立表示氢或烃基，例如烷基，或R9任一个的每次出现与R10和间插原子一起完成环结构中具有4-8个原子的杂环。
“保护基”是指当与分子中的反应性官能团连接时，掩蔽、降低或防止官能团的反应性的原子基团。通常，在合成过程中，可按需选择性脱去保护基。保护基的实例可参见Greene和Wuts,ProtectiveGroupsinOrganicChemistry,第3版,1999,JohnWiley&Sons,NY和Harrison等,CompendiumofSyntheticOrganicMethods,第1-8卷,1971-1996,JohnWiley&Sons,NY。代表性的氮保护基包括但不限于甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧基羰基(“CBZ”)、叔丁氧基羰基(“Boc”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(“TES”)、三苯甲基和取代的三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-芴基甲基氧基羰基(“FMOC”)、硝基-藜芦基氧基羰基(“NVOC”)等。代表性的羟基保护基包括但不限于其中羟基被酰化(酯化)或烷基化的那些，例如苄基和三苯甲基醚，以及烷基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚(例如TMS或TIPS基团)、二醇醚，例如乙二醇和丙二醇衍生物和烯丙基醚。
术语“医疗保健提供者”是指向个人、社区等提供医疗保健服务的个人或团体。“医疗保健提供者”的实例包括医生、医院、连续护理型退休社区(continuingcareretirementcommunities)、专业护理机构、亚急性护理机构、诊所、全科诊所、独立流动中心(freestandingambulatorycenter)、居家卫生机构(homehealthagencies)和HMO。
如本文所用，“预防”病症或病况的治疗剂是指在统计样品中，相对于未治疗的对照样品降低经治疗的样品的病症或病况发生率，或相对于未治疗的对照样品延迟病症或病况的一个或多个症状的发生或降低其严重性的化合物。
术语“治疗”包括预防性和/或治疗性治疗。术语“预防性或治疗性”治疗是本领域公知的，包括将主题组合物的一种或多种给予宿主。如果在不需要的情况(例如宿主动物的疾病或其它不需要的状态)临床表现之前给予，则治疗是预防性的(即它防止宿主出现不需要的情况)，而如果在不需要的情况表现之后给予，则治疗是治疗性的(即它旨在减轻、改善或稳定现有的不需要的情况或其副作用)。
术语“前药”意在包括在生理条件下转化成本发明的治疗活性剂(例如式I的化合物)的化合物。制备前药的通用方法包括在生理条件下水解露出所需分子的一个或多个选择的部分。在其它实施方案中，前药被宿主动物的酶活性转化。例如，酯或碳酸酯(例如醇或羧酸的酯或碳酸酯)是本发明的优选前药。在某些实施方案中，上文所示制剂中的一些或所有式I化合物可用相应的合适前药替换，例如，其中母体化合物中的羟基作为酯或碳酸酯呈现，或者存在于母体化合物中的羧酸作为酯存在。
药物组合物
本发明的组合物和方法可用来治疗有需要的个体。在某些实施方案中，个体是哺乳动物，例如人或非人哺乳动物。当给予动物(例如人)时，组合物或化合物优选作为包含例如本发明的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物给予。药学上可接受的载体是本领域众所周知的，包括例如含水溶液例如水或生理缓冲盐水或其它溶剂或溶媒，例如二醇、甘油、油(例如橄榄油)或注射用有机酯。在一个优选的实施方案中，当所述药物组合物是用于人类给药，特别用于侵入途径的给药(即避开通过上皮屏障转运或扩散的途径，例如注射或植入)时，含水溶液是无致热原或基本无致热原的。可选择赋形剂以实现例如药剂的缓释或选择性靶向一个或多个细胞、组织或器官。药物组合物可呈剂量单位形式，例如片剂、胶囊剂(包括撒粉胶囊剂(sprinklecapsule)和明胶胶囊剂)、颗粒剂、复溶用冻干剂、散剂、溶液剂、糖浆剂、栓剂、注射剂等。组合物还可以透皮递送系统(例如皮肤贴剂)存在。组合物还可以适于局部给药的溶液剂(例如滴眼剂)存在。
药学上可接受的载体可含有生理上可接受的作用剂，其起例如稳定化合物(例如本发明的化合物)、提高化合物(例如本发明的化合物)溶解度或增加化合物(例如本发明的化合物)吸收的作用。这类生理上可接受的作用剂包括例如糖，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质或其它稳定剂或赋形剂。所选的药学上可接受的载体，包括生理上可接受的作用剂，取决于例如组合物的给药途径。制剂或药物组合物可以是自乳化药物递送系统或自微乳化药物递送系统。药物组合物(制剂)还可以是例如本发明的化合物可掺入其中的脂质体或其它聚合物基质。例如包含磷脂或其它脂质的脂质体是相对容易制备和给予的无毒的生理上可接受的和可代谢的载体。
本文使用短语“药学上可接受的”是指在合理医学判断范围内、适用于与人类和动物组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
本文所用短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或溶媒，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。从与制剂的其它成分相容并对患者无害的意义来看，各载体必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)用于药物制剂的其它无毒的相容物质。
可通过各种给药途径的任一种将药物组合物(制剂)给予受试者，包括例如口服(例如如在水性或非水溶液或混悬液的兽用顿服药、片剂、胶囊剂(包括撒粉胶囊剂和明胶胶囊剂)、大丸剂、散剂、颗粒剂、舌用糊剂)；通过口腔黏膜吸收(例如舌下)；肛门、直肠或阴道(例如作为阴道栓、乳膏剂或泡沫剂)；胃肠外(包括肌内、静脉内、皮下或鞘内、作为例如无菌溶液剂或混悬剂)；经鼻；腹膜内；皮下；透皮(例如作为施用于皮肤的贴剂)；和局部(例如作为施用于皮肤的乳膏剂、软膏剂或喷雾剂，或作为滴眼剂)。还可以配制化合物用于吸入。在某些实施方案中，可将化合物简单溶解于或悬浮于无菌水中。合适的给药途径和适于所述给药途径的组合物的详细描述可参见例如美国专利号6,110,973、5,763,493、5,731,000、5,541,231、5,427,798、5,358,970和4,172,896以及其中引用的专利。
制剂可适宜地存在于单位剂型中，可通过制药领域众所周知的任何方法制备。可与载体材料混合以产生单一剂型的活性成分的量将随待治疗的宿主、具体的给药方式而变化。可与载体材料混合以产生单一剂型的活性成分的量一般将是产生治疗作用的化合物的量。一般而言，在100％中计，该量的范围可为约1％-约99％的活性成分，优选约5％-约70％，最优选约10％-约30％。
制备这些制剂或组合物的方法包括将活性化合物(例如本发明的化合物)与载体和任选一种或多种助剂成分联合的步骤。一般来说，通过将本发明的化合物与液体载体或细碎的固体载体或两者充分均匀地混合，然后如有需要，使产物成形，来制备制剂。
适于口服给予的本发明的制剂可呈以下形式：胶囊剂(包括撒粉胶囊剂和明胶胶囊剂)、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味基料、通常为蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、冻干剂、散剂、颗粒剂或作为水性或非水液体中的溶液剂或混悬剂，或作为水包油或油包水液体乳剂，或作为酏剂或糖浆剂，或作为软锭剂(使用惰性基料，例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯树胶)和/或作为漱口剂等，各自含有预定量的本发明的化合物作为活性成分。还可以大丸剂、糖药剂或糊剂给予组合物或化合物。
为了制备口服给药的固体剂型(胶囊剂(包括撒粉胶囊剂和明胶胶囊剂)、片剂、丸剂、糖衣丸、散剂、颗粒剂等)，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下的任一种混合：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇，和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯树胶；(3)湿润剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物；(10)络合剂，例如改性和未改性环糊精；和(11)着色剂。在胶囊剂(包括撒粉胶囊剂和明胶胶囊剂)，片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可包含缓冲剂。使用诸如乳糖(lactose/milksugar)等赋形剂以及高分子量聚乙二醇等，类似类型的固体组合物也可用作软充填和硬充填的明胶胶囊剂中的填充剂。
可任选与一种或多种助剂成分一起，通过压制或模制来制备片剂。可使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂，来制备压制片。通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物，来制备模制片。
片剂和药物组合物的其它固体剂型，例如糖衣丸、胶囊剂(包括撒粉胶囊剂和明胶胶囊剂)、丸剂和颗粒剂，可任选划痕或用包衣材料和外壳材料(例如肠溶包衣和制药领域众所周知的其它包衣材料)制备。它们还可使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素(以提供所需释放特征)、其它聚合物基质、脂质体和/或微球体，进行配制以提供其中活性成分的慢释或控释。它们可通过例如截留细菌滤器过滤，或通过以临用前可溶于无菌水或一些其它无菌注射用介质的无菌固体组合物的形式掺入杀菌剂来灭菌。这些组合物还可任选含有遮光剂，并且可以具有只在或优先在胃肠道的某些部分，任选以延时方式释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性成分还可呈微囊化形式，在适当时，与上述赋形剂的一种或多种一起。
可用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、复溶用冻干剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分以外，液体剂型可含有常用于本领域的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、环糊精及其衍生物、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯及其混合物。
除惰性稀释剂以外，口服组合物还可包括辅助剂，例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除活性化合物以外，混悬剂可含有助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨坦酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶及其混合物。
用于直肠、阴道或尿道给药的药物组合物的制剂可作为栓剂呈现，其可通过将一种或多种活性化合物与一种或多种合适的无刺激的赋形剂或载体(包含例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备，并且在室温下是固体，但在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔中将融化并释放活性化合物。
用于给予口腔的药物组合物的制剂可作为漱口剂，或口腔喷雾剂，或口腔软膏剂呈现。
或者或另外地，可配制组合物用于通过导管、支架、金属丝或其它管腔内装置递送。通过这类装置的递送尤其可用于递送到膀胱、尿道、输尿管、直肠或肠。
适于阴道给药的制剂还包括含有本领域已知是合适的这类载体的阴道栓、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。
用于局部或经皮给药的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。可在无菌条件下将活性化合物与药学上可接受的载体和可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。
除活性化合物以外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂可含有赋形剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。
除活性化合物以外，散剂和喷雾剂可含有赋形剂，例如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉或这些物质的混合物。喷雾剂另外可含有常规抛射剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃，例如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有提供将本发明的化合物受控递送到机体的附加优势。这类剂型可通过活性化合物溶解或分散在合适的介质中来制备。还可使用吸收促进剂增加化合物跨越皮肤的流动。可通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制这种流动的速率。
还考虑眼用制剂、眼膏、散剂、溶液剂等在本发明的范围内。示例性眼用制剂描述于美国公布号2005/0080056、2005/0059744、2005/0031697和2005/004074和美国专利号6,583,124，其内容通过引用结合到本文中。如有需要，液体眼用制剂具有类似于泪液、房水或玻璃体液的性质或与所述流体相当。优选的给药途径是局部给药(例如局部给药，例如滴眼剂，或通过植入剂给予)。
本文所用短语“胃肠外给药”和“胃肠外给予”意指肠内和局部给药以外的给药方式，通常通过注射，包括而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
适于胃肠外给药的药物组合物包含一种或多种活性化合物以及一种或多种药学上可接受的无菌等渗的水性或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，或临用前可复溶为无菌注射溶液剂或分散剂的无菌粉剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者血液等渗的溶质或助悬剂或增稠剂。
可用于本发明的药物组合物的合适的含水和非含水载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和注射用有机酯(例如油酸乙酯)。例如，可通过使用包衣材料(例如卵磷脂)、在分散剂的情况下通过保持所需粒度和通过使用表面活性剂，来保持合适的流动性。
这些组合物还可含有辅助剂例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，确保防止微生物的作用。可能还需要将等渗剂(例如糖、氯化钠等)包括在组合物中。另外，可通过包括延迟吸收的作用剂(例如单硬脂酸铝和明胶)，引起注射药物形式的延长吸收。
在某些情况下，为了延长药物的作用，需要减慢药物自皮下或肌内注射的吸收。这可通过使用水溶解度差的结晶或非晶形材料的液体悬浮液来实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，这进而可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给予的药物形式的延长吸收通过将药物溶于或悬浮在油溶媒中来实现。
通过在生物可降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成主题化合物的微囊化基质，来制备注射贮库形式。可根据药物与聚合物的比率和所用具体聚合物的性质，控制药物释放的速率。其它生物可降解的聚合物的实例包括聚原酸酯和聚酐。另通过将药物包封在与机体组织相容的脂质体或微乳剂中，来制备贮库注射制剂。
对于用于本发明的方法，可给予活性化合物本身或作为含有例如0.1-99.5％(更优选0.5-90％)的活性成分以及药学上可接受的载体的药物组合物给予。
还通过可再装载或生物可降解的装置提供引入方法。近年来开发了各种慢释聚合物装置并在体内测试用于药物(包括蛋白质性生物制剂)的控制递送。各种生物相容的聚合物(包括水凝胶)，包括生物可降解的和不可降解的聚合物两者，都可用于形成化合物在特定靶标部位缓释的植入剂。
药物组合物中活性成分的实际剂量水平可改变，以获得有效实现针对特定患者、组合物和给药方式所需的治疗反应而对患者无毒的一定量的活性成分。
选择的剂量水平将取决于各种因素，包括所用的具体化合物或化合物的组合或其酯、盐或酰胺的活性、给药途径、给药时间、所用具体化合物的排泄率、治疗持续时间、与所用具体化合物联用的其它药物、化合物和/或材料、待治疗的患者的年龄、性别、体重、病况、一般健康状况和既往病史等医学领域众所周知的因素。
具有本领域普通技术的医师或兽医可容易地确定和开给所需的治疗有效量的药物组合物。例如，医师或兽医可以低于达到所需治疗作用的水平开始药物组合物或化合物的剂量，逐渐增加剂量直到达到所需作用。所谓“治疗有效量”意指足以引发所需治疗作用的化合物的浓度。一般认为，有效量的化合物将随受试者的体重、性别、年龄和病史而变化。影响有效量的其它因素可包括但不限于患者病况的严重性、待治疗的病症、化合物的稳定性，以及如有需要，与本发明的化合物一起给予的另一种类型的治疗剂。可通过多次给予所述治疗剂，来递送较大的总剂量。确定功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的(Isselbacher等(1996)Harrison’sPrinciplesofInternalMedicine第13版，1814-1882，通过引用结合到本文。
一般来说，用于本发明的组合物和方法的活性化合物的合适日剂量可以是有效产生治疗作用的最低剂量的化合物的量。这类有效剂量一般将取决于上述因素。
如有需要，可作为一整天内以合适间隔给予的1、2、3、4、5、6个或更多个亚剂量，任选以单位剂型给予有效日剂量的活性化合物。在本发明的某些实施方案中，活性化合物可每日2或3次给予。在优选的实施方案中，活性化合物可每日一次给予。
接受该治疗的患者是有需要的任何动物，一般包括灵长类动物(特别是人)和其它哺乳动物，例如马、牛、猪和绵羊；家禽和宠物。
在某些实施方案中，本发明的化合物可单独使用或与另一种类型的治疗剂联合给予。本文所用短语“联合给予”是指给予两种或更多种不同的治疗化合物的任何形式使得在之前给予的治疗化合物在体内仍有效时给予第二化合物(例如两种化合物在患者中同时有效，这可包括两种化合物的协同效应)。例如，不同的治疗化合物可以相同的制剂或以单独的制剂同时或序贯给予。在某些实施方案中，不同的治疗化合物可彼此在1小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时或1周内给予。因此，接受所述治疗的个体可获益于不同治疗化合物的联合作用。
在某些实施方案中，相对于本发明的化合物(例如式I或式Ia化合物)或一种或多种其它治疗剂的各自单独给予，本发明的化合物与一种或多种其它治疗剂(例如一种或多种其它化学治疗剂)的联合给予提供提高的功效。在某些这样的实施方案中，联合给予提供相加效应，其中相加效应是指单独给予本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂的各自作用的总和。
本发明包括本发明化合物的药学上可接受的盐在本发明的组合物和方法中的用途。在某些实施方案中，本发明预期的盐包括但不限于烷基、二烷基、三烷基或四烷基铵盐。在某些实施方案中，本发明预期的盐包括但不限于L-精氨酸、苯乙苄胺、苄星青霉素、甜菜碱、氢氧化钙、胆碱、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙基氨基)乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、海巴明(hydrabamine)、1H-咪唑、锂、L-赖氨酸、镁、4-(2-羟基乙基)吗啉、哌嗪、钾、1-(2-羟基乙基)吡咯烷、钠、三乙醇胺、氨丁三醇和锌盐。在某些实施方案中，本发明预期的盐包括但不限于Na、Ca、K、Mg、Zn或其它金属盐。
药学上可接受的酸加成盐还可作为例如与水、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等的各种溶剂合物存在。还可制备这类溶剂合物的混合物。这类溶剂合物的来源可来自结晶的溶剂、制备或结晶的溶剂中固有的，或对所述溶剂而言为外来的。
润湿剂、乳化剂和润滑剂(例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁羟茴醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属-螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
在某些实施方案中，本发明涉及通过制备本发明化合物的制剂或本文所述试剂盒，并向医疗保健提供者营销使用制剂或试剂盒以治疗或预防本文所述任何疾病或病况的益处，来实施制药商务的方法。
在某些实施方案中，本发明涉及通过提供用于销售本发明化合物的制剂或本文所述试剂盒的行销网，并向患者或医师提供使用制剂治疗或预防本文所述任何疾病或病况的说明资料，来实施制药商务的方法。
在某些实施方案中，本发明包括通过确定本发明化合物治疗或预防本文所述任何疾病或病况的合适制剂和剂量，在动物中针对功效和毒性进行所鉴定的制剂的治疗概况分析，并提供销售具有可接受的治疗概况的已鉴定制剂的行销网，来实施制药商务的方法。在某些实施方案中，所述方法还包括提供向医疗保健提供者营销制剂的销售组。
在某些实施方案中，本发明涉及通过确定本发明的化合物治疗或预防本文所述任何疾病或病况的合适的制剂和剂量，向第三方放发有权进一步开发和销售制剂的许可，来实施制药商务的方法。
实施例
实施例1：合成方案
连接基核心的合成：
5,5’-(丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1001)
将己二腈(8.00g，73.98mmol)和氨基硫脲(13.48g，147.96mmol)在三氟乙酸(TFA)(75mL)中的混合物在80℃下加热17小时。使反应物冷却至室温，倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到5,5’-(丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1001，13.07g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.00(s,4H),2.84(bs,4H),1.68(bs,4H)。5,5’-(硫代双(乙烷-2,1-二基))双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1002)的合成
化合物1002按照US/2002/0115698A1所述制备。
5,5’-(2-甲基丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1003)
将3-甲基己二酸(5.00g，31.22mmol)和氨基硫脲(5.69g，62.43mmol)在POCl3(45mL)中的混合物在90℃下加热4小时。使反应物冷却至室温，倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到5,5’-(2-甲基丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1003，8.97g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.00(s,4H),2.89–2.81(m,3H),2.89–2.81(m,3H),2.69(dd,J＝7.6,7.6Hz,1H),1.89–1.46(m,3H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H)。
5,5’-(丙烷-1,3-二基)-双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1004)
将戊二腈(5.00g，53.13mmol)和氨基硫脲(9.68g，106.26mmol)在TFA(50mL)中的混合物在85℃下加热4小时。使反应物冷却至室温，倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到5,5’-(丙烷-1,3-二基)-双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1004，13.72g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.06–7.03(s,4H),2.87(t,J＝7.5Hz,4H),2.02–1.95(m,2H)。
5-(2-((2-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-yl)乙基)氨基)乙基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(1005)
将3,3’-亚氨基二丙腈(1.50g，12.18mmol)和氨基硫脲(2.22g，24.36mmol)在TFA(10mL)中的混合物在85℃下加热4.5小时。使反应物冷却至室温，倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到5-(2-((2-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙基)氨基)乙基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(1005，1.47g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.95(s,4H),2.90(d,J＝6.0Hz,4H),2.83(d,J＝6.3Hz,4H)。
向3-((2-甲氧基-2-氧代乙基)硫代)丙酸甲酯(5.0g，26mmol)的THF/MeOH/水(60mL，4:1:1)溶液中加入一水氢氧化锂(4.375g，101mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用水(～100mL)稀释，所得溶液用6NHCl酸化。使混合物在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到3-((羧基甲基)硫代)丙酸(3.64g，85％)，为白色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δppm2.55-2.57(t,2H)2.75-2.79(t,2H)3.27(s,2H)12.41(s,2H)。
向3-((羧基甲基硫代)丙酸(3.64g，22.2mmol)和氨基硫脲(4.1g，45mmol)的混合物中慢慢加入三氯氧化磷(25mL)。将所得混合物在90℃下搅拌3小时后，慢慢倒入碎冰上。将分离的固体过滤，通过固体氢氧化钠使滤液碱化到pH～13。分离的固体经过滤，用水洗涤，在45℃下真空干燥过夜，得到1006(～3g，50％)，为黄褐色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δppm2.79-2.83(t,2H)3.06-3.10(t,2H)3.99(s,2H)7.04(s,2H)7.16(s,2H)。
将2,2’-硫代二乙酸(5.00g，33.3mmol)和氨基硫脲(6.07g，66.6mmol)在POCl3(40mL)中的混合物在90℃下加热5小时。使反应物冷却至室温，小心地将其倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到1007。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.18(s,4H),3.96(s,4H)。
将1,5-二氰基戊烷(1.00g，8.19mmol)和氨基硫脲(1.5g，16.40mmol)在TFA(3mL)中的混合物在85℃下加热5小时。使反应物冷却至室温，倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到1008。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.98(s,4H),2.81(t,4H),1.67(m,4H),1.20(m,2H)。
二氨基核心的酰化：
方法A：通过酰氯
N,N'-[5,5’-(丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基)]-双(2-苯基乙酰胺)(21)
在0℃下向1001(8.00g，31.21mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)100mL)中的悬浮液中滴加苯乙酰氯(10.25mL，77.54mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时后，通过加入水(～200mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到N,N'-[5,5’-(丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基)]-双(2-苯基乙酰胺)(21，14.02g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,2H),7.34(m,10H),3.81(s,4H),3.01(bs,4H),1.76(bs,4H)。
使用苯氧基乙酰氯，按照方法A制备化合物43。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,2H),7.35–7.30(m,4H),6.99–6.97(m,6H),4.90(s,4H),3.05(bs,4H),1.79(bs,4H)。
化合物100按照方法A制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,2H),3.64(t,J＝5.6Hz,4H),3.24(s,6H),3.01(bs,4H),2.72(t,J＝6.2Hz,4H),1.79(bs,4H)。
化合物5按照方法A制备：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,4H),3.27(t,J＝6.99Hz,4H),2.95(t,J＝7.02Hz,4H),2.12(s,6H)。
在0℃下向1001(200mg，0.78mmol)在NMP(2mL)中的悬浮液中滴加O-乙酰基扁桃酸酰氯(0.44mL，1.95mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1.5h后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥。粗物质用DMSO和MeOH的混合物通过重结晶纯化，得到173。
向烧瓶中装入173和2N氨/MeOH(3ml)，将所得混合物在室温下搅拌6小时。除去溶剂，将所得物质在烘箱中干燥，得到174。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,2H),7.53-7.31(m,10H),6.35(s,2H),5.34(d,J＝1.14Hz,2H),3.01(bs,4H),1.76(bs,4H)。
化合物306按照用于上述化合物174的方法制备。
在0℃下，向1001(400mg，1.56mmol)在NMP(4mL)中的悬浮液中滴加(R)-(-)-O-甲酰基扁桃酰氯(0.61mL，3.90mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1.5h后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥。粗物质用DMSO和MeOH的混合物通过重结晶纯化，得到68。
向烧瓶中装入68和2N氨/MeOH(5ml)，将所得混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂，将所得物质在烘箱中干燥，得到80。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.53-7.31(m,10H),6.34(s,2H),5.33(s,2H),3.01(bs,4H),1.75(bs,4H)。
在-15℃下，向1002(544mg，1.89mmol)在NMP(13mL)中的悬浮液中滴加苯乙酰氯(0.249mL，1.89mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时，通过加入水(54mL)猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水(27mL)和乙酸乙酯(3x27mL)漂洗。使用2.5MNaOH将滤液碱化至pH11。分层，水层用二氯甲烷(3x54mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥并浓缩，得到N-(5-(2-((2-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙基)硫代)乙基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-苯基乙酰胺(17，56mg)1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),7.32(s,5H),3.81(s,2H),3.25(t,J＝7.61Hz,2H)3.06(t,J＝7.25Hz,2H),2.92(t,J＝6.90Hz,2H),2.85(t,J＝6.86Hz,2H)。
将苯乙酰氯(0.134mL，1.01mmol)和乙酰氧基乙酰氯(0.109mL，1.01mmol)在NMP(0.5mL)中混合在一起。在室温下，将该混合物慢慢加入1002(292mg，1.01mmol)在NMP(7mL)中的悬浮液中。将所得混合物在室温下搅拌1小时，通过加入水(20mL)猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗，高真空下干燥。粗物质用制备型HPLC纯化。化合物26：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.69(s,2H),7.34(3,5H),4.81(s,2H),3.82(s,2H),2.96(bs,4H),2.14(s,3H)。
化合物44按照前述化合物21的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,2H),7.34–7.28(m,10H),3.81(s,4H),3.05–3.00(m,3H),2.87(dd,J＝7.9,8.2Hz,1H),1.95–1.77(m,3H),0.94(d,J＝6.5Hz,3H)。
化合物72按照前述化合物21的方法制备。在0℃下，向二胺1004(0.70g，3.07mmol)在NMP(15mL)中的悬浮液中滴加苯乙酰氯(811μL，6.13mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时后，通过加入水将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到N,N'-[5,5’-(丙烷-1,3-二基)-双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基)]-双(2-苯基乙酰胺)(72，1.37g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,2H),7.38–7.27(m,10H),3.82(s,4H),3.06(t,J＝7.2Hz,4H),2.17–2.12(m,2H)。
在室温下，向化合物1005(100mg，0.37mmol)在DMF(12mL)中的悬浮液中加入(t-Boc)2O(88mg，0.41mmol)的DMF(2mL)溶液。将混合物在室温下搅拌24小时。向该反应混合物加入NMP(2mL)，接着加入苯乙酰氯(97μL，0.74mmol)。将反应物搅拌1小时后，将其倒入冰-水的混合物中。固体通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到1010(180mg)。
在室温下，将上述产物1010(160mg，0.26mmol)在TFA(1.5mL)和CH2CH2(10mL)的混合物中搅拌4小时后，将其浓缩。使残余物重新溶于CH2Cl2(3×)中并浓缩，得到N,N'-(5,5’-(氮烷二基-双(乙烷-2,1-二基))-双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基))-双(2-苯基乙酰胺)三氟乙酸(149，122mg)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,2H),8.75(bs,2H),7.38–7.27(m,10H),3.84(s,4H),3.45(d,J＝2.9Hz,4H),3.39(d,J＝6.0Hz,4H)。
