CN105177182B - 一种检测葡萄卷叶伴随病毒3号实时荧光pcr的dpo引物及试剂盒 - Google Patents
一种检测葡萄卷叶伴随病毒3号实时荧光pcr的dpo引物及试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种检测葡萄卷叶伴随病毒3号实时荧光PCR的DPO引物及试剂盒。本发明的DPO引物由SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子组成。通过实验证明：本发明的DPO引物特异性强、灵敏度高，而且运用本发明的葡萄卷叶伴随病毒3号的检测方法可以准确、简便和快速的检测葡萄卷叶伴随病毒3号，对进出口相关货物及产品检验检疫、病害防治预测具有指导意义。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测葡萄卷叶伴随病毒3号实时荧光PCR的DPO引物及试剂盒。
背景技术
葡萄卷叶病毒病(Grapevine leafroll-associated virus，GLRaV)是仅次于葡萄扇叶病毒病的一种世界性葡萄病毒病，在国内分布也较为普遍，田间感病率较高，对葡萄产量和品质影响很大，且引起该病的病毒是由多种病毒单独或复合侵染造成。现已报道的葡萄卷叶伴随病毒有11种，分别为GLRaV-1～9、GLRaV-Dr和GLRaV-De，我国已明确鉴定的葡萄卷叶伴随病毒种类共有6种，即GLRaV-1～5和GLRaV7。GLRaV已被证明属于典型的Clostero病毒，仅在韧皮部和叶片存在，其传播不是靠机械，通常是靠感染的母株或接穗等繁殖材料。GLRaV具有半潜隐性，对葡萄的生长发育有显著影响，通常会导致葡萄植株的生长衰弱、果实成熟延迟、果粒大小不均、着色不良、含糖量减少和产量下降。
目前，检测葡萄卷叶病毒的方法主要基于PCR的方法。但传统引物存在特异性不强、容易出现加阳性等缺点，而且传统PCR的结果判断需要电泳，增加了检测所需的时间。DPO(Dual priming oligonucleotide)引物技术的主要原理为其引物包含两个各自独立的特异性引物区域，5′端序列由18-25个碱基组成并与靶基因序列配对，3′端序列由6-12个碱基用来引导PCR反应的特异性延伸，这两段独立的特异性区域利用寡聚次黄嘌呤(Inosine,I)进行连接，由于次黄嘌呤比一般碱基的退火温度低，在退火时寡聚次黄嘌呤形成类似泡状的结构，从而使5′和3′区域形两个独立功能的双特异性引物结构，并且研究表明5′和3′引物区域中任何有3个及以上碱基的错配，PCR反应将不能进行。
SYBR Green I是一种小分子DNA染料，游离时不会发射任何荧光信号，但当与双链DNA特异地结合时，荧光染料掺入DNA双链，发射出强烈的荧光信号，同时PCR产物的特异性可以用熔解曲线分析进一步确认，利用SYBR Green I这一特性建立的实时荧光PCR在植物病原菌检测方面已广泛应用。DPO(Dual priming oligonucleotide)引物包含两个各自独立的特异性引物区域，5′端序列由18～25个碱基组成并与靶基因序列配对，3′端序列由6～12个碱基用来引导PCR反应的特异性延伸，这两段独立的特异性区域利用寡聚次黄嘌呤(Inosine，I)进行连接，由于次黄嘌呤比一般碱基的退火温度低，在退火时寡聚次黄嘌呤形成类似泡状的结构，从而使5′和3′区域形两个独立功能的双特异性引物结构，而且由于其特殊的结构，引物自身以及引物之间很少形成二级结构且对退火温度不敏感。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物。
本发明提供的检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物由SEQ ID No.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子组成。
本发明的另一个目的是提供一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的实时荧光PCR试剂。
本发明提供的检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的实时荧光PCR试剂包括上述DPO引物。
上述实时荧光PCR试剂中，所述引物1和所述引物2在所述实时荧光PCR试剂中的终浓度均为0.4μmol/L。
本发明还有一个目的是提供一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的试剂盒。
本发明提供的检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的试剂盒包括上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂。
本发明还有一个目的是提供上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒的新用途。
本发明提供了上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒在检测或辅助检测葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
本发明还提供了上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒在制备检测或辅助检测葡萄卷叶伴随病毒3号产品中的应用。
本发明还提供了上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒在检测或辅助检测待测样品是否感染葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
本发明还提供了上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品是否感染葡萄卷叶伴随病毒3号产品中的应用。
本发明还提供了上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒在检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
本发明还提供了上述DPO引物或上述实时荧光PCR试剂或上述试剂盒在制备检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的产品中的应用。
