CN105254785A - 一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法 - Google Patents

Abstract

一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法。本发明涉及一种制备葡萄糖分子印迹聚合物的方法。本发明为了解决目前没有采用双功能单体制备的葡萄糖分子印迹聚合物的问题。方法：一、制备水性超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子；二、Fe₃O₄磁性纳米粒子的改性；三、Fe₃O₄磁性纳米粒子的硅烷化；四、Fe₃O₄SiO₂微粒的氨基化；五、双功能单体磁性纳米微球的制备；六、葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的合成。本发明的GlucoseMIP对葡萄糖的最大饱和吸附量为9.111mg/g，而MNIPs饱和吸附量在3.112mg/g，印迹因子达到2.92，经过五次重复吸附，吸附量仅降低5.9％。

Description

一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法

技术领域

本发明涉及一种制备葡萄糖分子印迹聚合物的方法。

背景技术

分子印迹技术是指制备对某一目标分子具有特异选择性的聚合物能选择性地把目标分子及其结构类似物从复杂样品基质中分离和富集出来，具有特异的识别性和选择性，合成的分子印迹聚合物(Molecularimprintedpolymers，MIPs)具有构效预定性、特异识别性、长期稳定性和实施简便性的特点，在生物传感器、分离提取、环境监测等领域有广阔的应用前景。磁性分子印迹聚合物(MMIPs)是将分子印迹技术与磁性材料相结合制备的聚合物，其具有超顺磁性，能在外加磁场的作用下将其从溶液中快速分离，兼备了磁性材料和分子印迹聚合物的共同优点。双功能单体在已有的研究中表现出了强于单功能单体的选择性吸附能力，而本发明中，在分子印迹技术中采用双功能单体技术，创新性的将功能单体刀豆凝集素(ConA)(植物凝集素突出的特点是它的糖结合特异性和稳定性)与氨基苯硼酸(M-APBA)(苯硼酸可以与多羟基化合物通过生成五元或六元环酯发生反应形成配合物，而且该反应可以根据pH不同结合或解离)引入分子印迹的合成中来，利用植物凝集素的特异性识别和氨基苯硼酸对糖的结合作用，成功合成了具有高吸附量，高印迹因子的葡萄糖磁性分子印迹聚合物。

目前，采用双功能单体制备的葡萄糖分子印迹聚合物未见报道。

从而，制备出一种葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物是必要的。

发明内容

本发明为了解决目前没有采用双功能单体制备的葡萄糖分子印迹聚合物的问题，而提供一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法。

本发明的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法按以下步骤进行：

一、制备水性超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子：将FeCl₃·6H₂O溶于乙二醇中，超声处理至无固体存在，然后加入无水乙酸钠，在搅拌速度为200r/min～400r/min的条件下搅拌25min～35min，转移至不锈钢反应釜中，在温度为180～220℃和搅拌速度为80r/min～120r/min的条件下反应11h～13h，停止反应，用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄磁性纳米粒子；

所述的FeCl₃·6H₂O的质量与乙二醇的体积的比为13.5g：(450～550)mL；所述的FeCl₃·6H₂O与无水乙酸钠的质量比为13.5：(35～37)；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与乙二醇的体积比为4：(4.5～5.5)；每次洗涤处理所用去离子水与乙二醇的体积比为4：(4.5～5.5)；

二、Fe₃O₄磁性纳米粒子的改性；向步骤一得到的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入盐酸和柠檬酸三钠，超声处理15min～25min，然后在温度为40～50℃的条件下真空干燥5h～7h，完成改性，得到带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤二中所述的盐酸与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：(4.5～5.5)；步骤二中所述的柠檬酸三钠与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：(4.5～5.5)；

三、Fe₃O₄磁性纳米粒子的硅烷化：向步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入异丙醇和双蒸水，超声处理至分散均匀，然后以滴加速度为1.8mL/min～2.3mL/min逐滴加入氨水，滴加完毕后，再以滴加速度为1.8mL/min～2.3mL/min逐滴加入正硅酸乙酯，滴加完毕后，于室温下以搅拌速度为200r/min～400r/min搅拌10h～14h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄SiO₂微粒；

步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与异丙醇的体积的比为0.4g：(40～60)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与双蒸水的体积的比为0.4g：(3～5)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与氨水的体积的比为0.4g：(4～6)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与正硅酸乙酯的体积的比为0.4g：(0.8～1.2)mL；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与异丙醇的体积比为5：(4.5～5.5)；每次洗涤处理所用去离子水与异丙醇的体积比为5：(4.5～5.5)；

四、Fe₃O₄SiO₂微粒的氨基化：向步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒中加入无水甲苯，超声处理10min～20min，然后加入3-氨丙基乙氧基硅烷，在氮气氛围保护下，于室温和搅拌速度为200r/min～400r/min的条件下搅拌10h～14h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒；

步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与无水甲苯的体积的比为0.5g：(200～300)mL；步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与3-氨丙基乙氧基硅烷的体积的比为0.5g：(8～12)mL；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与无水甲苯的体积比为50：(200～300)；每次洗涤处理所用去离子水与无水甲苯的体积比为50：(200～300)；

五、双功能单体磁性纳米微球的制备：将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合，室温下震荡5min～10min，然后加入辛二酸二琥珀酰亚胺，于温度为4℃的条件下震荡5h～7h，得到混合产物A，然后用50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物A至去除多余的辛二酸二琥珀酰亚胺，然后加入刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，于温度为4℃的条件下震荡11h～13h，得到混合产物B，用50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物B至去除多余的刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，然后在温度为40～50℃的条件下真空干燥，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA，即双功能单体磁性纳米微球；

步骤五中所述的将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合时，其中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒的质量与50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液的体积的比为40mg：(4～6)mL；

步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与辛二酸二琥珀酰亚胺的质量比为40：(10～20)；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与刀豆凝集素的质量比为40：(8～12)；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与3-氨基苯硼酸的质量比为40：(4～6)；

六、葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的合成：将葡萄糖溶液和步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA混合，于温度为35～45℃的条件下震荡0.8h～1.2h，然后加入浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺，于室温下震荡1.5h～2.5h，再加入过硫酸铵和pH为5.0的磷酸盐缓冲液，在氮气氛围保护下，于温度为55～65℃的条件下震荡11h～13h，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，用pH为9.0的磷酸盐缓冲液洗脱去除模版分子至无葡萄糖检出，然后于温度为35～45℃的条件下真空干燥22h～24h，得到GlucoseMIP磁性纳米微球，即葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的浓度为1mg/mL，所述的葡萄糖溶液的溶剂为pH为5.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的体积与步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA的质量的比为5mL：(35～45)mg；步骤六中所述的葡萄糖溶液与浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺的体积比为5：(4～6)；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与过硫酸铵的体积比为(4～6)：1；其中过硫酸铵浓度为22.82mg/mL；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为5.0磷酸盐缓冲液的体积比为(4～6)：9；其中pH为5.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为9.0磷酸盐缓冲液的体积比为(4～6)：20，其中pH为9.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L。

本发明公开了一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，先采用溶胶-凝胶法对制备Fe₃O₄磁性纳米微球表面包覆二氧化硅层实现硅烷化，然后通过APTES(3-氨丙基三乙氧基硅烷)对硅烷化的Fe₃O₄磁性纳米微球进行表面氨基化改性，再通过DSS(双琥珀酰胺辛二酸酯钠盐)对氨基化的Fe₃O₄磁性纳米微球进行表面改性，形成酰胺键以在超顺磁性纳米微球表面引入刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸制得Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA，最后以葡萄糖为模版，过硫酸铵为引发剂，N-N亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，以Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA为载体制得葡萄糖分子印迹聚合物(GlucoseMIP)。弥补了目前没有一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法的空洞，得到的GlucoseMIP磁性纳米微球，即葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物对葡萄糖的最大饱和吸附量为9.111mg/g，而MNIPs饱和吸附量在3.112mg/g，印迹因子达到2.92，吸附效率高，经过五次重复吸附，吸附量没有明显变化，吸附量仅降低5.9％，重复利用率高。

附图说明

图1为试验一得到的GlucoseMIP磁性纳米微球的SEM照片；

图2为试验一步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的EDS谱图；

图3为试验一得到的GlucoseMIP磁性纳米微球的EDS谱图；

图4为试验一得到的GlucoseMIP磁性纳米微球的红外光谱谱图；其中曲线a代表步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子，曲线b代表步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒，曲线c代表步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒，曲线d代表步骤六得到的GlucoseMIP磁性纳米微球；

图5为试验一的GlucoseMIP磁性纳米微球(MMIPs)和MNIPs对葡萄糖的吸附量-时间曲线图；其中a代表MMIPs，b代表MNIPs；

图6为测定葡萄糖吸光度的标准曲线图；

图7为试验一的GlucoseMIP磁性纳米微球的重复利用率柱形图。

具体实施方式

本发明的技术方案不局限于以下具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法按以下步骤进行：

一、制备水性超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子：将FeCl₃·6H₂O溶于乙二醇中，超声处理至无固体存在，然后加入无水乙酸钠，在搅拌速度为200r/min～400r/min的条件下搅拌25min～35min，转移至不锈钢反应釜中，在温度为180～220℃和搅拌速度为80r/min～120r/min的条件下反应11h～13h，停止反应，用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄磁性纳米粒子；

所述的FeCl₃·6H₂O的质量与乙二醇的体积的比为13.5g：(450～550)mL；所述的FeCl₃·6H₂O与无水乙酸钠的质量比为13.5：(35～37)；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与乙二醇的体积比为4：(4.5～5.5)；每次洗涤处理所用去离子水与乙二醇的体积比为4：(4.5～5.5)；

二、Fe₃O₄磁性纳米粒子的改性；向步骤一得到的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入盐酸和柠檬酸三钠，超声处理15min～25min，然后在温度为40～50℃的条件下真空干燥5h～7h，完成改性，得到带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤二中所述的盐酸与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：(4.5～5.5)；步骤二中所述的柠檬酸三钠与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：(4.5～5.5)；

三、Fe₃O₄磁性纳米粒子的硅烷化：向步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入异丙醇和双蒸水，超声处理至分散均匀，然后以滴加速度为1.8mL/min～2.3mL/min逐滴加入氨水，滴加完毕后，再以滴加速度为1.8mL/min～2.3mL/min逐滴加入正硅酸乙酯，滴加完毕后，于室温下以搅拌速度为200r/min～400r/min搅拌10h～14h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄SiO₂微粒；

步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与异丙醇的体积的比为0.4g：(40～60)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与双蒸水的体积的比为0.4g：(3～5)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与氨水的体积的比为0.4g：(4～6)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与正硅酸乙酯的体积的比为0.4g：(0.8～1.2)mL；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与异丙醇的体积比为5：(4.5～5.5)；每次洗涤处理所用去离子水与异丙醇的体积比为5：(4.5～5.5)；

四、Fe₃O₄SiO₂微粒的氨基化：向步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒中加入无水甲苯，超声处理10min～20min，然后加入3-氨丙基乙氧基硅烷，在氮气氛围保护下，于室温和搅拌速度为200r/min～400r/min的条件下搅拌10h～14h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒；

步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与无水甲苯的体积的比为0.5g：(200～300)mL；步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与3-氨丙基乙氧基硅烷的体积的比为0.5g：(8～12)mL；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与无水甲苯的体积比为50：(200～300)；每次洗涤处理所用去离子水与无水甲苯的体积比为50：(200～300)；

五、双功能单体磁性纳米微球的制备：将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合，室温下震荡5min～10min，然后加入辛二酸二琥珀酰亚胺，于温度为4℃的条件下震荡5h～7h，得到混合产物A，然后用50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物A至去除多余的辛二酸二琥珀酰亚胺，然后加入刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，于温度为4℃的条件下震荡11h～13h，得到混合产物B，用50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物B至去除多余的刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，然后在温度为40～50℃的条件下真空干燥，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA，即双功能单体磁性纳米微球；

步骤五中所述的将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合时，其中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒的质量与50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液的体积的比为40mg：(4～6)mL；

步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与辛二酸二琥珀酰亚胺的质量比为40：(10～20)；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与刀豆凝集素的质量比为40：(8～12)；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与3-氨基苯硼酸的质量比为40：(4～6)；

六、葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的合成：将葡萄糖溶液和步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA混合，于温度为35～45℃的条件下震荡0.8h～1.2h，然后加入浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺，于室温下震荡1.5h～2.5h，再加入过硫酸铵和pH为5.0的磷酸盐缓冲液，在氮气氛围保护下，于温度为55～65℃的条件下震荡11h～13h，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，用pH为9.0的磷酸盐缓冲液洗脱去除模版分子至无葡萄糖检出，然后于温度为35～45℃的条件下真空干燥22h～24h，得到GlucoseMIP磁性纳米微球，即葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的浓度为1mg/mL，所述的葡萄糖溶液的溶剂为pH为5.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的体积与步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA的质量的比为5mL：(35～45)mg；步骤六中所述的葡萄糖溶液与浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺的体积比为5：(4～6)；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与过硫酸铵的体积比为(4～6)：1；其中过硫酸铵浓度为22.82mg/mL；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为5.0磷酸盐缓冲液的体积比为(4～6)：9；其中pH为5.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为9.0磷酸盐缓冲液的体积比为(4～6)：20，其中pH为9.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O的质量与乙二醇的体积的比为13.5g：500mL；步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O与无水乙酸钠的质量比为13.5：36。其它步骤与参数与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二中所述的盐酸与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：5；步骤二中所述的柠檬酸三钠与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：5。其它步骤与参数与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤二中所述的盐酸的浓度为2mol/L。其它步骤与参数与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤二中所述的柠檬酸三钠的浓度为0.5mol/L。其它步骤与参数与具体实施方式一至四之一相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与异丙醇的体积的比为0.4g：50mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与双蒸水的体积的比为0.4g：4mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与氨水的体积的比为0.4g：5mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与正硅酸乙酯的体积的比为0.4g：1mL。其它步骤与参数与具体实施方式一至五之一相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是：步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与无水甲苯的体积的比为0.5g：240mL；步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与3-氨丙基乙氧基硅烷的体积的比为0.5g：10mL。其它步骤与参数与具体实施方式一至六之一相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一之一不同的是：步骤五中所述的将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合时，其中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒的质量与50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液的体积的比为40mg：5mL。其它步骤与参数与具体实施方式一至七之一相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是：步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与辛二酸二琥珀酰亚胺的质量比为40：15；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与刀豆凝集素的质量比为40：10；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与3-氨基苯硼酸的质量比为40：5。其它步骤与参数与具体实施方式一至八之一相同。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是：步骤六中所述的葡萄糖溶液的体积与步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA的质量的比为5mL：40mg；步骤六中所述的葡萄糖溶液与浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺的体积比为5：5；步骤六中所述的葡萄糖溶液与过硫酸铵的体积比为5：1；步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为5.0磷酸盐缓冲液的体积比为5：9；步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为9.0磷酸盐缓冲液的体积比为5：20。其它步骤与参数与具体实施方式一至九之一相同。

用以下试验验证本发明的有益效果：

试验一、一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法按以下步骤进行：

一、制备水性超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子：将13.5g的FeCl₃·6H₂O溶于500mL的乙二醇中，超声处理至无固体存在，然后加入36g的无水乙酸钠，在搅拌速度为300r/min的条件下搅拌30min，转移至不锈钢反应釜中，在温度为200℃和搅拌速度为100r/min的条件下反应12h，停止反应，用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用的95％的乙醇洗涤固体物质3次，每次400mL，再用去离子水洗涤固体物质3次，每次400mL得到Fe₃O₄磁性纳米粒子；

二、Fe₃O₄磁性纳米粒子的改性；向步骤一得到的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入120mL浓度为2mol/L的盐酸和120mL浓度为0.5mol/L的柠檬酸三钠，超声处理20min，然后在温度为45℃的条件下真空干燥6h，完成改性，得到带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子；

三、Fe₃O₄磁性纳米粒子的硅烷化：向0.4g的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入50mL的异丙醇和4mL的双蒸水，超声处理至分散均匀，然后以滴加速度为2mL/min逐滴加入5mL的氨水，滴加完毕后，再以滴加速度为2mL/min逐滴加入1mL的正硅酸乙酯，滴加完毕后，于室温下以搅拌速度为300r/min搅拌12h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，每次50mL，再用去离子水洗涤固体物质3次，每次50mL，得到Fe₃O₄SiO₂微粒；

四、Fe₃O₄SiO₂微粒的氨基化：向0.5g的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒中加入240mL无水甲苯，超声处理15min，然后加入10mL的3-氨丙基乙氧基硅烷，在氮气氛围保护下，于室温和搅拌速度为300r/min的条件下搅拌12h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，每次50mL，再用去离子水洗涤固体物质3次，每次50mL，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒；

五、双功能单体磁性纳米微球的制备：将40mg的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和5mL的摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合，室温下震荡5min，然后加入15g辛二酸二琥珀酰亚胺，于温度为4℃的条件下震荡6h，得到混合产物A，然后用摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物A至去除多余的辛二酸二琥珀酰亚胺，然后加入10g刀豆凝集素和5g3-氨基苯硼酸，于温度为4℃的条件下震荡12h，得到混合产物B，用摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物B至去除多余的刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，然后在温度为45℃的条件下真空干燥，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA，即双功能单体磁性纳米微球；

六、葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的合成：将5mL的葡萄糖溶液和40mg的步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA混合，于温度为40℃的条件下震荡1h，然后加入5mL的浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺，于室温下震荡2h，再加入1mL过硫酸铵和9mL的pH为5.0的磷酸盐缓冲液，在氮气氛围保护下，于温度为60℃的条件下震荡12h，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，用20mLpH为9.0的磷酸盐缓冲液洗脱去除模版分子至无葡萄糖检出，然后于温度为40℃的条件下真空干燥24h，得到GlucoseMIP磁性纳米微球，即葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的浓度为1mg/mL，所述的葡萄糖溶液的溶剂为pH为5.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；

步骤六中所述的过硫酸铵浓度为22.82mg/mL；

步骤六中所述的pH为5.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L；

步骤六中所述的pH为9.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L。

(一)通过场发射扫描电子显微镜对试验一得到的GlucoseMIP磁性纳米微球进行了形貌分析，得到如图1所示的试验一得到的GlucoseMIP磁性纳米微球的SEM图，从图1中可以看到，分子印迹聚合物表面粒径均一，分散均匀，而且呈球状。

(二)对试验一步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒和步骤六得到的GlucoseMIP磁性纳米微球进行扫描电镜EDS能谱检测，得到如图2所示的试验一步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的扫描电镜能谱图和如图3所示的试验一步骤六得到的GlucoseMIP磁性纳米微球的扫描电镜能谱图。

从图2中可以看到，Fe₃O₄SiO₂的EDS中只有Fe、O、Si三种元素，并无其他杂质，证明了磁纳米球硅烷基化改性成功。图3与图2相比，除了有Fe、O和Si元素的谱线外，又增加了B、N和S元素的谱峰，其中，B元素是接枝3-氨基苯硼酸得到的，证明双功能单体成功接枝到了磁纳米球上。

(三)GlucoseMIP磁性纳米微球磁性微球的IR分析，过程如下：

对试验一步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子、步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒、步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和步骤六得到的GlucoseMIP磁性纳米微球进行红外光谱检测，得到如图4所示的GlucoseMIP磁性纳米微球红外光谱谱图；其中曲线a代表步骤二，曲线b代表步骤三，曲线c代表步骤四，曲线d代表步骤六。

从图4中曲线a得出，该物质在577cm^-1波长处有明显的红外吸收峰，该波长的吸收峰为标准的Fe-O伸缩振动峰，属于Fe₃O₄的特征红外峰，磁纳米球的合成是成功的。

从图4中曲线b得出，577cm^-1波长的Fe₃O₄的特征吸收峰明显消弱，增加了波长802cm^-1、955cm^-1、1100cm^-1以及1642cm^-1和3400cm^-1几处红外峰，802cm^-1是Si-O-Si的弯曲振动吸收峰，955cm^-1属于Si-O的振动特征峰，1100cm^-1波长是Si-O-Si的反对称伸缩振动吸收峰，1642cm^-1和3400cm^-1附近是-OH伸缩振动峰，以上都是SiO₂结构的主要特征吸收峰，证明Fe₃O₄表面成功合成SiO₂层。

从图4中曲线c得出，在1424cm^-1处为-NH₂基团的特征吸收峰，说明Fe₃O₄SiO₂表面接枝了氨基基团。

从图4中曲线d得出，在3305cm^-1附近出现N-H伸缩峰，1568cm^-1附近出现N-H振动峰，1345cm^-1附近出现C-N振动峰，1380cm^-1处的B-O伸缩震动，这些峰都表明MMIPs的每一步合成反应都是成功的。

(四)对试验一的GlucoseMIP磁性纳米微球(MMIPs)进行吸附量检测，过程如下：准确称取40mg的试验一的GlucoseMIP磁性纳米微球(MMIPs)和40mg非分子印迹聚合物(MNIPs)，分别加入20mL的浓度为40mg/L的葡萄糖溶液分别进行震荡混合，其中所述的葡萄糖溶液的溶剂为pH为5.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，在震荡混合5min、10min、15min、20min、30min、40min、60min、80min、120min、150min、180min时用钕铁硼磁铁进行吸附，取1mL上清液，用苯酚-硫酸法测定不同吸附时间后上清液中葡萄糖溶液的浓度，根据公式(1)计算出MMIPs和MNIPs在不同时间内对葡萄糖的吸附量，绘制出MMIPs和MNIPs随时间变化时对葡萄糖的吸附量-时间曲线，如图5所示。

$Q=\frac{(C_0-C_t)V}{W}---\left(1\right)$

其中Q为对葡萄糖的吸附量(mg/g)；C₀为吸附前葡萄糖的初始浓度(mg/L)；C_t为不同时间间隔时葡萄糖的浓度(mg/L)；V为溶液的体积(20mL)；W为吸附剂的质量(40mg)。

其中非分子印迹聚合物(MNIPs)制备时不添加葡萄糖模板，其他步骤与制备MMIPs的方法相同。

从图5可得出，随着时间的增长，葡萄糖分子印迹聚合物的吸附量不断增大，40min时，MMIPs吸附量达到7.144mg/g，MNIPs吸附量达到2.378mg/g，80min后变化趋于稳定。MMIPs的饱和吸附量是9.111mg/g，MNIPs饱和吸附量在3.112mg/g，MMIPs与MNIPs的吸附趋势类似，但是吸附量却相差很大。

其中葡萄糖浓度的测定方法如下：

苯酚硫酸法测葡萄糖含量：本文选用苯酚-硫酸法来测定中葡萄糖的含量。葡萄糖在浓硫酸作用下，会水解生成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物会与苯酚缩合形成橙黄色化合物，该化合物颜色稳定，紫外分光光度仪检测最大吸收在波长490nm处，测得的吸光度与总糖含量线性相关，因此，可以利用紫外测定待测液吸光度，换算成待测液中糖的浓度。

(1)制作标准曲线：

①待测液由1mL缓冲溶液、1mL标准葡萄糖溶液、1mL苯酚和5mL浓硫酸混合而成；其中标准葡萄糖溶液的浓度依次为0mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L和80mg/L；其中所述的缓冲溶液为pH为9.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液。

②采用紫外光谱仪测待测液，选取波长为490nm处的紫外吸收峰值，以空白组做对照，其中空白组由2mL缓冲溶液、1mL苯酚和5mL浓硫酸混合而成；其中所述的缓冲溶液为pH为9.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液。测量吸光值操作重复三次取平均值，得标准曲线和回归方程，曲线图如图6所示，回归方程为Y＝0.0074X+0.0206；其中横坐标为葡萄糖含量(mg/L)，纵坐标为吸光值(Abs)，标准误差R²＝0.9949。

(2)样品含量测定：吸取样品液1.0mL按上述步骤操作，测光密度吸光度值，以标准曲线计算葡萄糖的含量。

(五)对试验一的GlucoseMIP磁性纳米微球(MMIPs)进行重复利用效率检测，过程如下：

准确称取40mg的GlucoseMIP，加入20mL的浓度为40mg/L的葡萄糖溶液，其中所述的葡萄糖溶液的溶剂为pH为5.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，震荡反应12h后，静置钕铁硼磁铁吸附，取上清液1mL，采用苯酚-硫酸法测定葡萄糖含量，重复5次，每次都计算GlucoseMIP的吸附量，并绘制出试验一的GlucoseMIP的重复利用率图，如图7所示。

结果：5次吸附量依次为：9.162mg/g，8.959mg/g，8.959mg/g，8.824mg/g，8.622mg/g。

从图7可知，经过五次的反复吸附GlucoseMIP的吸附量降低了5.9％，吸附能力的降低主要是因为分子印迹识别过程主要是通过三维空间空隙，而分子印迹经过反复的使用后，会使这些空隙阻塞，造成吸附能力的降低，所有在分子印迹应用过程中反复有效的洗脱尤为重要。实验结果也证明GlucoseMIP经过反复的使用对葡萄糖仍然具有很好的吸附能力。

Claims (10)

1.一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、制备水性超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子：将FeCl₃·6H₂O溶于乙二醇中，超声处理至无固体存在，然后加入无水乙酸钠，在搅拌速度为200r/min～400r/min的条件下搅拌25min～35min，转移至不锈钢反应釜中，在温度为180～220℃和搅拌速度为80r/min～120r/min的条件下反应11h～13h，停止反应，用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄磁性纳米粒子；

所述的FeCl₃·6H₂O的质量与乙二醇的体积的比为13.5g：(450～550)mL；所述的FeCl₃·6H₂O与无水乙酸钠的质量比为13.5：(35～37)；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与乙二醇的体积比为4：(4.5～5.5)；每次洗涤处理所用去离子水与乙二醇的体积比为4：(4.5～5.5)；

二、Fe₃O₄磁性纳米粒子的改性；向步骤一得到的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入盐酸和柠檬酸三钠，超声处理15min～25min，然后在温度为40～50℃的条件下真空干燥5h～7h，完成改性，得到带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤二中所述的盐酸与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：(4.5～5.5)；步骤二中所述的柠檬酸三钠与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：(4.5～5.5)；

三、Fe₃O₄磁性纳米粒子的硅烷化：向步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子中加入异丙醇和双蒸水，超声处理至分散均匀，然后以滴加速度为1.8mL/min～2.3mL/min逐滴加入氨水，滴加完毕后，再以滴加速度为1.8mL/min～2.3mL/min逐滴加入正硅酸乙酯，滴加完毕后，于室温下以搅拌速度为200r/min～400r/min搅拌10h～14h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄SiO₂微粒；

步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与异丙醇的体积的比为0.4g：(40～60)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与双蒸水的体积的比为0.4g：(3～5)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与氨水的体积的比为0.4g：(4～6)mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与正硅酸乙酯的体积的比为0.4g：(0.8～1.2)mL；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与异丙醇的体积比为5：(4.5～5.5)；每次洗涤处理所用去离子水与异丙醇的体积比为5：(4.5～5.5)；

四、Fe₃O₄SiO₂微粒的氨基化：向步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒中加入无水甲苯，超声处理10min～20min，然后加入3-氨丙基乙氧基硅烷，在氮气氛围保护下，于室温和搅拌速度为200r/min～400r/min的条件下搅拌10h～14h，停止反应，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，对得到的固体物质进行洗涤处理，所述的洗涤处理为：先用95％的乙醇洗涤固体物质3次，再用去离子水洗涤固体物质3次，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒；

步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与无水甲苯的体积的比为0.5g：(200～300)mL；步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与3-氨丙基乙氧基硅烷的体积的比为0.5g：(8～12)mL；

每次洗涤处理所用95％的乙醇与无水甲苯的体积比为50：(200～300)；每次洗涤处理所用去离子水与无水甲苯的体积比为50：(200～300)；

五、双功能单体磁性纳米微球的制备：将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合，室温下震荡5min～10min，然后加入辛二酸二琥珀酰亚胺，于温度为4℃的条件下震荡5h～7h，得到混合产物A，然后用摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物A至去除多余的辛二酸二琥珀酰亚胺，然后加入刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，于温度为4℃的条件下震荡11h～13h，得到混合产物B，用摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液清洗得到的混合产物B至去除多余的刀豆凝集素和3-氨基苯硼酸，然后在温度为40～50℃的条件下真空干燥，得到Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA，即双功能单体磁性纳米微球；

步骤五中所述的将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合时，其中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒的质量与摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液的体积的比为40mg：(4～6)mL；

步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与辛二酸二琥珀酰亚胺的质量比为40：(10～20)；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与刀豆凝集素的质量比为40：(8～12)；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与3-氨基苯硼酸的质量比为40：(4～6)；

六、葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的合成：将葡萄糖溶液和步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA混合，于温度为35～45℃的条件下震荡0.8h～1.2h，然后加入浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺，于室温下震荡1.5h～2.5h，再加入过硫酸铵和pH为5.0的磷酸盐缓冲液，在氮气氛围保护下，于温度为55～65℃的条件下震荡11h～13h，然后用钕铁硼磁铁进行磁力分离沉降，倒出上层液体后，用pH为9.0的磷酸盐缓冲液洗脱去除模版分子至无葡萄糖检出，然后于温度为35～45℃的条件下真空干燥22h～24h，得到GlucoseMIP，即葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的浓度为1mg/mL，所述的葡萄糖溶液的溶剂为pH为5.0和摩尔浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；

步骤六中所述的葡萄糖溶液的体积与步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA的质量的比为5mL：(35～45)mg；步骤六中所述的葡萄糖溶液与浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺的体积比为5：(4～6)；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与过硫酸铵的体积比为(4～6)：1；其中过硫酸铵浓度为22.82mg/mL；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为5.0磷酸盐缓冲液的体积比为(4～6)：9；其中pH为5.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L；

步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为9.0磷酸盐缓冲液的体积比为(4～6)：20，其中pH为9.0磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.02mol/L。

2.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O的质量与乙二醇的体积的比为13.5g：500mL；步骤一中所述的FeCl₃·6H₂O与无水乙酸钠的质量比为13.5：36。

3.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤二中所述的盐酸与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：5；步骤二中所述的柠檬酸三钠与步骤一中所述的乙二醇的体积比为1.2：5。

4.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤二中所述的盐酸的浓度为2mol/L。

5.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤二中所述的柠檬酸三钠的浓度为0.5mol/L。

6.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与异丙醇的体积的比为0.4g：50mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与双蒸水的体积的比为0.4g：4mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与氨水的体积的比为0.4g：5mL；步骤三中所述的步骤二得到的带正电荷的Fe₃O₄磁性纳米粒子的质量与正硅酸乙酯的体积的比为0.4g：1mL。

7.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与无水甲苯的体积的比为0.5g：240mL；步骤四中所述的步骤三得到的Fe₃O₄SiO₂微粒的质量与3-氨丙基乙氧基硅烷的体积的比为0.5g：10mL。

8.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤五中所述的将步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒和摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液混合时，其中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒的质量与摩尔浓度为50mmol/L的Na₂HPO₃缓冲液的体积的比为40mg：5mL。

9.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与辛二酸二琥珀酰亚胺的质量比为40：15；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与刀豆凝集素的质量比为40：10；步骤五中所述的步骤四得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂磁性纳米颗粒与3-氨基苯硼酸的质量比为40：5。

10.根据权利要求1所述的一种制备葡萄糖双功能单体磁性分子印迹聚合物的方法，其特征在于步骤六中所述的葡萄糖溶液的体积与步骤五得到的Fe₃O₄SiO₂NH₂APBA-ConA的质量的比为5mL：40mg；步骤六中所述的葡萄糖溶液与浓度为40mg/mL的N-N亚甲基双丙烯酰胺的体积比为5：5；步骤六中所述的葡萄糖溶液与过硫酸铵的体积比为5：1；步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为5.0磷酸盐缓冲液的体积比为5：9；步骤六中所述的葡萄糖溶液与pH为9.0磷酸盐缓冲液的体积比为5：20。