向1006(0.274g，1mmol)在NMP(5mL)中的悬浮液中滴加苯乙酰氯(0.263mL，2mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后将其用水稀释。分离的固体经过滤，用更多的水洗涤并干燥。粗物质用制备型HPLC纯化，得到199，为白色固体。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm2.87-2.91(t,2H)3.25-3.29(t,2H)3.82(s,4H)4.19(s,2H)7.26-7.33(m,10H)12.71-12.72(brs,2H)。
方法B：使用肽偶联试剂通过酸进行
向含有5,5’-(硫代双(乙烷-2,1-二基))双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1002)(0.69mmol，0.20g，1.0当量)的烧瓶中加入2-吗啉代乙酸(1.52mmol，0.22g，2.2当量)、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲(HBTU)(2.20mmol，0.83g，3.2当量)、1-羟基苯并三唑(HOBT)(2.2mmol，0.29g，3.2当量)、5mLDMF，接着加入N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(5.52mmol，0.71g，0.960mL，8.0当量)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用15mL水稀释。混合物用EtOAc萃取，合并有机层，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物，得到0.04g的化合物12。1HNMR(300MHz,CDCl3)化合物12：δ3.80(宽多重峰,4H),3.34(dd,4H,J＝7.2Hz),3.28(s,4H),3.00(dd,4H,J＝7.1Hz),2.63(宽多重峰,4H)。
向含有5,5’-(丁烷-1,4-二基)双(1,3,4-噻二唑-2-胺)(1101)(3.9mmol，1.0g，1.0当量)的烧瓶中加入(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-苯乙酸(8.58mmol，2.15g，2.2当量)、HBTU(12.48mmol，4.73g，3.2当量)、HOBt(12.48mmol，1.69g，3.2当量)25mL的DMF，接着加入DIEA(31.2mmol，4.03g，5.43mL，8.0当量)。搅拌混合物过夜，并倒入150mL水中。形成的白色固体通过真空过滤收集，用水洗涤，真空干燥，得到2.47g的双-Boc保护的中间体。
在剧烈搅拌的情况下，向双-Boc保护的中间体(2.76mmol，2.0g，1.0当量)在20mL二氯甲烷(DCM)的浆液中加入含4MHCl的二噁烷(40mmol，10mL)。混合物短时变澄清和均匀，然后形成白色沉淀。搅拌混合物过夜，用20mL乙醚稀释。固体通过真空过滤收集，用额外的乙醚洗涤，并真空干燥，得到0.9g187。1HNMR(300MHz,DMSO,d6)化合物187：δ9.13(s,4H),7.61(m,4H),7.48(m,6H),6.2(宽单峰,4H),5.32(s,2H),3.04(宽多重峰,4H),1.77(宽多重峰,4H)。
在室温下，向2,2-双(羟基甲基)丙酸(5.00g，37.28mmol)的丙酮(80mL)溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(6.88mL，55.92mmol)和p-TsOH·H2O(0.36g，1.86mmol)。将反应物搅拌2小时后，将其用Et3N(0.30mL)猝灭。减压除去有机挥发物。使残余物在EtOAc和水之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到所需产物1011(5.17g)，为白色固体。
在0℃下，向二胺1001(500mg，1.95mmol)、3-氟苯乙酸(361mg，2.34mmol)和酸1011(442mg，2.54mmol)在DMF(20mL)中的悬浮液中加入HOBt(791mg，5.85mmol)，接着加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(1.12g，5.85mmol)。将混合物在18小时内从0℃到室温搅拌后，将其用水稀释。沉淀通过吸滤收集，用水洗涤，干燥。粗产物用硅胶色谱法纯化(用1-10％MeOH/CH2Cl2洗脱)，得到N-(5-(4-(5-(2-(3-氟苯基)乙酰氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,2,5-三甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-甲酰胺(1012，208mg)。
将上述产物1012(87mg，0.16mmol)和TFA(2mL)在THF(8mL)和水(2mL)的混合物中在50℃下加热5小时后，将其减压浓缩。粗制残余物用HPLC纯化，得到N,N'-(5-(4-(5-(2-(3-氟苯基)乙酰氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3-羟基-2-(羟基甲基)-2-甲基丙酰胺(152)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),11.77(s,1H),7.04–7.38(m,1H),7.18–7.09(m,4H),4.98(s,2H),3.86(s,2H),3.62(dd,J＝10.7,29.0Hz,4H),3.03(bs,4H),1.77(bs,4H),1.14(s,3H)。
在0℃下，向二胺1001(400mg，1.56mmol)、3-氟苯乙酸(313mg，2.03mmol)、(R)-(–)-2,2-二甲基-5-氧代-1,3-二氧杂环戊烷-4-乙酸(353mg，2.03mmol)和Et3N(200μL)在DMF(20mL)中的悬浮液中依次加入HOBt(633mg，4.68mmol)和EDC(897mg，4.68mmol)。将混合物在18小时内从0℃到室温搅拌后，将其用水稀释。沉淀通过吸滤收集，并用水洗涤。固体用热的MeOH-THF混合物进一步漂洗。合并的滤液经浓缩，并用硅胶色谱法纯化(用1-10％MeOH/CH2Cl2洗脱)，得到(R)-N-(5-(4-(5-(2-(3-氟苯基)乙酰氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3,4-二羟基丁酰胺(1013，93mg)。
上述产物1013(87mg，0.16mmol)和TFA(2mL)在THF(8mL)和水(2mL)中的混合物在50℃下加热5小时后，将其减压浓缩。粗制残余物用HPLC纯化，得到(R)-N-(5-(4-(5-(2-(3-氟苯基)乙酰氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-3,4-二羟基丁酰胺(153)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),12.43(s,1H),7.41–7.38(m,1H),7.20–7.12(m,4H),4.45–4.40(m,1H),3.86(s,2H),3.03(bs,4H),2.85–2.77(m,2H),1.78(bs,4H)。
向(S)-(+)-O-乙酰基扁桃酸(666mg，3.43mmol)和六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲(HATU)(1.47g，3.86mmol)在DMF(4mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.672ml，3.86mmol)和1001(400mg，1.56mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥。粗物质用DMSO和MeOH的混合物通过重结晶纯化，得到66。
向烧瓶中装入66和2N氨/MeOH(5ml)，将所得混合物在室温下搅拌6小时。除去溶剂，将所得物质在烘箱中干燥，得到92。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,2H),7.53-7.31(m,10H),6.35(s,2H),5.33(s,2H),3.01(bs,4H),1.76(bs,4H)。
向烧瓶中装入1001(200mg，0.78mmol)、DL-3-苯基乳酸(285mg，1.716mmol)和含HOBT(527mg，3.9mmol)的DMF(3ml)，依次加入EDC(897mg，4.68mmol)和三乙胺(0.87ml，6.24mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～5mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到69。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.20(s,2H),7.24(m,10H),5.75(d,J＝6.87Hz,2H),4.43(m,2H),3.10(m,6H),2.89-2.81(m,2H),1.80(bs,4H)。
向烧瓶中装入1001(200mg，0.78mmol)、D-(+)-3-苯基乳酸(285mg，1.716mmol)和含HOBt(464mg，3.43mmol)的DMF(3ml)，依次加入EDC(822mg，4.28mmol)和三乙胺(0.718ml，5.15mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～5mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到169。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.20(s,2H),7.24(m,10H),5.75(d,J＝6.87Hz,2H),4.43(m,2H),3.03(m,6H),2.89-2.81(m,2H),1.80(bs,4H)。
向烧瓶中装入1001(200mg，0.78mmol)、L-(-)-3-苯基乳酸(285mg，1.716mmol)和含HOBt(464mg，3.43mmol)的DMF(3ml)，依次加入EDC(822mg，4.28mmol)和三乙胺(0.718ml，5.15mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～5mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到146。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.27(s,2H),7.31(m,10H),5.78(m,2H),4.44(m,2H),3.05(m,6H),2.87(m,2H),1.79(bs,4H)。
向(R)-(+)-3-羟基-3-苯基丙酸(285mg，1.72mmol)和HATU(719mg，1.89mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.329ml，1.89mmol)和1001(200mg，0.78mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥。粗物质通过用DMSO和MeOH重结晶来纯化，得到127。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.38(s,2H),7.34(m,10H),5.56(m,2H),5.10(m,2H),3.04(bs,4H),2.80(m,4H),1.80(bs,4H)。
向(R)-2-羟基-2-苯基丁酸(310mg，1.72mmol)和HATU(719mg，1.89mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.329ml，1.89mmol)和1001(200mg，0.78mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。粗物质用HPLC纯化，得到143。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.61(d,J＝7.65Hz,4H),7.34(m,6H),2.99(bs,4H),2.26(m,2H),2.10(m,2H)1.74(bs,4H),0.80(t,6H)。
向3-氧代-1-茚满甲酸(604mg，3.43mmol)和HATU(1.47g，3.86mmol)在DMF(5mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.672ml，3.86mmol)和1001(400mg，1.56mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。浅褐色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥。粗物质用DMSO和MeOH的混合物通过重结晶纯化，得到64。
在0℃下，向64(100mg，0.175mmol)在EtOH(20ml)中的悬浮液中加入NaBH4(15mg，0.384mmol)，将所得混合物搅拌1小时后，用1NHCl将其猝灭。使混合物在1NHCl和EtOAc之间分配，有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，并且用DMSO和MeOH的混合物重结晶进一步纯化，得到94。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,2H),7.34(m,8H),5.56(m,2H),5.11(t,2H),4.15(t,2H),3.05(bs,4H),2.70(m,2H),2.15(m,2H),1.80(bs,4H)。
在0℃下，向含DL-扁桃酸(1g，6.57mmol)的DMF(10ml)溶液中加入NaH(700mg，19.7mmol)，将混合物搅拌20分钟后，滴加2-溴乙基甲基醚(1.24ml，13.1mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌，慢慢升温至室温过夜后，用1NHCl将其猝灭。使混合物在1NHCl和EtOAc之间分配，有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1014。
向1014(500mg，2.37mmol)和HATU(995mg，2.62mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.456ml，2.62mmol)和1001(277mg，1.08mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～6mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用HPLC纯化，得到203。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.58(s,2H),7.49-7.37(m,10H),5.22(s,2H),3.66-3.54(m,8H),3.27(s,6H),3.01(bs,4H),1.75(bs,4H)。
向2-(4-Boc-哌嗪基)-2-苯乙酸(1.1g，3.43mmol)和HATU(1.47g，3.86mmol)在DMF(5mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.672ml，3.86mmol)和1001(400mg，1.56mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥。粗物质通过用DMSO和MeOH重结晶来纯化，得到63。
向烧瓶中装入63和含4NHCl的1,4-二噁烷(6ml)，将所得混合物在室温下搅拌3小时。沉淀经过滤收集，用EtOAc/CH2Cl2漂洗并干燥，得到77。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.10(bs,4H),7.51-7.41(m,10H),4.90(bs,2H),4.62(s,2H),3.15(bs,8H),3.03(bs,4H),2.73(bs,8H),1.76(bs,4H)。
向(R)-(+)-3-羟基-3-苯基丙酸(254mg，1.53mmol)和HATU(640mg，1.68mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中依次加入DIEA(0.292ml，1.68mmol)和1002(200mg，0.693mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥。粗物质用DMSO和MeOH的混合物通过重结晶纯化，得到126。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,2H),7.38(m,10H),5.55(m,2H),5.09(m,2H),3.27(t,4H),2.95(t,4H),2.82(m,4H)。
向烧瓶中装入1002(200mg，0.693mmol)、2-(4-Boc-哌嗪基)-2-苯乙酸(244mg，0.763mmol)和含HOBt(187mg，1.39mmol)的DMF(3ml)，依次加入EDC(332mg，1.73mmol)和三乙胺(0.290ml，2.08mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，在0℃下滴加苯乙酰氯(0.037ml，0.277mmol)，搅拌1小时后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥。粗物质用HPLC纯化，得到70和76。
向烧瓶中装入70和含4NHCl的1,4-二噁烷(6ml)，将所得混合物在室温下搅拌3小时。沉淀经过滤收集，用EtOAc/CH2Cl2漂洗并干燥，得到78。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,2H),8.97(bs,2H),7.50-7.29(m,10H),4.72(bs,1H),4.59(s,1H),3.82(s,2H),3.27(t,4H),3.15(bs,4H),2.92(t,4H),2.70(bs,4H)。
向烧瓶中装入76和含4NHCl的1,4-二噁烷(6ml)，将所得混合物在室温下搅拌3小时。沉淀经过滤收集，用EtOAc/CH2Cl2漂洗并干燥，得到79。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,2H),9.03(bs,4H),7.50-7.40(m,10H),4.67(bs,2H),4.59(s,2H),3.28(t,4H),3.14(bs,8H),2.97(t,4H),2.71(bs,8H)。
酰胺偶联通用方法(用于下列实施例)：向含羧酸(2当量)的DMF0.2摩尔浓度悬浮液中加入HATU(2当量)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺(1当量)和DIPEA(4当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥。
39：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.89-2.01(m,6H)2.18-2.29(m,2H)2.95-3(m,4H)3.79-3.86(m,2H)3.94-4.02(m,2H)4.55-4.6(m,2H)12.29(brs,2H)。
41：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm2.93-2.98(m,4H)3.27-3.32(m,4H),4.46(s,4H),5.18-5.2(brs,2H)6.88-7.03(m,8H)12.87-12.92(brs,2H)。
51：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.78(brs,4H)3.05-3.06(brs,4H),3.38-3.40(m,2H)3.54-3.63(m,2H)5.44-5.50(m,2H)6.92-7.26(m,8H)12.78(brs,2H)。
54：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.92-2.03(m,10H)2.17-2.28(m,2H)3.05(brs,4H)3.79-3.85(m,2H)3.94-4.01(m,2H)4.55-4.59(m,2H)12.27(brs,2H)。
60：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.77(brs,4H)3.04(brs,4H)5.20(s,4H)6.31(brs,2H)7.49(brs,2H)7.79(brs,2H)12.80(brs,2H)。
85：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm0.20-0.21(brs,4H)0.48-0.50(brs,4H)1.79(brs,4H)2.35-2.38(brs,4H)3.04(brs,4H)12.32(brs,2H)。
87：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.78(brs,4H)3.03(brs,4H)4.05(s,4H)6.99(brs,4H)7.42-7.44(m,2H)12.68(brs,2H)。
114：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.01-1.12(m,4H)1,40(s,18H)1.61-1.65(m,4H)1.78(brs,4H)1.95(brs,2H)3.84(m,4H)2.65-2.75(m,4H)3.03(brs,4H)3.89-3.93(m,4H)12.39(brs,2H)。
123：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.43(s,6H)1.79-1.94(m,10H)2.22-2.31(m,2H)3.05(brs,4H)3.85-4.01(m,4H)11.85(brs,2H)。
133：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm2.92-2.97(m,4H)3.26-3.30(m,4H)4.61-4.87(m,6H)6.83-6.89(m,4H)7.16-7.21(m,2H)7.36-7.38(m,2H)12.95(brs,2H)。
135：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.77(brs,4H)3.03(brs,4H)4.60-4.87(m,6H)6.83-6.89(m,4H)7.16-7.22(m,2H)7.36-7.38(m,2H)12.92(brs,2H)。
114：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.01-1.12(m,4H)1,40(s,18H)1.61-1.65(m,4H)1.78(brs,4H)1.95(brs,2H)3.84(m,4H)2.65-2.75(m,4H)3.03(brs,4H)3.89-3.93(m,4H)12.39(brs,2H)。
323：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.76(brs,4H)3.01(brs,4H)4.02(s,4H)6.56(s,2H)6.94-7.05(m,4H)7.31-7.33(m,4H)11.12(brs,2H)12.69(s,2H)。
397：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.67-3.82(m,10H)6.85-7.03(m,4H)7.26-7.36(m,5H)7.55-7.58(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
398：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppmppm1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.72-3.78(m,10H)6.42-6.51(m,4H)7.36(m,5H)7.54-7.58(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
399：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.48(s,9H)1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.74-3.78(m,4H)6.92-6.94(m,1H)7.20-7.36(m,7H)7.51-7.58(m,2H)8.18-8.21(d,1H)9.34(s,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
400：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.48(s,9H)1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.71-3.78(m,4H)7.18-7.42(m,9H)7.54-7.58(m,2H)8.18-8.21(d,1H)9.34(s,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
324：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.39(s,18H)1.76(brs,4H)3.01(brs,4H)3.79(s,4H)4.11-4.13(brs,4H)7.13-7.38(m,8H)12.65(s,2H)。
方法C：通过与酯/内酯的铝酰胺偶联
向1002(288mg，1.00mmol)在甲苯(9mL)中的悬浮液中依次加入3-异色满酮(311mg，2.10mmol)和三甲基铝(2M的甲苯溶液，1.0mL，2.00mmol)。将所得混合物在75℃下搅拌15小时，冷却至室温，并用乙酸乙酯(50mL)稀释。有机层用水(3x20mL)、10％氯化钠溶液(10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并减压浓缩。粗产物用HPLC纯化，得到N,N'-(5,5’-(硫代双(乙烷-2,1-二基))双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基))双(2-(2-(羟基甲基)苯基)乙酰胺)(181，78mg)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.42(d,J＝6.84Hz,2H),7.26(bs,6H),4.57(s,4H),3.90(s,4H),3.27(t,J＝6.62Hz,4H),2.94(t,J＝6.44Hz,4H)。
向1001(256mg，1.00mmol)在甲苯(8mL)中的悬浮液中依次加入3-异色满酮(311mg，2.10mmol)和三甲基铝(2M的甲苯溶液，1.0mL，2.00mmol)。将所得混合物在75℃下搅拌15小时，冷却至室温，并用乙酸乙酯(50mL)稀释。有机层用水(3x20mL)、10％氯化钠溶液(10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并减压浓缩。粗产物用HPLC纯化，得到N,N'-(5,5’-(硫代双(乙烷-2,1-二基))双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基))双(2-(2-(羟基甲基)苯基)乙酰胺)(208，62mg)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.41(s,2H),7.26(s,6H),4.56(s,4H),3.01(bs,4H),1.76(bs,4H)。
向1015(3.2g，19.5mmol)的四氯化碳(150mL)溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(3.47g，19.6mmol)和过氧化苯甲酰(10mg，催化性)。使所得混合物回流过夜后，将其热过滤。将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶色谱法纯化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到1016(2g，42％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm3.66(s,2H)3.74(s,3H)4.51(s,2H)7.35(m,4H)。
向1016(0.243g，1mmol)的丙酮(10mL)溶液中加入2-甲基咪唑(0.41g，5mmol)。使所得混合物回流过夜后，将其减压浓缩，所得残余物用水(～100mL)稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到1017(0.17g，69％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.37(s,3H)3.63(s,2H)3.72(s,3H)5.07(s,2H)6.87(s,1H)6.96-7.029m,2H)7.23-7.33(m,3H)。
向1017(0.17g，0.69mmol)的THF/MeOH/水(10mL，2mL，2mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.06g，1.42mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用水(～20mL)稀释，所得溶液用乙酸酸化。将水层浓缩，产物用制备型HPLC分离。将所得残余物溶于水(5mL)，向其中加入浓盐酸(83μL)后，将其浓缩并干燥，得到1018(0.15gm)，为盐酸盐。
向羧酸1018(105mg，0.39mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中加入HATU(150mg，0.39mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1001(50.5mg，0.197mmol)和DIPEA(0.14mL，0.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥，得到296(112mg，83％)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.76(brs,4H)2.38(s,6H)3.01(brs,4H)3.82(s,4H)5.25(s,4H)7.09-7.38(m,12H)12.64-12.67(brs,2H)。
在0℃下，向1019(1.5g，6.8mmol)在CH2Cl2(15mL)中的悬浮液中依次滴加Et3N(1.9ml，13.6mmol)和苯乙酰氯(1.07ml，8.1mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌，然后慢慢升温至室温持续2天。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-25％EtOAc的己烷洗脱)，得到1020。
在0℃下，向4-溴-1-丁炔(7g，53mmol)的DMSO(30ml)溶液中加入NaI(7.94g，53mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时后，使之冷却至0℃，接着加入NaCN(5.2g，106mmol)。所得混合物在80℃下加热2.5小时，然后在室温下搅拌过夜。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1021。
在氩气氛下，向1020(400mg，1.18mmol)、PdCl2(PPh3)2(41mg，0.059mmol)和CuI(11mg，0.059mmol)在Et3N(3ml)和THF(6ml)中的混合物中加入1021(187mg，2.36mmol)，然后在60℃下加热过夜。在除去溶剂后，残余物用硅胶色谱法纯化(用含0-60％EtOAc的己烷洗脱)，得到1022。
向1022(118mg，0.406mmol)在EtOAc(60ml)和EtOH(15ml)的混合物中的溶液中加入Pd(OH)2/C(50mg，0.356mmol)。使氢气鼓泡通过所得混合物中，并搅拌1小时。滤出Pd催化剂，并将滤液浓缩，得到1023。
将1023(127mg，0.431mmol)和氨基硫脲(51mg，0.561mmol)在TFA(3mL)中的混合物在85℃下加热5小时。使反应物冷却至室温，倒入冰-水的混合物中。混合物用NaOH小粒碱化(pH10)。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到1024。
在0℃下，向1024(38.4mg，0.104mmol)在NMP(1mL)中的溶液中滴加苯乙酰氯(0.017mL，0.125mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1.5h后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到295。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.72Hz,1H),7.36-7.28(m,10H),3.81-3.78(d,J＝8.43Hz,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物1024也可按照下列方法制备：
在19℃下，在5分钟内向3-氨基-6-氯哒嗪(11.14g，86.0mmol)的NMP(279mL)溶液中滴加苯乙酰氯(18.2mL，137.6mmol)，同时保持溶液的内部温度Ti≤28℃。将所得混合物在19℃下搅拌90分钟，并倒入冰水(557mL)中。白色沉淀通过吸滤收集，用水(2x110mL)和乙醚(110mL)漂洗。将产物高真空干燥过夜，得到N-(6-氯哒嗪-3-基)-2-苯基乙酰胺(xxx，18.8g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.57(s,1H),8.40(d,J＝9.636Hz,1H),7.90(d,J＝9.516Hz,1H),7.36(m,5H)3.82(s,2H)。
用Ar(g)吹扫配备内部温度探针和加料漏斗的1000mL三颈烧瓶。在正氩气压力下，在室温下，将4-氰基丁基溴化锌(0.5M的THF溶液，500mL，250mmol)装入加料漏斗，然后加入反应容器中。在Ar(g)流下，在室温下将固体N-(6-氯哒嗪-3-基)-2-苯基乙酰胺(20.6g，83.3mmol)加入搅拌溶液中，接着加入NiCl2(dppp)(4.52g，8.33mmol)。将所得混合物在19℃下搅拌240分钟，然后用乙醇(120mL)猝灭。将水(380mL)加入搅拌的红色溶液中，得到浓稠的沉淀。加入乙酸乙酯(760mL)，充分搅拌30分钟。通过经硅藻土垫过滤除去固体。然后将母液转移到分液漏斗中，有机层用H2O(380mL)、0.5％乙二胺四乙酸溶液(380mL)洗涤，并再次用H2O(380mL)洗涤。有机层通过旋转蒸发浓缩。将所得红色油状物重新溶于EtOAc(200mL)，将1MHCl(380mL)加入充分搅拌的烧瓶中。在30分钟后，将混合物转移到分液漏斗中，收集水层。有机层用1MHCl(2x380mL)萃取。然后使用7.5％碳酸氢钠溶液调节水层的pH至～7，浅黄色沉淀通过吸滤收集，用水(200mL)和乙醚(2x200mL)漂洗。固体经高真空干燥过夜，得到N-(6-(4-氰基丁基)哒嗪-3-基)-2-苯基乙酰胺(1023，14.76g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.29(s,1H),8.23(d,J＝9.036Hz,1H),7.59(d,J＝9.246Hz,1H),7.32(m,5H),3.79(s,2H),2.90(t,J＝7.357Hz,2H),2.56(t,J＝7.038Hz,2H),1.79(t,J＝7.311Hz,2H),1.63(t,J＝7.01Hz,2H)
将N-(6-(4-氰基丁基)哒嗪-3-基)-2-苯基乙酰胺(14.7g，50.2mmol)装入配备敞顶回流冷凝器的250mL圆底烧瓶中。向烧瓶中加入氨基硫脲(5.03g，55.2mmol)和三氟乙酸(88mL)。使反应浆液在65℃浴中加热2小时。在冷却至室温后，加入H2O(150mL)，搅拌30分钟。然后将混合物慢慢转移到在0℃浴中冷却的搅拌的7.5％碳酸氢钠溶液(1400mL)中。沉淀通过吸滤收集，用水(2x200mL)、乙醚(2x200mL)漂洗，高真空下干燥过夜。将灰白色固体在DMSO(200mL)中调成浆液，在80℃浴中加热直到内部温度达到65℃。使用DMSO(105mL)冲洗烧瓶边侧。慢慢加入H2O(120mL)直到溶液变得轻微混浊，然后从热浴中取出混合物，在搅拌同时使之冷却到环境温度。浅绿色沉淀通过吸滤收集，用水(200mL)和乙醚(2x200mL)漂洗。固体经高真空干燥过夜，得到N-(6-(4-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)哒嗪-3-基)-2-苯基乙酰胺(1024，15.01g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.28(s,1H),8.23(d,J＝8.916Hz,1H),7.59(d,J＝8.826Hz,1H),7.36(m,5H),7.07(s,2H),3.78(s,2H),2.87(t,J＝6.799Hz,4H),1.69(bm,4H)