本发明的最后一个目的是提供一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的方法。
本发明提供的检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的方法包括如下步骤：
用上述DPO引物对待测病毒进行实时荧光PCR，并根据所述实时荧光PCR的扩增曲线图分析其Ct值大小；
若所述实时荧光PCR有荧光信号且Ct值小于等于35且大于0，则所述待测病毒为或候选为葡萄卷叶伴随病毒3号；
若所述实时荧光PCR无荧光信号或有荧光信号且Ct值大于35，则所述待测病毒不为或候选不为葡萄卷叶伴随病毒3号。
上述方法中，所述实时荧光PCR的模板为待测病毒的cDNA。
上述方法在检测或辅助检测葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明根据葡萄卷叶伴随病毒3号的HSP 70基因保守序列设计了特异性DPO引物，并将该特异性DPO引物和基于SYBR Green I的实时荧光PCR技术相结合，建立了一种葡萄卷叶伴随病毒3号的检测方法。通过实验证明：本发明的DPO引物特异性强、灵敏度高，而且运用本发明的葡萄卷叶伴随病毒3号的检测方法可以准确、简便和快速的检测葡萄卷叶伴随病毒3号，对进出口相关货物及产品检验检疫、病害防治预测具有指导意义。
附图说明
图1为葡萄卷叶伴随病毒3的实时荧光PCR的特异性检测。其中，1：葡萄卷叶伴随病毒3号；2：葡萄卷叶伴随病毒2号；3：沙地葡萄茎痘伴随病毒；4：葡萄斑点病毒；5：葡萄病毒A；6：阴性对照。
图2为葡萄卷叶伴随病毒3的实时荧光PCR的灵敏度检测。1-5分别为稀释度为100、10-1、10-2、10-3、10-4的葡萄卷叶伴随病毒3的cDNA模板。
图3为普通PCR灵敏度的检测。1-5分别为稀释度为100、10-1、10-2、10-3、10-4的葡萄卷叶伴随病毒3的cDNA模板。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll-associated virus3)在文献“王仲,刘命华,李捷,李明骏,程玉琴.3种葡萄卷叶伴随病毒RT-PCR检测[J].中国果树,2012,04:43-46.”中公开过，公众可从伊犁出入境检验检疫局获得。
下述实施例中的葡萄卷叶伴随病毒2号(Grapevine leafroll-associated virus2)在文献“赵静静,乾义柯,颉超,郭庆元,胡白石,陆平.引起葡萄黄化类症状的病毒和类病毒RT-PCR检测[J].新疆农业科学,2015,06:1099-1104”中公开过，公众可从伊犁出入境检验检疫局获得。
下述实施例中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(Grapevine rupestris stem pittingassociated virus)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus)及葡萄病毒A(Grapevinevirus A)均在文献“梁巧玲,乾义柯,张娜,陆平,刘绪斌.新疆三种葡萄病毒RT-PCR检测及序列分析[J].植物保护学报,2015,03:376-381.”中公开过，公众可从伊犁出入境检验检疫局获得。
实施例1、检测葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物及试剂盒
一、DPO引物的设计
根据葡萄卷叶伴随病毒3号的HSP 70基因，设计了检测葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物，扩增片段大小为115bp，引物由上海生工生物技术有限公司合成。具体序列如下：
上游引物PF-F：5′-ATGGACACTGCGGAGTTGGCIIIIICATTGAGG-3′(序列1)；
下游引物PF-R：5′-TCATGAGAGCACTCTGAGATTTGTCIIIIITACTGATA-3′(序列2)；
其中，I为次黄嘌呤。
二、用于检测葡萄卷叶伴随病毒3号的检测试剂盒及其使用方法
1、RNA的提取及cDNA的合成
参照试剂盒操作(植物总RNA提取试剂盒，货号为DP432，天根生物科技有限公司)提取感染了葡萄卷叶伴随病毒3号的葡萄叶片的RNA，并参照试剂盒(PrimeScript RT-PCRKit，货号为RR014A，TaKaRa)的操作，以获得的RNA为模板，反转录获得cDNA。将获得的cDNA保存于-20℃备用。
2、荧光定量PCR
以待测样品的cDNA为模板，采用PF-F和PF-R进行实时荧光PCR，得到PCR扩增产物。
荧光定量PCR扩增体系如表1所示；荧光定量PCR扩增的反应条件为：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火30s，72℃延伸30s，40个循环，在每个循环的72℃阶段结束后用Roche 480仪器(瑞士罗氏公司)检测荧光信号，根据SYBR Green I通道下的循环阈值(Ct值)进行判断。Premix DimerEraser(2×conc.)是宝生物工程(大连)有限公司的产品(货号为RR091A)，Premix DimerEraser(2×conc.)含有DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、SYBR Green I和反应缓冲液。
表1、荧光定量PCR扩增的反应体系
3、结果判定
若实时荧光PCR有荧光信号且Ct值小于等于35且大于0，则待测病毒为或候选为葡萄卷叶伴随病毒3号；
若实时荧光PCR无荧光信号或有荧光信号且Ct值大于35，则待测病毒不为或候选不为葡萄卷叶伴随病毒3号。
实施例2、检测葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物的特异性检测
1、RNA的提取和cDNA的合成
参照实施例1的步骤二中的RNA的提取及cDNA的合成方法，分别从感染了葡萄卷叶伴随病毒3号的葡萄叶片、感染了葡萄卷叶伴随病毒2号的葡萄叶片、感染了沙地葡萄茎痘伴随病毒的葡萄叶片、感染了葡萄斑点病毒的葡萄叶片和感染了葡萄病毒A的葡萄叶片中制备得到葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA、葡萄卷叶伴随病毒2号的cDNA、沙地葡萄茎痘伴随病毒的cDNA、葡萄斑点病毒的cDNA和葡萄病毒A的cDNA。