向己二酸二甲酯(28.7mmol，5.0g，4.7mL，1.0当量)的20mLMeOH溶液中加入无水肼(229.6mmol，7.36g，7.51mL，8.0当量)，将混合物加热至50℃，得到白色沉淀。将混合物加热1小时，然后使之冷却至室温。白色固体经过滤收集，用另外的MeOH洗涤，然后高真空干燥，得到4.6g脂族酰肼(adipohydrizide)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,2H),4.14(s,4H),2.00(brs,4H),1.46(brs,4H)。
向脂族酰肼(12.49mmol，4.0g，1.0当量)、碳酸氢钾(15.61mmol，1.56g，1.25当量)在25mLMeOH的0℃冷却浆液中一次性加入固体溴化氰(13.74mmol，1.44g，1.1当量)。将该混合物在0℃下搅拌，并使之在1小时内升温至室温，然后搅拌过夜。减压除去挥发物，将固体用水稀释。用2.5NNaOH调节pH至12，固体经过滤收集。白色固体用水洗涤，高真空干燥，得到1.73g噁二唑1025。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.85(s,4H),2.68(s,4H),1.68(s,4H)。
向噁二唑1025(181mg，0.81mmol)在NMP(9mL)中的悬浮液中加入三乙胺(0.564mL，4.05mmol)，将混合物加热至70℃。将混合物搅拌30分钟，接着加入苯乙酰氯(0.234mL，1.77mmol)。将反应温度保持在70℃下15小时，然后使冷却至室温。粗制反应混合物通过反相HPLC纯化，得到305(0.015g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.74(s,2H),7.33(s,10H),3.74(s,4H),2.85(s,4H),1.76(s,4H)。
二酰化核心的官能化：
在室温下，向21(2.25g，4.57mmol)在THF(250mL)和H2O(20mL)的混合物中的悬浮液中加入NaOH(1.83g，45.67mmol)和甲醛溶液(37％的水溶液，14.83mL，182.70mmol)。将所得混合物在60℃下加热7小时后，使之冷却至0℃，并用HCl水溶液酸化至pH7。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到N,N'-[5,5’-(丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基)]-双(3-羟基-2-苯基丙酰胺)(36，624mg)。从滤液中的第二次沉淀，得到额外的产物(1.29g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(bs,2H),7.35–7.30(m,10H),5.09(bs,2H),4.10–4.02(m,4H),3.61(d,J＝8.1Hz,2H),3.02(bs,4H),1.76(bs,4H)。
向199(300mg，0.572mmol)在THF(50mL)和MeOH(5ml)的混合物的悬浮液中加入碳酸钾(158mg，1.144mmol)和甲醛溶液(37％的水溶液，2mL)。将所得混合物在室温下搅拌48小时后，使之冷却至0℃，并用HCl水溶液酸化至pH7。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥。粗物质用HPLC纯化，得到29。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.34–7.26(m,10H),4.13-4.02(m,2H),3.81(s,2H),3.62(m,2H),3.24(t,4H),2.93(t,4H)。
在室温下，向199(2.0g，3.81mmol)在THF(250mL)和MeOH(20ml)、H2O(20mL)的混合物中的悬浮液中加入1NNaOH(20ml)和甲醛溶液(37％的水溶液，15mL)。将所得混合物在50℃下加热过夜后，使之冷却至0℃，并用HCl水溶液酸化至pH7。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥。粗物质用HPLC纯化，得到24。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(bs,2H),7.36–7.30(m,10H),5.10(bs,2H),4.10–4.02(m,4H),3.61(d,2H),3.27(t,4H),2.95(t,4H)。
前药：
向含有N,N'-(5,5’-(硫代双(乙烷-2,1-二基))双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基))双(2-苯基乙酰胺)(1)(9.4mmol，5.0g，1.0当量)的烧瓶中加入100mLDMF、K2CO3(20.98mmol，2.89g，2.2当量)和丁酸氯甲酯(20.98mmol，2.86g，2.62mL，2.2当量)。将混合物在室温下搅拌15小时，然后用200mL水和200mLEtOAc稀释。分层，水层用EtOAc(2x100mL)萃取，合并有机层，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。化合物通过反相色谱法(MeCN，H2O)纯化，得到0.235g的化合物8和0.126g的化合物7。
1HNMR(300MHz,DMSO,d6)化合物8：δ7.31(m,10H),6.18(s,4H),3.82(s,4H),3.17(dd,2H,J＝6.8Hz),2.92(dd,2H,J＝6.8Hz),2.93(m,4H),2.32(dd,2H,J＝7.2Hz),1.54(dt,2H,J＝7.2,7.4Hz),0.87(t,3H,J＝7.4Hz)。
1HNMR(300MHz,DMSO,d6)化合物7：δ12.68(s,1H),7.32(m,10H),6.18(s,2H),3.82(s,4H),3.26(dd,2H,J＝7.0Hz),3.17(dd,2H,J＝6.8Hz),2.93(m,4H),2.32(dd,2H,J＝7.2Hz),1.54(dt,2H,J＝7.2,7.4Hz),0.87(t,3H,J＝7.4Hz)。
在0℃下，向3-吗啉-4-基-丙酸盐酸盐(500mg，2.56mmol)在DMF(20mL)中的悬浮液中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(534mg，2.79mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌40分钟，接着加入二醇36(642mg，1.16mmol)和4-DMAP(454mg，3.72mmol)。在3.5小时时间内从0℃到室温搅拌所得混合物后，将其用EtOAc和冷水稀释。分离有机层，并用水(3×50mL)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。粗产物用硅胶色谱法纯化(用含10-25％MeOH的EtOAc洗脱)，得到{[5,5’-(丁烷-1,4-二基)-双(1,3,4-噻二唑-5,2-二基)]-双(氮烷二基)}-双(3-氧代-2-苯基丙烷-3,1-二基)-双(3-吗啉代丙酸酯)(188，340mg)和较少极性的产物3-((5-{4-[5-(3-羟基-2-苯基丙酰胺基(propanamido))-1,3,4-噻二唑-2-基]丁基}-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-3-氧代-2-苯基丙基3-吗啉代丙酸酯(228，103mg)。188：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,2H),7.39(m,10H),4.62(t,J＝9.6Hz,2H),4.33–4.27(m,4H),3.48(bs,8H),3.02(bs,4H),2.45(bs,8H),2.25(bs,8H),1.76(bs,4H)。
228：1HNMR(300MHz,MeOD-d4)δ7.43–7.37(m,10H),4.71(t,J＝10.5Hz,1H),4.41(m,1H),4.30–4.24(m,2H),4.06–4.03(m,1H),3.80–3.76(m,1H),3.62(bs,4H),3.11(bs,4H),2.63–2.52(m,4H),2.40(bs,4H),1.90(bs,4H)。
在0℃下，向反式-1,2-环丙烷甲酸二乙酯(5.00g，26.85mmol)的THF(20mL)溶液中滴加L+AH(67.13mL，1.0M的THF溶液，67.13mmol)溶液。将所得混合物在0℃下搅拌1.5h后，将其用H2O(20mL)、2NNaOH水溶液(20mL)和H2O(20mL)猝灭。将混合物在室温下剧烈搅拌1小时后，使其通过硅藻土塞过滤。滤液经干燥(MgSO4)并浓缩，得到所需的二醇(2.73g)，为无色油状物。
在0℃下，向二醇(2.00g，19.58mmol)在CH2Cl2(75mL)中的混合物中依次滴加吡啶(6.34mL，78.33mmol)和MsCl(3.33mL，43.08mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时后，使之加热至室温。反应物用H2O猝灭，用乙醚稀释。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到1039。将该粗产物溶于DMSO(75mL)，加入NaCN(2.88g，58.75mmol)和NaI(294mg，1.96mmol)。将所得混合物在45℃下加热8小时后，使之冷却至室温，并用EtOAc和H2O稀释。有机层经分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到粗产物1040，无需纯化便将其用于下一步。
将1040和氨基硫脲(3.75g，41.12mmol)在三氟乙酸(TFA)(20mL)中的混合物在80℃下加热5小时。使反应物冷却至室温，倒入冰和水的混合物中。将氢氧化钠小粒加入混合物中直到它为碱性(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水、乙醚漂洗并干燥，得到1041(472mg)。
在0℃下，向1041(70mg，0.26mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(5mL)中的悬浮液中滴加苯乙酰氯(72μL，0.55mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时后，通过加入水(～3mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到1035(37mg)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,2H),7.34–7.27(m,10H),3.82(s,4H),3.04–2.75(m,4H),1.14–1.12(m,2H),0.63–0.59(m,2H)。
在氩气氛、室温下，向1020(1.50g，4.42mmol)、乙炔基三甲基甲硅烷(813uL，5.75mmol)、PdCl2(PPh3)2(310mg，0.44mmol)和CuI(59mg，0.31mmol)的THF(20mL)溶液中加入Et3N(6.16mL，44.23mmol)。将所得混合物在50℃下加热5小时后，使之冷却至室温并经过硅藻土塞过滤。滤液经浓缩，粗制残余物用快速柱硅胶色谱法纯化(用含10–50％EtOAc的己烷洗脱)，得到所需产物(1.21g)，为固体。
将前述中间体(1.07g，3.48mmol)和K2CO3(0.40g，2.90mmol)在MeOH(100mL)中的混合物在室温下搅拌5小时后，将其减压浓缩。将残余物重新溶于EtOAc和H2O的混合物中，并用1NHCl水溶液中和至pH7。有机层经分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。粗制残余物用硅胶快速柱色谱法(用含10–50％EtOAc的己烷洗脱)纯化，得到所需的炔1036(0.48g)，为白色固体。
在室温下，向炔1036(52mg，0.22mmol)的吡啶(5mL)溶液中加入CuCl(4.3mg，0.04mmol)。在所有起始原料消耗时，将所得混合物在气流下搅拌40分钟。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(～2mL)稀释。灰白色沉淀通过吸滤收集，用H2O洗涤并干燥。该粗制的双-乙炔产物1037(52mg)无需进一步纯化便用于下一步骤。
在所有起始原料消耗时，将1037(52mg)和Pd(OH)2/C(100mg)在DMF(5mL)和THF(10mL)的混合物在室温下在1个大气压H2下搅拌3小时。滤出钯催化剂，并将滤液浓缩。粗制残余物用硅胶柱色谱法纯化(用1-10％MeOH/CH2Cl2洗脱)，得到所需产物1038(18mg)，为固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.26(s,2H),8.20(d,J＝8.97Hz,2H),7.56(d,J＝8.77Hz,2H),7.36–7.24(m,10H),3.78(s,4H),2.90(bs,4H),1.73(bs,4H)。
向己二腈(19.02g，175.8mmol)的TFA(50mL)溶液中加入氨基硫脲(16.02g，175.8mmol)，在氩气气氛下，将混合物加热至70℃达4小时。使混合物冷却至室温，并减压除去挥发物。残余物用水(200mL)稀释，并用固体NaOH调节pH至7，得到白色沉淀，经过滤收集并用水洗涤。将固体高真空干燥，得到9.22g1081。1HNMR(DMSO,d6)：δ7.02(brs,2H)2.84(m,2H),2.55(m,2H),1.67(m,4H)。
向1081(0.625g，2.87mmol)的NMP(12.5mL)溶液中滴加苯乙酰氯(0.487g，0.42mL，3.15mmol)，在氩气气氛下，将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物倒入水(100mL)中，固体经过滤收集。固体用水洗涤，高真空干燥，得到0.805g1082。1HNMR(DMSO,d6)：δ12.65(s,1H)7.31(m,5H),3.80(s,2H),3.00(t,2H,J＝7.3Hz),2.53(t,2H,J＝7.1Hz),1.78(dq,2H,J＝7.3,7.1Hz),1.61(dq,2H,J＝7.3,7.1Hz)。
向1082(0.49g，1.33mmol)的TFA(10mL)溶液中加入氨基硫脲(0.23g，1.46mmol)，将混合物在氩气气氛下在70℃下加热过夜。使混合物冷却至室温，并减压除去挥发物。残余物用水(50mL)稀释，并用固体NaOH调节pH至7，得到白色沉淀，其经过滤收集并用水洗涤。将固体高真空干燥,得到0.367g1083。1HNMR(DMSO,d6)：δ12.70(s,1H)7.34(brs,5H),7.16(s,2H),3.82(s,2H),3.01(s,2H),2.84(S,2H),1.71(brs,4H)。
向1083(0.10g，0.267mmol)、2,4-二氟-3-甲氧基苯乙酸(0.058g，0.267mmol)、EDC(0.127g，0.667mmol)、HOBt(0.090g，0.667mmol)的DMF(4mL)溶液中加入DIEA(0.171g，0.231mL，1.335mmol)，将混合物在氩气气氛下搅拌过夜。将混合物倒入水(20mL)中，所形成的固体经过滤收集，用水洗涤，高真空干燥。粗产物1084无需纯化便用于下一步。向含1084(0.050g，0.091mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入BBr3(1.0mL，1mmol，1.0M的二氢甲烷溶液)，将混合物在室温、氩气气氛下拌拌4小时。减压除去挥发物，残余物用二氯甲烷(5mL)稀释。减压除去挥发物，残余物用水(15mL)稀释，并调节pH至12。水层用二氯甲烷(4x5mL)洗涤，并调节pH至4。固体经过滤收集，用水洗涤，高真空干燥，得到0.029g346。1HNMR(DMSO,d6)：δ12.66(s,2H),10.12(s,1H),7.33(s,5H),7.00(m,1H),6.80(m,1H),3.84(s,2H),3.81(s,2H),3.02(brs,4H),1.76(brs,4H)。
向1083(0.05g，0.133mmol)、Boc-3-氨基甲基-苯乙酸(0.035g，0.133mmol)、EDC(0.064g，0.332mmol)、HOBt(0.045g，0.332mmol)的DMF(8mL)溶液中加入DIEA(0.086g，0.115mL，0.665mmol)，将混合物在氩气气氛下搅拌过夜。将混合物倒入水(20mL)中，所形成的固体经过滤收集，用水洗涤，高真空干燥，得到0.023g375。1HNMR(DMSO,d6)：δ12.66(s,2H),7.27(m,10H),4.11(brs,2H),3.81(s,2H),3.79(s,2H),3.01(brs,4H),1.76(brs,4H),1.39(s,9H)。
向烧瓶中装入1024(100mg，0.27mmol)、含莨菪酸(54mg，0.326mmol)的DMF(2ml)，在0℃下依次加入HOBT(88mg，0.652mmol)和EDCI(156mg，0.815mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌3小时后，通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥，得到314。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.72Hz,1H),7.36-7.28(m,10H),4.10-4.05(m,2H),3.78(s,3H),3.65(s,1H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
向烧瓶中装入1024(500mg，1.36mmol)、含DL-扁桃酸(248mg，1.63mmol)的DMF(10ml)，在0℃下依次加入HOBT(441mg，3.26mmol)和EDCI(781mg，4.08mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌10分钟，然后升温至室温，并搅拌10分钟后，在0℃下通过加入水(～50mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥，得到315。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.50(m,3H),7.36-7.28(m,8H),6.35(s,1H),5.32(s,1H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
向3-吗啉-4-基-丙酸盐酸盐(209mg，1.07mmol)在DMF(10ml)中的悬浮液中加入EDCI(308mg，1.61mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时，接着加入315(447mg，0.889mmol)和4-DMAP(261mg，2.14mmol)。在6小时内将所得混合物从0℃搅拌至室温后，通过加入冰水(～50mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0–6％MeOH的EtOAc洗脱)，得到334。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.45Hz,1H),7.58-7.26(m,11H),6.14(s,1H),3.78(s,2H),3.54(bs,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.63(bs,4H),2.38(bs,4H),1.73(bs,4H)。
化合物317按照上述用于化合物315的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.03Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.72Hz,1H),7.36-6.87(m,9H),6.35(bs,1H),5.30(s,1H),3.78(m,5H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物318按照上述用于化合物315的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.50(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.43Hz,1H),7.60-7.27(m,10H),6.51(bs,1H),5.35(s,1H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
向烧瓶中装入1024(50mg，0.135mmol)、含3-氯苯乙酸(28mg，0.163mmol)的DMF(1ml)，在0℃下依次加入HOBT(44mg，0.326mmol)和EDCI(78mg，0.408mmol)。使所得混合物慢慢升温至室温，搅拌1小时后，通过加入水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水和乙醚漂洗，然后干燥，得到335。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.72Hz,1H),7.36-7.28(m,9H),3.84(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物337按照上述用于化合物335的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),9.38(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.37Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.63Hz,1H),7.36-7.09(m,6H),6.75-6.65(m,3H),3.78(s,2H),3.70(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
339、341、382：向烧瓶中装入1024(100mg，0.27mmol)、含Boc-3-氨基甲基-苯乙酸(86mg，0.325mmol)的DMF(2ml)，在0℃下依次加入HOBT(88mg，0.65mmol)和EDCI(156mg，0.812mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌5分钟，然后升温至室温，并搅拌1.5小时后，在0℃下通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水和乙醚漂洗，然后干燥，得到339。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.42Hz,1H),7.36-7.13(m,9H),4.13-4.11(d,J＝10.62,2H),3.78(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.38(s,9H)。
在0℃下，向339(50mg，0.081mmol)在二氯甲烷(2ml)中的悬浮液中加入TFA(2ml)。将所得混合物在室温下搅拌20分钟后，将其在真空下蒸发至干。加入乙醚，白色沉淀通过吸滤收集，用更多的乙醚和二氯甲烷漂洗，然后干燥，得到341。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),8.14-8.11(bs,2H),7.58-7.54(d,J＝9.42Hz,1H),7.36-7.13(m,9H),4.06-4.03(m,2H),3.84(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
在0℃下，向341(10mg，0.0159mmol)的DMF(1ml)溶液中依次滴加三乙胺(4.4ul，0.0317mmol)和氯甲酸乙酯(1.8ul，0.0191mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌30分钟后，在0℃下通过加入水(～1mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到382。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.67-7.58(bs,1H),7.58-7.54(d,J＝9.42Hz,1H),7.36-7.13(m,9H),4.18-4.16(m,2H),4.06-4.0(q,2H),3.78(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.19-1.13(t,3H)。
化合物431按照上述用于化合物382的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.35(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.88Hz,1H),7.57-7.54(d,J＝9.51Hz,1H),7.38-7.15(m,9H),4.25-4.24(d,J＝5.64Hz,2H),3.76(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.87(s,3H),1.73(bs,4H)。
化合物432按照上述用于化合物382的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.63(s,1H),11.26(s,1H),9.04-9.01(m,1H),8.22-8.19(d,J＝8.91Hz,1H),7.93-7.89(d,J＝9.51Hz,2H),7.58-7.25(m,13H),4.50-4.48(d,J＝5.91Hz,2H),3.78(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物433按照上述用于化合物382的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.63(s,1H),11.26(s,1H),8.31-8.21(m,1H),8.20-8.19(d,J＝9.57Hz,1H),7.57-7.54(d,J＝8.73Hz,1H),7.35-7.13(m,9H),4.26-4.24(d,J＝5.52Hz,2H),3.78(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.0(s,3H),1.73(bs,4H),0.86-0.85(d,J＝3.99Hz,6H)。
在0℃下，向341(70mg，0.111mmol)的DMF(1ml)溶液依次滴加三乙胺(31ul，0.22mmol)和5-溴戊酰氯(12ul，0.122mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌1小时。然后在0℃下，将叔丁醇钾(50mg，0.445mmol)加入反应混合物中。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌过夜后，在0℃下通过加入水(～2mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到476。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.42Hz,1H),7.36-7.13(m,9H),4.50(s,2H),3.78(s,4H),3.35(bs,2H),3.20(bs,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.30(bs,2H),1.68-1.80(d,6H)。
化合物340按照上述用于化合物315的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.50(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.24Hz,1H),7.60-7.27(m,10H),6.51(bs,1H),5.35(s,1H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物349按照上述用于化合物315的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.76Hz,1H),7.58-7.27(m,11H),6.36(s,1H),5.34(s,1H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物350按照上述用于化合物315的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.67Hz,1H),7.58-7.27(m,11H),6.34(s,1H),5.34(s,1H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物351按照上述用于化合物315的方法用合适的试剂制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.50(s,1H),11.26(s,1H),8.21-8.18(d,J＝8.67Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.72Hz,1H),7.36-7.23(m,8H),6.67(s,1H),5.40(s,1H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
在0℃下，向1024(50mg，0.136mmol)的DMF(1ml)溶液中滴加三乙胺(38ul，0.271mmol)，接着滴加异氰酸苄酯(20ul，0.163mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌40分钟后，在0℃下通过加入水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0–6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到352。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.26(s,1H),10.82(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.42Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝8.79Hz,1H),7.36-7.31(m,10H),7.06(bs,1H),4.37-4.35(d,J＝5.22Hz,2H),3.78(s,2H),2.99-2.90(m,4H),1.73(bs,4H)。
化合物353按照上述用于制备化合物335的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.57(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.45Hz,1H),7.57-7.54(d,J＝9.48Hz,1H),7.36-7.25(m,6H),6.91-6.84(m,3H),3.76(m,7H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
向烧瓶中装入1024(50mg，0.135mmol)、含2-吡啶乙酸盐酸盐(27mg，0.156mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次加入丙基膦酸酐溶液(91ul)和三乙胺(54ul，0.39mmol)。使所得混合物慢慢升温至室温，搅拌1小时后，通过加入水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水和乙醚漂洗，然后干燥，得到354。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.51(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.97Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.54(d,J＝9.06Hz,1H),7.42-7.26(m,7H),4.02(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物355按照上述用于制备化合物354的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),11.26(s,1H),8.53-8.49(m,1H),8.22-8.19(d,J＝9.0Hz,1H),7.77-7.73(d,J＝8.46Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.48Hz,1H),7.38-7.26(m,7H),3.88(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物309和310按照上述用于制备化合物354的方法制备。
向1043(3.2g，19.5mmol)的四氯化碳(150mL)溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(3.47g，19.6mmol)和过氧化苯甲酰(10mg，催化性)。将所得混合物回流过夜后，将其热过滤。将滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶色谱法纯化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到1044(2g，42％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm3.66(s,2H)3.74(s,3H)4.51(s,2H)7.35(m,4H)。
向1044(0.243g，1mmol)的丙酮(10mL)溶液中加入2-甲基咪唑(0.41g，5mmol)。将所得混合物回流过夜后，将其减压浓缩，所得残余物用水(～100mL)稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到1045(0.17g，69％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.37(s,3H)3.63(s,2H)3.72(s,3H)5.07(s,2H)6.87(s,1H)6.96-7.029m,2H)7.23-7.33(m,3H)。
向1045(0.17g，0.69mmol)的THF/MeOH/水(10mL，2mL，2mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.06g，1.42mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用水(～20mL)稀释，所得溶液用乙酸酸化。将水层浓缩，产物用制备型HPLC分离。将所得残余物溶于水(mL)，向其加入浓盐酸(mL)后，将其浓缩并干燥，得到1046(0.15gm)，为盐酸盐。
向羧酸1046(41.8mg，0.157mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中加入HATU(61.3mg，0.161mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(52.5mg，0.142mmol)和DIPEA(50ul，0.29mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用乙醚研磨。分离的固体经过滤，用乙醚洗涤并干燥，得到380(40mg,48％)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.91-3.02(brs,4H)3.78-3.83(m,4H)5.34(s,2H)7.16-7.57(m,12H)8.19-8.22(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向1048(5g，0.033mol)在甲醇(50mL)的冰冷溶液中加入亚硫酰氯(0.2mL)，将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。使所得残余物高真空干燥过夜，得到1049(5gm)，为油状物，并照原样用于下一步骤。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm3.62(s,2H)3.74(s,3H)6.76-6.87(m,3H)7.18-7.21(m,1H)。
向1049(1g，6mmol)的DMF(20mL)溶液中加入碳酸钾(2.08g，15mmol)、1050(1.225g，6.62mmol)和碘化钠(10mg)。将所得混合物在80℃下搅拌过夜后，将其用水(～100mL)稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到1051(1g，60％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.61(s,4H)2.83(t,2H)3.62(s,2H)3.63(s,3H)3.73-3.77(m,4H)4.14(t,2H)6.88-6.91(m,3H)7.26-7.29(m,1H)。
向1051(1g，3.57mmol)的THF/MeOH/水(30mL，5mL，5mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.3g，7.14mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用水(～50mL)稀释，所得溶液用1N盐酸酸化。将水层浓缩，产物用制备型HPLC分离。将所得残余物溶于水(mL)，向其加入浓盐酸(mL)后，将其浓缩并干燥，得到1052，为盐酸盐。
向羧酸1052(47.4mg，0.157mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中加入HATU(61.3mg，0.161mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(52.5mg，0.142mmol)和DIPEA(50ul，0.29mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到381(40mg，46％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.72(t,2H)2.89-2.9(m,4H)3.02(brs,4H)3.336(m,2H)3.76-3.78(m,2H)4.09(m,2H)6.88-6.93(m,3H)7.24-7.36(m,6H)7.54-7.58(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向1044(2.29g，0.01mol)的DMF(100mL)溶液中加入碳酸钾(1.38g，0.01mmol)和吡唑(0.68g，0.01mol)。将所得混合物在70℃下搅拌5小时后，将其用水(～100mL)稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1053(1g，50％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm3.94(s,3H)5.40(s,2H)6.33(s,1H)7.42-7.48(m,3H)7.58(s,1H)7.95(s,1H)8.00-8.02(m,1H)。
向1053(1g，4.62mmol)的THF(20mL)冰冷溶液中滴加氢化铝锂(2.5mL，2M/THF)，将所得反应混合物在0℃下搅拌5小时后，将其用饱和Rochelle盐溶液猝灭。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1054(0.8g，92％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm4.71(s,2H)5.35(s,2H)6.30(s,1H)7.15-7.43(m,5H)7.58(s,1H)。
向1054(0.8g，4.2mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入亚硫酰氯，将所得混合物在室温下搅拌5小时后，将其减压浓缩。使所得残余物高真空干燥过夜，得到1055(1g，97％收率)，为HCl盐。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm4.75(s,2H)5.38(s,2H)6.30(s,1H)7.19-7.50(m,5H)7.86(s,1H)11.49-11.60(brs,1H)。
向1055(1g，4.1mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氰化钠(0.625g，12.7mmol)和碘化钠(20mg)，将所得反应混合物在70℃下搅拌2小时后，将其用水稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1056(0.664g，83％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm3.76(s,2H)5.38(s,2H)6.35(s,1H)7.19-7.46(m,5H)7.61(s,1H)。
向1056(0.664g，3.3mmol)的二噁烷(5mL)溶液中加入浓盐酸(5mL)，将所得反应混合物在90℃下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化，并转化成HCl盐，得到1057(0.5g，40％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm3.55(s,2H)5.33(s,2H)6.29(s,1H)7.14-7.20(m,4H)7.48(s,1H)7.84(s,1H)11.97-11.99(brs,1H)。
向羧酸1057(19.8mg，0.0785mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中加入HATU(30.6mg，0.08mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(26.25mg，0.07mmol)和DIPEA(25ul，0.15mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥，得到395(18mg，45％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.89-3.04(m,4H)3.78(s,4H)5.33(s,2H)6.27-6.28(s,1H)7.09-7.58(m,11H)7.82(s,1H)8.19-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向1044(1g，4.1mmol)的THF(5mL)溶液中加入2M/THF甲胺溶液(2mL)，将所得反应混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。使所得残余物在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到1058(0.26g，33％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.49(s,3H)3.66(s,2H)3.73(s,3H)3.79(s,2H)7.2-7.33(m,4H)。
向1058(0.26g，1.35mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入boc酐(0.293g，1.35mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌4小时后，并将其用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1059(0.3g，77％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.5(s,9H)2.84(s,3H)3.66(s,2H)3.73(s,3H)4.44(s,2H)7.17-7.32(m,4H)。
向1059(0.3g，1.02mmol)在二噁烷(3mL)和水(2mL)的冰冷溶液中加入一水氢氧化锂(0.086g，2.04mmol)，将所得反应混合物在0℃下搅拌3小时后，将其用1NHCl酸化。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。使所得残余物高真空干燥过夜，得到1060(0.2g，70％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.5(s,9H)2.84(s,3H)3.66(s,2H)4.43(s,2H)7.17-7.32(m,4H)。
向羧酸1060(51.1mg，0.183mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中加入HATU(69.7mg，0.183mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(61.3mg，0.166mmol)和DIPEA(58ul，0.33mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到445(0.06g，57％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.37-1.38(s,9H)1.74(brs,4H)2.76(s,3H)2.89(brs,2H)3.02(brs,2H)3.78-3.80(m,4H)4.36(s,2H)7.11-7.36(m,9H)7.54-7.57(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
通过396脱保护为408和再酰化制备445：
向含408(26mg，0.04mmol)的DMF(1mL)的冰冷溶液中加入三乙胺(12.3uL，0.088mmol)和乙酰氯(3.16uL，0.044mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时后，将其用水稀释。分离的固体经过滤，用水洗涤，高真空干燥过夜，得到445(10mg，48％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.05(m,3H)2.91-3.02(m,7H)3.78-3.82(m,4H)4.49-4.56(m,2H)7.18-7.36(m,9H)7.55-7.58(d,1H)8.18-8.21(d,1H)8.75-8.7(brs,2H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
化合物401按照上述用于制备化合物339的方法制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.40(s,9H)1.75(brs,4H)2.87(brs,2H)2.89(brs,2H)3.78(s,4H)4.09-4.11(brs,2H)7.18-7.36(m,9H)7.54-7.58(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
化合物413按照上述用于制备化合物315的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.68(bs,1H),11.26(s,1H),8.20(d,J＝9.46Hz,1H),7.58–7.26(m,10H),3.90(s,2H),3.78(s,2H),3.02(bs,2H),2.90(bs,2H),1.74(bs,4H)。
化合物415按照上述用于制备化合物315的方法制备：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.48(s,1H),11.26(s,1H),8.20(d,J＝8.95Hz,1H),7.75(s,1H),7.58–7.26(m,9H),6.52(m,1H),5.35(m,1H),3.78(s,2H),3.02(m,2H),2.90(m,2H),1.74(bs,4H)。
向1063(6.31g，24.9mmol)的乙醇溶液中加入一水氢氧化锂(1.048g，24.9mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌3小时后，将其减压浓缩。所得残余物用水稀释，并用6NHCl酸化。溶液用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1064(3g，53％收率)。
向羧酸1064(0.1g，0.44mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中加入HATU(0.17g，0.44mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(0.15g，0.4mmol)和DIPEA(0.14mL，0.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥，得到456(0.2，86％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.18(t,3H)1.74(brs,4H)2.88-2.90(m,2H)3.01-3.04(m,2H)3.66(s,2H)3.78(s,4H)4.05-4.12(q,2H)7.19-7.36(m,9H)7.55-7.58(m,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向456(0.205g，0.358mmol)的二噁烷/水(20mL/6mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.06g，1.42mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时后，将其用乙酸酸化。将溶液减压浓缩，所得残余物用水稀释。分离的固体经过滤，用水洗涤，高真空干燥过夜。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到465(0.15g，77％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.90(brs,2H)3.01(brs,2H)3.5(s,2H)3.78(s,4H)7.19-7.36(m,9H)7.55-7.58(m,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.32(brs,1H)12.65(s,1H)。
向羧酸465(25mg，0.046mmol)在DMF(1mL)中的悬浮液中加入HATU(19.2mg，0.05mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入N,N-二甲胺(2M/THF，30uL，0.05mmol)和DIPEA(16uL，0.092mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥，得到472(19mg，73％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.83-2.90(brs,6H)3.01(brs,4H)3.68(s,2H)3.78(s,4H)7.14-7.36(m,9H)7.55-7.58(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向1049(1g，6mmol)的DMF(20mL)溶液中加入碳酸钾(1.662g，12mmol)和(2.16g，9mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌过夜后，将其用水(～100mL)稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1065(1.78g，91％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm0.13(s,6H)0.95(s,9H)3.63(s,2H)3.73(s,2H)3.99-4.06(m,4H)6.87(m,3H)7.3(m,1H)。
向1065(1.78g，5.5mmol)的THF/MeOH/水(30mL，3mL，3mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.46g，10.9mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用水(～20mL)稀释，所得溶液用6N盐酸酸化。使溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1065和1066。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm3.54(s,2H)3.72(brs,2H)3.96-3.98(brs,2H)4.85(brs,1H)6.82-6.85(m,3H)7.0-7.22(m,1H)12.3(brs,1H)。
向羧酸1065(27mg，0.137mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中加入HATU(52.2mg，0.137mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(46mg，0.125mmol)和DIPEA(44ul，0.25mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥。所得固体用制备型HPLC纯化，得到427(16mg，23％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.71-3.78(m,6H)3.98-3.99(brs,2H)4.84-4.87(brs,1H)6.83-6.92(m,3H)7.21-7.36(m,6H)7.54-7.58(d,1H)8.2-8.23(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向1049(1g，6mmol)的丙酮(50mL)溶液中加入碳酸铯(2.545g，7.83mmol)、2-溴乙基甲基醚(0.92g，6.62mmol)和碘化钠(10mg)。将所得混合物在50℃下搅拌过夜后，将其过滤。将滤液蒸发，所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1075(0.97g，72％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm3.48(s,3H)3.63(s,2H)3.72(brs,2H)4.14-4.15(t,2H)6.86-6.9(m,3H)7.26-7.29(m,1H)。
制备化合物428的其余部分按照上文化合物427的方法。428：1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.32(s,3H)3.66(brs,2H)3.78(brs,4H)4.08(brs,2H)6.88-6.92(m,3H)7.25-7.27(m,6H)7.54-7.58(d,1H)8.2-8.23(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向1068(6g，30.9mmoL)的乙醇(50mL)的冰冷溶液中加入亚硫酰氯(2mL)，将所得反应混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。使所得残余物在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1063(6gm)。
向1063(3.35g，13.4mmol)的THF(50mL)搅拌溶液中加入CDI(2.44g，15mmol)，将所得混合物搅拌2小时接着加入水(13mL)。使反应混合物冷却至0℃，分批加入硼氢化钠(2.87g，76mmol)。在室温下继续搅拌3小时后，将其用乙酸乙酯稀释，并用6NHCl酸化。有机层经分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1069(0.563g，20％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.27-1.31(q,3H)2.87-2.92(d,2H)3.63(s,2H)3.87-3.92(t,2H)4.18-4.2(q,2H)7.19-7.31(m,4H)。
向1069(0.563g，2.7mmol)的二氯甲烷(40mL)和三乙胺(0.47mL，3.3mmol)的冰冷溶液中加入甲烷磺酰氯(0.23mL，3.3mmol)，将所得混合物在0℃下搅拌2小时并在室温下搅拌1小时后，将其用饱和碳酸氢钠水溶液稀释。溶液用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1070(0.78g，100％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.27-1.31(q,3H)2.87(s,3H)3.08(t,2H)3.63(s,2H)4.18-4.2(t,2H)4.45(q,2H)7.19-7.31(m,4H)。
向1070(0.787g，2.7mmol)的DMF(6mL)溶液中加入叠氮化钠(0.358g，5.5mmol)，将所得反应混合物在60℃下搅拌3小时后，使之在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1071(0.5g，78％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.27-1.31(q,3H)2.92(t,2H)3.54(t,2H)3.63(s,2H)4.18-4.2(q,2H)7.19-7.29(m,4H)。
向1071(0.5g，2.1mmol)的THF(25mL)溶液中加入三苯基膦(0.787g，3mmol)，将反应混合物在室温、氩气下搅拌过夜后，将其用1mL水稀释。反应在50℃下进行1小时后，将其减压浓缩。使残余物在饱和碳酸氢钠溶液和二氢甲烷之间分配。有机层经分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到1072(0.43g，100％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.27-1.31(q,3H)2.75-2.79(t,2H)2.98-3.02(t,2H)3.63(s,2H)4.18-4.2(q,2H)7.13-7.29(m,4H)。
向1072(0.427g，2mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(0.447g，2mmol)，将反应混合物在室温下搅拌5小时后，将其用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1073(0.577g,91％收率)，为油状物。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.27-1.31(q,3H)1.59(s,9H)2.82(t,2H)3.4(m,2H)3.63(s,2H)4.18(q,2H)7.13-7.29(m,4H)。
向1073(0.577g，1.8mmol)的二噁烷/水(10mL/3mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.158g，3.6mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用水(～20mL)稀释，所得溶液用1N盐酸酸化。使溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1074(0.35g，67％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.82(m,2H)3.4(m,2H)3.63(s,2H)4.6(brs,1H)7.13-7.29(m,4H)。
向羧酸1074(43.8mg，0.157mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中加入HATU(61.3mg，0.161mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(52.5mg，0.142mmol)和DIPEA(50ul，0.287mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥，得到429(60mg，67％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.37-1.38(s,9H)1.74(brs,4H)2.69-2.71(m,2H)2.87-2.88(m,2H)2.9-3.15(m,4H)3.78(s,4H)7.09(brs,1H)7.12-7.36(m,9H)7.54-7.57(d,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向429(50mg，79.5mmol)在二氯甲烷(5mL)中的悬浮液中加入TFA(1mL)，将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将其减压浓缩。所得残余物用乙醚研磨。分离的固体经过滤，用乙醚洗涤，并高真空干燥过夜，得到441(45mg，88％收率)，为TFA盐。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.86-3.02(m,8H)3.78-3.80(s,4H)7.12-7.36(m,8H)7.58(d,1H)7.78(brs,3H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
向441(23mg，0.035mmol)的DMF(1mL)冰冷溶液中加入三乙胺(11uL，0.079mmol)和乙酰氯(2.8uL，0.038mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时后，将其用水稀释。分离的固体经过滤，用水洗涤，高真空干燥过夜，得到454(10mg，50％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.75-1.79(m,7H)2.67-2.70(m,2H)2.9(brs,2H)3.00-3.02(m,2H)3.21-3.26(m,2H)3.78(s,4H)7.12-7.36(m,9H)7.58(d,1H)7.9(brs,1H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
化合物409按照上述制备化合物441的方法，通过化合物399的TFA脱保护来制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.75(brs,4H)2.90(brs,2H)3.02(brs,2H)3.78(brs,4H)6.89-6.98(m,4H)7.25-7.36(m,7H)7.51-7.58(d,1H)8.2-8.23(d,1H)9.34(s,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)。
化合物457按照上述制备化合物39的酰胺偶联方法，通过酰化409来制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.32(s,6H)2.89(m,2H)3.02(m,2H)3.13(s,2H)3.78(s,4H)7.01-7.04(m,1H)7.25-7.38(m,6H)7.54-7.58(m,3H)8.18-8.21(d,1H)9.77(s,1H)11.26(s,1H)12.65(brs,1H)
在0℃下，向295(30mg，0.0617mmol)在MeOH(2ml)中的悬浮液中加入2NNaOH(2ml)溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜。溶剂经真空蒸发，混合物用1NHCl酸化至pH6。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥，得到348。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.32-7.24(m,5H),7.15-7.12(d,J＝9.57Hz,1H),6.72-6.69(d,J＝9.15Hz,1H),6.09(s,2H),3.77(s,2H),2.99-2.96(bs,2H),2.76-2.70(bs,2H),1.70(bs,4H)。
366：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.32Hz,1H),7.33-7.25(m,6H),6.95-6.82(m,3H),3.81(s。3H),3.75(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
367：向烧瓶中装入348(100mg，0.27mmol)、含Boc-3-氨基甲基-苯乙酸(86mg，0.325mmol)的DMF(2ml)，在0℃下依次加入HOBT(88mg，0.65mmol)和EDCI(156mg，0.812mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌5分钟，然后升温至室温过夜后，在0℃下通过加入水(～10mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0–6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到367。
化合物368按照上述化合物341的方法，通过化合物367的脱保护来制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.16(m,3H),7.58-7.54(d,J＝9.27Hz,1H),7.40-7.28(m,9H),4.04(s,2H),3.81(s。4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
化合物383按照上述制备化合物354的方法，由化合物348制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.26(s,1H),8.51(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.09Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.54(d,J＝9.12Hz,1H),7.42-7.26(m,7H),4.0(s,2H),3.81(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
在0℃下，向348(56.5mg，0.153mmol)的DMF(1ml)溶液中依次滴加三乙胺(43ul，0.306mmol)和异氰酸苄酯(23ul，0.184mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌6小时后，在0℃下通过加入水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水和醚和二氯甲烷漂洗，然后干燥，得到405。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),9.57(s,1H),8.25(bs,1H),7.74-7.71(d,J＝8.61Hz,1H),7.50-7.47(d,J＝9.42Hz,1H),7.34-7.27(m,10H),4.42-4.40(d,J＝5.46Hz,2H),3.80(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
在0℃下，向339(1g，1.62mmol)在MeOH(10ml)中的悬浮液中加入2NNaOH(10ml)溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜。溶剂经真空蒸发，在0℃下，将混合物用6NHCl酸化至pH6。混合物用EtOAc研磨，白色沉淀通过吸滤收集，用更多的EtOAc漂洗并干燥，得到412。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),7.29–7.22(m,2H),7.19–7.13(m,4H),6.72(d,J＝8.86Hz,1H),6.12(bs,2H),4.12(d,J＝6.09Hz,2H),3.79(s,2H),3.01(m,2H),2.71(m,2H),1.70(bs,4H),1.39(s,9H)。
在0℃下，向412(60mg，0.121mmol)的DMF(1ml)溶液中依次滴加三乙胺(34ul，0.242mmol)和异氰酸乙酯(11ul，0.145mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌6小时后，在0℃下通过加入水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0–6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到420。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.27(s,1H),9.42(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.61Hz,1H),7.77-7.13(m,5H),6.56-6.53(bs,1H),4.12-4.11(d,2H),3.78(s,2H),3.23-3.16(m,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.38(s,9H),1.10-1.07(t,3H)。
422：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),10.74(s,1H),8.18-8.15(d,J＝9.51Hz,1H),7.61-7.12(m,9H),6.62(s,1H),5.33(s,1H),4.13-4.11(d,J＝5.58Hz,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.38(s,9H)。
在0℃下，向412(40mg，0.0804mmol)的DMF(1ml)溶液中依次滴加三乙胺(17ul，0.121mmol)和乙酸酐(8ul，0.0844mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌过夜后，在0℃下通过加入水(～5mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到424。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),11.01(s,1H),8.23-8.20(d,J＝8.61Hz,1H),7.57-7.55(d,J＝8.16Hz,1H),7.38-7.12(m,4H),4.13-4.11(d,J＝5.76Hz,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.14(s,3H),1.75(bs,4H),1.39(s,9H)。
在0℃下，向424(10mg，0.018mmol)在二氯甲烷(1ml)中的悬浮液中加入TFA(1ml)。将所得混合物在室温下搅拌1小时后，将其真空蒸发至干。加入乙醚，白色沉淀通过吸滤收集，用更多的乙醚漂洗并干燥，得到425。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),11.0(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.82Hz,1H),8.16-8.08(bs,2H),7.58-7.54(d,J＝9.42Hz,1H),7.39-7.30(m,4H),4.06-4.03(m,2H),3.84(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.14(s,3H),1.75(bs,4H)。
向1076(1.8g，10mmmol)的乙醇/水(40mL/20mL)溶液中加入氰化钠(0.98g，20mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌4小时后，使之冷却至0℃。分离的固体经过滤，用水洗涤，高真空干燥过夜，得到1077(1.5g，85％收率)。
向1077(1g，5.68mmmol)的乙醇(50mL)冰冷溶液中分批加入硼氢化钠(0.86g，22.72mmol)接着分批加入氯化铋(2g，6.248mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时后，使其通过硅藻土垫过滤。滤液经浓缩，使所得残余物在碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物经分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1078(0.82g，100％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.17(s,3H)3.69-3.71(brs,4H)6.71-6.74(d,1H)6.80-6.83(d,1H)7.04-7.09(m,1H)。
向1078(0.3g，2mmmol)的甲苯(10mL)溶液中加入乙酸钾(0.2g，2.04mmol)和乙酸酐(0.55mL，5.83mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌1小时，接着加入亚硝酸异戊酯(0.4mL，3mmol)。继续在80℃下搅拌过夜后，使之冷却至室温。使溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1079(0.22g,54％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.85(s,3H)4.09(s,2H)7.39-7.41(d,1H)7.58-7.63(m,1H)8.28(s,1H)8.48-8.51(d,1H)。
向1079(0.44g，2.21mmmol)的乙醇(5mL)溶液中加入20％氢氧化钠水溶液(5mL)。将所得混合物在90℃下搅拌过夜后，将其浓缩。所得残余物用水稀释，用乙酸酸化，并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1080(0.1g，51％收率)。1HNMR(300MHz，二甲亚砜-d6)δppm3.89(s,2H)6.98-7.0(d,1H)7.27-7.32(m,1H)7.43-7.46(d,1H)8.10(s,1H)12.3-13.2(宽双重峰,2H)。
向羧酸1080(60mg，0.34mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中加入HATU(130mg，0.34mmol)，搅拌直到反应混合物澄清，接着加入胺1024(114mg，0.31mmol)和DIPEA(108uL，0.62mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时后，通过加入水将其猝灭。分离的固体经过滤，用水洗涤，干燥。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用MeOH/二氯甲烷洗脱)，得到512(14mg，9％收率)。1HNMR(300MHz，二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.89(brs,2H)2.91(brs,2H)3.78(s,2H)4.13(s,2H)7.05-7.08(m,1H)7.27-7.57(m,8H)8.19(d,2H)11.26(s,1H)12.76-12.80(brs,1H)13.11(s,1H)。
化合物389按照上述用于制备化合物334的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝8.91Hz,1H),7.61-7.26(m,10H),6.17(s,1H),3.78(s,2H),3.54(bs,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.67-2.62(m,4H),2.38(bs,4H),1.73(bs,4H)。
化合物404按照上述用于制备化合物334的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),11.26(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.60Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.03Hz,1H),7.39-7.26(m,6H),7.12(s,2H),7.01-6.98(m,1H),6.10(s,1H),3.78(s,5H),3.54(bs,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.64(bs,4H),2.38(bs,4H),1.74(bs,4H)。
向烧瓶中依次加入K2CO3(0.28g，2.06mmol)、化合物295(0.5g，1.03mmol)和25mLDMF。将混合物搅拌15分钟，加入丁酸氯甲酯(0.17g，1.23mmol)，并将反应物置于氩气气氛下。将混合物加热至80℃1.5小时，使之冷却至室温，并倒入200ml水中。将混合物转移到分液漏斗中，用EtOAc(3x100mL)萃取，分离有机层，用水(3x50mL)、盐水(2x50ml)洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。粗物质用反相色谱法纯化，得到0.15g的化合物402。
在0℃下，向318(100mg，0.19mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中加入吡啶(300μL)，接着滴加丁酰氯(43mL，0.41mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液。将所得混合物在0℃下搅拌1小时后，使之在EtOAc和H2O之间分配。有机层经分离，干燥(MgSO4)并浓缩。残余物用硅胶快速柱色谱法纯化(用1-10％MeOH/CH2Cl2洗脱)，得到所需产物439(117mg)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ13.01(bs,1H),10.12(s,1H),8.49(d,J＝9.64Hz,1H),7.77(s,1H),7.57(d,J＝7.11Hz,1H),7.40–7.30(m,8H),6.57(s,1H),3.97(s,2H),3.09(bs,2H),3.00(bs,2H),2.48(m,2H),1.91(bs,4H),1.85–1.62(m,2H),0.98(t,J＝7.07Hz,3H)。
向甲硫醇钠(0.266g，3.8mmol)的DMF(10mL)溶液中加入1016(0.657g，2.7mmol)的DMF溶液，将所得混合物在室温下搅拌过夜。使溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1085(0.41g，72％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.03-2.04(s,3H)3.66-3.73(m,7H)7.21-7.32(m,4H)。
向1085(0.503g，2.39mmol)的二氯甲烷溶液中加入MCPBA(1.338g，7.78mmol)，将所得混合物在室温下搅拌4小时后，将其用硫代硫酸钠水溶液稀释。有机层经分离，用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1086(0.5g，86％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.8(s,3H)3.7-3.74(m,5H)4.27(s,2H)7.30-7.4(m,4H)。
向1086(0.5g，2.06mmol)的二噁烷(10mL)和水(10mL)的冰冷溶液中加入一水氢氧化锂(0.26g，6.19mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌过夜后，将其浓缩。所得残余物用水稀释，并用乙酸酸化。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用乙醚研磨。分离的固体经过滤，用乙醚洗涤并高真空干燥过夜，得到1087(0.3g，64％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm2.92(s,3H)3.61(s,2H)4.48(s,2H)7.31-7.35(m,4H)12.37(s,1H)。
化合物634采用类似于上述方法的方法制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.91(brs,5H)3.03(brs,2H)3.78(s,2H)3.85(s,2H)4.49(s,2H)7.32-7.40(m,9H)7.55-7.58(d,1H)8.19(d,1H)11.26(s,1H)12.69(s,1H)。
化合物635采用类似于上述方法的方法制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.75(brs,4H)2.91(brs,5H)3.03(brs,2H)3.82(s,4H)4.49(s,2H)7.32-7.40(m,9H)7.55-7.58(d,1H)8.19(d,1H)11.26(s,1H)12.69(s,1H)。
向1,3-溴氯丙烷(1.57g，10mmol)的DMF(10mL)溶液中加入甲硫醇钠(0.63g，9mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌过夜并在70℃下再搅拌一天。使溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1088(1.3gm)，其无需纯化便可用于下一步。
向1088(1.3g，7.7mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入MCPBA(5.15g，23.34mmol)，将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其用硫代硫酸钠水溶液稀释。有机层经分离，用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1089(0.3gm)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.38-2.49(m,2H)2.99(s,3H)3.22-3.27(m,2H)3.57-3.77(m,2H)。
向1092(0.525g,3.16mmol)的DMF(15mL)溶液中加入碳酸钾(0.873g，6.32mmol)、1089(0.74g，4.74mmol)和碘化钠(10mg)。将所得混合物在70℃下搅拌过夜后，将其用水(～100mL)稀释。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1090(0.53g，59％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.35-2.40(m,2H)2.99(s,3H)3.26-3.31(m,2H)3.63(s,2H)3.73(s,3H)4.16(t,2H)6.81-6.93(m,3H)7.25(m,1H)。
向1090(0.53g,1.85mmol)的二噁烷(8mL)和水(4mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.156g，3.71mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌5小时后，将其用乙酸酸化。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用乙醚研磨。分离的固体经过滤，用乙醚洗涤并高真空干燥过夜，得到1091(0.2g，40％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm2.32-2.42(m,2H)2.99(s,3H)3.26-3.31(m,2H)3.66(s,2H)4.12-4.16(t,2H)6.83-6.94(m,3H)7.26-7.31(m,1H)。
化合物583采用酰胺偶联通用方法所述方法通过1091与1024偶联来制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.15-2.19(m,2H)2.90-3.03(m,7H)3.27-3.39(m,2H)3.78(s,4H)4.07-4.11(t,2H)6.90-6.93(m,3H)7.24-7.37(m,6H)7.55-7.58(d,1H)8.19(d,1H)11.26(s,1H)12.69(s,1H)。
化合物623采用酰胺偶联通用方法所述方法通过11与348偶联来制备。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.74(brs,4H)2.15-2.19(m,2H)2.90-3.03(m,7H)3.27-3.39(m,2H)3.75-3.78(m,4H)4.07-4.11(t,2H)6.90-6.97(m,3H)7.26-7.34(m,6H)7.58(d,1H)8.19(d,1H)11.26(s,1H)12.69(s,1H)。
在0℃下，向3-羟基苯乙酸(1g，0.00657mol)的MeOH(10ml)溶液中滴加(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷溶液(2M，在己烷中，20ml)。将所得混合物在室温下搅拌30分钟后，将其蒸发至干。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-25％EtOAc的己烷洗脱)，得到1093。
1094采用化合物1119所述方法制备。
1095采用化合物1102所述方法制备。
646采用化合物666所述方法制备。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ10.32(s,1H),8.50-8.47(d,J＝8.52Hz,1H),7.90-7.70(m,1H),7.40-7.36(m,6H),7.03-6.86(m,3H),4.72(s,2H),4.02(s,2H),3.90(s,2H),3.44-3.39(m,4H),3.09-2.96(d,4H),1.87(bs,4H),1.24-1.16(m,6H)。
647采用化合物666所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),11.22(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.18Hz,1H),8.02-8.10(t,1H),7.58-7.55(d,J＝9.12Hz,1H),7.36-7.24(m,5H),6.99-6.84(m,3H),4.48(s,2H),3.82(s,2H),3.75(s,2H),3.50(s,2H),3.01-2.90(m,5H),1.73(bs,4H),0.82-0.80(d,J＝6.69Hz,6H)。
将羟胺(50％的水溶液，7.4mL)溶液加入乙腈(60mL)中，将混合物加热至90℃16小时。使混合物冷却至室温，然后在湿冰浴中冷却，得到沉淀。固体经过滤收集，用冷的乙腈(10mL)漂洗，高真空下干燥，得到4.47gN'-羟基乙脒(hydroxyacetimidamide)1096。参见Zemolka,S.等，PCT国际申请2009118174。1HNMR300MHzCDCl3：δ4.57(brs,2H),1.89(s,3H)。
向烧瓶中装入N'-羟基乙脒1096(0.45g，6.17mmol)，接着装入THF(25mL)、NaH(60％油溶液，0.246g，6.17mmol)、4A分子筛(4.5g)，在氩气气氛下将混合物加热至60℃1小时。将2-(3-溴苯基)乙酸乙酯1097(1.5g，6.17mmol)的THF(12.5mL)溶液加入N'-羟基乙脒混合物中，并在60℃下加热16小时。混合物用水(100mL)稀释，用EtOAc(2x25mL)萃取。合并有机层，用水(25mL)、盐水(2x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。粗物质通过正相色谱法(0-30％EtOAc/己烷)纯化，得到0.56g5-(3-溴苄基)-3-甲基-1,2,4-噁二唑1098。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.48-7.42(m,2H),7.26-7.24(m,2H),4.15(s,2H),2.38(s,3H)。
在氩气气氛下，向5-(3-溴苄基)-3-甲基-1,2,4-噁二唑1098(0.50g，1.97mmol)的二噁烷(1mL)溶液中，加入双(三叔丁基膦)钯(0)(0.15g，0.295mmol)，接着加入2-叔丁氧基-2-氧代乙基氯化锌(0.5M的乙醚溶液，4.92mmol，9.84mL)。在氩气下将混合物搅拌20小时，并减压除去挥发物。使残余物溶于EtOAc(10mL)，用水(2x5mL)、盐水(2x5mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。粗产物用正相色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到0.300g2-(3-((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)甲基)苯基)乙酸叔丁酯1099。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.40-7.18(m,4H),4.17(s,2H),3.51(s,2H),2.36(s,3H),1.43(s,9H)。
向2-(3-((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)甲基)苯基)乙酸叔丁酯1099(0.127g，0.44mmol)在二噁烷(3mL)中的混合物中加入含4NHCl的二噁烷(1mL)，在氩气气氛下搅拌2小时。减压除去挥发物，残余物用水(5mL)稀释，并用2.5NNaOH调节pH至12。混合物用二氯甲烷(4x2mL)洗涤，并用1NHCl调节pH至6。混合物用EtOAc(3x2mL)萃取，合并有机层，用盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物，得到0.041g2-(3-((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)甲基)苯基)乙酸1100。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.40-7.18(m,4H),4.18(s,2H),3.63(s,2H),2.36(s,3H)。
向N-(5-(4-(6-氨基哒嗪-3-基)丁基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-苯基乙酰胺348(0.061g，0.0165mmol)、2-(3-((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)甲基)苯基)乙酸1100(0.040g，0.18mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(0.078g，0.41mmol)、1-羟基苯并三唑(0.055g，0.41mmol)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(0.085g，0.115mL，0.66mmol)，将混合物搅拌16小时。混合物用水(20mL)稀释，用EtOAc(3x20mL)萃取。合并有机层，用水(3x20mL)、盐水(2x20mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。粗物质用正相色谱法(0-5％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到0.003g2-(3-((3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)甲基)苯基)-N-(6-(4-(5-(2-苯基乙酰氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)哒嗪-3-基)乙酰胺648。1HNMR300MHzCDCl3：δ12.59(s,1H),10.53(s,1H),8.45(d,1H,J＝12.2Hz),7.4-7.1(m,10H),4.15(s,2H),4.03(s,2H),3.94(s,2H),3.02(m,2H),2.94(m,2H),2.33(s,3H),1.85(m,4H)。
1101采用化合物1119所述方法制备。
在0℃下，向1101(470mg，1.41mmol)的MeOH(5ml)和H2O(5ml)溶液中加入一水氢氧化锂(296mg，7.05mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3天后，将其蒸发至干。混合物然后用1NHCl酸化(pH4)，并使之在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1102。
608采用化合物664所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.15Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.27Hz,1H),7.38-7.28(m,8H),4.63(bs,4H),3.82(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.48-1.44(d,J＝5.93Hz,9H)。
612采用化合物666所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.78Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.72Hz,1H),7.48-7.28(m,7H),4.67-4.61(m,4H),3.88(s,2H),3.80(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.48-1.44(d,J＝9.93Hz,9H)。
649采用化合物695所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.36(s,1H),8.20-8.17(d,J＝9.78Hz,1H),7.60-7.57(d,J＝8.92Hz,1H),7.52-7.32(m,7H),4.61-4.56(d,J＝16.99Hz,4H),3.91(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
650采用化合物695所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),9.40(bs,1H),8.22-8.19(d,J＝9.09Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.36Hz,1H),7.38-7.28(m,8H),4.63(bs,4H),3.82(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
在0℃下，向650(30mg，0.0468mmol)的DMF(1ml)溶液中依次滴加三乙胺(13ul，0.0936mmol)和乙酸酐(4.64ul，0.0491mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌20分钟后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到651。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.27Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.00Hz,1H),7.38-7.28(m,8H),4.88(bs,2H),4.67(bs,2H),3.82(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.11(s,3H),1.73(bs,4H)。
向2-(3-溴苯基)乙酸1103(10.0g，46.5mmol)的100mLEtOH溶液中加入浓H2SO4(10滴)，将混合物加热至回流温度持续3小时。使混合物冷却至室温，并减压除去挥发物。使残余物溶于EtOAc(100mL)，并用水(2x50mL)、饱和NaHCO3(1x25mL)、盐水(2x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物，得到2-(3-溴苯基)乙酸乙酯1097(11.1克)，为液体)。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.41(m,2H),7.20(m,2H),4.14(q,2H,J＝9.5Hz),3.57(s,2H),1.25(t,3H,J＝9.5Hz)。
向2-(3-溴苯基)乙酸乙酯1097(1.5g，6.17mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入肼(0.79g，24.7mmol)，将混合物加热至回流温度持续4小时。使混合物冷却至室温，产生白色沉淀，其经过滤收集，并用MeOH(10mL)漂洗。减压干燥后，分离出1.4克2-(3-溴苯基)乙酰肼1104。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.42(s,2H),7.20(s,2H),6.73(brs,1H),3.51(s,2H),1.81(brs,2H)。
向2-(3-溴苯基)乙酰肼1104(1.0g，4.37mmol)的AcOH(10mL)溶液中加入原乙酸三甲酯(2.62g，21.83mmol)，将混合物加热至115℃18小时。减压除去挥发物，残余物用反相色谱法纯化，得到0.59g2-(3-溴苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑1105。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.45(m,2H),7.23(m,2H),4.12(s,2H),2.49(s,3H)。
在氩气气氛下，向2-(3-溴苄基)-5-甲基-1,3,4-噁二唑1105(0.50g，1.97mmol)的二噁烷(1mL)溶液中加入双(三叔丁基膦)钯(0)(0.15g，0.295mmol)，接着加入2-叔丁氧基-2-氧代乙基氯化锌(0.5M的乙醚溶液，4.92mmol，9.84mL)。在氩气下将混合物搅拌20小时，并减压除去挥发物。使残余物溶于EtOAc(10mL)，用水(2x5mL)、盐水(2x5mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。粗物质用正相色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到0.338g2-(3-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)苯基)乙酸叔丁酯1106。1HNMR300MHzCDCl3：δ7.24(m,4H),4.12(s,2H),3.51(s,2H),2.46(s,3H),1.43(s,9H)。
向2-(3-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)苯基)乙酸叔丁酯1106(0.127g，0.44mmol)在二噁烷(3mL)中的混合物中加入含4NHCl的二噁烷(1mL)，在氩气气氛下搅拌2小时。减压除去挥发物，残余物用水(5mL)稀释，并用2.5NNaOH调节pH至12。混合物用二氯甲烷(4x2mL)洗涤，并用1NHCl调节pH至6。混合物用EtOAc(3x2mL)萃取，合并有机层，用盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物，得到0.023g2-(3-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)苯基)乙酸1107。
将N-(5-(4-(6-氨基哒嗪-3-基)丁基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-苯基乙酰胺348(0.035g，0.094mmol)、2-(3-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)苯基)乙酸1107(0.023g，0.094mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(0.045g，0.235mmol)、1-羟基苯并三唑(0.032g，0.235mmol)的DMF(1.75mL)溶液搅拌16小时，并用水(20mL)稀释。混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，合并有机层，用水(3x20mL)、盐水(2x20mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。Na2SO4经过滤除去，减压除去挥发物。粗物质用反相色谱法纯化，得到0.004g2-(3-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)苯基)-N-(6-(4-(5-(2-苯基乙酰氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)哒嗪-3-基)乙酰胺652。1HNMR300MHzDMSO-d6：δ12.62(s,1H),11.24(s,1H),8.16(d,1H,J＝12.2Hz),7.54(d,1H,J＝12.2Hz),7.3-7.1(m,9H),4.20(s,2H),3.78(s,2H),3.74(s,2H),2.99(m,2H),2.87(m,2H),2.41(s,3H),1.72(m,4H)。
将3-溴乙酰苯(5g，25.1mmol)在甲酸(6gm)和甲酰胺(25mL)的混合物加热至170℃过夜后，将其用甲苯萃取。分离有机层，并浓缩。所得残余物用3NHCl稀释，将所得混合物回流过夜后，使之冷却至室温。溶液用乙醚萃取。水层经分离，用氢氧化钠水溶液碱化，并用乙醚萃取。有机层经分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到1108(3g，60％收率)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δppm1.22-1.25(d,3H)3.97-3.99(q,1H)7.23-7.4(m,3H)7.6(s,1H)。
向1108(2.945g，14.7mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入boc酐(3.21g，14.7mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将其浓缩，并通过硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1109(3g，68％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.29-1.31(d,3H)1.38(s,9H)4.61-4.63(q,1H)7.3(brs,2H)7.41-7.5(m,3H)。
在氩气下，向1109(0.5g，1.66mmol)和双(三叔丁基膦)钯(0)(0.085g，0.166mmol)的二噁烷(3mL)脱气溶液中加入2-叔丁氧基-2-氧代乙基氯化锌(8.5mL，4.15mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌4小时后，将其用饱和氯化铵水溶液猝灭。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1110(0.35g，62％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.29-1.31(d,3H)1.388-1.42(brs,18H)3.53(s,2H)4.59-4.63(q,1H)7.09(brs,1H)7.12-7.20(brs,2H)7.25-7.27(m,1H)7.27-7.30(m,1H)。
向1110(0.44g，1.3mmol)的甲醇(40mL)和水(10mL)溶液中加入一水氢氧化锂(0.4gm)，将所得反应混合物在室温下搅拌2天后，将其浓缩。所得残余物用冰冷的水稀释，并用乙酸酸化。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1111(0.316g，86％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.22-1.39(m,12H)3.55(s,2H)4.58-4.63(q,1H)7.11-7.38(m,5H)12.29(s,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.43(m,12H)1.89(brs,4H)2.97-3.08(m,4H)3.95-4.03(m,4H)4.71-4.77(q,1H)7.24-7.43(m,11H)8.45-8.48(d,1H)10.99(s,1H)12.4(brs,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.43(m,12H)1.89(brs,4H)2.97-3.08(m,4H)3.95-4.03(m,4H)4.71-4.77(q,1H)7.24-7.43(m,11H)8.45-8.48(d,1H)10.22(brs,1H)12.4(brs,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.5-1.52(d,3H)1.75(brs,4H)2.88-2.93(m,2H)3.03-3.05(m,2H)3.79(s,2H)3.86(s,2H)4.38-4.44(q,1H)7.27-7.59(m,10H)8.20-8.23(m,4H)11.27(s,1H)12.71(s,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.5-1.52(d,3H)1.75(brs,4H)2.88-2.93(m,2H)3.03-3.05(m,2H)3.86(s,4H)4.38-4.44(q,1H)7.27-7.59(m,10H)8.20-8.23(m,4H)11.27(s,1H)12.71(s,1H)。
HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.5-1.52(d,3H)1.75(brs,4H)2.88-2.93(m,2H)3.03-3.05(m,2H)3.78(s,2H)3.82(s,2H)4.91-4.96(q,1H)7.20-7.35(m,9H)7.55-7.58(d,1H)8.20-8.23(d,1H)8.68-8.71(m,1H)11.27(s,1H)12.71(s,1H)。
向1-(5-溴-2-氟苯基)乙酮(4.5g，20.7mmol)的甲醇(100mL)冰冷溶液中加入乙酸铵(32g，414.7mmol)和氰基硼氢化钠(6.15g，28.98mmol)。在周末期间在室温下搅拌反应混合物后，将其浓缩。所得残余物用水稀释，用1NNaOH碱化至pH～13，用二氢甲烷萃取。有机萃取物经分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1112(1.8g，40％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.24-1.26(d,3H)4.22-4.24(q,1H)7.1-7.16(t,1H)7.41-7.46(m,1H)7.76(m,1H)。
向1112(1.97g，9mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入boc酐(1.97g，9mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜后，将其浓缩，并通过硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1113(2.4g，83％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.29-1.32(d,3H)1.39(s,9H)4.87(q,1H)7.14-7.21(t,1H)7.46-7.58(m,3H)。
在氩气下，向1113(2.4g，7.54mmol)和双(三叔丁基膦)钯(0)(0.77g，1.508mmol)的二噁烷(12mL)脱气溶液中加入2-叔丁氧基-2-氧代乙基氯化锌(38mL，18.85mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌4小时后，将其用饱和氯化铵水溶液猝灭。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1114(2g，75％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.29-1.32(d,3H)1.38-1.41(m,18H)3.53(s,2H)4.87(q,1H)7.05-7.16(m,2H)7.26-7.29(m,1H)7.48(m,1H)。
向1114(2g，5.66mmol)的甲醇(100mL)和水(25mL)溶液中加入一水氢氧化锂(2gm)，将所得反应混合物在室温下搅拌2天后，将其浓缩。所得残余物用冰冷的水稀释，并用乙酸酸化。使所得溶液在水和乙酸乙酯之间分配。有机萃取物用更多的水洗涤，分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。所得残余物用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱)，得到1115(1.5g，89％收率)。1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.29-1.31(d,3H)1.38(s,9H)3.53(s,2H)4.87(q,1H)7.05-7.19(m,2H)7.26-7.29(m,1H)7.45-7.48(m,1H)12.32(s,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.30-1.33(m,12H)1.74(brs,4H)2.89(m,2H)3.02(m,2H)3.78(s,4H)4.85(q,1H)7.10-7.57(m,11H)8.19-8.22(d,1H)11.26(s,1H)12.64(s,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.28-1.32(m,12H)1.73-1.75(brs,4H)2.87(m,2H)2.89(m,2H)3.75(s,2H)3.81(s,2H)4.85(q,1H)7.06-7.57(m,11H)8.18-8.21(d,1H)11.26(s,1H)12.64(s,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.51-1.53(m,3H)1.75(brs,4H)2.90(m,2H)3.02(m,2H)3.78(s,2H)3.85(s,2H)4.65(q,1H)7.25-7.61(m,10H)8.21-8.25(d,1H)8.33-8.35(brs,3H)11.29(s,1H)12.68(s,1H)。
1HNMR(300MHz,二甲亚砜-d6)δppm1.54(d,3H)1.75-1.76(brs,4H)2.91(m,2H)3.02(m,2H)3.81-3.83(m,4H)4.65(q,1H)7.24-7.63(m,10H)8.22-8.25(d,1H)8.36(brs,3H)11.35(s,1H)12.66(s,1H)。
在室温下，向413(1.62g)在MeOH(25mL)、THF(10mL)和H2O(10mL)中的混合物中加入1NNaOH水溶液(8mL)。该将混合物搅拌24小时后，减压除去有机挥发物。残余物用1NHCl水溶液中和至pH7，用EtOAc(2×20mL)萃取。合并的萃取物经干燥(MgSO4)并浓缩。粗产物用硅胶色谱法纯化(用含1–15％MeOH的二氯甲烷洗脱)，得到胺1116。按335所述将所得胺1116转化成660。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.68(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),7.52–7.21(m,8H),3.90(s,2H),3.87(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
在3000mL三颈圆底烧瓶中，将3-氨基-6-氯哒嗪(55.5g，0.428mol)和3-(三氟甲氧基)苯乙酸(1.1当量，0.471mol，104g)溶于DMF(30.0体积，1.66L)。通过加料漏斗在5分钟内加入DIEA(1.1当量，0.471mol，82mL)。将丙基膦酸酐溶液(300mL50％的DMF溶液，1.1当量，0.471mol)装入500mL加料漏斗中，滴加到反应溶液(保持反应温度≤+30℃)中。反应通常在3小时后完成(TLC：6:4己烷-乙酸乙酯)。然后将反应混合物倒入7.5％碳酸氢钠(80.0体积，4.4L)中，其在冰浴中冷却。灰白色结晶粉经Büchner漏斗过滤，用水(20.0体积，1.1L)漂洗。在50℃下真空干燥至恒重，得到N-(6-氯哒嗪-3-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺1117：产量119.6g(77％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.63(s,1H),8.38(d,J＝9.4Hz,1H),7.88(d,J＝9.4Hz,1H),7.52–7.27(m,4H),3.90(s,2H)。
将4-氰基丁基溴化锌溶液(3.0当量，0.50mol，1.0L)装入经氩气吹扫的5000mL3颈圆底烧瓶中。在氩气层下，用氩气吹扫5分钟接着加入1117(1.0当量，0.167mol，55.3g)和NiCl2(dppp)(0.15当量，0.0251mol，13.6g)。反应通常在4小时后完成(TLC：1:1己烷-乙酸乙酯)。将EtOAc(15体积，832mL)加入深红色溶液中。加入水(15体积，832mL)，形成浓稠的浆液。加入1NHCl直到浆液变成浅蓝色层(～6体积，333mL)。转移到分液漏斗中，将有机层用1NHCl(2x500mL)洗涤，干燥(MgSO4)并通过旋转蒸发浓缩(浴≤30℃)成固体淡红色油状物。将油状物溶于二氯甲烷(15体积，832mL)，硅胶(100g)被调浆成红色溶液，将其通过旋转蒸发(浴≤30℃)成固体淡红色粉末。加载到硅胶垫(5cmx11cm)上，用含25％己烷的乙酸乙酯(3L)冲洗，合并的有机物通过旋转蒸发浓缩(浴≤30℃)。高真空干燥至恒重，得到N-(6-(4-氰基丁基)哒嗪-3-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺1118：产量58.2g(92％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.41(s,1H),8.28(d,J＝9.2Hz,1H),7.65(d,J＝9.2Hz,1H),7.52–7.27(m,4H),3.89(s,2H),2.92(t,J＝7.5Hz,2H),2.56(t,J＝7.0Hz,2H),1.80(m,2H),1.61(m,2H)。
将1118(1.0当量，0.154mol，58.2g)与氨基硫脲(1.2当量，0.184mol，16.8g)一起装入500mL圆底烧瓶中。在搅拌的同时，将TFA(5体积，291mL)慢慢加入反应容器中。将反应浆液在具有敞顶回流冷凝器的65℃浴中加热。反应通常在5小时后完成(通过LC/MS测定)。将甲苯(10体积，582mL)加入深红色溶液中，通过旋转蒸发(浴≤30℃)共沸成红色油状物。将油状物慢慢转移到在0℃浴中冷却的含有7.5％碳酸氢钠溶液(69体积，4.0L)的充分搅拌的6000mLErlenmeyer烧瓶中。将晶体通过Büchner漏斗过滤，并用乙醚(5体积，2x250mL)漂洗两次。高真空干燥至恒重，得到N-(6-(4-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)丁基)哒嗪-3-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺657；产量55.7g(80％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),8.21(d,J＝9.2Hz,1H),7.58(d,J＝9.2Hz,1H),7.51–7.26(m,4H),6.99(s,2H),3.88(s,2H),2.87(m,4H),1.71(m,4H)。
在0℃下，向657(50mg，0.11mmol)的DMF(3mL)溶液中加入4-氟苯乙酸(22mg，0.14mmol)、HOBt(30mg，0.22mmol)和EDCI(42mg，0.22mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1.5小时后，使之冷却至0℃，并用H2O猝灭。沉淀通过吸滤收集，用硅胶色谱法进一步纯化(用含1–10％MeOH的二氯甲烷洗脱)，得到661。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.65(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.1Hz,1H),7.57(d,J＝9.4Hz,1H),7.49–7.14(m,8H),3.87(s,2H),3.81(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
662通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.1Hz,1H),7.57(d,J＝9.1Hz,1H),7.51–7.07(m,7H),3.89(s,2H),3.87(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
663通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.74(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),7.51–7.19(m,7H),3.97(s,2H),3.87(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
在氩气氛下，向1-溴-3-(二氟甲氧基)苯(1g，4.5mmol)、双(三叔丁基膦)钯(0)(460mg，0.9mmol)在1,4-二噁烷(30ml)的混合物中加入0.5M含2-叔丁氧基-2-氧代乙基氯化锌的乙醚(22.5ml)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。使混合物在饱和NH4Cl和EtOAc之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-10％EtOAc的己烷洗脱)，得到1119。
在0℃下，向1119(300mg，1.16mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中滴加TFA(3ml)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其蒸发至干，然后将残余物用乙醚研磨，得到1120。
1121采用化合物1120所述方法由1-溴-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯制备。
向烧瓶中装入1024(50mg，0.135mmol)、含1120(28mg，0.142mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次加入HOBT(39mg，0.285mmol)和EDCI(68mg，0.356mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌2小时后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗，得到664。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.03Hz,1H),7.48-6.99(m,10H),3.85(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
665采用化合物664所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.03Hz,1H),7.38-7.28(m,6H),7.03-6.97(m,3H),4.77-4.74(q,2H),3.80-3.78(d,J＝5.82Hz,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
向烧瓶中装入348(50mg，0.135mmol)、含1120(28mg，0.142mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次加入HOBT(39mg，0.285mmol)和EDCI(68mg，0.356mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌过夜后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的二氯甲烷洗脱)，得到666。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.03Hz,1H),7.48-6.98(m,10H),3.81(bs,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
667采用化合物666所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝8.97Hz,1H),7.35-7.28(m,6H),7.03-6.97(m,3H),4.77-4.74(q,2H),3.87(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
668采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.15Hz,1H),7.58-6.99(m,10H),3.87-3.84(d,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
669采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.09Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.37Hz,1H),7.48-7.28(m,6H),7.03-6.97(m,2H),4.77-4.74(q,2H),3.87(s,2H),3.78(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
向烧瓶中装入657(50mg，0.111mmol)、含2-吡啶乙酸盐酸盐(20mg，0.116mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次用丙基膦酸酐溶液(91ul)和三乙胺(40ul，0.29mmol)处理。使所得混合物慢慢升温至室温，搅拌1小时后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。黄色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的二氯甲烷洗脱)，得到670。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),11.32(s,1H),8.53-8.49(m,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.78-7.76(t,1H),7.58-7.26(m,7H),4.01(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
671采用化合物670所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.70(s,1H),11.32(s,1H),8.53-8.48(m,2H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.76-7.26(m,7H),3.87(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
672采用化合物670所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.53-8.52(bs,2H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.58-7.26(m,7H),3.87(s,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
673通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.69(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.1Hz,1H),7.57(d,J＝9.1Hz,1H),7.51–7.21(m,8H),3.90(s,2H),3.87(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
674通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.63(bs,1H),11.32(s,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),7.51–7.38(m,3H),7.33–7.09(m,5H),3.87(s,2H),3.79(s,2H),3.06–2.86(m,4H),2.48(s,3H),1.77–1.72(m,4H)。
向烧瓶中装入657(70mg，0.155mmol)、含5-嘧啶乙酸(22mg，0.162mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次加入HOBT(44mg，0.326mmol)和EDCI(78mg，0.408mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌过夜后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的二氯甲烷洗脱)，得到675。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),9.11(s,1H),8.76(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.59-7.26(m,6H),3.94(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
676采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),8.70(s,1H),8.61-8.57(m,2H),8.22-8.19(d,J＝9.36Hz,1H),7.59-7.26(m,5H),4.11(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
677采用合物675所述方法制备化。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),8.89(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.15Hz,1H),7.59-7.26(m,5H),6.62(s,1H),3.99(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
678采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),9.06(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.21Hz,1H),7.59-7.26(m,6H),4.03(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
679通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),7.51–7.36(m,4H),7.29–7.12(m,4H),3.87(s,2H),3.85(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
680通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.3Hz,1H),7.57(d,J＝9.0Hz,1H),7.51–7.28(m,8H),3.87(s,2H),3.84(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
在-78℃下，分4份向674(100mg，0.16mmol)的二氯甲烷溶液中加入m-CPBA(60mg，0.24mmol)。将所得混合物在该温度下搅拌1小时后，慢慢使之升温至-10℃，并用25％Na2S2O3水溶液猝灭。反应物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液(3×10mL)洗涤。合并的有机层经分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。粗产物用HPLC纯化，得到682。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.72(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.0Hz,1H),7.68(m,1H),7.60–7.26(m,8H),3.91(s,2H),3.87(s,2H),3.06–2.86(m,4H),2.76(s,3H),1.77–1.72(m,4H)。
681通过化合物661所述方法由657和3-甲基磺酰基苯乙酸制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.72(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.0Hz,1H),7.92–7.83(m,2H),7.70–7.26(m,7H),3.93(s,2H),3.87(s,2H),3.23(s,3H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
683采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),8.36(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.18Hz,1H),7.84-7.80(d,J＝9.36Hz,1H),7.59-7.26(m,6H),3.90-3.87(d,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
684采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),8.57(s,1H),8.51-8.49(d,J＝9.18Hz,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.79-7.75(d,J＝9.36Hz,1H),7.59-7.26(m,6H),4.07(t,2H),3.87(s,2H),3.30-3.28(m,1H),3.19(s,3H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.3-2.5(m,1H),1.99-1.96(m,1H),1.73(bs,4H)。
685通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.52(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.1Hz,1H),7.61–7.25(m,7H),3.87(s,2H),3.80(s,3H),3.62(s,2H),3.06–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
686通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.53(bs,1H),11.32(s,1H),8.20(d,J＝9.1Hz,1H),7.58(d,J＝9.2Hz,1H),7.52–7.26(m,4H),5.96(s,1H),3.87(s,2H),3.67(s,2H),3.64(s,3H),3.06–2.86(m,4H),2.21(s,3H),1.77–1.72(m,4H)。
687通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.56(bs,1H),11.32(s,1H),8.20(d,J＝9.3Hz,1H),7.61–7.38(m,6H),6.17(d,J＝2.2Hz,1H),3.87(s,2H),3.79(s,3H),3.75(s,2H),3.03–2.90(m,4H),1.7–1.72(m,4H)。
688通过化合物661所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.61(bs,1H),11.32(s,1H),8.20(d,J＝9.3Hz,1H),7.58(d,J＝9.3Hz,1H),7.51–7.26(m,4H),3.87(s,2H),3.84(s,2H),3.07–2.86(m,4H),1.77–1.72(m,4H)。
在0℃下，向657(200mg，0.44mmol)的DMF(4mL)溶液中加入扁桃酸(124mg，0.66mmol)、HOBt(119mg，0.88mmol)和EDCI(170mg，0.88mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1.5小时后，使之冷却至0℃，并用H2O猝灭。沉淀通过吸滤收集，用硅胶色谱法进一步纯化(用含1–10％MeOH的二氯甲烷洗脱)，得到690和更大极性的689。689：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.42(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.58–7.27(m,10H),6.35(d,J＝4.4Hz,1H),5.34(d,J＝4.3Hz,1H),3.87(s,2H),3.03–2.89(m,4H),1.77–1.73(m,4H)。690：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.05(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.0Hz,1H),7.59–7.26(m,15H),6.26(d,J＝5.5Hz,1H),6.11(s,1H),5.38(d,J＝5.3Hz,1H),3.87(s,2H),3.03–2.88(m,4H),1.76–1.73(m,4H)。
447通过化合物689所述方法由657和3-氯扁桃酸制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.48(bs,1H),11.31(s,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.59–7.26(m,9H),6.53(m,1H),5.36(t,J＝0.7Hz,1H),3.87(s,2H),3.03–2.90(m,4H),1.75–1.71(m,4H)。
692采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.18Hz,1H),7.80-7.26(m,9H),3.92(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
693采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.06Hz,1H),7.79(s,1H),7.59-7.26(m,6H),6.31(s,1H),5.20(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
694采用化合物675所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.18(d,J＝9.15Hz,1H),7.58-7.54(d,J＝9.18Hz,1H),7.48-7.26(m,4H),3.87(s,2H),3.63(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.39(s,3H),2.13(s,3H),1.73(bs,4H),1.57(s,9H)。
在0℃下，向694(50mg，0.081mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中加入TFA(2ml)。将所得混合物在室温下搅拌1小时后，将其真空蒸发至干。加入乙醚，白色沉淀通过吸滤收集，用更多的乙醚漂洗，得到695。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.36Hz,1H),7.60-7.57(d,J＝9.27Hz,1H),7.51-7.28(m,4H),3.88(s,2H),3.57(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.45(s,3H),2.15(s,3H),1.73(bs,4H)。
696采用化合物695所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.30Hz,1H),8.15(s,1H),7.58-7.54(d,J＝9.30Hz,1H),7.48-7.28(m,5H),3.87(s,2H),3.76(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H),1.59(s,9H)。
697采用化合物695所述方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.22(s,1H),12.71(s,1H),11.32(s,1H),9.01(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.15Hz,1H),7.59-7.26(m,6H),4.04(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.73(bs,4H)。
在0℃下，向3-吗啉-4-基-丙酸盐酸盐(113mg，0.58mmol)在DMF(8mL)中的悬浮液中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(130mg，0.67mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌40分钟，接着加入689(300mg，0.48mmol)和4-DMAP(165mg，1.35mmol)。在3.5小时时间内从0℃到室温搅拌所得混合物后，将其用EtOAc和冷水稀释。分离有机层，并用水(3×15mL)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。粗产物用硅胶色谱法纯化(用含0–15％MeOH的CH2Cl2洗脱)，得到711(297mg)，为白色固体。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ10.75(bs,1H),8.49(d,J＝9.0Hz,1H),7.64(s,1H),7.50–7.26(m,7H),7.16–7.15(m,1H),6.51(s,1H),4.04(s,2H),3.80–3.72(m,4H),3.88–2.81(m,8H),2.75–2.71(m,5H),1.89(m,4H)。
将1117(4.00g，12.06mmol)、4-戊炔腈(2.11mL，24.12mmol)、PdCl2(PPh3)2(847mg，1.21mmol)、CuI(184mg，0.96mmol)和Et3N(13.44mL，96.48mmoL)在DMF(18mL)中的混合物在55℃下加热5小时。使反应物冷却至室温，倒入冰-水的混合物中。沉淀通过吸滤收集并风干。粗产物先用i-PrOH-H2O的混合物进一步重结晶，然后再用i-PrOH进一步重结晶，得到炔1131。
将炔1131(6.00g)和Pd(OH)2/C(1.00g)在EtOAc(150mL)、THF(75mL)和MeOH(75mL)混合物中的混合物在1大气压D2、室温下搅拌3小时后，将催化剂滤出SiO2短塞，用EtOAc漂洗。将滤液浓缩，得到粗产物，将其用EtOAc和乙醚的混合物进一步重结晶，得到所需的烷烃1132，为灰白色固体(6.01g)
将腈1132(5.20g，13.61mmol)和氨基硫脲(1.61g，17.69mmol)在TFA(75mL)中的混合物在80℃下加热4小时。使反应物冷却至室温，倒入冰-水的混合物中。混合物用NaOH小粒碱化(pH14)。白色沉淀通过吸滤收集，用水漂洗并干燥，得到726(5.87g)。
在0℃下，向726(1.40g，3.07mmol)和2-吡啶基乙酸HCl盐(1.49g，8.59mmol)的DMF(20mL)溶液中依次加入Et3N(1.50mL，10.73mmol)和1-丙烷膦酸酐(2.73mL，50％的DMF溶液，4.29mmol)。将该混合物在室温下搅拌2.5小时后，使之冷却回到0℃，并用冰-H2O猝灭。沉淀通过吸滤收集并风干。该粗产物用硅胶色谱法进一步纯化(用含0–15％MeOH的DCM洗脱)，得到727(0.97g)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),11.31(s,1H),8.52–8.50(m,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.78(dt,J＝1.8,7.6Hz,1H),7.58(d,J＝9.1Hz,1H),7.51–7.26(m,6H),4.02(s,2H),3.87(s,2H),3.03(t,J＝7.4Hz,2H),1.73(t,J＝7.4Hz,2H)。
化合物710采用类似于制备化合物711所用的方法自化合物447制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.62-7.26(m,9H),6.16(s,1H),3.87(s,2H),3.52-3.50(d,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.80-2.71(m,11H),1.73(bs,4H)。
化合物712采用类似于制备化合物711所用的方法自化合物447制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.62-7.26(m,9H),6.16(s,1H),3.87(s,2H),3.38-3.36(d,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.29(s,6H),1.73(bs,4H)。
化合物713采用类似于制备化合物711所用的方法自化合物447制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.11(bs,1H),11.32(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.62-7.26(m,9H),6.16(s,1H),3.87(s,2H),3.60-3.57(m,4H),3.44-3.42(d,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.55-2.51(m,4H),1.73(bs,4H)。
化合物714采用类似于制备化合物711所用的方法自化合物447制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.62-7.26(m,9H),6.16(s,1H),3.87(s,2H),3.38-3.31(d,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.49-2.47(m,4H),1.93(bs,4H),1.73(bs,4H),1.72(bs,2H)。
在0℃下，向670(3g，5.24mmol)在MeOH(50ml)中的悬浮液中加入2NNaOH(20ml)溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜。溶剂经真空蒸发，混合物用1NHCl酸化至pH6。白色沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗并干燥，得到1121a。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),8.51-8.50(m,1H),7.81-7.76(m,1H),7.42-7.28(m,2H),7.16-7.13(d,1H),6.73-6.70(d,1H),6.10(s,2H),4.0(s,2H),3.01(bs,2H),2.71(bs,2H),1.70(bs,4H)。
在0℃下，向1121a(20mg，0.054mmol)的DMF(1ml)溶液中依次滴加三乙胺(11ul，0.081mmol)和o-乙酰基扁桃酸酰氯(15ul，0.065mmol)。使所得混合物慢慢升温至室温，搅拌1小时后，在0℃下通过加入水(～3mL)将其猝灭。使混合物在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-5％MeOH的DCM洗脱)，得到1122。
向烧瓶中装入1122(20mg，0.037mmol)和2N氨/MeOH(5ml)。将混合物在室温下搅拌2小时。溶剂经真空蒸发，混合物用乙醚研磨。白色沉淀通过吸滤收集，用乙醚漂洗并干燥，得到715。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),10.61(s,1H),8.51-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.61-7.53(m,3H),7.42-7.28(m,5H),6.49-6.47(d,1H),5.30-5.28(d,1H),4.0(s,2H),3.02(bs,2H),2.91(bs,2H),1.75(bs,4H)。
化合物719采用类似于化合物670制备所用的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.32(s,1H),8.51-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.79-7.76(m,1H),7.59-7.30(m,6H),4.0(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.75(bs,4H)。
化合物720采用类似于制备化合物670所用的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.32(s,1H),8.51-8.50(m,1H),8.19-8.16(d,J＝9.06Hz,1H),7.79-7.76(m,1H),7.59-7.30(m,6H),4.01(s,2H),3.95(s,2H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
化合物721采用类似于制备化合物670所用的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.32(s,1H),8.51-8.50(m,1H),8.21-8.16(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.28(m,7H),4.01(s,2H),3.89(s,2H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
化合物717采用类似于制备化合物670所用的方法制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.17(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.19-8.16(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.55(d,1H),7.42-7.09(m,4H),7.08-7.06(d,1H),4.01(s,2H),3.83(s,2H),3.79(s,3H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
在0℃下，向717(10mg，0.017mmol)的DCM(3ml)溶液中滴加三溴化硼溶液(1N，在DCM中)(2ml)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌4.5小时后，通过加入水(～3mL)将其猝灭。混合物然后用1NNaOH碱化至pH8。使混合物在水和DCM之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-10％MeOH的DCM洗脱)，得到718。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.55(d,1H),7.51-7.09(m,4H),6.88-6.85(d,1H),4.0(s,2H),3.79(s,2H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
化合物1128采用类似于下述化合物1124的方法由4-溴-2-三氟甲氧基茴香醚制备。
化合物722用类似于化合物670的方法使用化合物1128制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.17(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.55(d,1H),7.42-7.19(m,5H),4.0(s,2H),3.85(s,3H),3.79(s,2H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
化合物723采用类似于制备上述化合物718的方法自化合物722制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.17(s,1H),10.06(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.55(d,1H),7.42-7.19(m,4H),6.99-6.96(d,1H),4.0(s,2H),3.70(s,2H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
化合物1129采用类似于下述化合物1126的方法由3-溴-5-三氟甲氧基茴香醚制备。
化合物729采用类似于化合物670的方法使用化合物1129制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.28(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.55(d,1H),7.42-7.29(m,2H),6.99-6.95(m,2H),6.84(s,1H),4.0(s,2H),3.80(m,5H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
化合物730采用类似于制备上述化合物718的方法自化合物729制备。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.66(s,1H),11.28(s,1H),10.04(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.21-8.18(d,J＝9.06Hz,1H),7.81-7.76(m,1H),7.58-7.55(d,1H),7.42-7.29(m,2H),6.81-6.78(m,2H),6.61(s,1H),4.0(s,2H),3.74(m,2H),3.03(bs,2H),2.91(bs,2H),1.76(bs,4H)。
在氩气氛下，向6-(二-Boc-氨基)-2-溴吡啶(1g，2.9mmol)、双(三叔丁基膦)钯(0)(300mg，0.59mmol)在1,4-二噁烷(30ml)中的混合物中加入含0.5M2-叔丁氧基-2-氧代乙基氯化锌的乙醚(15ml)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。使混合物在饱和NH4Cl和EtOAc之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-20％EtOAc的己烷洗脱)，得到1123。
在0℃下，向1123(150mg，0.37mmol)的MeOH(6ml)和水(2ml)溶液中加入一水氢氧化锂(100mg，2.38mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2天后，将其蒸发至干。混合物然后用1NHCl酸化(pH4)，并使之在水和EtOAc之间分配。有机萃取物用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到1124。
向烧瓶中装入657(105mg，0.232mmol)、含1124(90mg，0.255mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次加入丙基膦酸酐溶液(300ul)和三乙胺(89ul，0.64mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌3小时后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的DCM洗脱)，得到724。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),11.32(s,1H),9.69(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.72-7.01(m,8H),3.91-3.87(d,4H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.75(bs,4H)1.47(s,9H)。
在0℃下，向724(50mg，0.07mmol)的DCM(3ml)溶液中滴加TFA(3ml)。将所得混合物在室温下搅拌3小时后，将其蒸发至干，然后将残余物用乙醚研磨，得到725。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.88-7.77(m,3H),7.59-7.26(m,5H),6.90-6.80(m,2H),4.05(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.75(bs,4H)。
在0℃、氩气下，向乙酸叔丁酯(789ul，5.88mmol)、2-氯-6-甲基吡啶(428ul，3.92mmol)、氯(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-1-丙基-1,1’-二-苯基)[2-(2-氨基乙基)苯基]钯(II)(27mg，0.039mmol)在甲苯(10ml)的搅拌溶液加入预冷却至0℃的LHMDS(1M在甲苯中)(12ml，12mmol)溶液。将所得混合物搅拌1小时。使混合物在饱和NH4Cl和EtOAc之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-15％EtOAc的己烷洗脱)，得到1125。
在0℃下，向1125(267mg，1.29mmol)的DCM(3ml)溶液中滴加TFA(1.5ml)。将所得混合物在室温下搅拌过夜后，将其蒸发至干，然后将残余物用乙醚研磨，得到1126。
向烧瓶中装入657(50mg，0.111mmol)、含1126(35mg，0.133mmol)的DMF(1ml)，在0℃下，依次加入丙基膦酸酐溶液(155ul)和三乙胺(57ul，0.4mmol)。将所得混合物慢慢升温至室温，搅拌3小时后，通过加入冰水(～5mL)将其猝灭。沉淀通过吸滤收集，用更多的水漂洗。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-6％MeOH的DCM洗脱)，得到728。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),11.32(s,1H),8.22-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.69-7.15(m,8H),3.96(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),2.52(s,3H),1.75(bs,4H)。
在0℃下，向2-吡啶基乙酸乙酯(1g，6.05mmol)的DCM(20ml)溶液中加入MCPBA(77％最大)(1.77g，10.2mmol)。使所得混合物升温至室温达3小时后，使之在饱和碳酸氢钠和DCM之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-12％MeOH的EtOAc洗脱)，得到1127。
向657(331mg，0.73mmol)的甲苯悬浮液中依次加入1127(278mg，1.53mmol)和三甲基铝(2M在甲苯中)(732ul，1.46mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌过夜。使反应混合物在水和DCM之间分配。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗物质用硅胶色谱法纯化(用含0-5％MeOH的DCM然后含0-15％MeOH的EtOAc洗脱)，得到716。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),11.32(s,1H),8.29-8.27(m,1H),8.21-8.19(d,J＝9.12Hz,1H),7.61-7.26(m,8H),4.03(s,2H),3.87(s,2H),3.01(bs,2H),2.90(bs,2H),1.75(bs,4H)。
制备型HPLC纯化
所有反相制备型HPLC纯化在环境温度下使用带有柱的ShimadzuProminence制备型液相色谱仪进行。流动相A和B分别由0.1％甲酸/水和0.1％甲酸/乙腈组成。将粗产物混合物以约100mg/mL的浓度溶于DMF、DMSO或其混合物中，并按表2所述方法进行色谱分析。然后使用SavantSpeedVacPlusSC210A型，将合适的色谱流分在45℃下高真空蒸发，得到纯化的产物。
表2：制备型HPLC方法描述
下面的代表性合成方案也可用于产生本发明的化合物。
3,6-二氯哒嗪用丙二酸二叔丁酯和含氢化钠的THF或DMF处理，得到1026。然后将中间体1026用含氢化钠的THF或DMF处理，接着用双-(氯甲基)硫化物处理，得到1027。将中间体1027用含TFA的二氯甲烷处理，得到1028。将中间体1028用氨处理，得到1029。通过依次用2,4-二甲氧基苄胺和TFA处理，另使中间体1028转化成1029。可采用上述用于1001-1008酰化的合成方案部分中描述的方法，使双-氨基中间体1029转化成类似于表3中所述的那些的酰化产物。
通过双-甲磺酸酯化中间体1030，使反式-和顺式-环丙烷-1,2-二基二甲醇两者转化成相应的双-腈1031。在含吡啶或三乙胺的二氢甲烷存在下，通过将二醇用甲磺酰氯处理来制备双甲磺酸酯中间体1030。在DMSO或乙醇/水中，通过将1030用氰化钠处理来制备双腈1031。采用类似于制备1001所述的方法，使双-腈1031在TFA中与氨基硫脲进行环化，得到双-氨基中间体1032。可采用上述用于1001-1008酰化的合成方案部分所述的方法，将双-氨基中间体1032转化成类似于表3中所述的那些的酰化产物。
烯烃类似物1033采用类似于用于制备1001所述的方法，由反式-3-己烯二腈制备。可采用上述用于1001-1008酰化的合成方案部分所述方法，将双-氨基中间体1033转化成类似于表3所述的那些的酰化产物(例如1034)。在Simmons-Smith条件下(Et2Zn，CH2I2，1,2-二甲氧基乙烷)，产物可进一步转化成环丙基类似物(以1035为例)。
实施例2：化合物测定法
在下列体外生物化学测定法和细胞增殖测定法中测定化合物。表3提供了IC50结果。
重组酶测定法
采用使谷氨酸(通过GAC释放)的产生与谷氨酸脱氢酶(GDH)关联并针对NAD+还原成NADH测量吸光度的变化的生物化学测定法，评价化合物抑制重组形式的谷氨酰胺酶1(GAC)的酶活性的能力。制备底物溶液(50mMTris-HClpH8.0、0.2mMEDTA、150mMK2HPO4、0.1mg/mlBSA、1mMDTT、20mML-谷氨酰胺、2mMNAD+和10ppm防沫剂)，将50μL加入96孔半面积透明板(halfareaclearplate)(Corning#3695)上。加入化合物(2μL)，得到在2X所需的化合物浓度下最终DMSO浓度为2％。酶促反应始于加入50μL酶溶液(50mMTris-HClpH8.0、0.2mMEDTA、150mMK2HPO4、0.1mg/mlBSA、1mMDTT、10ppm防沫剂、4单位/mlGDH、4mM腺苷二磷酸和4nMGAC)，在MolecularDevicesM5读板仪中在20℃下读数。配置读板仪以动力学模式读取吸光度(λ＝340nm)15分钟。数据以毫-吸光度单位/分钟记录，与相同板上的对照化合物和仅DMSO对照比较斜率。斜率小于DMSO对照的化合物被视为抑制剂，使用对照化合物评价板变化性。
对本发明几种化合物的该测定法的结果见表3a和3b，表示为IC50，或半最大抑制浓度，其中IC50是表明抑制指定生物学活性达一半需要多少化合物的定量度量。
重组酶测定法–时间依赖性
采用使谷氨酸(通过GAC释放)的产生与谷氨酸脱氢酶(GDH)关联并针对NAD+还原成NADH测量吸光度的变化的生物化学测定法，评价化合物抑制重组形式的谷氨酰胺酶1(GAC)的酶活性的能力。制备酶溶液(50mMTris-HClpH8.0、0.2mMEDTA、150mMK2HPO4、0.1mg/mlBSA、1mMDTT、10ppm防沫剂、4单位/mlGDH、4mM腺苷二磷酸和4nMGAC)，将50μL加入96孔半面积透明板(Corning#3695)上。加入化合物(2μL)，得到在2X所需的化合物浓度下最终DMSO浓度为2％。酶/化合物混合物用封口箔纸(USAScientific)密封，在适度搅拌下在20℃下温育60分钟。酶促反应始于加入50μL底物溶液(50mMTris-HClpH8.0、0.2mMEDTA、150mMK2HPO4、0.1mg/mlBSA、1mMDTT、20mML-谷氨酰胺、2mMNAD+和10ppm防沫剂)，在MolecularDevicesM5读板仪中在20℃下读数。配置读板仪以动力学模式读取吸光度(λ＝340nm)15分钟。数据以毫-吸光度单位/分钟记录，与相同板上的对照化合物和仅DMSO对照比较斜率。斜率小于DMSO对照的化合物被视为抑制剂，使用对照化合物评价板变化性。
对本发明几种化合物的该测定法的结果见表3a和3b，表示为IC50，或半最大抑制浓度，其中IC50是表明抑制指定生物学活性达一半需要多少化合物的定量度量。
细胞增殖测定法
在37℃与5％CO2下，将P493-6(myc“on”)细胞在生长培养基(RPMI-1640、10％FBS、2mM谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素)中维持。对于化合物测定，在化合物加入50μl生长培养基中的当天，以200,000个细胞/ml(10,000个细胞/孔)的细胞密度将P493-6细胞铺板于96孔V底板中。按200倍终浓度将化合物在100％DMSO中系列稀释。将化合物100倍稀释入生长培养基中，然后将50μl该混合物加入细胞板中，使得DMSO终浓度为0.5％。将细胞与化合物一起在37℃与5％CO2下孵育72小时，使用Guava仪器的Viacount(Millipore)试剂盒，通过CellTiterGlo(Promega)或FACS分析，分析抗增殖作用。
对本发明几种化合物的该测定法的结果见表3a和3b，表示为IC50，或半最大抑制浓度，其中IC50是表明抑制指定生物学活性达一半需要多少化合物的定量度量。
改进的重组酶测定法–时间依赖性
采用使Glu(通过谷氨酰胺酶释放)的产生与GDH关联并测量由于NADP+还原成NADPH引起的荧光增加的生物化学测定法，评价化合物抑制重组形式的谷氨酰胺酶的酶活性的能力。
测定设置：制备谷氨酰胺酶反应缓冲液[50mMTris-HClpH8.8、150mMK2HPO4、0.25mMEDTA、0.1mg/mlBSA(Calbiochem号2960)、1mMDTT、2mMNADP+(SigmaAldrich号N5755)和0.01％TX-100]，并用来制备含3x酶的溶液、含3x底物的溶液和含3x抑制剂的溶液(见下)。含抑制剂的溶液如下制备：通过将化合物的DMSO原液在谷氨酰胺酶反应缓冲液中稀释以产生含有6％DMSO的3x抑制剂溶液。含3x酶的溶液如下制备：通过将重组谷氨酰胺酶和来自变形杆菌属(Proteus)菌种(SigmaAldrich号G4387)的GDH在谷氨酰胺酶缓冲液中稀释以产生6nM谷氨酰胺酶加18单位/mLGDH溶液。如下制备含有Gln、Glu或NADPH的3x底物溶液:通过将Gln(SigmaAldrich号49419)、Glu(SigmaAldrich号49449)或NADPH(SigmaAldrich号N1630)的原液在谷氨酰胺酶反应缓冲液中稀释以产生3x-底物溶液。在不需要预孵育时，通过将5μL含抑制剂的溶液与5μL含底物的溶液接着与5μL含酶的溶液混合，将反应物装入384孔小容量黑色微量滴定板(MolecularDevices号0200-5202)中。当测试化合物抑制的时间依赖性效应时，在加入含底物的溶液之前，将含酶的溶液用含抑制剂的溶液处理达规定时间。
谷氨酰胺酶活性的测量：在全部3种组分混合后，采用SpectromaxM5e(MolecularDevices)，记录在室温下的荧光增加(激发：340nM，发射：460nm)15分钟。
IC50测定：应用直线方程式(Y＝Y截距+(斜率)*X)，计算各进展曲线的初速度。使初速度值对化合物浓度作图，并拟合到4参数剂量反应方程式(％活性＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogIC50-X)*Hill斜率)))以计算IC50值。
该测定法对几种化物的结果见表3a和3b，表示为IC50，或半最大抑制浓度，其中IC50是表明抑制指定生物学活性达一半需要多少化合物的定量度量。
表3a：
表3b：
实施例3：Caco-2通透性测定法
Caco-2细胞通常用于细胞培养插入滤片上的汇合单层。当以这种方式并在特定条件下培养时，细胞发生分化和极化，使得其表型在形态和功能上类似于内衬小肠的肠细胞。细胞单层对小分子的通过提供物理和生物化学屏障，并广泛用于制药业作为人小肠粘膜的体外模型以预测口服给予的药物的吸收(Hidalgo等,Gastroenterology,1989；Artursson,J.Pharm.Sci.,1990)。跨越Caco-2单层的体外表观通透性(P-app)和体内吸收间的相关性已被充分证实(Artursson等,Biochem.Biophys.Res.Comm.,1991)。
采用本测定法以测定本发明的化合物通过Caco-2细胞单层的双向通透性。使Caco-2细胞在汇合单层中生长，在单层中顶面(A)和底侧面(basolateralside)(B)两者的培养基为pH7.4。在200μM萤光黄存在下，一式两份将1μM化合物给予顶面(A→B)或底侧面(B→A)上用于评价。在120分钟暴露后，取A面和B面两者的样品，采用通用LC-MS/MS方法，以最小4点校正曲线，测定化合物浓度(以％回收率报告)。
化合物的吸收潜力归类为低(P-app<1X10-6cm/s)或高(P-app>1X10-6cm/s)。流出比率计算为(PappB→A)/(PappA→B)，当Papp(B→A)大于或等于1X10-6cm/s时，流出比率如大于或等于3则显著。本发明某些化合物的结果见表4。
表4：Caco-2通透性结果
实施例4：溶解度
将试验品的约1mg部分与120μL溶剂在96x2mL聚丙烯板的孔中混合。将板在室温(约20℃)下剧烈涡旋混合18小时，目视检查各孔未溶解的固体；不含可见固体的孔加入额外的固体试验品，在室温下再涡旋6小时，之后所有孔显示可见固体。然后将所有孔的内含物通过0.45μmGHP滤板过滤得到透明滤液。将5μL各滤液在100μLDMF中稀释，涡旋混合得到HPLC样品。通过在测量体积的DMF中稀释称重部分的固体试验品，来制备各试验品的一式两份定量标准品。采用表5中概述的方法，通过HPLC分析2μL各HPLC样品和定量标准品。通过针对合适的定量标准品的峰面积比，计算溶解的试验品浓度。溶解度结果见表6。
表5：HPLC方法概述
表6：所测溶解度
实施例5：抗增殖和谷氨酰胺依赖性测定法
体外测试乳腺细胞系在缺乏谷氨酰胺下生长的能力和在含有谷氨酰胺的培养基中其对化合物670的敏感性。在37℃、5％CO2下将细胞保持在补充2mM谷氨酰胺的生长培养基(RPMI-1640、10％FBS、100单位/ml青霉素和100Ag/ml链霉素、0.25μg/mL两性霉素)中。
为了测定谷氨酰胺依赖性，根据细胞大小及其生长特性，将细胞以3000-5000个细胞/孔的密度接种在96孔板中。选择合适的接板密度以确保细胞在72小时测定期限内不发生汇合。接种后24小时，除去接板培养基，将细胞用不含谷氨酰胺的生长培养基洗涤2次，然后将100uL不含谷氨酰胺的培养基或含有的谷氨酰胺(2mM)的生长培养基加回到孔中。将细胞在37℃与5％CO2下孵育72小时，并通过CellTiterGlo(Promega)分析抗增殖作用。通过经由下式((在不含谷氨酰胺的培养基中生长72小时的细胞的rfu–在t＝0时的rfu)/(在2mM谷氨酰胺中生长72小时的细胞的rfu–在t＝0时的rfu))比较谷氨酰胺撤出当天(t＝0)平行板中测量的CellTiterGlo信号(rfu)与在72小时孵育期后观察到的信号，计算细胞增殖(DMSO对照的％)。通过下式测定细胞损失：(100x不含谷氨酰胺的培养基中72小时时的rfu/在t＝0时的rfu)–100。
通过处理如上所述接种在96孔板中的细胞，来测定对化合物670的敏感性。在接种后24小时，将细胞用含2mM谷氨酰胺的生长培养基洗涤，将50uL含2mM谷氨酰胺的生长培养基加入孔中。将10mM化合物670的DMSO原液以200uM稀释入100％DMSO中。将其在含2mM谷氨酰胺的生长培养基中进一步稀释成2uM。将50ul的该混合物加入细胞板，使得670uM的终浓度为1uM。平行对照孔只用DMSO处理。将细胞在37℃与5％CO2下孵育72小时，并通过CellTiterGlo分析抗增殖作用。以带有下列修改的类似于上述的方式，计算细胞增殖：细胞增殖((在1uM化合物670中生长72小时的细胞的rfu–在t＝0时的rfu)/(在72小时时DMSO对照的rfu–在t＝0时的rfu))，细胞损失(100x1uM化合物670中在72小时时的rfu/在t＝0时的rfu)–100。这些测定的结果见图1。
实施例6：三阴性乳腺癌亚型中谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶的差异 性表达。
下载原发性乳腺肿瘤和细胞系表达数据集[TheCancerGenomeAtlas，来自https://genome-cancer.ucsc.edu(乳腺侵润性癌/基因表达/RNAseqV2数据)和TheCellLineEncyclopedia，来自http://www.broadinstitute.org/ccle/home(基因中心RMA归一化mRNA表达/aAffymetrixU133+2阵列)]，并评价下列基因各数据集内的表达水平：雌激素受体(ER)、黄体酮受体(PR)和Her2(ERBB2)、谷氨酰胺酶(GLS)和谷氨酰胺合成酶(GLUL)。通过与整个数据集中基因的表达中位值进行比较，来计算各样品中指定基因的相对表达水平。通过分析该群中3个标志物基因各自的表达分布和谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶的相对水平，来鉴定具有最低相对水平的ER、PR和Her2(“三阴性”)的样品，并且评价非三阴性群。图2表示表明三阴性群中相对高表达(红色)的谷氨酰胺酶和低表达(绿色)的谷氨酰胺合成酶的热图。
实施例7：MDA-MB-231原位异种移植物模型的单药剂化合物402 治疗。
将与基质胶1:1混合的1x107个MDA-MB-231细胞植入6-8周龄雌性scig/beige小鼠(n＝20)的腹股沟乳房脂垫。当肿瘤达到100-150mm3的体积时，将小鼠随机分成以下两组，n＝10只小鼠/组：1)溶媒对照(Gelucire)POBID给予35天，和2)100mg/kg的化合物402(以10mg/mL在Gelucire中配制)IPBID给予35天。用测径器每周两次测量肿瘤35天，应用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝(axb2/2)，其中‘b’是最小直径，‘a’是最大直径。最终剂量后24小时，处死小鼠，切下肺，肺转移用百分比肺转移覆盖度(肺外部质地粗糙)量化。图3显示与溶媒相比用化合物402治疗时肿瘤体积和转移的测量结果。
实施例8：MDA-MB-231原位异种移植物模型中用化合物389和紫杉 醇的联合研究。
用与基质胶1:1混合的1x107个MDA-MB-231细胞植入6-8周龄的雌性scig/beige小鼠(n＝40)的腹股沟乳房脂垫。当肿瘤达到100-150mm3的体积时，将小鼠随机分成以下4组，n＝10只小鼠/组：1)溶媒对照(20％HPBCD/10mM柠檬酸盐缓冲液pH4.0)IPBID给予35天，2)50mg/kg的化合物389(5mg/mL在20％HPBCD/10mM柠檬酸盐缓冲液pH4.0中配制)IPBID给予35天，3)10mg/kg的紫杉醇(在盐水稀释至1mg/mL的临床制剂)IPQD给予5天，和4)50mg/kg的化合物389IPBIDx35天加10mg/kg的紫杉醇IPQD给予x5天。用测径器每周两次测量肿瘤35天，应用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝(axb2/2)，其中‘b’是最小直径，‘a’是最大直径。图4显示与溶媒和仅各药物相比，用化合物389和紫杉醇的组合治疗时肿瘤体积的测量结果。
实施例9：通过液相色谱法串联质谱法测定细胞样品中的谷氨酸和谷 氨酰胺。
如实施例5所述测定对化合物670的敏感性。
针对代谢物水平检查未处理的细胞。通过液相色谱法串联质谱法(LC-MS/MS)测定谷氨酰胺和谷氨酸的浓度。来自体外细胞测定法的细胞沉淀用PBS洗涤，与含有内标(IS)的甲醇:水(50:50)混合以提取谷氨酰胺和谷氨酸，然后在-70℃下保存直到分析。提取的细胞样品经涡旋，离心和/或过滤，注入10μL提取物用于LC-MS/MS分析。通过比较研究样品中与标准校准样品中分析物与IS的峰面积比，量化谷氨酰胺和谷氨酸。LC-MS/MS系统包括配备ShimadzuLC-10ADvp泵(Shimadzu，Columbia，MD)和LeapPALHTC-xt自动进样器的API4000质谱仪(ABSCIEX，FosterCity，CA)。使用梯度洗脱，在PhenomenexLunaNH2柱(2.1×50mm，3.5μm粒度)上实现色谱分离。流动相为(A)10mM乙酸铵和5mM氢氧化铵水溶液，和(B)50:50甲醇:乙腈。通过选择性m/z转换的MRM：对于谷氨酸为145.9→101.8和对于谷氨酰胺为144.7→108.8，使用负电离模式的Turbo离子喷雾界面实现质谱检测。这些测定的结果见图9。
实施例10：谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶比率的测定
基因表达数据来自Oncomine的BarretinaCellLine数据集。使各个原发性肿瘤样品的各个谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶转录物的表达水平分位数归一化。在任何指定样品中，log2拷贝数为0表明所述基因以相对于跨越所有数据集和所分析的样品的12,000个基因的表达中位值水平表达。水平线表明所示临床样品数内各个转录物的表达中位值的比率。结果见图5、6、7和8。
实施例11：表达和代谢物相关性延伸到其它肿瘤类型
原发性肿瘤异种移植物连同谷氨酰胺酶和谷氨酰胺合成酶表达的微阵列数据由商业临床研究组织提供。如实施例9中所述测定谷氨酸和谷氨酰胺。谷氨酰胺酶活性基本上按Curthoys和Bellemann(ExpCellRes,1979)的描述测定。图10显示谷氨酸:谷氨酰胺比率与谷氨酰胺酶:谷氨酰胺合成酶表达比或谷氨酰胺酶活性之间的相关性。
实施例12：结肠癌异种移植物功效研究
以100uL无菌PBS的体积用5x106个HCT116细胞/小鼠皮下植入约6周龄的雌性scid/bg小鼠右胁。当肿瘤达到50-100mm3的体积时，小鼠随机分成n＝10的组以接受通过腹膜内注射每日递送2次的溶媒或试验化合物。使用Vernier测径器，每周3次测量肿瘤，应用下式计算肿瘤体积：体积＝(长度x宽度2/2)，其中长度和宽度是肿瘤的最长垂直边。继续给药每天两次直到对照肿瘤达到2000mm3的大小。应用2方向ANOVA与Bonferroni事后检验进行统计比较。图11显示在该HCT116结肠癌异种移植物模型中将化合物188腹膜内给予小鼠导致肿瘤大小减小。
实施例13：肺腺癌异种移植物功效研究
用悬浮于PBS中的1x107个H2122肺腺癌细胞/小鼠皮下植入6-8周龄的雌性scid/beige小鼠(n＝20)中。将小鼠随机分成以下两组，n＝10只小鼠/组：1)溶媒对照(25％羟基丙基-β-环糊精)，和2)以200mg/kg口服给予的化合物670(以20mg/mL在25％HP-β-CD中配制)。对于两个组，在植入后24小时开始给药，并继续口服BID23天。用测径器每周3次测量肿瘤，应用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝(axb2/2)，其中‘b’是最小直径，‘a’是最大垂直直径。**P值<0.01(双侧T检验)。结果见图12。
实施例14：TNBC和HR+/Her2+乳腺肿瘤细胞系中谷氨酰胺酶和谷氨 酰胺合成酶的mRNA表达
查询2个可公开获取的数据库以测定谷氨酰胺酶(GLS)和谷氨酰胺合成酶(GS)的mRNA水平：
-Neve等,(CancerCell10(6):515-27(2006年12月))公开的一组51个乳腺癌细胞系的微阵列表达数据，在本实施例中评价了其中的20个，和
-TheCellLineEncyclopedia(CCLE；Barretina等,Nature483,603–607(2012年3月29日)，其包括58个乳腺癌细胞系的表达数据，本实施例中使用其中的25个。
Neve等人的出版物包括数据集中各个细胞系的激素和生长因子状态的注释(25个三阴性，26个HR+或Her2+)。对于CCLE数据集，根据雌激素受体(ESR，20/58阳性)、黄体酮受体(PGR，10/58阳性)和Her2(ERBB2，13/58阳性)的mRNA表达水平，评价激素和生长因子受体状态。根据该分析，总共31个细胞系归类于TNBC，27个归类为HR+或Her2+。对于两个数据集提供的33个细胞系，在激素和生长因子受体状态分配中有良好的一致性(32/33)。本实施例在包括22个三阴性和7个HR+或Her2+的一组细胞系中进行。
根据跨越数据集中所有样品的所有探针集(probeset)的表达中位值，使各个细胞系中的GLS剪接变体KGA(探针集203159_at)和GAC(探针集221510_s_at)以及GS(探针集215001_s_at)的log2换算的mRNA表达值进行中位值居中(Neve等数据集的中位值为5.583，CCLE数据集的中位值为4.809)。对于GLS:GS比率计算，首先将KGA、GAC和GS的log2换算表达值转换回相应的未换算值。在TNBC细胞系与HR+/Her2+细胞系中比较GLS(KGA和GAC)、GS的表达水平和GLS(KGA或GAC)与GS的比率。应用不配对斯氏T检验(Prism)，测定显著差异。
TNBC细胞系和HR+/Her2+细胞系间的差异通过图表描述于图13中。对于两个数据集，与HR+或Her2+细胞系相比，在TNBC中有显著较高的GLS剪接变体KGA和GAC表达。GAC剪接变体的差异数量和统计显著性较大。对于谷氨酰胺合成酶(GS)，相对于两个数据集的HR+或Her2+亚集，在TNBC细胞系中有显著较低的表达。KGA与GS比率和GAC与GS的比率在TNBC细胞系中也显著较高。
实施例15：对化合物670的敏感性和GLS和GS的表达之间的相关性。
将所观察到的作为化合物670治疗结果的细胞增殖和细胞损失与谷氨酰胺酶(KGA和GAC)、谷氨酰胺合成酶(GS)的表达水平和谷氨酰胺酶与谷氨酰胺合成酶的比率进行比较。按实施例5中所述测定化合物670的抗增殖作用。图14显示绘出所有测试的细胞系的化合物670敏感性对各表达参数(来自Neve等或CCLE数据集)的曲线的一系列二变量图，而表7概括相应的Spearman秩序相关系数(和P值)。对于两个表达数据集，在化合物670敏感性和谷氨酰胺酶的GAC同种型的表达、谷氨酰胺合成酶(GS)的表达和GAC:GS的比率之间观察到显著相关性。各个数据集中的最大显著相关性为仅用GAC表达进行的。这些结果支持这样的设想，即GAC表达或GAC:GS比率升高的细胞对用谷氨酰胺酶抑制剂的GLS抑制敏感。在多数TNBC细胞系和少数受体阳性乳腺细胞系中观察到这种表型。
表7.化合物670的敏感性与GLSmRNA表达、GSmRNA表达或表达比之间的相关性1。
1对于图14中二变量图绘出的数据的Spearman秩序相关系数和相关P值。对于各相关性分析，汇总整组的乳腺癌细胞系(TNBC、HR+、Her2+)。
实施例15：乳腺癌细胞系中利用Gln的酶的蛋白质表达
使用从乳腺癌细胞系组制备的提取物的蛋白质印迹分析监测蛋白质水平上的GLS(GAC和KGA剪接变体)和谷氨酰胺合成酶的表达。如图15所示，与这些基因的微阵列mRNA表达分析一致，多数TNBC细胞系表达GAC和KGA，而在大多数受体阳性系中GAC和KGA以较低水平(或未检出水平)表达。具体地说，GAC在所测的几乎所有TNBC细胞系以相对高的水平表达(与HR+/Her2+细胞系相比)。谷氨酰胺合成酶的表达更易变，并且与微阵列数据不同，在整个该细胞系组中在TNBC和受体阳性细胞间不显示明显区别。
按照实施例11所述方法，针对谷氨酰胺酶活性对用于蛋白质印迹法所制备的细胞裂解物进行分析。结果表明，KGA和GAC蛋白的水平与较高谷氨酰胺酶活性对应。
实施例16：对谷氨酰胺酶抑制剂的敏感性和代谢物水平。
谷氨酸和谷氨酰胺浓度按实施例9所述测定。对谷氨酰胺酶抑制剂的敏感性按实施例5所述测定。图16显示谷氨酸:谷氨酰胺比率和对化合物670的敏感性之间的相关性。
实施例17：多发性骨髓瘤异种移植物研究。
给8-12周龄的雌性CB.17SCID小鼠(n＝20)皮下植入与基质胶1:1混合的1x107个RPMI-8226骨髓瘤细胞/小鼠。将小鼠随机分成以下两组，n＝10个小鼠/组：1)溶媒对照(25％羟基丙基-β-环糊精)，和2)以200mg/kg口服给予的化合物670(以20mg/mL在25％HP-β-CD中配制)。对于两个组，当肿瘤达到100-150mm3的体积时开始给药，继续口服BID28天。用测径器每周两次测量肿瘤，应用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝(axb2/2)，其中‘b’是最小直径，‘a’最大垂直直径。**P值<0.01(双侧T检验)。结果见图17。
实施例18：用药物组合处理多发性骨髓瘤细胞。
如图18所示，将MM1S细胞(图A和B)和RPMI-8226细胞(图C和D)在生长培养基中用剂量滴定的化合物670、泊马度胺或其混合物(图A和C)或化合物670、地塞米松或其混合物(图B和D)处理72小时。按照生产商的方案，采用CellTiterGlo(Promega，Madison，WI)，在孵育结束时测量细胞成活率。使化合物处理细胞的测量值归一化至DMSO处理细胞，数据以细胞存活比率报告，其1(一)的值对应于最大细胞存活，0(零)的值对应于无细胞存活。所有化合物处理的细胞存活比率用柱状图表示。组合指数应用Calcusyn程序(biosoft.com)计算，针对化合物670和泊马度胺[POM]的各混合物(图A和C)和化合物670和地塞米松[DEX]的各混合物(图B和D)报告。突出显示产生协同抗肿瘤活性的化合物混合物。
通过引用结合
本文提及的所有出版物和专利通过引用以其整体结合到本文中，就像各出版物或专利具体而单独指明通过引用予以结合一样。在有冲突的情况下，以本申请(包括本文的任何定义)为准。2012年11月19日提交的美国申请号13/680,582的化合物、合成方法和实验方案和结果通过引用结合到本文中。
等同内容
虽然论述了主题发明的具体实施方案，但上述说明书是说明性的和非限制性的。在阅读本说明书和随附权利要求书时，本发明的许多变化对本领域技术人员而言将变得显而易见。通过参考权利要求书及其等同内容的整个范围和说明书及所述变化，确定本发明的整个范围。

Claims (184)

1.一种治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予式I的化合物或其药学上可接受的盐，
　(I)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X每次出现时独立地表示S、O或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立地表示H、烷基、烷氧基或羟基；
R3每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立地表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H。
2.权利要求1的方法，其中L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2。
3.权利要求1的方法，其中L表示CH2CH2。
4.前述权利要求中任一项的方法，其中Y表示H。
5.前述权利要求中任一项的方法，其中X每次出现时独立地表示S或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换。
6.前述权利要求中任一项的方法，其中Z表示R3(CO)。
7.权利要求6的方法，其中R3的每次出现都不相同。
8.前述权利要求中任一项的方法，其中R1和R2各自表示H。
9.前述权利要求中任一项的方法，其中R3每次出现时独立地表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。
10.前述权利要求中任一项的方法，其中R3每次出现时独立地表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基。
11.权利要求10的方法，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基或杂芳基。
12.权利要求10或11的方法，其中R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基。
13.权利要求1的方法，其中L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且R3每次出现时独立地表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。
14.权利要求13的方法，其中R3的每次出现都是相同的。
15.权利要求1的方法，其中L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且R3每次出现时独立地表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，R9表示H，且R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基。
16.权利要求15的方法，其中L表示CH2CH2。
17.权利要求15或16的方法，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基或杂芳基。
18.权利要求17的方法，其中R8表示取代或未取代的芳基。
19.权利要求15-18中任一项的方法，其中R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基。
20.权利要求19的方法，其中R10表示羟基烷基。
21.权利要求15-20中任一项的方法，其中R3的每次出现都是相同的。
22.权利要求1的方法，其中L表示CH2CH2，Y表示H，X每次出现时独立地表示S或CH=CH，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，且R3每次出现时独立地表示芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。
23.权利要求22的方法，其中R3的每次出现都是相同的。
24.一种治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予式Ia化合物或其药学上可接受的盐，
　(Ia)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X表示S、O或CH=CH，优选S或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基，优选H；
R3表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H；
R11表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基或C(R12)(R13)(R14)、N(R4)(R14)或OR14，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R12和R13各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，其中R12和R13两者都不是H；和
R14表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基。
25.权利要求24的方法，其中R11表示取代或未取代的芳基烷基。
26.权利要求25的方法，其中R11表示取代或未取代的苄基。
27.权利要求24-26中任一项的方法，其中L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2。
28.权利要求27的方法，其中L表示CH2CH2。
29.权利要求24-28中任一项的方法，其中各个Y表示H。
30.权利要求24-29中任一项的方法，其中X表示S或CH=CH。
31.权利要求30的方法，其中X表示S。
32.权利要求24-31中任一项的方法，其中Z表示R3(CO)。
33.权利要求32的方法，其中R3和R11不相同。
34.权利要求24-33中任一项的方法，其中R1和R2各自表示H。
35.权利要求32的方法，其中R3表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基。
36.权利要求35的方法，其中R3表示取代或未取代的杂芳基烷基。
37.权利要求32的方法，其中R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，R9表示H，且R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基。
38.权利要求37的方法，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基或杂芳基。
39.权利要求37或38的方法，其中R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基。
40.权利要求24的方法，其中L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基，且R11表示取代或未取代的芳基烷基。
41.权利要求40的方法，其中R3表示取代或未取代的杂芳基烷基。
42.权利要求24的方法，其中L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2S或SCH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳烷基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷基，且R11表示取代或未取代的芳基烷基。
43.权利要求42的方法，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基或杂芳基。
44.权利要求43的方法，其中R8表示杂芳基。
45.权利要求42-44中任一项的方法，其中R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基。
46.权利要求24的方法，其中L表示CH2CH2，Y表示H，X表示S或CH=CH，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示取代或未取代的芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基或杂环烷基，且R11表示取代或未取代的芳基烷基。
47.权利要求46的方法，其中R3表示取代或未取代的杂芳基烷基。
48.权利要求24的方法，其中L表示CH2CH2，Y表示H，X表示S，Z表示R3(CO)，R1和R2各自表示H，R3表示C(R8)(R9)(R10)，其中R8表示取代或未取代的芳基、芳基烷基或杂芳基，R9表示H，R10表示羟基、羟基烷基或烷氧基，且R11表示取代或未取代的芳基烷基。
49.前述权利要求中任一项的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤、肾癌和B细胞恶性肿瘤。
50.权利要求49的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
51.权利要求50的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。
52.权利要求51的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞。
53.权利要求51的方法，其中所述乳腺癌包括三阴性乳腺癌细胞。
54.权利要求51的方法，其中所述乳腺癌包括紧蛋白-低乳腺癌细胞。
55.权利要求49的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
56.权利要求49的方法，其中所述癌症是内分泌癌。
57.权利要求56的方法，其中所述内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。
58.权利要求49的方法，其中所述癌症是黑素瘤。
59.权利要求49的方法，其中所述癌症是肾癌。
60.权利要求49的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
61.权利要求60的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
62.权利要求61的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤。
63.权利要求61的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是白血病。
64.权利要求63的方法，其中所述白血病选自急性成淋巴细胞性白血病和慢性成淋巴细胞性白血病。
65.权利要求61的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。
66.权利要求65的方法，其中所述淋巴瘤选自伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
67.前述权利要求中任一项的方法，所述方法还包括联合给予一种或多种其它化学治疗剂。
68.权利要求67的方法，其中联合给予一种或多种其它化学治疗剂相对于各自单独给予式I化合物或一种或多种其它化学治疗剂提供改进功效。
69.权利要求68的方法，其中联合给予一种或多种其它化学治疗剂提供协同效应。
70.权利要求69的方法，其中联合给予一种或多种其它化学治疗剂提供相加效应。
71.权利要求67-70中任一项的方法，其中式I化合物和一种或多种其它化学治疗剂同时给予。
72.权利要求67-70中任一项的方法，其中一种或多种其它化学治疗剂在给予式I化合物之前或之后约5分钟-约168小时内给予。
73.权利要求67-72中任一项的方法，其中一种或多种其它化学治疗剂选自ABT-263、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、bcg、比卡鲁胺、博来霉素、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氯喹、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、秋水仙素、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素、脱甲绿胶霉素、地塞米松、二氯乙酸盐、己二烯雌酚、己烯雌酚、多西他赛、多柔比星、表柔比星、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、非格司亭、氟达拉滨、氟氢可的松、氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、吉西他滨、染料木碱、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康、ironotecan、来那度胺、来曲唑、亚叶酸、亮丙立德、左旋咪唑、洛莫司汀、氯尼达明、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、二甲双胍、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、诺考达唑、奥曲肽、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸盐、喷司他丁、哌立福辛、PF-04691502、普卡霉素、泊马度胺、卟吩姆钠、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、罗米地新、索拉非尼、链佐星、舒尼替尼、苏拉明、他莫昔芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、塞替派、二氯二茂钛、托泊替康、曲妥珠单抗、维A酸、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨和伏林司他(SAHA)。
74.权利要求73的方法，其中一种或多种其它化学治疗剂选自硼替佐米、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、环磷酰胺、柔红霉素、地塞米松、多西他赛、多柔比星、表柔比星、eribulin、氟尿嘧啶、吉西他滨、伊沙匹隆、来那度胺、甲氨蝶呤、米托蒽醌、自力霉素、紫杉醇、泊马度胺、利妥昔单抗、沙利度胺、塞替派、长春新碱和长春瑞滨。
75.权利要求74的方法，其中一种或多种其它化学治疗剂选自硼替佐米、卡非佐米、地塞米松、多柔比星、来那度胺、紫杉醇、泊马度胺、沙利度胺和利妥昔单抗。
76.一种鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定癌症患者的癌细胞中谷氨酸与谷氨酰胺的比率，其中比率大于或等于1.5表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。
77.权利要求76的方法，其中所述比率大于或等于2.0。
78.权利要求76或77的方法，其中所述测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中谷氨酸和谷氨酰胺的水平。
79.权利要求76-78中任一项的方法，所述癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
80.权利要求79的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
81.权利要求80的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。
82.权利要求81的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞。
83.权利要求81的方法，其中所述乳腺癌包括三阴性乳腺癌细胞。
84.权利要求81的方法，其中所述乳腺癌包括紧蛋白-低乳腺癌细胞。
85.权利要求79的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
86.权利要求79的方法，其中所述癌症是内分泌癌。
87.权利要求86的方法，其中所述内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。
88.权利要求79的方法，其中所述癌症是黑素瘤。
89.权利要求79的方法，其中所述癌症是肾癌。
90.权利要求79的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
91.权利要求90的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
92.权利要求91的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤。
93.权利要求91的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是白血病。
94.权利要求93的方法，其中所述白血病选自急性成淋巴细胞性白血病和慢性成淋巴细胞性白血病。
95.权利要求91的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。
96.权利要求95的方法，其中所述淋巴瘤选自伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
97.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中谷氨酸与谷氨酰胺的比率；和2)如果谷氨酸与谷氨酰胺的比率大于或等于1.5，则给予式I的化合物或其药学上可接受的盐，
　(I)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X每次出现时独立地表示S、O或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基；
R3每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H。
98.权利要求97的方法，其中所述化合物是权利要求2-23中任一项描述的化合物。
99.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中谷氨酸与谷氨酰胺的比率；和2)如果谷氨酸与谷氨酰胺的比率大于或等于1.5，则给予式Ia化合物或其药学上可接受的盐，
　(Ia)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X表示S、O或CH=CH，优选S或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基，优选H；
R3表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H；
R11表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基或C(R12)(R13)(R14)、N(R4)(R14)或OR14，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R12和R13各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，其中R12和R13两者都不是H；和
R14表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基。
100.权利要求99的方法，其中所述化合物是权利要求25-48中任一项描述的化合物。
101.权利要求97-100中任一项的方法，其中所述比率大于或等于2.0。
102.权利要求97-101中任一项的方法，其中所述测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中谷氨酸和谷氨酰胺的水平。
103.权利要求97-102中任一项的方法，所述癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
104.权利要求103的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
105.权利要求104的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。
106.权利要求105的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞。
107.权利要求105的方法，其中所述乳腺癌包括三阴性乳腺癌细胞。
108.权利要求105的方法，其中所述乳腺癌包括紧蛋白-低乳腺癌细胞。
109.权利要求103的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
110.权利要求103的方法，其中所述癌症是内分泌癌。
111.权利要求110的方法，其中所述内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。
112.权利要求103的方法，其中所述癌症是黑素瘤。
113.权利要求103的方法，其中所述癌症是肾癌。
114.权利要求103的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
115.权利要求114的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
116.权利要求115的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤。
117.权利要求115的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是白血病。
118.权利要求117的方法，其中所述白血病选自急性成淋巴细胞性白血病和慢性成淋巴细胞性白血病。
119.权利要求115的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。
120.权利要求119的方法，其中所述淋巴瘤选自伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
121.一种鉴定可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗的癌症患者的方法，所述方法包括测定癌症患者的癌细胞中的GLS:GS比率，其中比率大于或等于0.05，表明患者可获益于用谷氨酰胺酶抑制剂治疗。
122.权利要求121的方法，其中所述比率大于或等于1。
123.权利要求121或122的方法，其中所述测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中GLS和GS的水平。
124.权利要求123的方法，其中测量GLS和GS的水平包括测量mRNA的量。
125.权利要求123的方法，其中测量GLS和GS的水平包括测量蛋白质的量。
126.权利要求121-125中任一项的方法，其中GLS是GAC。
127.权利要求121-125中任一项的方法，其中GLS是KGA。
128.权利要求121-125中任一项的方法，其中GLS是GAC和KGA两者。
129.权利要求121-128中任一项的方法，其中所述癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
130.权利要求129的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
131.权利要求130的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。
132.权利要求130的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞。
133.权利要求130的方法，其中所述乳腺癌包括三阴性乳腺癌细胞。
134.权利要求130的方法，其中所述乳腺癌包括紧蛋白-低乳腺癌细胞。
135.权利要求129的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
136.权利要求129的方法，其中所述癌症是内分泌癌。
137.权利要求136的方法，其中所述内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。
138.权利要求129的方法，其中所述癌症是黑素瘤。
139.权利要求129的方法，其中所述癌症是肾癌。
140.权利要求129的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
141.权利要求140的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
142.权利要求140的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤。
143.权利要求140的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是白血病。
144.权利要求143的方法，其中所述白血病选自急性成淋巴细胞性白血病和慢性成淋巴细胞性白血病。
145.权利要求140的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。
146.权利要求145的方法，其中所述淋巴瘤选自伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
147.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中GLS与GS的比率；和2)如果GLS与GS的比率大于或等于0.05，则给予式I的化合物或其药学上可接受的盐，
　(I)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X每次出现时独立地表示S、O或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基；
R3每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H。
148.权利要求147的方法，其中所述化合物是权利要求2-23中任一项描述的化合物。
149.权利要求147的方法，其中所述比率大于或等于1。
150.权利要求147或149中任一项的方法，其中所述测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中GLS和GS的水平。
151.权利要求150的方法，其中测量GLS和GS的水平包括测量mRNA的量。
152.权利要求151的方法，其中测量GLS和GS的水平包括测量蛋白质的量。
153.权利要求147-152中任一项的方法，其中GLS是GAC。
154.权利要求147-152中任一项的方法，其中GLS是KGA。
155.权利要求147-152中任一项的方法，其中GLS是GAC和KGA两者。
156.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中GLS与GS的比率；和2)如果GLS与GS的比率大于或等于0.05，则给予式Ia化合物或其药学上可接受的盐，
　(Ia)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X表示S、O或CH=CH，优选S或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基，优选H；
R3表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H；
R11表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基或C(R12)(R13)(R14)、N(R4)(R14)或OR14，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R12和R13各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，其中R12和R13两者都不是H；和
R14表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基。
157.权利要求156的方法，其中所述化合物是权利要求25-48中任一项描述的化合物。
158.权利要求156或157的方法，其中所述比率大于或等于1。
159.权利要求156-158中任一项的方法，其中所述测定比率的方法包括测量癌症患者的癌细胞中GLS和GS的水平。
160.权利要求159的方法，其中测量GLS和GS的水平包括测量mRNA的量。
161.权利要求159的方法，其中测量GLS和GS的水平包括测量蛋白质的量。
162.权利要求156-161中任一项的方法，其中GLS是GAC。
163.权利要求156-161中任一项的方法，其中GLS是KGA。
164.权利要求156-161中任一项的方法，其中GLS是GAC和KGA两者。
165.权利要求156-164中任一项的方法，所述癌症选自B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、内分泌癌、肺癌、黑素瘤、间皮瘤和肾癌。
166.权利要求165的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
167.权利要求166的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞、三阴性乳腺癌细胞或紧蛋白-低乳腺癌细胞。
168.权利要求166的方法，其中所述乳腺癌包括基底型乳腺癌细胞。
169.权利要求166的方法，其中所述乳腺癌包括三阴性乳腺癌细胞。
170.权利要求166的方法，其中所述乳腺癌包括紧蛋白-低乳腺癌细胞。
171.权利要求165的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
172.权利要求165的方法，其中所述癌症是内分泌癌。
173.权利要求172的方法，其中所述内分泌癌选自肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、肾上腺嗜铬细胞瘤和甲状旁腺腺瘤。
174.权利要求165的方法，其中所述癌症是黑素瘤。
175.权利要求165的方法，其中所述癌症是肾癌。
176.权利要求165的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
177.权利要求176的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤选自多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。
178.权利要求176的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤。
179.权利要求176的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是白血病。
180.权利要求179的方法，其中所述白血病选自急性成淋巴细胞性白血病和慢性成淋巴细胞性白血病。
181.权利要求176的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。
182.权利要求181的方法，其中所述淋巴瘤选自伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。
183.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中的谷氨酰胺酶活性；和2)如果活性大于或等于0.005μmol/分钟/mg蛋白质，则给予式Ia化合物或其药学上可接受的盐，
　(Ia)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，优选CH2CH2，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X表示S、O或CH=CH，优选S或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基、芳基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基，优选H；
R3表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H；
R11表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基或C(R12)(R13)(R14)、N(R4)(R14)或OR14，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R12和R13各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，其中R12和R13两者都不是H；和
R14表示取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基。
184.一种治疗癌症患者的方法，所述方法包括1)测定癌症患者的癌细胞中的谷氨酰胺酶活性；和2)如果活性大于或等于0.005μmol/分钟/mg蛋白质，则给予式I的化合物或其药学上可接受的盐，
　(I)，
其中：
L表示CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH=CH或，其中CH或CH2单元的任何氢原子可被烷基或烷氧基置换，NH单元的任何氢可被烷基置换，且CH2CH2、CH2CH2CH2或CH2的CH2单元的任何氢原子可被羟基置换；
X每次出现时独立地表示S、O或CH=CH，其中CH单元的任何氢原子可被烷基置换；
Y每次出现时独立地表示H或CH2O(CO)R7；
R7每次出现时独立地表示H或取代或未取代的烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基烷基、杂环基烷基或杂环基烷氧基；
Z表示H或R3(CO)；
R1和R2各自独立表示H、烷基、烷氧基或羟基；
R3每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基或C(R8)(R9)(R10)、N(R4)(R5)或OR6，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R4和R5各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基烷基、酰基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；
R6每次出现时独立地表示取代或未取代的烷基、羟基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、烯基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7；和
R8、R9和R10各自独立表示H或取代或未取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、酰氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烯基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、芳氧基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳氧基或杂芳氧基烷基，或R8和R9与它们所连接的碳一起形成碳环环系或杂环环系，其中任何游离羟基可被酰化形成C(O)R7，且其中R8、R9和R10的至少两个不是H。
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