2、实时荧光PCR
分别以如下6组的cDNA为模板，采用实施例1中设计的引物PF-F和PF-R，参考实施例1中步骤二中的方法进行实时荧光PCR。
组1：以含葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA(1μL)为模板；
组2：以含葡萄卷叶伴随病毒2号的cDNA(1μL)为模板；
组3：以含沙地葡萄茎痘伴随病毒的cDNA(1μL)为模板；
组4：以含葡萄斑点病毒的cDNA(1μL)为模板；
组5：以含葡萄病毒A的cDNA(1μL)为模板；
组6：以水(1μL)为模板。
上述实时荧光PCR扩增的反应体系如表1所示。上述实时荧光PCR扩增的反应条件为：95℃ 60s；95℃ 5s，60℃ 30s，72℃ 30s，40个循环，在每个循环的72℃阶段结束后收集荧光信号，根据SYBR Green I通道下的循环阈值(Ct值)进行判断。
若实时荧光PCR有荧光信号且Ct值小于等于35且大于0，则待测病毒为或候选为葡萄卷叶伴随病毒3号；
若实时荧光PCR无荧光信号或有荧光信号且Ct值大于35，则待测病毒不为或候选不为葡萄卷叶伴随病毒3号。
3、检测结果
5个供试毒株的实时荧光PCR特异性检测结果如图1所示：仅组1的葡萄卷叶伴随病毒3的荧光信号增加，表现为阳性扩增，而供试的其它菌株都没有检测到荧光信号的增加，阴性对照也没有检测到荧光信号增加，结果表现为阴性。试验结果表明，本发明的引物特异性好，SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法能够对葡萄卷叶伴随病毒3进行特异性检测。
实施例3、检测葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物的灵敏度检测
1、RNA的提取
参照实施例1的步骤二中的RNA的提取及cDNA的合成方法，从感染了葡萄卷叶伴随病毒3号的葡萄叶片样品中制备得到含葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA。将得到的cDNA进行梯度稀释，分别得到稀释度为100、10-1、10-2、10-3、10-4的葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA。
2、实时荧光PCR扩增
分别以上述稀释度分别为100、10-1、10-2、10-3、10-4的葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA为模板，采用PT-F引物和PT-R引物进行实时荧光PCR扩增。实时荧光PCR扩增的反应体系和反应条件同上述实施例2。
3、普通PCR扩增
分别以上述步骤1得到的稀释度为100、10-1、10-2、10-3、10-4的葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA为模板，采用引物P3U/P3D进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。引物序列如下：
P3U：5′-CGCTCATGGTGAAAGCAGACG-3′；
P3D：5′-CTTAGAACAAAAATATGGAGCAG-3′。
PCR扩增的体系和反应条件参考文献“Genetic variability and populationstructure of Grapevine leafroll-associated virus 3isolates”中的方法。
PCR反应结束后，取5μL的PCR扩增产物于1.5％琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统上观察结果。
4、检测结果
实时荧光PCR灵敏度的检测结果如图2所示：从图中可以看出，当葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA浓度稀释到10-4时，CT值在30～35之间，表现为阳性扩增。
普通PCR灵敏度的检测结果如图3所示：从图中可以看出：当葡萄卷叶伴随病毒3号的cDNA浓度稀释到10-3时，有微弱条带扩增。说明本发明的基于PF-F/PF-R引物组的实时荧光PCR法比基于P3U/P3D引物的普通PCR法的灵敏度至少高10倍。
Claims (12)
1.一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的DPO引物，由SEQ IDNo.1所示的单链DNA分子和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子组成。
2.一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的实时荧光PCR试剂，包括权利要求1所述的DPO引物。
3.一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的试剂盒，包括权利要求1所述的DPO引物或权利要求2所述的实时荧光PCR试剂。
4.权利要求1所述的DPO引物或权利要求2所述的实时荧光PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在检测或辅助检测葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
5.权利要求1所述的DPO引物或权利要求2所述的实时荧光PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在制备检测或辅助检测葡萄卷叶伴随病毒3号产品中的应用。
6.权利要求1所述的DPO引物或权利要求2所述的实时荧光PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样品是否感染葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
7.权利要求1所述的DPO引物或权利要求2所述的实时荧光PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品是否感染葡萄卷叶伴随病毒3号产品中的应用。
8.权利要求1所述的DPO引物或权利要求2所述的实时荧光PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
9.权利要求1所述的DPO引物或权利要求2或3所述的实时荧光PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的产品中的应用。
10.一种检测或辅助检测待测病毒是否为葡萄卷叶伴随病毒3号的方法，包括如下步骤：
用权利要求1所述的DPO引物对待测病毒进行实时荧光PCR，并根据实时荧光PCR的扩增曲线图分析其Ct值大小；
若所述实时荧光PCR有荧光信号且Ct值小于等于35且大于0，则所述待测病毒为或候选为葡萄卷叶伴随病毒3号；
若所述实时荧光PCR无荧光信号或有荧光信号且Ct值大于35，则所述待测病毒不为或候选不为葡萄卷叶伴随病毒3号。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述实时荧光PCR的模板为待测病毒的cDNA。
12.权利要求10或11所述的方法在检测或辅助检测葡萄卷叶伴随病毒3号中的应用。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103215372A (zh) * | 2013-05-08 | 2013-07-24 | 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 基于dpo引物检测布氏杆菌的引物序列及其检测试剂盒 |
| CN103952483A (zh) * | 2014-04-21 | 2014-07-30 | 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 利用dpo-pcr方法检测溶藻弧菌的dpo引物序列及检测试剂盒 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN103952483A (zh) * | 2014-04-21 | 2014-07-30 | 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 利用dpo-pcr方法检测溶藻弧菌的dpo引物序列及检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
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| 应用 DPO 引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重 RT-PCR方法;徐焕洲;《中国国境卫生检疫杂志》;20120430;第35卷(第2期);73-77 |
| 应用DPO引物检测马铃薯病毒的多重RT-PCR技术研究;刘梅;《植物病理学报》;20091231;第39卷(第4期);431-434 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Wei Shuang Inventor after: Liu Zhongyong Inventor after: Qian Yike Inventor after: Zhang Na Inventor after: Liang Qiaoling Inventor after: Lu Ping Inventor after: Zhang Xianglin Inventor after: Hu Baishi Inventor after: Chen Weimin Inventor after: Wei Frost, Qianyi Kezhang Na, Liang Qiaoling, Lu Ping, Zhang Xianglin, Hu Baishi, Chen Weimin, Seir Khan, Liu Zhongyong Inventor before: Qian Yike Inventor before: Liu Zhongyong Inventor before: Wei Shuang Inventor before: Zhang Na Inventor before: Liang Qiaoling Inventor before: Lu Ping Inventor before: Zhang Xianglin Inventor before: Hu Baishi Inventor before: Chen Weimin Inventor before: Qianyi Kewei Frost Zhang Na Liang Qiaoling Lu Ping Zhang Xianglin Hu Baishi Chen Weimin Seir Khan Liu Zhongyong |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20181221 Address after: 510623 block B, Guangdong check tower, 66 Huacheng Road, Zhujiang New Town, Guangzhou, Guangdong. Applicant after: Guangdong Inspection & Quarantine Technology Center of Guangdong Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau Address before: No. 304 Yili River Road, Yining City, Yili Kazakh Autonomous Prefecture, Xinjiang Uygur Autonomous Region, 835000 Applicant before: Comprehensive Technology Service Center, Yili Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau Applicant before: Yili Normal University |
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| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190212 Termination date: 20200901 |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |