CN105008370A - 作为cftr抑制剂的三环化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式I的化合物或其可药用盐；及其治疗用途，例如治疗腹泻的用途。本发明还提供了药理学活性剂的组合和药物组合物。

Description

作为CFTR抑制剂的三环化合物
发明领域
本发明提供了三环化合物，其用于抑制CFTR通道的用途和使用其治疗疾病的方法。
发明背景
囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)是cAMP-活化的氯离子通道，其在哺乳动物的气道、肠、胰腺和睾丸中的上皮细胞中表达(Sheppard等,Physiol.Rev.79:S23-45(1999)；Gadsby等,Nature 40:477-83(2006))。已知CFTR氯离子通道与包括囊性纤维化(CF)、多囊性肾病和分泌性腹泻的多种疾病和病症相关。
腹泻性痢疾仍然属于有高度未满足的医学需求的领域，在2002年导致约2百万例死亡，其中超过95％是5岁下的儿童。差的卫生环境和密闭的居住条件导致的传染性分泌性腹泻是大多数急性发作的原因，且明确需要附加疗法与现有的口服补液和抗生素疗法组合使用。
Thiagarajah和Verkman在Clinical Pharmacology and Therapeutics(2012)：92,3,287-290中讨论了CFTR抑制剂。
发明概述
需要提供新的CFTR抑制剂作为好的候选药物。特别地，本发明的化合物应当有效地结合于囊性纤维化跨膜传导调节蛋白，而对其他受体几乎不具有亲和力，并显示作为CFTR抑制剂的功能性活性。它们应当被胃肠道良好吸收、代谢稳定且具有有利的药代动力学性质。进一步地，理想的候选药物将以稳定、非吸湿且容易配制的物理形式存在。
本发明的化合物是CFTR通道的高亲和性抑制剂，且因此可能用于治疗广泛的障碍、特别是多囊性肾病和腹泻(包括传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS))。
多囊性肾病和腹泻的治疗是所考虑的用途。本发明的化合物潜在地可治疗所有形式的多囊性肾病和腹泻，包括传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS)。
本发明因此提供了作为实施方案1的式(I)的化合物或其可药用盐:
其中R1表示苯基、(C4-C7)环烯基或Het1，所述R1基团可以是未被取代的或在一个或两个碳原子被取代基Ra取代，还可以在氮原子上被取代基Ra1取代；
Ra各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、R6OC(O)-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
Ra1表示(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、芳基(C1-C4)烷基-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
R2表示(C1-C6)烷基、(C3-C7)环烷基、(C4-C7)环烯基、苯基、呋喃基、噻唑基、噻吩基或吡唑基，所述R2可以是未被取代的或在1至3个碳原子上被取代基Rb取代，还可以在氮原子上被(C1-C4)烷基取代；
Rb各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、(R6)2NC(O)(C1-C4)烷基-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
X表示O、NH或NMe；或
X表示–CH2-O-，其中所述O原子连接于环的–C(R4)(R4’)原子；
R3各自独立地表示甲基或乙基；
R4表示氢、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、氨基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、苯基、Het1(C1-C4)烷基-、Het2(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基S(O)2NH(C1-C4)烷基-、或R7C(O)NH(C1-C4)烷基-；
R4’表示H或甲基；
R4a表示氢、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、Het1(C1-C4)烷基-、Het2(C1-C4)烷基-、或R6OC(O)-；
R6表示氢、(C1-C4)烷基；
R7表示(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷氧基、(C1-C2)烷氧基(C1-C2)烷基或苯基；
Het1表示5-或6-元的杂芳基环，其包含a)一个氧或硫原子，且任选地包含一个或两个氮原子；或b)1至4个氮原子；且
Het2表示4-至7-元的杂环，其包含a)1或2个选自N、O和S的杂原子；或b)–C(O)-和1或2个选自N和O的杂原子。
在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其可药用盐或其亚式以及一种或多种可药用载体。
在另一个实施方案中，本发明提供了包含治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其可药用盐或其亚式以及一种或多种治疗活性剂的组合产品、特别是药物组合产品。
在另一个实施方案中，本发明提供了在个体中调节CFTR活性的方法，其中所述方法包括向个体施用治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其可药用盐或其亚式。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗选自多囊性肾病和腹泻的障碍或疾病的方法，其包括向个体施用治疗有效量的根据式(I)定义的化合物或其可药用盐或其亚式。
发明详述
本发明因此提供了作为实施方案1的上文所述的式(I)的化合物。
除非另外指出，术语“本发明的化合物”是指式(I)和式(Ia)的化合物、所述化合物的盐、所述化合物的水合物或溶剂化物、以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代)。本发明的化合物还包括式I和式(Ia)的化合物的多晶型物及其盐。
出于解释本说明书的目的，将采用如下定义，并且当适用时，以单数形式使用的术语也包括复数，反之亦然。
本文使用的术语“C1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的完全饱和的支链或直链的烃基。术语“C1-4烷基”和“C1-2烷基”做相应的解释。C1-6烷基的代表性的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基和正庚基。
本文所用的术语“卤代C1-6烷基”是指其中至少一个氢原子被卤素原子代替的本文所定义的C1-6烷基。该卤代C1-6烷基可以是单卤代C1-6烷基、二卤代C1-6烷基或包括全卤代C1-6烷基在内的多卤代C1-6烷基。单卤代C1-6烷基可以在烷基内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代C1-6烷基和多卤代C1-6烷基可以在烷基内具有两个或更多个相同的卤素原子或不同卤素基团的组合。多卤代C1-6烷基典型地包含最多12、或6、或8、或6、或4、或3或2个卤素基团。卤代C1-6烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代C1-6烷基是指所有的氢原子都被卤素原子代替的C1-6烷基。
术语“芳基”是指在环部分具有6-20个碳原子的芳族烃基。芳基典型地是具有6-20个碳原子的单环、二环或三环芳基，并且包括与一个或多个非芳族烃环稠合的一个或多个芳族环。非限制性的实例包括苯基、萘基或四氢萘基。
本文使用的术语“C1-6烷氧基”是指C1-6烷基-O-，其中C1-6烷基如上文所定义。C1-1烷氧基的代表性的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。
本文使用的术语“Het2”或“杂环”是指饱和的或不饱和的非芳族环或环系统，其是4-、5-、6-或7-元的单环的环，包含a)1或2个选自N、O和S的杂原子；或b)–C(O)-和1或2个选自N和O的杂原子。杂环基可以通过杂原子或碳原子进行连接。杂环的实例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1、4-二噁烷、吗啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫杂环戊烷、二硫戊环、1,3-二噁烷、1,3-二噻烷、氧硫杂环己烷、吡咯烷酮基(pyrrolidinonyl)、噁唑烷酮基(oxazolidinonyl)和硫吗啉。
术语“C3-7环烷基”是指具有3-7个碳原子的完全饱和的或不饱和的单环烃基。示例性的单环烃基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基和环己烯基。
本文使用的术语“Het1”或“杂芳基环”是指为5-或6-元的单环的芳族环系统，其包含a)一个氧或硫原子，且任选地包含一个或两个氮原子；或b)1至4个氮原子。典型的杂芳基环包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-或5-咪唑基、3-、4-或5-吡唑基、2-、4-或5-噻唑基、3-、4-或5-异噻唑基、2-、4-或5-噁唑基、3-、4-或5-异噁唑基、3-或5-(1,2,4-三唑基)和4-或5-(1,2,3-三唑基)、四唑基、嘧啶基和吡啶基。
本文使用的术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴和碘。
本文描述了本发明的各种(例举的)实施方案。应确定的是在每个实施方案中具体指出的特征可以与其他列举的特征组合，来提供本发明的另外的实施方案。
实施方案2.式(I)的化合物或其可药用盐:
其中R1表示苯基、(C4-C7)环烯基或Het1，所述R1基团可以是未被取代的或在一个或两个碳原子被取代基Ra取代，还可以在氮原子上被取代基Ra1取代；
Ra各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、R6OC(O)-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
Ra1表示(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、芳基(C1-C4)烷基-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
R2表示(C1-C6)烷基、(C3-C7)环烷基、(C4-C7)环烯基、苯基、呋喃基、噻唑基、噻吩基或吡唑基，所述R2可以是未被取代的或在1至3个碳原子上被取代基Rb取代，还可以在氮原子上被(C1-C4)烷基取代；
Rb各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、(R6)2NC(O)(C1-C4)烷基-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
X表示O、NH或NMe；
R3各自独立地表示甲基或乙基；
R4表示氢、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、氨基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-或苯基；
R4a表示氢、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、Het2(C1-C4)烷基-或R6OC(O)-；
R6表示氢、(C1-C4)烷基；
Het1表示5-或6-元的杂芳基环，其包含a)一个氧或硫原子，且任选地包含一个或两个氮原子；或b)1至4个氮原子；且
Het2表示4-至7-元的杂环，其包含1或2个选自N、O和S的杂原子。
实施方案3.根据实施方案1或实施方案2的化合物，其中X表示O。
实施方案4.根据任何前述权利要求的化合物，其中R1表示苯基、环己烯基、噻唑基、吡唑基、噻吩基、嘧啶-2-基或吡啶-2-基，且其中R1可以是未被取代的或在一个或两个碳原子上被取代基Ra取代，还可以在氮原子上被取代基Ra1取代。
实施方案5.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R1表示噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻吩-2-基或吡唑-4-基，所述R1基团可以是未被取代的或在一个或两个碳原子被取代基Ra取代，还可以在氮原子上被取代基Ra1取代
实施方案6.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R1表示苯基，其可以是未被取代的或被1或2个取代基Ra取代。
实施方案7.根据实施方案6的化合物，其中所述Ra取代基位于3-位、2-和3-位、3-和4-位、3-和5-位或3-和6-位。
实施方案8.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中Ra各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、(C1-C4)烷氧基、R6OC(O)-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-。
实施方案9.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R2表示苯基、呋喃基、噻唑基、噻吩基或吡唑基，所述R2可以是未被取代的或在1至3个碳原子上被取代基Rb取代，还可以在氮原子上被(C1-C4)烷基取代。
实施方案10.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中Rb各自独立地表示(C1-C2)烷基、卤代、卤代(C1-C2)烷基或氰基。
实施方案11.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中Rb各自独立地表示甲基、乙基、溴、氯、氟、三氟甲基或氰基。
实施方案12.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R3各自表示甲基。
实施方案13.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R4表示氢、甲基、苯基或HOCH2-。
实施方案14.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R4a表示氢或甲基。
实施方案15.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中R6表示氢、甲基或乙基。
实施方案16.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中所述化合物为式(Ia)化合物:
实施方案17.根据前述实施方案中任意一项的化合物，其中式(I)的化合物是外消旋物或具有如式(Ia)中所示的立体化学。
实施方案18.式(I)或式(Ia)的化合物，其选自:
实施例1.1
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.4
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.5
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.6
10-(4-溴噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.7
1,3-二甲基-5-苯基-10-(噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.8
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻吩-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.9
1,3-二甲基-5-苯基-10-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.10
10-(5-乙基呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.11
5-(4-氟苯基)-1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.12
1,3-二甲基-10-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.13
1,3-二甲基-10-(5-甲基噻吩-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.14
10-(2,3-二氟苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.15
1,3-二甲基-5,10-二苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.16
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(间甲苯基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.17
10-(环己-3-烯-1-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.18
10-(4-溴呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.19
3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-10-基)苄腈；
实施例1.20
10-(呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.21
1,3-二甲基-10-(2-甲基噻唑-4-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.22
10-(4-氟苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.23
10-(4-氯苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例1.24
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
实施例1.25
3-(1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
实施例1.26
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.1
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.2
10-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.3
10-(5-乙基呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.4
1,3-二甲基-5-苯基-10-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.5
10-(2,3-二氟苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.6
10-环己基-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.7
10-(呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.8
1,3-二甲基-5,10-二苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例2.9
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
实施例2.10
3-(1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
实施例3.1
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例3.2
5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例3.3
5-(3-甲氧基苯基)-1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例3.4
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-甲氧基苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例3.5
5-(3,5-二甲基苯基)-1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例3.6
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3,5-二甲基苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例3.7
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1’,2’:1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苯甲酸甲酯；
实施例3.8
3-(1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1’,2’:1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苯甲酸甲酯；
实施例3.9
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(3-(三氟甲基)苯基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例4.1
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例4.4
10-(5-溴呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例4.5
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例4.6
10-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例4.7
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
实施例5.0
1,3,7-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例6.0
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例6.1
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈；
实施例7.0
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例7.1
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例7.2
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例7.3
10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例8.0
5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例8.1
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例9a
3-(10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈；
实施例10
10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例11a
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例12
1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12.1
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8-三甲基-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12.2
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12.3
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5,8-二苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12.4
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12.5
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8,8-四甲基-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例13
11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例14
3-(11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈；
实施例15
8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例16
(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
及其可药用盐。
实施方案19.式(I)或式(Ia)的化合物，其选自:
实施例6
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮：
实施例8.0a
5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例7.0a
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例8.1a
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例6.1
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈；
实施例11a
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例12.2
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12.4
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例12
1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例7.1a
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
及其可药用盐。
实施方案20.式(I)或式(Ia)的化合物，其选自:
实施例6
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮：
实施例8.0a
5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例7.0a
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例8.1a
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
实施例6.1
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈；
实施例11a
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
实施例12.2
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
及其可药用盐。
本文所用的术语“光学异构体”或“立体异构体”指对于给定的本发明化合物而言可以存在的各种立体异构构型中的任何一种并且包括几何异构体。应当清楚的是，取代基可以被连接在碳原子手性中心上。术语“手性”是指与其镜像无法重叠的分子，而“非手性”是指与其镜像可重叠的分子。因此，本发明包括所述化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是彼此为不可重叠的镜像的一对立体异构体。一对对映异构体的1:1的混合物是“外消旋的”混合物。在适宜的情况中用该术语来命名外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子，但不是彼此的镜像的立体异构体。根据Cahn-lngold-Prelog R-S系统来指定绝对立体化学。当一种化合物是纯对映异构体时，各手性碳上的立体化学可以被指定为R或S。根据在钠D线波长下旋转平面偏振光的方向(右-或左旋)，可以将绝对构型未知的拆分化合物命名为(+)或(-)。本文所述的某些化合物包含一个或多个不对称中心或轴，因此，可以产生对映异构体、非对映异构体、和可以根据绝对立体化学被定义为(R)-或(S)-的其它立体异构形式。
根据起始材料和工艺步骤选择的不同，化合物可以以一种可能的异构体形式或者作为混合物形式存在，例如作为纯的光学异构体，或作为异构体混合物如外消旋体和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子数量。本发明意欲包括所有可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间的混合物。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以用手性合成子或手性试剂来制备，或者可以用常规技术进行拆分。如果该化合物包含双键，则取代基可以为E或Z构型。如果该化合物包含二取代的环烷基，则该环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。也意欲包括所有的互变异构形式。
本文所用的术语“盐”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“可药用盐”。术语“可药用盐”是指保留了本发明化合物的生物有效性和性质，并且通常在生物学或其它方面不会不受欢迎的盐。在许多情况中，本发明的化合物能凭借存在的氨基和/或羧基或与其类似的基团形成酸和/或碱盐。
可以由其获得盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以由其获得盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
可以用无机碱和有机碱形成可药用的碱加成盐。
可由其获得盐的无机碱包括例如铵盐和元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施方案中，该盐得自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适宜的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。
可由其获得盐的有机碱包括例如伯、仲和叔胺、包括天然存在的被取代的胺在内的被取代的胺、环形胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、N,N’-二苄基乙二胺(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨基丁三醇。
在另一个方面，本发明提供了作为实施方案21的根据实施方案1至20中任意一项的式(I)的化合物或其可药用盐，其为乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
实施方案22.根据实施方案1至20中任意一项的式(I)的化合物或其可药用盐，其为钠、钾、铵、镁、铁、银、锌、铜、异丙基胺、N,N’-二苄基乙二胺、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨丁三醇盐形式。
本发明可药用盐可以由碱性或酸性结构部分，用常规化学方法来进行合成。一般而言，该盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应典型地是在水或有机溶剂或二者的混合物中进行的。一般而言，在可行的情况中，希望使用非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington's Pharmaceutical Sciences”,第20版,MackPublishing Company,Easton,Pa.,(1985)；和“Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”，Stahl和Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)中可以找到其它适宜盐的列表。
文中给出的任何结构式还意欲代表未标记形式以及同位素标记形式的化合物。除了一个或多个原子被具有所选择的原子质量或原子数的原子替换外，同位素标记的化合物具有文中所给出的结构式描述的结构。可以掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明包括各种同位素标记的本文中所定义的化合物，例如其中存在放射性同位素例如3H和14C的那些，或其中存在非放射性同位素的那些，例如2H和13C。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术例如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机体层摄影(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射治疗。具体来讲，18F或标记的化合物可能特别适于PET或SPECT研究。通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与附带的实施例和制备例中所述的方法类似的方法、使用适宜的同位素标记的试剂替代之前使用的非标记的试剂来制备同位素标记的式(I)化合物。
此外，用较重的同位素特别是氘(即，2H或D)取代可提供由更高的代谢稳定性产生的某些治疗优点，例如体内半衰期增加或剂量需求降低或治疗指数改善。应当理解，在本文中将氘认为是式(I)化合物的取代基。所述较重的同位素特别是氘的浓度可以用同位素富集因子来定义。本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定的同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物中的取代基指明为氘，对于每一指定的氘原子，所述化合物具有至少3500(在每一指定的氘原子处52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。
本发明的可药用溶剂化物包括其中结晶溶剂可能被同位素取代(例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO)的那些溶剂化物。
包含能够充当氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物即式(I)化合物可能能够与适当的共晶形成剂形成共晶。这些共晶可以由式(I)化合物通过已知的共晶形成操作来制备。此类操作包括研磨、加热、共升华、共熔或在结晶条件下使式(I)化合物与共晶形成剂在溶液中接触且分离如此形成的共晶。适当的共晶形成剂包括如WO 2004/078163中所述的那些。因此本发明还提供包含式(I)化合物的共晶。
如本领域技术人员已知的，本文所用的术语“可药用载体”包括任意的和所有的溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等张剂(isotonic agent)、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等以及它们的组合(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Printing Company,1990,第1289-1329页)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则其在治疗或药物组合物中的应用将被考虑。
术语本发明化合物的“治疗有效量”是指将引起个体的生物学或医学响应，例如降低或抑制酶或蛋白活性、或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进程、或预防疾病等的本发明化合物的量。
在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当被施用给个体时，有效地产生如下效果的本发明化合物的量：(1)至少部分缓解、抑制、预防和/或改善(i)由CFTR介导的或(ii)与CFTR活性相关的或(iii)特征为CFTR的活性(正常或异常)的病症或障碍或疾病或者(2)降低或抑制CFTR的活性。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当被施用于细胞、或组织、或非细胞生物材料、或介质时，有效地至少部分降低或抑制CFTR活性；或至少部分降低或抑制CFTR表达的本发明化合物的量。
本文所用的术语“个体”是指动物。该动物典型地是哺乳动物。个体也指例如灵长类动物(例如人、男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔子、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，该个体是灵长类动物。在另一个实施方案中，该个体是人。
本文所用的术语“抑制”是指减少或阻抑给定的情况、症状或障碍或疾病，或生物学活动或过程的基础活性的显著降低。
本文所用的术语任何疾病或障碍的“治疗”在一个实施方案中是指疾病或障碍的改善(即，减缓或阻止或降低疾病或者至少一种其临床症状的发展)。在另一个实施方案中，治疗是指缓解或改善至少一种物理参数，包括那些患者可能不能辨别的参数。在另一个实施方案中，治疗是指在身体上(例如稳定可辩别症状)或生理上(例如稳定物理参数)或同时在身体上和生理上对疾病或障碍进行调控。在另一个实施方案中，治疗是指阻止或延迟疾病或障碍的发作或发展或进展。
如本文所用的那样，如果个体将在生物学、医学或生活质量方面从该治疗获益，则该个体是“需要”治疗的。
除非在本文中有相反指示或者与上下文的内容明显相悖，否则本文所用的单数形式的术语、“所述”、“该”以及本发明的上下文(尤其是权利要求的上下文)中所用的类似术语被解释为既包括单数形式又包括复数形式。
除非在本文中有相反指示或者与上下文的内容明显相悖，否则本文所述的所有方法都可以以任何适宜的次序来进行。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“诸如”、“如”)均意指仅仅是为了对本发明进行更好的说明，并不是要对本发明所要保护的范围进行限制。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)都可以以外消旋或对映异构体富集的形式，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％的对映异构体过量、至少60％的对映异构体过量、至少70％的对映异构体过量、至少80％的对映异构体过量、至少90％的对映异构体过量、至少95％的对映异构体过量或至少99％的对映异构体过量。如果可能的话，位于具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用的那样，本发明化合物可以为可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体之一或其混合物的形式，例如为基本纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、旋光异构体(对映异构体)、外消旋体或其混合物的形式。
可以根据组分理化性质的差异将任何所得的异构体混合物分离成纯或基本纯的几何异构体或旋光异构体、非对映异构体、外消旋体，例如，通过色谱法和/或分级结晶来进行分离。
可以用已知的方法将所得的任何终产物或中间体的外消旋体拆分成光学对映异构体，例如，通过对用光学活性的酸或碱获得的其非对映异构的盐进行分离，然后释放光学活性的酸性或碱性化合物来进行拆分。特别是，因此可以利用碱性部分来将本发明化合物拆分成其光学对映异构体，例如通过对用光学活性的酸形成的盐进行分级结晶来进行拆分，所述光学活性的酸有例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对-甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。也可以用手性色谱，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱(HPLC)对外消旋产物进行拆分。
此外，本发明化合物、包括它们的盐还可以以它们的水合物形式获得，或者包括用于其结晶的其它溶剂。本发明化合物可以固有地或通过设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。术语“溶剂化物”是指本发明化合物(包括其可药用盐)和一个或多个溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是在药学领域中经常使用的那些，已知其对接受者是无毒的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的所述复合物。
本发明化合物，包括其盐、水合物和溶剂化物，可以固有地或通过设计形成多晶型物。
通常，式(I)的化合物可以根据下文提供的流程制备。
可根据流程1制备式(I)的化合物，其中X是NH，R4是H，且R1、R2、R3和R4a如上文所定义。
流程1
其中R表示甲基或异丙基；E表示I和G1表示硼酸或硼酸酯；或E表示B(OH)2，且G1表示Cl、Br、I或OTf。
步骤1(i) 可通过在适合的碱、诸如在DMSO/THF中的氢化钠或在2-甲基-THF中的叔丁醇钾的存在下将适合的嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮与1-(异氰基甲基)磺酰基)-4-甲基苯反应，制备式(II)的中间体。
步骤1(ii) 可通过在适合的碱、诸如在THF中的NaH的存在下用1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯-2,2-二氧化物进行式(II)的中间体的N-烷基化，制备式(III)的中间体。
步骤1(iii) 可从式(III)的中间体在适合的碱、诸如LDA或BuLi的存在下通过与适合的亲电试剂、诸如I2或B(OR)3反应，制备式(IV)的中间体。技术人员将会意识到该C5-锂化的物质(lithiated species)可以是在适合的亲电试剂的存在下预先形成或原位形成。
步骤1(iv) 可从式(IV)的中间体在适合的钯催化剂、诸如四-(三苯基膦)钯(0)或1,1”双(二-叔丁基膦基)二茂铁氯化钯(Johnson Matthey PD-118)的存在下通过与式R1-G1的化合物进行铃木交叉偶联反应，制备式(V)的中间体。
步骤1(v) 可从式(V)的中间体通过在适合的酸、诸如TFA的存在下除去BOC保护基团，制备式(VI)的中间体。
步骤1(vi) 从式(VI)的中间体通过应用加热与所需的醛在适合的溶剂诸如乙醇中、任选地在催化的质子酸、诸如TFA的存在下反应，可制备式(I)的化合物。
可根据流程2制备式(I)的化合物，其中X、R1、R2、R3、R4和R4a如上文所定义。
流程2
其中G2表示卤化物，优选溴化物。
步骤2(i) 可通过将式(VII)的中间体与所需的单-保护的二胺在适合的碱、诸如在乙醇中的三乙胺的存在下反应，制备式(VIII)的中间体。
步骤2(ii) 可在适合的酸、诸如TFA的存在下进行式(VIII)的中间体的脱保护，得到式(IX)的中间体。
步骤2(iii) 可从式(IX)的中间体通过应用加热与所需的醛在适合的溶剂诸如乙醇中、任选地在催化的质子酸诸如TFA的存在下反应，制备式(I)的化合物。
步骤2(iv) 可通过将式(VII)的中间体与所需的氨基醇在适合的碱、诸如在乙醇中的三乙胺的存在下反应，制备式(X)的中间体。
步骤2(v) 可从式(X)的中间体通过与所需的醛在路易斯酸、诸如三氟甲磺酸铋的存在下、在适合的溶剂中反应，制备式(I)的化合物。
式(VII)的中间体可根据流程3制备。
流程3
步骤3(i)和(ii)以两步骤方法通过醋酸酐和二甲脲的反应、随后使用所需的酰基氯在适合的路易斯酸、诸如氯化锌或三氯化铝的存在下进行傅克酰基化反应，可制备式(XI)的中间体。
步骤3(iii) 可通过在自由基引发剂存在或不存在时卤化式(XI)的中间体，制备式(VII)的中间体。适宜地，可使用在氯仿中的溴。
可根据流程4制备式(I)的化合物，其中X、R1、R2和R3如上文所定义
流程4
其中G1表示卤化物或硼酸酯，G2表示卤化物或三氟甲磺酸酯基，且PG表示三烷基硅烷基。
步骤4(i) 可通过将式(II)的中间体与SEM-Cl在适合的碱、诸如在THF中的氢化钠的存在下反应，制备式(XIa)的中间体
步骤4(ii) 可从式(XI)的中间体通过与适合的亲电试剂、诸如I2或B(OR)3在适合的碱、诸如LDA或BuLi的存在下反应，制备式(XII)的中间体。技术人员将会意识到该C5-锂化的物质(lithiated species)可以是在适合的亲电试剂的存在下预先形成或原位形成。
步骤4(iii) 可从式(XII)的中间体通过与式R1-G1的化合物在适合的钯催化剂、诸如四-(三苯基膦)钯(0)或1,1”双(二-叔丁基膦基)二茂铁氯化钯(Johnson Matthey PD-118)的存在下进行铃木交叉偶联反应，制备式(XIII)的中间体。
步骤4(iv) 可从式(XIII)的中间体通过在试剂诸如在THF中的TBAF的存在下除去SEM保护基团，制备式(XIV)的中间体。
步骤4(v) 可从式(XIV)的中间体通过与适合的亲电试剂、诸如中间体(XVIII)在适合的碱、诸如在THF中的氢化钠的存在下反应，制备式(XV)的中间体。
步骤4(vi) 可从式(XV)的中间体通过在酸、诸如在乙醚中的HCl的存在下除去丙酮化合物保护基团，制备式(XVI)的中间体
步骤4(vii) 可从式(XVI)的中间体通过与适合的氯硅烷在适合的碱、诸如叔丁基二甲基氯硅烷的存在下、在DMF中的咪唑的存在下反应，制备式(XVII)的中间体
步骤4(viii) 可从式(XVII)的中间体通过应用加热、在适合的溶剂、诸如乙醇中、在质子酸诸如TFA和催化的路易斯酸诸如三氟甲磺酸铋的存在下与所需的醛反应，制备式(I)的化合物。
可根据流程5制备式(XVIII)的中间体。
流程5
步骤5(i) 可从商购可得的醇通过与适合的磺酸酐在适合的碱、诸如三氟甲磺酸酐的存在下、在THF中的2,6-卢剔啶的存在下反应，制备式(XVIII)的中间体。
可根据流程6制备式(I)的化合物，其中X、R1、R2、R3R4和R4a如上文所定义。
流程6
其中G2表示卤化物，优选溴化物。
步骤6(i) 可通过将式(VII)的中间体与式(XXII)的中间体在适合的碱、诸如在乙醇中的三乙胺的存在下反应，制备式(XIX)的中间体。
步骤6(ii) 可通过用还原剂、在乙醇中的诸如硼氢化钠-氯化锂处理式(XIX)的中间体，制备式(XX)的中间体
步骤6(iii) 可从式(XX)的中间体通过在催化氢化的条件下使用氢化催化剂诸如在乙醇中的碳载钯除去Cbz-保护基团，制备式(XXI)的中间体
步骤6(iv) 可从式(XXI)的中间体通过应用加热在适合的溶剂、诸如乙醇中与所需的醛反应，制备式(I)的化合物
可根据流程7制备式(XXII)的中间体。
流程7
步骤7(i) 可从商购可得的氨基酸通过与甲醇在无水酸(通过将乙酰氯加入甲醇中制备)的存在下反应，制备式(XXII)的中间体
可根据流程8制备式(I)的化合物，其中具体而言如上文所定义X＝-CH2O-且R1、R2、R3、R4和R4a如上文所定义
流程8
其中G2表示卤化物，优选溴化物或碘化物，且PG表示保护基团，诸如三烷基硅烷基
步骤8(i) 可从式(XVII)的化合物通过与式(XXII)的中间体在适合的溶剂中的适合的碱、诸如丙酮中的碳酸钾的存在下反应，制备式(XXIII)的中间体
步骤8(ii) 可从式(XXIII)的中间体通过与式(XXIV)的中间体在适合的溶剂、诸如THF中反应，制备式(XXV)的中间体。从适合的卤代化合物和适合的金属化试剂、诸如异丙基氯化镁-氯化锂可直接制备式(XXIV)的中间体
步骤8(iii) 可从式(XXV)的中间体通过用在适合的溶剂中的适合的还原剂、诸如在甲醇中的硼氢化钠进行处理，制备式(XXVI)的中间体
步骤8(iv) 可从式(XXVI)的中间体通过用适合的活化剂在适合的溶剂中的适合的碱的存在下进行处理，制备式(XXVII)的中间体，诸如使用三氟甲磺酸酐在DCM中的三乙胺的存在下进行
步骤8(v) 可从式(XXVII)的中间体通过使用在适合的溶剂中的适合的酸、诸如在甲醇-水中的三氟乙酸除去保护基团，制备式(I)的化合物
可根据流程9制备式(XXII)的中间体
流程9
其中G2是卤化物，优选溴化物
步骤9(i) 可从商购可得的酰基卤通过用N,O-二甲基羟胺在在适合的溶剂中的适合的碱的存在下、诸如在二相DCM-水混合液中的碳酸钾的存在下处理，制备式(XXII)的中间体
可根据流程10制备式(I)的化合物，其中X＝O且R1、R2、R3、R4、R4a和Het2如上文所定义
流程10
其中LG是离去基团、诸如甲磺酰基。
步骤10(i) 可从式(I)的化合物通过用适合的活化剂在在适合的溶剂中的适合的碱的存在下处理，制备式(XXVII)的中间体，诸如使用甲磺酰氯在DCM中的三乙胺的存在下处理。
步骤10(ii) 可从式(XXVII)的中间体通过与适合的杂环在在适合的溶剂中的适合的碱的存在下、诸如在DMF中的碳酸铯的存在下反应，制备式(I)的化合物。
可根据流程11制备式(I)的化合物，其中X＝O，且R1、R2、R3、R4、R4a和Het2如上文所定义
流程11
其中G2是卤化物、优选溴化物，PG是保护基团、诸如三烷基硅烷基，W具体是C＝O，且Ra具体是卤代(C1-C4)烷基。
步骤11(i) 可从式(XIV)的中间体通过与式(XXVIII)的中间体在在适合的溶剂中的适合的碱的存在下、诸如在二甲基乙酰胺中的碳酸铯的存在下反应，制备式(XXIX)的中间体
可以以与步骤6(iv)相似的方式、通过加入适合的酸、诸如TFA进行步骤11(ii)。
步骤11(iii) 可使用乙醇胺、并应用加热进行N-苯邻二甲酰亚胺基团的脱保护
步骤11(iv) 可从式(XXXI)的中间体通过用适合的酰化剂在在适合的溶剂中的适合的碱的存在下处理，制备式(XXXII)的中间体，诸如使用卤代烷基氯在DCM中的DIPEA的存在下处理。
步骤11(v) 可从式(XXXII)的中间体通过应用加热用在适合的溶剂中的适合的碱(例如在THF中的氢化钠)处理，制备式(I)的化合物。
可根据流程12制备式(XXVIII)的中间体
流程12
其中G2是卤化物，优选溴化物，且PG是适合的保护基团、诸如三烷基硅烷基。
步骤12(i) 可从商购可得的环氧化物通过用适合的酸、诸如浓HBr处理，制备式(XXXIII)的中间体。
步骤12(ii) 可从式(XXXIII)的中间体通过与步骤4(vii)类似的反应制备式(XXVIII)的中间体
在另一方面，本发明提供了包含本发明化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。该药物组合物可以被制备成用于特定的施用途径，如口服施用、胃肠外施用和直肠施用等。此外，本发明的药物组合物也可以被制备为固体形式(非限制性地包括胶囊、片剂、丸剂、颗粒、散剂或栓剂)或液体形式(非限制性地包括溶液、混悬剂或乳剂)。该药物组合物可进行常规药学操作如灭菌处理和/或可包含常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及助剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
该药物组合物典型地是包含活性成分与下面物质的片剂或明胶胶囊：
a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂而言还包含
c)粘合剂，例如，硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要的话，还包含
d)崩解剂，例如，淀粉类、琼脂、藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；和/或
e)吸附剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
可以根据现有技术已知的方法对片剂包膜衣或肠衣。
适于口服施用的组合物以片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉末或颗粒、乳剂、硬或软明胶胶囊、或糖浆或酏剂的形式包含有效量的本发明化合物。根据药物组合物制备领域已知的任何方法来制备用于口服应用的组合物并且该类组合物可包含一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供药学美观和可口的制剂。片剂可包含与适于制备片剂的无毒可药用赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂有例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如，淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。可以不对片剂进行包衣，或者用已知技术对其进行包衣以延迟其在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时期内提供持续的作用。例如，可以使用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服应用的制剂可以以其中活性成分与惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土等混合的硬明胶胶囊或其中活性成分与水或油性介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊的形式呈现。
某些可注射组合物是水性的等渗溶液或混悬剂，并且栓剂有利地是由脂肪性乳液或混悬剂制备的。所述组合物可被灭菌和/或包含助剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，其还可包含其它有治疗价值的物质。所述组合物根据常规的混合、制粒或包衣方法进行制备，且包含约0.1-75％或约1-50％的活性成分。
用于经皮应用的适宜组合物包含有效量的本发明化合物与适宜的载体。适用于经皮传递的载体包括用于帮助通过宿主皮肤的可吸收的可药用溶剂。例如，经皮装置为一种绷带形式，该绷带包含背衬组件、包含化合物和任选的载体的储库、任选的用于在长期内将该化合物以受控和预定的速率传递到宿主皮肤的控速屏障、和用于将该装置固定到皮肤上的部件。
适于局部应用，例如应用于皮肤和眼睛的适宜组合物包括水溶液、混悬剂、软膏、霜剂、凝胶或可喷雾的制剂，例如，用于通过气雾剂传递的制剂等。该类局部传递系统将特别适用于皮肤应用，例如，用于治疗皮肤癌，例如，用于在防晒霜、乳液和喷雾剂等中的预防性应用。因此，它们特别适于本领域已知的局部制剂、包括化妆品制剂。该类组合物可包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
如本文所用的那样，局部应用还可涉及吸入或鼻内应用。其可以以干粉(例如单独传递或者以混合物形式例如与乳糖的干掺合物，或混合的组分颗粒，例如使用磷脂类物质的混合组分颗粒)形式由干粉吸入器方便地进行传递，或者可以在使用或不使用适宜的推进剂的情况下，由加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷洒器以气雾喷雾形式呈现。
因为水可能会促进某些化合物的降解，因此，本发明进一步提供了包含本发明化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型。
本发明的无水药物组合物和剂型可用无水或低水分含量的成分和低水分或低湿度条件来进行制备。可以以可维持其无水性的方式来制备和存储无水药物组合物。因此，可以用已知可阻止与水接触的材料对无水组合物进行包装，从而使得其可以被包含在适宜的制剂药盒中。适宜包装的实例包括但不限于密封的铝箔、塑料、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡罩包装和条状包装。
本发明进一步提供包含一种或多种可降低作为活性成分的本发明化合物的降解速率的物质的药物组合物和剂型。该物质在本文中被称为“稳定剂”，其包括但不限于抗氧剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
已知CFTR氯离子通道与多种以下疾病和病症相关：包括囊性纤维化(CF)(Quinton,Physiol.Rev.79:S3-S22(1999)；Boucher,Eur.Respir.J23:146-58(2004))、多囊性肾病(O'Sullivan等,Am.J Kidney Dis.32:976-983(1998)；Sullivan等,Physiol.Rev.78:1165-91(1998)；Strong等,J Clin.Invest.93:347-54(1994)；Mall等,Gastroenterology 126:32-41(2004)；Hanaoka等,Am.J Physiol.270:C389-C399(1996)；Kunzelmann等,PhysioI.Rev.82:245-289(2002)；Davidow等,Kidney Int.50:208-18(1996)；Li等,Kidney Int.66:1926-38(2004)；AI-Awqati,J Clin.Invest.110:1599-1601(2002)；Thiagarajah等,Curr.Opin.Pharmacol.3:594-99(2003))和分泌性腹泻(Clarke等,Science 257:1125-28(1992)；Gabriel等,Science 266:107-109(1994)；Kunzelmann和Mall,Physiol.Rev.82:245-89(2002)；Field,M.J Clin.Invest.111:931-43(2003)；和Thiagarajah等,Gastroenterology 126:511-519(2003))。
游离形式或盐形式的式(I)的化合物表现出有价值的药理学性质，例如CFTR调节性质，例如以下部分所提供的体外和体内试验所示的那样，并且因此适用于治疗或用作研究用化学药品例如作为工具化合物。式(I)和(Ia)的化合物可用于在体内开发囊性纤维化的模型。
本发明的化合物可用于治疗选自多囊性肾病和腹泻的适应症，包括传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS)。
因此，作为另一个实施方案，本发明提供了式(I)或(Ia)的化合物在治疗法中的应用。在另一个实施方案中，所述治疗法选自可通过抑制CFTR治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表、适合地选自多囊性肾病和腹泻、更适合地选自多囊性肾病、传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS)。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗可通过抑制CFTR治疗的疾病的方法，其包括施用治疗可接受的量的式(I)或(Ia)的化合物。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表、适合地选自多囊性肾病和腹泻、更适合地选自多囊性肾病、传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS)。
因此，作为另一个实施方案，本发明提供了式(I)或(Ia)的化合物在制备药物中的用途。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗可通过抑制CFTR治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述列表、适合地选自多囊性肾病和腹泻、更适合地选自多囊性肾病、传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS)。
实施方案23.根据前述实施方案1至20中任意一项的化合物或其可药用盐，其用于治疗多囊性肾病和腹泻、更适合地治疗多囊性肾病、传染性分泌性腹泻、旅行者腹泻、与HIV相关的腹泻和腹泻型肠易激综合征(IBS)。
对于约50-70kg的个体而言，本发明的药物组合物或组合产品可以为约1-2000mg活性成分、或约1-1000mg或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg或约1-50mg活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效量取决于个体的种属、体重、年龄和个体情况、所治疗的病症或疾病或其严重程度。普通的医师、临床医师或兽医可容易地确定预防、治疗或抑制障碍或疾病进程所必需的各活性成分的有效量。
上述剂量性能可方便地利用哺乳动物，例如小鼠、大鼠、狗、猴或离体的器官、组织及其制备物在体外和体内试验中进行证明。可将本发明化合物以溶液例如水溶液的形式体外应用，以及以肠内、胃肠外、有利地是静脉内例如以混悬剂或以水溶液的形式体内应用。体外剂量是约10-3摩尔至10-9摩尔浓度。体内的治疗有效量取决于给药途径，约为0.1-500mg/kg或约1-100mg/kg。
可以通过以下方法评价本发明的化合物的活性。
IonWorks Quattro试验:
可以使用膜片钳技术的全细胞模式通过电生理学方法定量测定CFTR活性(Hamill O,Marty A,Neher E,Sakmann B和Sigworth F.‘Improvedpatch-clamp techniques for high resolution current recording from cellsand cell-free membrane patches.’Pflugers Archive 1981391：85-100)。该试验在保持或调整跨膜电压的同时直接测量与通过CFTR通道的氯离子流相关的电流。该试验可以从天然或重组细胞系统使用单一的各玻璃微量加液器或平行的平面阵列测量CFTR活性。使用平行的平面阵列测量的电流可以使用适当装备的仪器诸如IonWorks Quattro(Molecular DevicesCorporation,Sunnyvale,CA)定量测量。Quattro系统可以测量来自单细胞/记录孔(HT结构)或来自64个细胞的群/孔(Population Patch Clamp PPC)的CFTR电流(Finkel A,Wittel A,Yang N,Handran S,Hughes J,CostantinJ.‘Population patch clamp improves data consistency and success rates inthe measurement of ionic currents.’J Biomol Screen.2006年8月；11(5):488-96)。
细胞培养：
用稳定表达WT-CFTR通道的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞进行IonWorks Quattro试验。将细胞在37℃、5％v/v CO2、100％湿度保持在补充有10％(v/v)FCS、100U/mL盘尼西林/链霉素和100μg/L甲氨蝶呤的MEM alpha培养基中。为进行试验，将细胞接种于225cm2组织培养烧瓶中直至几乎融合。使用胰蛋白酶-EDTA将细胞从烧瓶除去，重新混悬在用于立即进行试验的胞外记录溶液中。
CFTR抑制剂测定:
将细胞以1.5-2百万/mL的密度置于Quattro系统上，加入到平面贴板中，并且密封，使其建立5-10分钟。在评价密封电阻(通常>50MΩ)后，通过用100μg/mL两性霉素B穿孔得到全细胞通路。通过施加从-100至+100mV的电压斜升得到预先-化合物扫描，通过后者来测量基线电流。通过向贴板的384个孔的每个孔中加入10μM弗司扣林来活化CFTR。在5min温育后，再次通过施加从-100至+100mV的电压斜升来测量后-化合物1电流。然后将从10mM在DMSO中的储备溶液稀释至细胞外溶液中的测试化合物加入贴板中，并再温育10min。通过施加相同的从-100至+100mV的电压斜升测量后-化合物2电流。从弗司扣林加入(后-化合物1)和测试化合物(后-化合物2)之间电流的差异测量CFTR的抑制。在-100mV和+100mV(分别表示内向电流和外向电流)均进行该项测量。
溶液:
细胞外溶液(ECS)：145mM NaCl,4mM CsCl,5mM D-葡萄糖,10mM TES,1mM CaCl2,1mM MgCl2,pH 7.4NaOH
细胞内溶液(ICS)：113mM L-门冬氨酸,113mM CsOH,27mM CsCl,1mM NaCl,1mM MgCl2,1mM EGTA,10mM TES。用CsOH调节至pH7.2。使用前用过滤法消毒。
使用Ion Works Quattro试验(如本申请中描述)，本发明的化合物显示表A的CFTR抑制功效:
表A式(I)的化合物的抑制活性
本发明化合物可与一种或多种其它治疗剂同时施用、或在其之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的施用途径单独施用，或者与其它活性剂一起在同一药物组合物中进行施用。
在一个实施方案中，本发明提供了产品，其包含式(I)的化合物和至少一种其它治疗剂，其为用于在治疗法中同时、单独或相继使用的联合制剂形式。在一个实施方案中，该治疗法是由CFTR介导的疾病或病症的治疗。以联合制剂形式提供的产品包括在同一药物组合物中同时包含式(I)化合物和其它治疗剂的组合物，或独立形式的式(I)化合物及其它治疗剂、例如药盒形式。
在一个实施方案中，本发明提供了包含式(I)化合物和另一种或多种治疗剂的药物组合物。该药物组合物可任选地包含如上所述的可药用的载体。
在一个实施方案中，本发明提供了包含两种或更多种独立的药物组合物的药盒，所述组合物中至少一种包含式(I)的化合物。在一个实施方案中，该药盒包含用于独立盛放所述组合物的部件，如容器、分开的瓶或分开的箔包装。该类药盒的一个实例是一种泡罩包装，如通常用于包装片剂、胶囊等的包装。
本发明的药盒可用于施用不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，用于以不同的剂量间隔施用独立的组合物，或者用于所述独立组合物的针对彼此逐步增加剂量。为了有助于顺从性，本发明的药盒典型地包含施用说明。
在本发明的联合治疗中，本发明的化合物和其它治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，本发明的化合物和其它治疗剂可以如下那样被用于联合治疗中:(i)在将该组合产品被分发给医师前(例如在包含本发明化合物和其它治疗剂的药盒的情况中)；(ii)在临施用前由医师自己(或者在医师的指导下)；(iii)由患者自己，例如在本发明化合物和其它治疗剂相继施用期间。
因此，本发明提供了式(I)或(Ia)的化合物用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的用途，其中制备所述药物用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)的化合物一起施用。
本发明还提供了用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的方法的式(I)或(Ia)的化合物，其中制备式(I)或(Ia)的化合物用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的方法的另一种治疗剂，其中所述另外的治疗剂被制备用于与式(I)或(Ia)的化合物一起施用。本发明还提供了用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的方法的式(I)或(Ia)的化合物，其中式(I)或(Ia)的化合物与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的方法的另一种治疗剂，其中所述另外的治疗剂与式(I)或(Ia)的化合物一起施用。
本发明还提供了式(I)的化合物用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的用途，其中所述患者已经用另一种治疗剂治疗过(例如24小时内)。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由CFTR介导的疾病或病症的用途，其中所述患者已经用式(I)的化合物治疗过(例如24小时内)。
在一个实施方案中，本发明提供了包含治疗有效量的根据前述实施方案中任意一项的式(I)或(Ia)的化合物或其可药用盐及一种或多种共同使用的治疗活性剂(therapeutically active co-agent)的组合产品，所述共同使用的治疗活性剂选自止泻剂，其包括口服补液剂(oral rehydration agent)；抗生素；和抗动力剂(antimotility agent)、诸如洛哌丁胺。
可提供特定治疗益处的特定单个的组合包括根据前述实施方案中任意一项的式(I)或(Ia)的化合物或其可药用盐与洛哌丁胺的组合。
实施例
通用条件:
在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系统上使用电喷射、化学和电子碰撞电离方法从具有以下配置的仪器获取质谱：具有Agilent 6110质谱仪或Micromass Platform质谱仪或Thermo LTQ质谱仪的Agilent 1100HPLC系统；具有SQD质谱仪的Waters Acquity UPLC系统、具有3100质谱仪的Waters FractionLynx HPLC系统、具有TQD质谱仪的Waters UPC2系统或具有SQD2质谱仪的Waters Prep100SFC-MS系统。[M+H]+是指质子化的分子离子of the chemical species。
在Bruker AVANCE 400MHz或500MHz NMR分光计上使用ICON-NMR、在TopSpin程序控制下运行NMR谱。除非另外指出，在298K测量波谱，以溶剂共振信号作参比。
用下面的实施例来对本发明进行说明，但其并不构成对本发明的限制。温度是以摄氏度(℃)为单位给出的。如果没有另外提及，则所有的蒸发都是在减压下，典型地在约15mm Hg至100mm Hg(＝20-133mbar)下进行的。终产物、中间体和起始材料的结构都是用标准的分析方法，例如微量分析和光谱学特性，例如MS、IR、NMR来确认。所用的缩写词是本领域常规的。如没有定义，术语具有它们一般公认的意义。
缩写：
BOC    叔丁基羧基
br     宽峰
CBA    弱阳离子交换(例如来自Biotage的CBA柱)
d      双峰
dd       双双峰
ddd      双双双峰
de       非对映异构体过量
d.e.     非对映异构体过量
degC     ℃
DCM      二氯甲烷
DIPEA    二异丙基乙胺
DMAP     4-二甲基氨基吡啶
DMF      N,N-二甲基甲酰胺
DMSO     二甲亚砜
ee       对映异构体过量
e.e.     对映异构体过量
EtOAc    乙酸乙酯
EtOH     乙醇
GC-MS    气相色谱和质谱法
h        小时
HCl      盐酸
HPLC     高压液相色谱法
Int.     中间体
IR       红外线
LCMS     液相色谱法和质谱法
LC-MS    液相色谱法和质谱法
MeOH     甲醇
2-Me-THF 2-甲基四氢呋喃
MS       质谱法
m        多重峰
mult     多重峰
min      分钟
mL       毫升
m/z      质荷比
NaOH     氢氧化钠
NBS      N-溴琥珀酰亚胺
NMR      核磁共振
O/N      过夜
Pd-118   1,1”双(二-叔丁基膦基)二茂铁氯化钯
ppm      百万分率
PS       聚合物支载
PE-AX    PE-阴离子交换(例如来自Biotage的PE-AX柱)
RT       室温
Rt       保留时间
s        单峰
SCX-2    强阳离子交换(例如来自Biotage的SCX-2柱)
SEM-Cl   (2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷
SFC      超临界流体色谱法
t        三重峰
     2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂磷六环-2,4,6-三氧化物溶液
TBAF     四丁基氟化铵溶液
TEA      三乙胺
TFA      三氟乙酸
THF      四氢呋喃
UPLC     超高效液相色谱
参考下列实施例，采用本文中所述方法或本领域中已知的其它方法合成了优选实施方案的化合物。
各种原料、中间体和优选实施方案的化合物可以在适当时采用常规技术例如沉淀、过滤、结晶、蒸发、蒸馏和色谱法分离，并纯化。这些化合物的鉴定可以采用常规方法例如通过熔点、质谱、核磁共振和各种其它光谱分析法进行。除非另外规定，所有原料从商业供应商获得，且未经进一步纯化地使用。可从化合物通过已知的成盐方法制备盐。
应该理解优选的实施方案的有机化合物可能具有互变异构现象。因为本说明书中的化学结构只能表示出可能的互变异构形式中的一种，所以应该理解优选实施方案包含所绘制的结构的任何互变异构形式。
如果没有另外指出，分析HPLC条件如下:
LowpH_v002
2minLC_v003
10minLC_v003
2minLC_30_v003
2minLowpH:
2minLowpHv01:
2minLowpHv03:
2minLowpH30:
2minLowpH50:
2minLowpH80:
10minLowpH:
2minHighpH:
2minHighpH30:
2minHighpH50:
2minHighpH80:
10minHighpH:
最终化合物的制备
除非另外说明，化学名涉及外消旋化合物或非对映异构体混合物。术语‘对映异构体1’是指活性更高的所分离的对映异构体，而不是指在色谱中洗脱峰的相对位置(其中分离是通过SFC在指定条件下获得的)。术语‘非对映异构体1’是指活性更高的所分离的非对映异构体，而不是指在色谱中洗脱峰的相对位置(其中分离是通过SFC在指定条件下获得的)。
实施例1.1
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
将在EtOH(3mL)中的6-(2-氨基-乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮(中间体A)(519mg，1.740mmol)用5-甲基呋喃-2-甲醛(商购)(0.173mL，1.740mmol)处理，并使用微波辐照在100℃加热30min。加入另一部分的5-甲基呋喃-2-甲醛(0.173mL，1.740mmol)，并继续在100℃加热10min。将溶剂减压除去，并经硅胶色谱用40-80％在异己烷中的EtOAc洗脱纯化，得到标题化合物，为黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.45(5H,s),5.97(1H,d),5.89(1H,d),5.73(1H,s),3.77-3.74(2H,m),3.27(3H,s),3.14(3H,s),3.06(1H,br s),2.92-2.86(2H,m),2.26(3H,s)；
LC-MS Rt＝0.85min[M+H]+391(方法2minLC_v003)。
使用以下条件通过超临界流体色谱法进行外消旋物的手性分离，得到下文列出的化合物：
流动相：40％MeOH/60％CO2
柱：Chiralpak AD-H,250 x 10mm,5um
检测：UV在220nm
流速:10mL/min
注射体积：200μl
实施例1.2和1.3为对映异构体。
实施例1.2：对映异构体1Rt＝5.06min。(R)-1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51-7.41(5H,m),5.88(1H,d),5.80(1H,d),5.77(1H,s),3.97-3.83(2H,m),3.42(3H,s),3.35(3H,s),3.18-3.07(1H,m),3.08-3.01(1H,m),2.32(3H,s)；
LC-MS Rt＝0.86min[M+H]+391(方法2minLC_v003)。
手性纯度>99％ee
实施例1.3：对映异构体2Rt＝3.26min(S)-1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51-7.41(5H,m),5.88(1H,d),5.80(1H,d),5.76(1H,s),3.96-3.83(2H,m),3.42(3H,s),3.35(3H,s),3.18-3.07(1H,m),3.07-3.00(1H,m),2.32(3H,s)；
LC-MS Rt＝0.85min MS m/z 391[M+H](方法2minLC_v003)。
手性纯度95％ee
X射线晶体学
通过(S)-1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(实施例1.3)的X射线晶体学确认了对映异构体的绝对立体化学。
晶体数据和结构
通过与实施例1.1类似的方法从中间体A、中间体Aa、中间体Ab、中间体Be或中间体Bf(酌情)和商购可得的醛制备以下列表显示的实施例的化合物(表1)。
表1
通过与实施例1.1类似的方法从6-(2-氨基-乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮(中间体A)或3-(6-(2-氨基乙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(中间体Be)和商购可得的醛制备以下列表显示的实施例的化合物(表2)。通过SFC色谱拆分得到的外消旋物，得到单一的各对映异构体。
表2
实施例3.1
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
将6-(2-氨基-乙基)-5-(3-氯-苯基)-1,3-二甲基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮(中间体B)(150mg，0.451mmol)和5-氯呋喃-2-甲醛(商购可得的，58.8mg，0.451mmol)混悬于乙醇(1.2ml)中。将该混合液在微波辐照下在50℃加热1小时。将TFA(4滴)加入该反应混合物中，并继续在微波辐照下在60℃再加热30min。将该反应混合液用乙醇(0.5mL)稀释，并使用质谱指导的HPLC纯化。分将含产物的级分合并，并减压蒸发，得到白色固体，将其在真空下在50℃干燥16h，得到标题化合物，为浅黄褐固体；
LC-MS：Rt 0.86min；MS m/z 445/447/449[M+H]+；(方法2minLowpH)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.40(3H,m),7.38-7.34(1H,m),6.12(1H,d),5.93(1H,dd),5.78(1H,d),3.94-3.84(2H,m),3.43(3H,s),3.36(3H,s),3.08(2H,q),2.31(1H,br s)
类似于实施例3.1从适合的起始化合物(中间体B、Ba、Bb、Bc或Bd)和商购可得的醛制备以下列表显示的化合物(表3)。
表3
实施例4.1
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将6-(2-羟基乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(Int C)(244mg，0.815mmol)、三氟甲磺酸铋(50.9mg，0.082mmol，10mol％)和EtOH(2.4mL)用5-甲基呋喃-2-甲醛(商购可得的，0.089mL，0.082mmol)处理。使用微波辐照将该混合液加热至100℃达10min。将另一部分的5-甲基呋喃-2-甲醛(25μL)加入该反应混合物中，并继续在100℃加热5min。形成的固体冷却后，将其通过减压过滤收集，并用EtOH洗涤、随后用乙醚洗涤，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49-7.45(5H,m),6.39(1H,s),6.01(1H,d),5.94(1H,d),4.03-3.87(4H,m),3.35(3H,s),3.32(3H,s),2.35(3H,s)；
LC-MS Rt＝1.13min[M+H]+392(方法2minLC_v003)。
使用以下条件通过超临界流体色谱法进行外消旋物的手性分离，得到下文列出的化合物：
流动相：50％MeOH/50％CO2
柱：Chiralcel OD-H 250 x 10mm,5um
检测：UV在220nm
流速:10mL/min
样品浓度：250mg在12mL THF中
注射体积：200μl
实施例4.2和4.3为对映异构体。
实施例4.2：1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的对映异构体2Rt＝2.97min:
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49-7.45(5H,m),6.39(1H,s),6.01(1H,d),5.95(1H,d),4.03-3.88(4H,m),3.36(3H,s),3.33(3H,s),2.35(3H,s)；
LC-MS Rt＝1.12min MS m/z 392[M+H](方法2minLC_v003)。
手性纯度>99％ee
实施例4.3：
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的对映异构体1Rt＝4.21min：
第二个洗脱的峰Rt＝4.21min。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49-7.35(5H,m),6.30(1H,s),5.92(1H,d),5.86(1H,d),4.94-3.78(4H,m),3.27(3H,s),3.24(3H,s),2.26(3H,s)；LC-MS Rt＝1.13min,MS m/z 392[M+H](方法2minLC_v003)。
手性纯度>99.9％ee
通过与实施例4.1类似的方法从适合的醇(下文描述的制备)和商购可得的醛制备以下列表显示的实施例的化合物(表4)。
表4
实施例4.7
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
类似于实施例4.1从适合的醇(下文描述的制备)和商购可得的醛制备标题化合物。通过手性SFC分离外消旋物，得到对映异构体；
实施例4.7.1 1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的对映异构体1
SFC条件:
柱：Chiralpak IB 250 x 10mm,5um。
流动相：25％EtOH/75％CO2。
流速：10mL/min。
柱温：35℃
检测：UV在220nm。系统：Berger Minigram SFC2
SFC保留时间：Rt 9.46min；
LCMS Rt 1.03min；[M+H]+423；方法2minLC_v003
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.37(1H,m),7.29(3H,m),6.97(1H,s),6.65(1H,s),4.12-3.94(4H,m),3.38(3H,s),3.36(3H,s),2.50(3H,s),2.44(3H,s)
>99.9％ee
实施例5.0
(7R)-1,3,7-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将6-((R)-2-羟基-1-甲基-乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮(中间体D)(195mg，0.622mmol)、三氟甲磺酸铋(38.8mg，0.062mmol，10mol％)和4-甲基噻唑-2-甲醛(商购)(79mg，0.622mmol)在EtOH(2mL)中合并，并将该混合液在微波辐照下在120℃加热3.5小时。将该反应混合液减压蒸发。将残余物经硅胶色谱用EtOAc/己烷洗脱纯化，得到非对映异构体化合物的混合物。使用以下条件进一步纯化经超临界流体色谱法，得到实施例5.1
流动相：40％MeOH/60％CO2
柱：CHIRALPAK AD 250x10mm
检测：UV在220-299nm
流速:10mL/min
注射体积：200μl
实施例5.1
(7R)-1,3,7-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
SFC保留时间＝3.0min
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.37(5H,m)；6.87(1H,s)；6.56(1H,s)；4.08-4.00(1H,m)；3.82(1H,dd,J 3.312.7)；3.54(1H,dd,J 3.312.7)；3.29(3H,s)；3.27(3H,s)；2.39(3H,s)；1.19(3H,d,J 6.6)。
LC-MS Rt＝1.05min MS m/z 423[M+H](方法2minLowpH)。
手性纯度>99％de
实施例6.0:
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
步骤1：(R)-6-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
在0℃将氢化钠(60％在矿物油中)(234mg，5.86mmol)分批加入至5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(中间体Gb)(1000mg，3.66mmol)和二苯并-18-冠-6(132mg，0.366mmol)在DMF(28.1mL)中的溶液中。将该溶液温至室温，并搅拌20分钟，然后再冷却至0℃。历经5分钟滴加(S)-三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基酯(中间体Ea)(1547mg，5.86mmol)。将该混合液温至室温，并搅拌3小时。将该反应用饱和的NH4Cl(水溶液)淬灭(10mL)，并用DCM萃取(3x30mL)。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发，得到标题化合物，为红色/棕色无定形固体。
LC-MS Rt 1.20min[M+H]+388.3(方法2minlowpHv03)
步骤2：(R)-6-(2,3-二羟基丙基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将HCl(2M在乙醚中)(92ml，185mmol)滴加至(R)-6-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(步骤1)(7.15g，18.46mmol)和水(6.65g，369mmol)在乙腈(35.1mL)中的溶液中。将该混合液在室温搅拌30分钟。将该反应混合液在真空下蒸发，得到标题化合物。
LCMS：Rt 0.85min[M+H]+348.3(方法2minlowpHV03)。
步骤3：(8R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将(R)-6-(2,3-二羟基丙基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(步骤2)(806mg，2.320mmol)、三氟甲磺酸铋(305mg，0.464mmol)和5-氯呋喃-2-甲醛(商购)(333mg，2.55mmol)在乙醇(13.6mL)的混合液在微波辐照下在100℃加热25min。将该混合液在真空下蒸发。将残余物在0.1M HCl(50mL)和DCM(100mL)之间分配，并用DCM萃取(3 x 100mL)。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-60％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LCMS Rt 1.19min[M+H]+460.4(方法2minlowpHv03)
步骤4：(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC分离(8R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体混合物，得到标题化合物。
柱：Chiralcel OD-H 250x10mm,5μm
流动相：40％异丙醇/60％CO2
流速：100mL/min
检测：UV在220nm
Rt＝2.90min
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.50-7.45(1H,m),7.30-7.23(2H,m),7.21-7.15(1H,m),6.47(1H,s),6.16(1H,d),6.12(1H,d),4.08-3.98(1H,d),3.86-3.78(3H,m),3.72-3.66(1H,m),3.37(6H,s)
LCMS Rt 1.19min[M+H]+460.4(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
还如下制备标题化合物：从三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(中间体Eb)(代替(S)-三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(中间体Ea))起始，并通过SFC拆分非对映异构体的最终混合物。
实施例6.1:
3-((8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或
3-((8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈
通过与实施例6.0类似的方法，用3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(中间体Ga)代替5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(中间体Gb)(步骤1)，并在以下条件下通过SFC纯化非对映异构体的最终混合物，制备标题化合物:
分离条件；
柱：Chiralpak AD-H 250x10mm,5μm
流动相：25％甲醇/75％CO2
流速：10mL/min
检测：UV在220nm
Rt＝8.01分钟
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.04(1H,s),7.95-7.91(1H,m),7.90-7.86(1H,m),7.71-7.67(1H,m),6.69(1H,s),6.50(1H,d),6.35(1H,d),4.92(1H,t),3.94-3.83(3H,m),3.55-3.42(2H,m),3.25(3H,s),3.17(3H,s)。
LCMS Rt 1.14分钟[M+H]+467.4(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例7.0a和实施例7.0b
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)--10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
步骤1：在0℃将6-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮氢化钠(60％，在矿物油中，0.417g，10.42mmol)加入1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(中间体Gc)(1.8g，6.51mmol)和二苯并-18-冠-6(0.235g，0.651mmol)在DMF(65.1mL)中的溶液中。将该混合液温至室温，并搅拌20分钟，然后再冷却至0℃。然后滴加三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(中间体Eb)(3.44g，9.77mmol)。将该混合液在0℃搅拌30分钟，并在室温搅拌16小时。将该反应用水(50mL)淬灭，并用DCM萃取(3 x 50mL)。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用EtOAc/己烷洗脱纯化混合液，得到标题化合物。
LC-MS Rt 1.15min[M+H]+392.3(方法2minlowpHv03)
步骤2：6-(2,3-二羟基丙基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将2M在Et2O中的HCl(5.36ml，10.71mmol)滴加至6-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(470mg，1.071mmol)在乙腈(10.7ml)和水(386mg，21.43mmol)中的溶液中。将该混合液在室温搅拌1小时，然后在真空下蒸发，得到标题化合物。
LC-MS Rt 0.84分钟[M+H]+351.3(方法2minLowpHv03)
步骤3：10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将6-(2,3-二羟基丙基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(450mg，1.284mmol)、5-氯呋喃-2-甲醛(184mg，1.413mmol)和三氟甲磺酸铋(169mg，0.257mmol)在乙醇(9.584ml)中的混合液在室温搅拌2.5小时。加入TFA(310μl)，并将该混合液在微波辐照下在80℃加热20分钟，然后进一步在微波辐照下在80℃加热10小时。然后将该反应混合液在真空下浓缩至一半体积，加入另一部分的三氟甲磺酸铋(169mg，0.257mmol)和粉末分子筛(200mg)，并将该混合液在微波辐照下在80℃加热10小时。将该混合液在真空下蒸发，并将残余物在EtOAc(100ml)和饱和的K2CO3(水溶液)(100ml)之间分配。将各相分离，并将水相用EtOAc萃取(3 x 100ml)。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用40-50％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LC-MS Rt 1.11分钟[M+H]+463.2(方法2minLowpHv03)
步骤4：10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体混合物的分离
在以下条件下通过SFC进行10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体混合物的分离，得到以下化合物:
柱：CHIRALPAK IC 250x10mm 5μm在33.8℃
梯度：等浓度50％MeOH/50％scCO2
流速：10ml/min
检测：UV在220-260nm
实施例7.0a 10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝6.81分钟
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.49(1H,s),6.72(1H,s),6.49(1H,d),6.38(1H,d),4.96(1H,t),4.66(1H,d),3.97-3.82(2H,m),3.60-3.47(2H,m),3.24(3H,s),3.22(3H s),2.45(3H,s)
LC-MS Rt 1.17分钟[M+H]+463.2(方法2minLowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例7.0b 10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体2
Rt＝8.95min
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ.49(1H,s),6.72(1H,s),6.49(1H,d),6.38(1H,d),4.96(1H,t),4.66(1H,d),3.97-3.82(2H,m),3.60-3.47(2H,m),3.24(3H,s),3.22(3H s),2.45(3H,s)
LC-MS Rt 1.12分钟[M+H]+463.1(方法2minLowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
以与实施例7.0a和7.0b类似的方式在相关步骤中从适合的原料(代替1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮)和适合的商购可得的醛制备以下实施例。在列出的条件下通过SFC纯化非对映异构体混合物，得到标题化合物。
实施例7.1a和实施例7.1b
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
如下文所述纯化单一的非对映异构体；
实施例7.1a:
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
柱：Phenomenex LUX C4250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
Rt＝6.41分钟
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(1H,s),6.72(1H,s),6.49(1H,d),6.39(1H d),5.39(1H,t),4.96(1H,t),4.65(3H,d),3.96-3.82(2H,m),3.59-3.47(2H,m),3.24(3H,s),3.22(3H,s)。
LC-MSRt1.00min[M+H]+479.3(方法2minLowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例7.1b：10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体2
柱：Chiralpak ID 250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
Rt＝3.56min
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(1H,s),6.56(1H,s),6.50(2H,q),5.38(1H,t),5.03(1H,t),4.65(2H,d),4.43(1H,dd),4.08(1H,dd),3.93(1H,m),3.64-3.53(2H,m),3.21(3H,s),3.10(3H,s)
LC-MS Rt 0.99min[M+H]+497.2(方法2minLowpHv03)
手性纯度>99％d.e
实施例7.2a和实施例7.2b:
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC进行非对映异构体混合物的分离，得到以下化合物:
柱：Chiralpak AD-H,250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例7.2a：10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝3.87分钟
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.88(1H,s),6.37(1H,s),6.08-6.02(2H,m),4.57-4.48(1H,m),4.06-3.95(2H,m),3.74-3.60(2H,m),3.31(6H,s),2.60(3H,s)。
LC-MS Rt 1.10min[M+H]+463.2(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例7.2b:
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体2
Rt＝2.42分钟
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.18(1H,s),6.37(1H,s),6.23-6.17(2H,m),4.43-4.27(2H,m),4.10-4.03(1H,m),3.95-3.76(2H,m),3.40(3H,s),3.26(3H,s),2.83(3H,s)。
LC-MS Rt 1.09min[M+H]+463.3(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例7.3a:
(8S,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC对映异构体混合物的分离，得到标题化合物:
分离条件；
柱：Chiralpak AD-H 250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝2.82分钟
1H NMR(400MHz,CDCl3)。δ8.28(1H,s),7.15(1H,s),6.69(1H,s),4.63(1H,d),4.33-4.25(1H,m),4.14(1H,s),3.99(1H,dd),3.85(1H,dd),3.58(3H,s),3.42(3H,s),2.81(3H,s)。
LC-MS Rt 1.07分钟[M+H]+480.3(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例8.0a:
(8R,10S)-5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
步骤1：6-(溴甲基)-5-(3-氯苯甲酰基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
类似于5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基-1H-嘧啶-2,4-二酮(中间体A的步骤3)在步骤2中用3-氯苯甲酰氯代替苯甲酰氯制备标题化合物。
LCMS Rt 1.23min[M+H]+373.4(方法2minlowpHv03)
步骤2：(R)-5-(3-氯苯基)-6-(2,3-二羟基丙基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将6-(溴甲基)-5-(3-氯苯甲酰基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2g，5.38mmol),(R)-3-氨基丙-1,2-二醇(0.490g，5.38mmol)和三乙胺(0.750ml，5.38mmol)在EtOH(17.94ml)的混合液在微波辐照下在100℃加热1小时。将该混合液在真空下蒸发，并将残余物在DCM(20mL)和1M HCl(20mL)之间分配。将各相分离，并将有机相用水(2 x 20mL)洗涤。使有机相通过疏水烧结玻璃料(frit)，并在真空下蒸发，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(3H,m),7.37(1H,m),6.58(1H,brs),4.02(2H,t),3.94(1H,m),3.61(1H,dd),3.43(4H,m),3.36(3H,s)
LC-MS Rt 0.84分钟[M+H]+364.2(方法2minLowpHv01)
步骤3：(R)-6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将(R)-5-(3-氯苯基)-6-(2,3-二羟基丙基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(1.39g、3.8mmol)、叔丁基氯二甲基硅烷(633mg，4.2mmol)、咪唑(520mg，7.6mmol)和DMAP(47mg，0.38mmol)在DMF(14mL)中的溶液在室温搅拌2小时。加入另一部分的叔丁基氯二甲基硅烷(172mg，1.1mmol)，并将该混合液再搅拌1小时。将该反应混合液用EtOAc(70mL)稀释，并用0.5M HCl(3 x 35mL)和盐水(1 x 35mL)洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。用己烷研磨，得到标题化合物。
LC-MS Rt 1.41分钟[M+H]+478.4(方法2minLowpHv01)
步骤4：(8R)-5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将在二噁烷中的HCl(0.654ml，2.61mmol)加入(R)-6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(250mg，0.523mmol)、4-氯噻唑-2-甲醛(中间体H)(85mg，0.575mmol)和三氟甲磺酸铋(103mg，0.157mmol)在无水乙醇(4ml)中的混悬液中，并将该混合液在50℃加热36小时。按需要加入另外部分的在二噁烷中的HCl(0.654ml，2.61mmol)以使反应进行完成。将该混合液冷却至室温，并用EtOAc(50ml)和水(20ml)稀释。将各相分离，并将水相用EtOAc萃取(3 x 30ml)。将合并的有机萃取物用饱和的NaHCO3(水溶液)(20ml)、水(20ml)和盐水(20ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用10-70％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LC-MS Rt 1.19/1.23min[M+H]+493.1(方法2minLowpHv03)
步骤5：(8R,10(R或S))-5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下使用SFC分离(8R)-5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体混合物，得到标题化合物。
柱：Chiralpak AD-H,250 x 10mm,5um在35degC
流动相：40％甲醇+0.1％v/v DEA/60％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例8.0a：5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝3.68min
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(1H,s),7.62(1H,s),7.56-7.48(3H,s),6.99(1H,s),4.97(1H,t),3.96-3.85(3H,m),3.53(1H,m),3.46(1H,m),3.30(3H,s),3.18(3H,s)
LC-MS Rt 1.20min[M+H]+493.1(方法2minLowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
还分离了5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的第二种非对映异构体；
Rt＝5.77分钟
以与实施例8.0a类似的方式在步骤4中使用适合的商购可得的醛制备以下实施例。
实施例8.1a:
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC纯化非对映异构体混合物，得到单一的非对映异构产物。
柱：Phenomenex Lux-C2,250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝10.53min
LC-MS Rt 1.25min[M+H]+476.3(方法2minlowpHv03)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(3H,m),7.36(1H,m),6.47(1H,s),6.16(1H,d),6.12(1H,d),4.00(1H,m),3.94-3.77(3H,s),3.68(1H,dd),3.36(6H,s)
实施例9a:
3-((8S,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或
3-((8R,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或
3-((8R,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或
3-((8S,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈
步骤1：3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈
通过与实施例8.0a的步骤3类似的方法在步骤1中使用3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(中间体Ga)代替5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(中间体Gb)并用外消旋的三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(中间体Eb)代替(S)-三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(中间体Ea)，制备标题化合物。
步骤2：3-((8S,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈和3-((8R,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈和
3-((8R,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈和3-((8S,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈
顺式异构体
和反式异构体
将HCl(4M在二噁烷中，1067μl，4.27mmol)加入三氟甲磺酸铋(84mg，0.128mmol),4-氯噻唑-2-甲醛(中间体H)(69.3mg，0.469mmol)和3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(200mg，0.427mmol)在乙醇(4268μL)中的溶液中。将该混合液在室温搅拌2小时，并在50℃搅拌24小时。将该混合液冷却至室温，并用DCM(10mL)和1M NaOH(水溶液)(10mL)稀释。将各相分离，并将水相用DCM萃取(3 x 10mL)。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。使用以下条件经质谱指导的HPLC纯化，得到两种非对映异构产物。
柱：XSelect CSH Prep C18柱,30 x 100mm,5um。
流动相：A＝0.1％在水中的DEA,B＝0.1％在MeCN中的DEA
梯度:
0.0-0.5min：30％B 30mL/min
0.5-1.0min：30％B 30-50mL/min
1.0-7.2min：30-70％B,7.2-7.3min：70-98％B,7.3-9.4min：98％B
9.4-9.530％B 50mL/min
3-(10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈的非对映异构体1
第一个洗脱峰。
LC-MS Rt 1.07分钟[M+H]+484.0(方法2minlowpHv03)
3-(10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈的非对映异构体2
第二个洗脱的峰。
LC-MS Rt 1.10min[M+H]+484.2(方法2minlowpHv03)
步骤3：3-((8S,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或3-((8R,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或
3-((8R,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈或3-((8S,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈
在以下条件下通过SFC分离步骤2的第一个洗脱峰，得到标题对映异构产物之一。
柱：Chiralcel OD-H 250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇+0.1％v/v DEA/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例9a：3-(10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈的非对映异构体1
Rt＝3.75min
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.04(1H,s),7.95-7.88(3H,m),7.71-7.68(1H,m),7.0(1H,s),4.97(1H,t),3.94-3.89(3H,m),3.57-3.44(2H,m),3.34-3.29(6H,m)。
存在二乙胺。
LC-MS Rt 1.06min[M+H]+484.1(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
还在Rt＝4.93min分离了第二种对映异构体。
在以下条件下通过SFC分离实施例9a的步骤2的第二个洗脱的峰，得到标题对映异构产物。
柱：Chirapak AD-H 250 x 10mm,5um在35degC
流动相：45％甲醇+0.1％v/v DEA/55％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例9b：3-(10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈的非对映异构体2
Rt＝2.90min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.08(1H,s),7.95-7.90(2H,m),7.83(1H,s),7.72-7.67(1H,m),6.91(1H,s),5.06(1H,t),4.15-4.09(1H,m),3.95-3.89(2H,m),3.68-3.57(2H,m),3.50(3H,s),3.20(3H,s)。
LC-MS Rt 1.10min[M+H]+484.1(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
还在Rt＝3.98分钟分离了另一种非对映异构体。
以与实施例6.0类似的方式在相关步骤中使用适合的原料(中间体Gb)(代替1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮)和适合的商购可得的醛制备以下实施例。在列出的条件下通过SFC进行非对映异构体混合物的纯化，得到标题化合物。
实施例10a和10b:
(8S,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
通过与实施例9a和9b类似的方法从适合的起始化合物(类似于实施例6的步骤2从中间体Eb和中间体Gb制备)，制备标题化合物。
在以下条件下通过SFC分离第一种洗脱的非对映异构体，得到标题对映异构产物之一
柱：Chiralcel OD-H 250 x 10mm,5um在35degC
流动相：45％甲醇/55％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例10a：10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝3.67分钟
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.54-7.45(1H,m),7.31-7.16(4H,m),6.70(1H,s),4.13-4.05(1H,m),3.98-3.86(2H,m),3.84-3.67(2H,m),3.40(3H,s),3.36(3H,s)
2013年3月28日
LC-MS Rt 2.54分钟[M+H]+477.2(5minhighpHv01)
手性纯度>99％d.e.
在以下条件下通过SFC分离第二种洗脱的非对映异构体，得到标题对映异构产物之一
柱：Chiralpak AD-H 250 x 10mm,5um
流动相：45％甲醇/55％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例10b：10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体2
Rt＝2.30min
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.51-7.46(1H,m),7.31-7.16(4H,m),6.72(1H,s),4.18-4.10(1H,m),4.08-4.02(1H,m),3.97-3.92(2H,m),3.80-3.73(1H,dd),3.59(3H,s),3.39(3H,s)
LC-MS Rt 1.15min[M+H]+477.1(方法2minlowpHv03)
手性纯度>99％d.e.
实施例11a:
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
步骤1：3-氨基-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯
在0℃将乙酰氯(0.627ml，8.81mmol)滴加至商购可得的Z-Dap-OH((S)-3-氨基-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙酸)(1g，4.20mmol)在甲醇(20ml)中的混悬液中。将该混合液在0℃搅拌4小时，并在室温搅拌16小时。将溶剂在真空下蒸发，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(3H,br s),7.90(1H,d),7.43-7.28(5H,m),5.07(2H,s),4.43(1H,m),3.68(3H,s),3.22(1H,dd),3.06(1H,dd)
LC-MS Rt 0.47分钟[M+H]+253.5(方法2minLowpHv03)
步骤2：2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)丙酸甲酯
将5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(中间体A的步骤3)(1.342g，3.98mmol)、(S)-3-氨基-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(1.207g，4.18mmol)和三乙胺(1.665ml，11.94mmol)混悬于甲醇(20ml)中。将该混合液加热至回流达16小时，然后冷却至室温，并过滤。将残余物用甲醇(20ml)冲洗，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(1H,d),7.49-7.36(5H,m),7.36-7.21(5H,m),6.88(1H,s),4.98(1H,d),4.88(1H,d),4.04-4.27(3H,m),4.17(1H,dd),3.55(3H,s),3.25(3H,s),3.15(3H,s)。
LC-MS Rt 1.20min[M+H]+491.3(方法2minLowpHv03)
步骤3：(1-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)-3-羟基丙-2-基)氨基甲酸苄酯和1,3-二甲基-6-((2-氧代噁唑烷-4-基)甲基)-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
在0℃将硼氢化钠(0.234g，6.20mmol)加入2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)丙酸甲酯(1.52g，3.10mmol)和氯化锂(0.263g，6.20mmol)在THF(79ml)和EtOH(39.7ml)中的溶液中。将该混合液在室温搅拌16小时。将该反应用饱和的NaHCO3(水溶液)淬灭(20mL)，用水(50ml)稀释，并用DCM萃取(3 x 150ml)。将合并的有机萃取物用MeOH(50ml)稀释，经硫酸钠干燥，使其通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发，得到标题化合物和作为副产物的1,3-二甲基-6-((2-氧代噁唑烷-4-基)甲基)-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮。将得到的混合液未经进一步纯化地用于下一个步骤。
LC-MS Rt 1.05min[M+H]+463.6(方法2minLowpHv03)。
步骤4：6-(2-氨基-3-羟基丙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将(1-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)-3-羟基丙-2-基)氨基甲酸苄酯和1,3-二甲基-6-((2-氧代噁唑烷-4-基)甲基)-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(1.67g)和10％碳载钯(200mg，3.61mmol)的混合物混悬于乙醇(50ml)中，并在氢气气氛下搅拌18小时。使该混合液通过预装的筒(10g，过滤材料)，并将残余物用乙醇(20ml)洗涤。将合并的滤液在真空下蒸发。将残余物混悬于THF(18ml)和水(5ml)中。加入氢氧化锂(20mg)，并将该混合液在室温搅拌4小时，然后用2M HCl(水溶液)淬灭。将NaHCO3(水溶液)溶液(20ml)加入以达到pH 6，并将该混合液用DCM萃取(3 x 30ml)，使其通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发，得到标题化合物。
LC-MS Rt 0.54分钟[M+H]+328.9(方法2minLowpHv03)
步骤5：(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
将6-(2-氨基-3-羟基丙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(200mg，0.609mmol)和5-氯呋喃-2-甲醛(87mg，0.670mmol)混悬于乙醇(1.2ml)中，并将该混合液在50℃、在微波辐照下加热15min、随后再加热30min。将该混合液在真空下蒸发。使用以下条件通过质谱指导的HPLC进行纯化，得到非对映异构体的混合物。
柱：XSelect CSH Prep C18柱,30 x 100mm,5um。
流动相：A＝0.1％在水中的DEA,B＝0.1％在MeCN中的DEA
洗脱梯度:
0.0-0.5min：30％B 30mL/min
0.5-1.0min：30％B 30-50mL/min
1.0-7.2min：30-70％B,7.2-7.3min：70-98％B,7.3-9.4min：98％B
9.4-9.530％B 50mL/min
使用以下条件通过SFC色谱拆分两种非对映异构体，得到标题化合物。
柱：Chiralpak IC,250 x 10mm,5um在35degC
流动相：50％甲醇/50％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例11a:
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝5.89分钟
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.55-7.40(5H,m),6.39(1H,d),6.08(1H,d),5.87(1H,s),4.78(1H,t),3.84(1H,dd),3.50(1H,t),3.42(1H,m),3.35(1H,q),3.30(3H,s),3.15(3H,s),3.02-2.91(2H,m)。
LC-MS Rt 1.04分钟[M+H]+441.3(方法2minLowpHv03)
在Rt＝8.13分钟分离了第二种非对映异构体
实施例12：
(8S,10S)-1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
步骤1：(S)-6-(2-羟基丙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(中间体A,步骤3)(200mg 0.59mmol),三乙胺(82μl,0.59mmol)和(S)-1-氨基丙-2-醇(44.6mg 0.59mmol)在乙醇(2ml)中的混合液在微波辐照下加热1小时。将该反应混合液过滤，并将残余物用乙醇冲洗，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51-7.43(5H,m)；6.55(1H,s)；4.07-3.83(1H,m)；3.96-3.82(3H,m)；3.42(3H,s)；3.34(3H,s)；1.11(3H,d)
LC-MS Rt 0.82分钟[M+H]+314方法2minLC_v003
步骤2：1,3,8S-三甲基-10(R或S)-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将(S)-6-(2-羟基丙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(160mg 0.51mmol)、4-甲基噻唑-2-甲醛(64.9mg，0.51mmol)和三氟甲磺酸铋(31.9mg，0.051mmol)在乙醇(2ml)中的混合液在微波辐照下在100℃加热20min，然后在100℃再次加热40min。加入另外部分的4-甲基噻唑-2-甲醛(64.9mg，0.51mmol)和三氟甲磺酸铋(31.9mg，0.051mmol)，并将该混合液在100℃在微波辐照下加热40min。将该混合液在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-50％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LC-MS Rt 4.56min[M+H]+423(方法10minLC_v003)
步骤3：(8S,10S)-1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或(8S,10R)-1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC分离非对映异构体的混合物，得到标题化合物，为单一的非对映异构体。
柱：Chiralpak AD-H,250 x 10mm,5um在35degC
流动相：40％甲醇/60％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例12：(8S)-1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt 2.14分钟
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53-7.46(5H,m),6.97(1H,s),6.66(1H,s),4.18-4.09(1H,m),3.91(1H,dd),3.64(1H,dd),3.38(3H,s),3.37(3H,s),2.49(3H,s),1.28(3H,d)
LC-MS Rt 1.04分钟[M+H]+423(方法2minLC_v003)
非对映异构体纯度>99％d.e.
在Rt＝2.14分钟分离了该第二种非对映异构体
通过类似于实施例12的方法从适合的起始化合物制备以下实施例(如需要在起始的溴化物的制备中用适合的取代的苯甲酰氯代替苯甲酰氯，在步骤1中使用适合的商购可得的氨基醇，在步骤3中适合的商购可得的醛)。在列出的条件下通过SFC进行非对映异构体混合物的最终纯化，得到标题化合物。
实施例12.1:
(8S,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8-三甲基-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8-三甲基-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
从(S)-6-(2-羟基丙基)-1,3-二甲基-5-间甲苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮和5-氯呋喃-2-甲醛通过与实施例12类似的方法制备标题化合物。经硅胶色谱用0-55％在异己烷中的EtOAc洗脱纯化；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40(1H,t)；7.30-7.23(4H,m)；6.40(1H,s)；6.15(1H,d)；6.08(1H,d)；4.05-3.98(1H,m)；3.85(1H,dd)；3.57(1H,dd)；3.35(6H,s)；2.45(3H,s)；1.27(3H,d)。
LC-MS Rt 1.34分钟[M+H]+440(方法2minLowpHv01)
实施例12.2
(8S,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC分离10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体混合物，得到标题化合物，为单一的对映异构体。
柱：Chiralpak AD-H 250 x 10mm,5um在35degC
流动相：35％异丙醇/65％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例12.210-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt 3.57分钟
LCMS Rt 1.43min[M+H]+490.1(方法2minLowpHv03)
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.47-7.43(3H,m),7.38-7.34(1H,m),6.45(1H,s),6.17(1H,s),6.11(1H,s),4.11-4.03(1H,m),3.92-3.86(2H,m),3.58-3.50(2H,m),3.39-3.33(9H,m)。
手性纯度>99％d.e.
实施例12.3:
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5,8-二苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5,8-二苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
从(S)-6-(2-羟基-2-苯基乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮和商购可得的5-氯呋喃-2-甲醛制备标题化合物。在以下条件下通过SFC分离得到的非对映异构体的混合物，得到标题化合物，为单一的非对映异构体；
柱：Chiralpak AS 250 x 10mm
流动相：40％甲醇+0.1％v/v DEA/30％CO2
流速：10ml/min
实施例12.3：10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5,8-二苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
Rt＝2.92分钟
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48-7.44(5H,m)；7.38-7.34(5H,m)；6.62(1H,s)；6.20(1H,d)；6.18(1H,d)；4.94(1H,dd)；4.08(1H,dd)；3.89(1H,dd)；3.39(3H,s)；3.38(3H,s)
LC-MS Rt 1.43min[M+H]+488方法2minLowpHv01
非对映异构体纯度>99％d.e.
实施例12.4:
(8R,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
类似于实施例12的步骤2从5-(3-氯苯基)-6-(3-(二甲基氨基)-2-羟基丙基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮和5-氯呋喃-2-甲醛制备标题化合物。将第一个洗脱的非对映异构体(通过Agilent制备系统(10-35％，低pH)在以下条件下通过SFC分离并分出，来得到标题化合物，为单一的各对映异构体。
柱：2 x Chiralpak AD-H,250 x 10mm,5um在35degC
流动相：35％异丙醇+0.1％v/v DEA/65％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
实施例12.4：10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
SFC Rt 3.03min
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.48-7.42(3H,m),7.38-7.34(1H,m),6.46(1H,s),6.20-6.13(2H,m),3.93-3.87(1H,m),3.72-3.65(1H,m),3.38(6H,s),2.76-2.58(1H,br s),2.40-2.18(6H,br s)
LC-MS Rt 3.29min[M+H]+503.3(方法5minhighpHV01)
手性纯度>99％d.e.
在SFC在Rt 2.47分钟分离了第二种对映异构体
实施例12.5:
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8,8-四甲基-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
类似于实施例12的步骤2从在甲苯中的6-(2-羟基-2-甲基丙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮和商购可得的5-氯呋喃-2-甲醛制备标题化合物；
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ7.54-7.44(5H,m),6.48(1H,d),6.44-6.41(2H,m),4.0-3.95(1H,m),3.72-3.67(1H,m),3.23(3H,s),3.16(3H,s),1.23(3H,s),1.07(3H,s)。
LCMS Rt 1.29min[M+H]+440.2(方法2minlowpHv01)
实施例13：
(S)-11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮或
(R)-11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮
步骤1：2-溴-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺
将N,O-二甲基盐酸羟胺(3g，30.8mmol)和碳酸钾(9.35g，67.7mmol)溶于Et2O(50mL)和水(50mL)中，并将该混合液冷却至0℃。滴加2-溴乙酰溴(2.95mL，33.8mmol)，并将该混合液在0℃短暂搅拌，然后温至室温，并搅拌40min。将该反应混合液各相分离，并将水相用Et2O萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥，并在真空下蒸发，得到标题化合物，为无色油状物；
步骤2：2-(2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)乙氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺
将6-(2-羟基乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(700mg，2.339mmol)溶于THF(20mL)中，并冷却至0℃。加入氢化钠(281mg，7.02mmol)，并将该混合液在0℃搅拌15min。加入2-溴-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(553mg，3.04mmol)，将该混合液温至室温，并搅拌20min。加入另外的氢化钠(281mg，7.02mmol)和2-溴-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(553mg，3.04mmol)，并继续搅拌45min。将该反应用水淬灭，并用氯仿萃取(3x)。使合并的有机相通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发。将残余物用EtOAc/己烷研磨，并通过沉淀法收集固体，得到标题化合物；
LC-MS:Rt 0.99min；MS 401.2m/z[M+H]方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(5H,多重峰),6.72(1H,br s),4.26(2H,s),4.16(2H,t),3.81(2H,t),3.66(3H,s),3.45(3H,s),3.36(3H,s),3.20(3H,s)。
步骤3：6-(2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-氧代乙氧基)乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将2-(2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)乙氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(800mg，1.998mmol)和2-溴-4-氯噻唑(中间体H，步骤2)(397mg，1.998mmol)溶于THF中，并缓慢加入异丙基氯化镁氯化锂复合物(4610μl，5.99mmol)。将该混合液在室温搅拌20分钟，并将该反应用饱和的NH4Cl(水溶液)淬灭，并用DCM萃取(3x)。使合并的有机相通过疏水烧结玻璃料，并将其在二氧化硅上蒸发。将二氧化硅置于25g二氧化硅筒，并将该系统用50％EtOAc/己烷、60％EtOAc/己烷、75％EtOAc/己烷和80％EtOAc/己烷洗脱。将产物各级分合并，并蒸发。将得到的残余物用Et2O/己烷研磨，并过滤，得到标题化合物；
LC-MS：Rt 1.24分钟；MS 459.1m/z[M+H]方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53(1H,s),7.48(5H,多重峰),6.69(1H,br s),4.91(2H,s),4.19(2H,t),3.85(2H,t),3.46(3H,s),3.36(3H,s)。
步骤4：6-(2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-羟基乙氧基)乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将6-(2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-氧代乙氧基)乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(540mg，1.177mmol)溶于MeOH(20mL)中，并加入硼氢化钠(134mg，3.53mmol)。将该混合液在室温搅拌25分钟，并将该反应用饱和的NaHCO3(水溶液)淬灭，并用氯仿萃取(3x)。使合并的有机萃取物通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发，得到标题化合物；
LC-MS：Rt 1.10min；MS 461.1m/z[M+H]方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52-7.40(5H,多重峰),7.08(1H,s),6.46(1H,br s),5.03(1H,dd),4.11(2H,t),3.86(1H,dd),3.80-3.65(3H,多重峰),3.43(3H,s),3.37(3H,s)。
步骤5：11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮
将6-(2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-羟基乙氧基)乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(300mg，0.651mmol)和三乙胺(0.272mL，1.953mmol)溶于DCM(10mL)中，以一批次加入Tf2O(0.165mL，0.976mmol)。将该混合液在室温搅拌15min，并加入另外的三乙胺(0.272mL，1.953mmol)和Tf2O(0.165mL，0.976mmol)。45min后，加入另外的三乙胺(0.272mL，1.953mmol)和Tf2O(0.165mL，0.976mmol)。再搅拌45min后，将该反应用饱和的NaHCO3(水溶液)淬灭，并用DCM萃取(3x)。使合并的有机相通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发。将残余物再溶于DCM中，并将其在二氧化硅上蒸发。将该二氧化硅置于10g二氧化硅筒上，并将该系统用10-80％EtOAc/己烷梯度洗脱。将产物各级分合并，并蒸发。将得到的残余物用DCM/Et2O/己烷研磨，并通过过滤收集沉淀，得到标题化合物，为浅黄色固体；
LC-MS：Rt 1.23min；MS 443.5m/z[M+H]方法2minLowpHv03。
步骤6：(S)-11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮
在以下条件下通过SFC分离外消旋的11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮，得到标题化合物，为单一对映异构体:
SFC Chiralpak IB 250 x 10mm,5um在35degC,40％甲醇+0.1％v/v DEA/60％CO2,10ml/min,检测：UV在220nm
11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮的对映异构体1
SFC保留时间＝5.61分钟,>99％e.e。
LC-MS：Rt 1.26min；MS 443.2m/z[M+H]方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55-7.31(5H,多重峰),7.12(1H,s),5.16(1H,d),4.98(1H,dd),4.23-4.07(2H,多重峰),4.07-3.92(2H,多重峰),3.65(3H,s),3.62(1H,多重峰),3.36(3H,s)
将第二种对映异构体在SFC分离，保留时间＝7.61min。
实施例14：
3-((8S,11S)-11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈或
3-((8R,11S)-11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈或
3-((8S,11R)-11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈或
3-((8R,11R)-11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈
步骤1：2-((1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-(5-(3-氰基苯基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)丙-2-基)氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺
在0℃向3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(实施例9a,步骤1)(280mg，0.597mmol)在THF(5975μL)中的搅拌的溶液中加入氢化钠(60％，在矿物油中)(71.7mg，1.792mmol)。将得到的红色溶液温至室温，并搅拌20分钟，随后却至0℃。然后历经5分钟滴加2-溴-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(实施例13,步骤1)(141mg，0.777mmol)。历经3小时将该反应混合液温至室温，然后冷却至0℃，并用饱和的氯化铵水溶液(5mL)淬灭。将DCM(10mL)加入该双相溶液中。将水相分离，并用DCM萃取(3 x 10mL)；将合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，并减压浓缩，得到黄色油状物。使用Teledyne ISCO(12g，SiO2)用0-65％EtOAc/己烷洗脱将该油状物纯化，得到标题化合物，为无定形白色固体。
LCMS；Rt 1.48min；MS m/z 570.7[M+H]+；2minlowpHV03。
步骤2：3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-氧代乙氧基)丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈
类似于实施例13的步骤3从2-((1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-(5-(3-氰基苯基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6(2H)-基)丙-2-基)氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺和2-溴-4-氯噻唑制备标题化合物；
LCMS；Rt 1.65min；MS m/z 628.2[M+H]+；2minlowpHV03。
步骤3：3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-羟基乙氧基)丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈的非对映异构体混合物
类似于实施例13的步骤4从3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-氧代乙氧基)丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈制备标题化合物；
LCMS；Rt 1.55,1.57分钟；MS m/z 630.6,630.6[M+H]+；2minlowpHV03。大约是1:1的非对映异构体的混合物。
步骤4：3-(11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈的非对映异构体对(pair)1和对(pair)2
类似于实施例13的步骤5从3-(6-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-(2-(4-氯噻唑-2-基)-2-羟基乙氧基)丙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈制备标题化合物；
使用Agilent制备系统纯化残余物(20-50％，低pH)，得到作为无定形白色固体的标题非对映异构体对。
第一个洗脱峰：
3-(11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈的非对映异构体对1:
LCMS；Rt 1.06min；MS m/z 498.2[M+H]+；2minlowpHV03。
第二个洗脱的峰:
3-(11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈的非对映异构体对2:
LCMS；Rt 1.08min；MS m/z 498.5[M+H]+；2minlowpHV03。
步骤5：在以下条件下通过SFC从非对映异构体对2分离11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈的非对映异构体1:
SFC Chiralpak ID 250 x 10mm,5um在35degC,40％异丙醇/60％CO2,10ml/min,检测：UV在220nm
第二个洗脱的峰：SFC保留时间＝7.01分钟
LCMS；Rt 1.12分钟；MS m/z 498.3[M+H]+；2minlowpHV03。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.71-7.50(4H,m),7.05(1H,s),5.09(1H,d),4.98-4.92(1H,m),4.08-4.03(2H,m),3.82-3.73(1H,m),3.70-3.63(1H,m),3.59(3H,s),3.57-3.42(1H,m),3.27(3H,s)。
实施例15:
(8R,10R)-8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
步骤1:((8R)-甲磺酸10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4’,5’:3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)甲酯
将甲磺酰氯(0.021ml，0.274mmol)滴加至(8R)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮(实施例6，步骤3)(100mg，0.217mmol)、三乙胺(0.039ml，0.283mmol)和DMAP(2.66mg，0.022mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。将该混合液在0℃搅拌30min，然后用DCM(20ml)稀释，并用水(20mL)淬灭。将各相分离，并将有机层经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发，得到标题化合物。
LC-MS Rt 1.31min[M+H]+538.5(方法2minLowpHv03)
步骤2：(8R)-8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将((8R)-甲磺酸10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4’,5’:3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)甲酯(117mg，0.217mmol)、碳酸铯(142mg，0.435mmol)和咪唑(22.51mg，0.331mmol)在乙腈(6mL)的混合液在80℃加热16小时，然后在85℃加热3.5小时。加入另外部分的咪唑(22.51mg，0.331mmol)和碳酸铯(142mg，0.435mmol)，并将该混合液再加热2小时。将该混合液冷却至室温，用水(30ml)稀释，并用DCM萃取(2x 30ml)。将合并的有机萃取物用盐水(30ml)洗涤，使其通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-100％EtOAc/己烷、然后用0-10％MeOH/DCM洗脱纯化，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LC-MS Rt 0.85min[M+H]+510.5和Rt 0.89min[M+H]+510.4(方法2minLowpHv03)
步骤3：(8R,10R)-8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC进行(8R)-8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体混合物的分离，得到标题化合物。
柱：Chiralpak AD-H 250 x 10mm,5um在35℃
流动相：30％甲醇+0.1％v/v DEA/70％CO2
流速：10ml/min
检测：UV在220nm
非对映异构体(8R,10R)-8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
Rt＝5.98min
LC-MS Rt 0.84min[M+H]+510.5方法2minLowpHv03
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(m,2H),7.19(dd,2H),7.13(m,1H),7.05(s,1H),6.94(s,1H),6.47(s,1H),6.11(d,1H),6.06(d,1H),4.12(m,3H),3.88(dd,1H),3.59(dd,1H),3.35(s,3H),3.34(s,3H)
手性纯度>99％d.e.
在Rt＝3.74分钟洗脱了第二种非对映异构体
实施例16:
(8R,10R)-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8R,10S)-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10R)-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮或
(8S,10S)-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
步骤1：2-(3-溴-2-羟基丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
在0℃将48％HBr(12.25ml，108mmol)滴加至2,3-环氧丙基苯邻二甲酰亚胺(2g，9.84mmol)在氯仿(25ml)中的溶液中。将该混合液搅拌16小时，然后用盐水(50ml)洗涤。将水相用DCM萃取(2 x 40ml)，并使合并的有机相通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-60％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物。
LC-MS：Rt 0.95min[M+H]+284.1(方法2minLowpHv03)
步骤2：2-(3-溴-2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮
将2-(3-溴-2-羟基丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(100mg，0.352mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液滴加至DMAP(43.0mg，0.352mmol)、咪唑(47.9mg，0.704mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(74.3mg，0.493mmol)在DMF(1mL)中的混合液中。将该混合液在室温搅拌18小时。将该混合液用EtOAc(20ml)稀释，并用饱和的NaHCO3(水溶液)(20ml)和盐水(3x10ml)洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-100％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物。
LC-MS Rt 1.72min[M+H]+398.3(方法2minLowpHv03)
步骤3：6-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将碳酸铯(115mg，0.351mmol)加入1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(中间体Gc)(53.4mg，0.176mmol)和2-(3-溴-2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(70mg，0.176mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(1273μl)中的溶液中。将该混合液在50℃加热18小时，然后冷却至室温，并用水(30ml)稀释。将该混合液用乙酸乙酯萃取(3 x 30ml)，将合并的有机萃取物用盐水(90ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-100％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物。
LC-MS Rt 1.68min[M+H]+594.6(方法2minLowpHv03)
步骤4：10-(5-氯呋喃-2-基)-8-((1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将三氟乙酸(0.032ml，0.421mmol)加入6-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丙基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(50mg，0.084mmol)在甲苯(1ml)中的溶液中，并将该混合液搅拌30min。加入三氟甲磺酸铋(27.6mg，0.042mmol)和5-氯呋喃-2-甲醛(16.49mg，0.126mmol)，并将该混合液在室温搅拌16小时。将该混合液用乙酸乙酯(30ml)稀释，并用水(30ml)、饱和的NaHCO3(水溶液)(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-100％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题化合物。
LC-MS Rt 1.42min[M+H]+592.5(方法2minLowpHv03)
步骤5：8-(氨基甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将乙醇胺(108μl，1.790mmol)加入10-(5-氯呋喃-2-基)-8-((1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮(106mg，0.179mmol)在甲苯(3087μl)中的溶液中。将该混合液在70℃搅拌6.5小时，然后在室温搅拌16小时。将该混合液用水(50ml)稀释，并用乙酸乙酯萃取(50ml)。将有机相用1M NaOH(水溶液)(20ml)洗涤，使其通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LC-MS Rt 0.74min[M+H]+462.4和Rt 0.78min[M+H]+462.4(方法2minLowpHv03)
步骤6：4-溴-N-((10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)甲基)丁酰胺
将4-溴丁酰氯(29.4mg，0.158mmol)加入8-(氨基甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮(61mg，0.132mmol)和三乙胺(0.022mL，0.158mmol)在DCM(4mL)中的溶液中。将该混合液在室温搅拌3.5小时，然后用DCM(30ml)稀释，并用饱和的NaHCO3(水溶液)(30ml)洗涤。使有机相通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发，得到标题化合物，为粗制的物质，将其直接使用。
步骤7：10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
将氢化钠(60重量％在矿物油中,26.8mg，0.671mmol)加入4-溴-N-((10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-8-基)甲基)丁酰胺(82mg，0.134mmol)在THF(6711μl)中的溶液中。将该混合液在回流下加热1小时，然后冷却至室温，并用水(30ml)淬灭。将该混合液用乙酸乙酯萃取(2 x 30ml)。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，使其通过疏水烧结玻璃料，并在真空下蒸发，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。
LC-MS Rt 1.20min[M+H]+530.4(方法2minLowpHv03)
步骤8：10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
在以下条件下通过SFC纯化外消旋的10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮，得到标题化合物，为粗制的物质。
柱：Chiralcel OD-H 250 x 10mm,5um在35℃
流动相：40％异丙醇+0.1％v/v DEA/60％CO2
流速：10ml/min
柱温：35deg C
检测：UV在220nm
实施例16：(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮的非对映异构体1
SFC Rt＝5.18min
在以下条件下通过质谱指导的HPLC进行该非对映异构体的最终纯化，得到标题化合物。
柱：XSelect CSH Prep C18柱,30 x 100mm,5um。
流动相：A＝0.1％在水中的FA,B＝0.1％在MeCN中的FA
梯度:0.0-0.5min：30％B 30mL/min
    0.5-1.0min：30％B 30-50mL/min
    1.0-7.2min：30-70％B,
    7.2-7.3min：70-98％B,
    7.3-9.4min：98％B
    9.4-9.5min：30％B 50mL/min
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.10(s,1H),6.44(s,1H),6.15(d,1H),6.09(d,1H),4.87(dd,1H),4.07(m,1H),3.92(dd,1H),3.65(dd,2H),3.46(m,1H),3.43(s,3H),3.38(s,3H),3.35(m,1H),2.54(s,3H),2.38(m,2H),2.07(m,2H)
LC-MS Rt 1.20min[M+H]+530.5(方法2minLowpHv03)
中间体的制备
中间体A：
6-(2-氨基-乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮
步骤1：1,3,6-三甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
在N2下在搅拌下向N,N'-二甲基脲(商购)(72.1g，819mmol)和DMAP(商购)(100g，819mmol)在吡啶(300mL)中的搅拌的混悬液中滴加醋酸酐(255mL，2701mmol)。添加完成后，将该反应混合液在室温搅拌3小时。该时间后，将挥发物减压除去，得到粘稠的橙色吡啶溶液，向其加入产品晶种。将该混合液在0-4℃储藏7天。将得到的结晶固体减压过滤，用乙醚洗涤，并干燥，得到标题化合物，为无色结晶。将母液进一步经硅胶色谱用30-50％在异己烷中的EtOAc洗脱纯化。将得到的固体用乙醚(500mL)稀释，并在0-4℃储藏过夜。将得到的结晶过滤掉，并用异己烷洗涤，然后干燥，得到无色结晶状的标题化合物，将其合并。得到标题产物，为白色结晶。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.58(1H,s),3.38(3H,s),3.30(3H,s),2.22(3H,s)；
LC-MS Rt＝0.55min[M+H]+155.4(方法：2minLC_v003)。
步骤2：5-苯甲酰基-1,3,6-三甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
将1,3,6-三甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(步骤1)(5g，32.4mmol)和氯苯(50mL)装入三颈烧瓶，将该容器用氮气排空。一次性加入苯甲酰氯(商购)(11.2mL，97mmol)，随后加入氯化锌(II)(5g，36.7mmol)，并将该反应混合液加热至110℃达16h。将该反应混合液冷却至室温，然后倾入水(100mL)和EtOAc(100mL)中。将各层分离，并将水相用EtOAc萃取(2 x 150mL)。将合并的有机物用水(100mL)洗涤，并干燥(Na2SO4)，减压过滤，并蒸发得到橙色固体。将该固体用己烷洗涤，随后用热乙醚洗涤，得到产物，为类白色固体。将母液进一步经硅胶色谱用10％-100％EtOAc/己烷洗脱纯化。得到标题产物，为淡橙色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(2H,dd),7.60(1H,t),7.48(2H,t),3.52(3H,s),3.38(3H,s),2.26(3H,s)；
LCMS Rt＝0.80min[M+H]+259(方法2minLC_v003)。
步骤3：5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
在搅拌下在氮气下将溴(0.497mL，9.68mmol)加入5-苯甲酰基-1,3,6-三甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(步骤2)(2.5g，9.68mmol)在氯仿(50mL)中的溶液中。将该混合液加热至55℃达2h。加入另一部分的溴(0.25mL，0.5当量)，并在55℃再继续加热30min。将该混合液冷却至室温，用CHCl3(50mL)稀释，并倾入饱和的硫代硫酸钠溶液(150mL)中。将各层分离，并将水相用CHCl3(50mL)萃取。将合并的有机物用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并减压过滤。将溶剂减压蒸发，得到浅黄色固体。将该固体溶于热的EtOAc(50mL)中，并缓慢蒸发直至观察到结晶。通过减压过滤收集得到的白色固体，并洗涤用冷的EtOAc(10mL)，并风干。将该化合物进一步在真空下在50℃干燥2h。将标题产物分离为白色微针状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90(2H,d),7.67(1H,t),7.52(2H,t),4.40(2H,s),3.50(3H,s),3.17(3H,s)；
LC-MS Rt＝2.75min[M+H]+337/339(方法10minLC_v003)。
步骤4：[2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-1,2,3,4-四氢-吡咯并[3,4-d] 嘧啶-6-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯
将在EtOH(12mL)中的5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基-1H-嘧啶-2,4-二酮(步骤3)(1g，2.97mmol)用TEA(0.41mL，2.97mmol)和2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯(商购)(0.465mL，2.97mmol)处理。使用微波辐照将该混合液加热至100℃达1h。该时间后，形成了白色沉淀。通过减压过滤收集该固体，并用乙醚洗涤。得到标题化合物，为白色针状物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49-7.42(5H,m),6.43(1H,bs),4.50(1H,bs),4.05(2H,t),3.43(3H,s),3.36(3H,s),3.34(2H,m),1.42(9H,s)；
LCMS Rt＝1.06min[M+H]+399(方法2minLC_v003)。
步骤5：6-(2-氨基-乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶 -2,4-二酮
将[2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-1,2,3,4-四氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯(步骤4)(1.11g，2.79mmol)溶于DCM(10mL)中，并用三氟乙酸(2.1mL，25.1mmol)处理。将该反应混合液在室温搅拌4h。通过倾入搅拌中的2M NaOH中将该反应淬灭，并进一步加入NaOH直至pH试纸呈碱性。将各层分离，并将水相用DCM萃取(3x75mL)。将合并的有机相用水(100mL)、盐水(75mL)洗涤，并使其通过疏水烧结玻璃料。将溶剂减压除去，得到标题化合物，为类白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52-7.45(5H,m),6.48(1H,s),3.98(2H,t),3.44(3H,s),3.36(3H,s),2.97(2H,t),1.27(1H,br s)；
LC-MS Rt＝0.72min[M+H]+299(方法2minLC_v003)。
中间体Aa
6-(2-氨基-乙基)-5-(4-氟-苯基)-1,3-二甲基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮。
类似于中间体A通过用4-氟苯甲酰氯替代苯甲酰氯(步骤2)制备该化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.51(2H,dd),7.29(2H,t),6.96(1H,s),3.82(2H,t),3.21(3H,s),3.14(3H,s),2.79(2H,t),1.57(2H,br s)；
LC-MS Rt＝0.74min[M+H]+317(方法2minLC_v003)。
中间体Ab
6-(2-氨基乙基)-1,3-二甲基-5-(间甲苯基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶 -2,4(3H,6H)-二酮
类似于中间体A通过用3-甲基苯甲酰氯(商购)替代苯甲酰氯(步骤2)制备该化合物。
LC-MS：Rt 0.58min；MS m/z 313[M+H]+；方法2minLowpH
中间体B
6-(2-氨基-乙基)-5-(3-氯-苯基)-1,3-二甲基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶 -2,4-二酮
步骤1 1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮)
在氮气下在30℃将1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(商购(40g，285mmol)和1-(异氰基甲基磺酰基)-4-甲基苯(商购)(84g，428mmol)溶于2-MeTHF(1000mL)中，并保持5min。然后将该容器冷却至0℃(内温)。通过滴液漏斗历经0.5h将KOtBu(商购)(64.1g，571mmol)在2-MeTHF(500mL)中的溶液加入该溶液中，使得内部温度保持低于5℃。加入KOtBu溶液后，形成橙色沉淀。通过滴液漏斗历经5min加入另一部分的2-MeTHF(455mL)。40min后，通过滴液漏斗历经15min加入饱和的NH4Cl溶液(2 x 400mL)将该暗橙色混悬液淬灭。然后用EtOAc(1L)稀释该混悬液，将各层分离，并将水相用EtOAc萃取(3 x 1L)。将合并的有机物干燥(MgSO4)，并减压过滤。将溶剂减压除去，得到棕色半固体。将该固体混悬于MeOH(300mL)中，超声处理，并在室温搅拌15min，通过减压过滤法过滤，并用MeOH(100mL)洗涤。将该固体在真空下在50℃干燥24h。得到标题化合物，为淡棕色无定形固体(26.34g，52％)
LC-MS：Rt 0.59min；非离子化；方法2minLowpHv01；表明其纯度为>95面积％。
可通过蒸发MeOH得到第二批物质，得到红色油状物。用MeOH(50mL)研磨，减压过滤，用MeOH(20mL)洗涤，并在真空下在50℃干燥16h，得到标题化合物，为淡棕色无定形固体(1.03g，2％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.82(1H,s),7.43(1H,dd),6.74(1H,t),3.29(3H,s),3.19(3H,s)。
步骤2 1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物
步骤A
在氮气下将2-羟基乙基氨基甲酸叔丁酯(商购)(6.19ml，40mmol)溶于无水MeCN(18mL)中。在-20℃(内温)将该溶液滴加至SOCl2(商购)(3.65ml，50.0mmol)在无水MeCN(200ml)中的溶液中，使得内部温度不升高至-15℃以上。使用无水MeCN(2mL)冲洗滴液漏斗，并将其加入该反应混合液中。10min后，历经10min通过滴液漏斗滴加无水吡啶(12.94ml，160mmol)，保持温度低于-15℃。然后在-20℃将该反应混合液搅拌1h，随后在0℃再搅拌1h。该时间后，通过加入水(50mL)和EtOAc(50mL)将该反应淬灭。将各层分离，并将有机层用1M HCl(100mL)洗涤；然后将水层用EtOAc萃取(100mL)。将合并的有机物用饱和的NaHCO3(100mL)、水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并减压过滤。将溶剂减压除去，得到暗橙色油状物。
步骤B
将步骤A的油状物溶于MeCN(160ml)中，并冷却至0℃(内温)。加入氯化钌(III)水合物(商购)(0.045g，0.200mmol)，随后加入NaIO4(商购)(12.83g，60.0mmol)和水(160ml)。将该反应混合液在0℃剧烈搅拌1h，然后通过加入水(80mL)淬灭。加入乙醚(100mL)，并将各层分离；将水相用乙醚萃取(3 x 100mL)，并将合并的有机物用水(60mL)洗涤直至黑色/绿色消失。将有机物干燥(Na2SO4)，并减压过滤；将溶剂减压除去，得到白色固体。将该固体混悬于煮沸的MTBE(110mL)中，并将该混悬液热过滤(>80℃)。将该无色溶液缓慢冷却至室温过夜，得到白色针状物。将通过减压过滤收集该针状物，然后在真空下在50℃干燥2h。将标题化合物分离，为白色针状物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.62(2H,t)；4.06(2H,t)；1.57(9H,s)。
步骤3[2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6- 基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯
将1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮)(步骤1)(4.43g，24.72mmol)和氢化钠(商购)(60％在矿物油中的分散液)(1.286g，32.1mmol)用氮气脱气15min。然后将反应物混悬于无水THF(44.5mL)中，并在室温搅拌15min，然后冷却至0℃(外部温度)。10min后，分两批加入1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物(步骤2)(6.07g，27.2mmol)在无水THF(44.5mL)中的溶液(2 x 24mL)。添加完成后，除去冰浴，并将该反应混合液在室温搅拌50min。然后通过加入饱和的NH4Cl溶液(30mL)将该反应混合液淬灭。将该反应混合液用水(30mL)、EtOAc(60mL)稀释，并将各层分离。将水层用EtOAc萃取(2 x 50mL)，用NaCl饱和，并用MeCN(4 x 50mL)萃取。将水层蒸发至(～20mL)，并用MeCN(3 x 50mL)进一步萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，并减压过滤，并将溶剂蒸发。将得到的固体吸附至二氧化硅，并经ISCO SiO2125g柱用60-95％EtOAc/己烷洗脱纯化。将含产物的级分合并，并蒸发，得到白色结晶固体。将该固体在真空下在50℃干燥3h。得到标题化合物，为白色结晶固体。
LC-MS：Rt 0.81分钟；MS m/z 323[M+H]+；(方法2minLowpH)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.42(1H,d),6.95(1H,t),6.76(1H,d),4.03(2H,t),3.29(2H,q),3.27(3H,s),3.20(3H,s),1.35(9H,s)。
步骤4(6-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代 -2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)硼酸
在室温将2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁基酯(步骤3)(1.8g，5.58mmol)溶于无水THF(49ml)中。然后将该烧瓶抽真空，并回填充氮气(x3)，并冷却至-78℃(外部温度)。10min后，历经3min加入LDA(0.731M，22.92ml，16.75mmol，在THF中，通过标准方法从BuLi和二异丙基胺新鲜制备)。15min后，在-78℃历经2分钟滴加硼酸三异丙酯(3.87ml，16.75mmol)，并将该反应在-78℃保持2小时。然后在氮气下通过注射器用饱和的NH4Cl溶液(10mL)将该反应混合液淬灭，并用水(60mL)和EtOAc(40mL)稀释。将各层分离，并将水相用EtOAc萃取(4 x 50mL)。将合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并减压过滤，得到浅黄色溶液。在减压下将溶剂体积减少一半，得到白色固体的混悬液。通过减压过滤将该固体回收，并风干，随后在真空下加热至50℃达3h。得到标题化合物，为白色结晶固体。
LC-MS：Rt 0.86min；MS m/z 367[M+H]+；(方法2minLowpH)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(2H,s),6.96(1H,s),6.82(1H,t),4.41(2H,t),3.32(3H,s),3.30(2H,m),3.28(3H,s),1.32(9H,s)。
步骤5{2-[5-(3-氯-苯基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-吡咯并 [3,4-d]嘧啶-6-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯
将(6-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)硼酸(步骤4)(631mg，1.724mmol)、Pd-118(商购，CAS 95408-45-0)(51.1mg，0.078mmol，5mol％)和碳酸钾(433mg，3.13mmol)混悬于醋酸正丁酯(11.2mL)中。将该容器抽真空，并回填充N2(x 4)。在N2气流下，加入1-溴-3-氯苯(商购)(0.184mL，1.567mmol)和水(0.056mL，3.13mmol)。将该容器在微波辐照下加热至80℃达2小时。加入另外的量的水(100μL)和1-溴-3-氯苯(0.184mL，1.567mmol)，并将该混合液在微波辐照下加热至80℃达2小时。将该反应混合液用水(40mL)和EtOAc(20mL)稀释，并将各层分离。将水相用EtOAc萃取(4 x 20mL)，并将合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并减压过滤。将硅胶加入该溶液中，并将溶剂减压蒸发。将残余物经ISCO SiO280gRf柱用50-70％EtOAc/己烷洗脱纯化。将含产物的级分合并，并蒸发，得到浅黄褐固体，将其在真空下在50℃干燥3小时。得到标题产物，为浅黄褐固体。
LC-MS：Rt 1.04分钟；MS m/z 433/435[M+H]+；(方法2minLowpH)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48-7.40(3H,m),7.37-7.32(1H,m),6.45(1H,s),4.50(1h,br s),4.05(2H,t),3.43(3H,s),3.36(3H,s),3.35(2H,q),1.43(9H,s)。
步骤6：6-(2-氨基-乙基)-5-(3-氯-苯基)-1,3-二甲基-1,6-二氢-吡咯并 [3,4-d]嘧啶-2,4-二酮
将{2-[5-(3-氯-苯基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(步骤5)(429mg，0.991mmol)溶于DCM(10ml)中。分两批加入TFA(1.374ml，17.84mmol)，并将该反应混合液在氮气下搅拌。2小时后，用饱和的K3CO3溶液(20mL)将该混合液的pH调节至pH 11。将各层分离，并将水相用DCM萃取(4 x 20mL)。使合并的有机物通过疏水烧结玻璃料，并减压蒸发，得到褐色固体，将其在真空下在50℃干燥5h，得到标题化合物，为褐色固体。
LC-MS：Rt 0.58min；MS m/z 333/335[M+H]+；(方法2minLowpH)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.5-7.31(4H,m),6.50(1H,s),3.97(2H,t),3.43(3H,s),3.36(3H,s),2.99(2H,t),1.29(2H,br s)。
中间体Ba
6-(2-氨基乙基)-1,3-二甲基-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
类似于中间体B通过用1-溴-3-(三氟甲基)苯替代1-溴-3-氯苯制备标题化合物；
LC-MS：Rt 0.62分钟；MS m/z 367.5[M+H]+；方法2minLowpH
中间体Bb
6-(2-氨基乙基)-5-(3-甲氧基苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
类似于中间体B通过用3-溴茴香醚替代1-溴-3-氯苯制备标题化合物；
LC-MS：Rt 0.63min；MS m/z[M+H]+；方法2minLowpH
中间体Bc
6-(2-氨基乙基)-5-(3,5-二甲基苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
类似于中间体B通过用1-溴-3,5-二甲基苯替代1-溴-3-氯苯制备标题化合物；
LC-MS：Rt 0.69min；MS m/z 327.5[M+H]+；方法2minLowpH_
中间体Bd
3-(6-(2-氨基乙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苯甲酸甲酯
类似于中间体B通过用3-溴苯甲酸甲酯替代1-溴-3-氯苯制备标题化合物；
LC-MS：Rt 0.98min；MS m/z 457[M+H]+；方法2minLowpH
中间体Be
3-(6-(2-氨基乙基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈
类似于中间体B通过用3-溴苄腈替代1-溴-3-氯苯制备标题化合物。
LC-MS Rt 0.52分钟[M+H]+324.4(方法2minLowpH)
中间体Bf
6-(2-氨基乙基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
类似于中间体B通过用2-碘-4-甲基噻唑(中间体F)替代1-溴-3-氯苯制备标题化合物
LC-MS Rt 0.64分钟[M+H]+320.4(方法2minHighpHv01)
中间体C
6-(2-羟基乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将在EtOH(4mL)中的5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(中间体A的步骤3)(400mg 1.19mmol)用TEA(0.16mL，1.19mmol)和乙醇胺(72.5mg，1.19mmol)处理。将该混合液在微波辐照下加热至100℃达1h。加入另一部分的乙醇胺(96μL)，并继续再加热20min。将该反应混合液倾入DCM(75mL)和水(75mL)中。将各层分离，并将水相用DCM萃取(2 x 50mL)。将合并的有机相用水(2 x 50mL)洗涤，然后通过疏水烧结玻璃料。将溶剂减压除去，得到浅黄色固体。将该固体在热的EtOH中研磨，并使其冷却。通过减压过滤收集标题产物，为白色粉末。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48-7.45(5H,m),6.54(1H,s),4.07(2H,t),3.87(2H,m),3.42(3H,s),3.35(3H,s),1.69(1H,br s),1.56(1H,br s)；
LC-MS Rt＝0.83min[M+H]+300(方法2minLC_v003)。
中间体D
6-((R)-2-羟基-1-甲基-乙基)-1,3-二甲基-5-苯基-1,6-二氢-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4-二酮
将5-苯甲酰基-6-(溴甲基)-1,3-二甲基-1H-嘧啶-2,4-二酮(中间体A的步骤3)(200mg 0.59mmol)、三乙胺(82μl、0.59mmol)和(R)-2-氨基丙-1-醇(45mg，0.59mmol)(商购)在EtOH(2mL)中合并。将该混合液在100℃在微波辐照下加热1小时。将溶剂减压蒸发。将固体残余物溶于DCM和水中，并萃取(x3)。将合并的有机相用水洗涤，使其通过疏水烧结玻璃料，并减压蒸发，得到标题化合物，为类白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.44(5H,m)；6.54(1H,s)；4.06-4.00(1H,m)；3.96-3.82(2H,m)；3.41(3H,s)；3.35(3H,s)；1.11(3H,d)。
LCMS Rt＝0.82min[M+H]+314(方法2minLowpH)。
中间体Ea：
(S)-三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯
在0℃将三氟甲磺酸酐(1.398ml，8.32mmol)滴加至商购可得的R-丙酮缩甘油(1g，7.57mmol)和2.6-卢剔啶(1.139ml，9.84mmol)在DCM(25.2mL)中的溶液中。将该混合液温至室温，并搅拌1小时。然后将该混合液在真空下蒸发，并将残余物在水(10mL)和DCM(20mL)之间分配。将各相分离，并将水相用DCM萃取(3 x 10mL)。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，得到标题化合物，为粗制的物质，将其未经进一步纯化地使用。
中间体Eb：
三氟甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯
通过与中间体Ea类似的方法从商购可得的外消旋的丙酮缩甘油制备标题化合物。
中间体F:
2-碘-4-甲基噻唑
在-78℃将甲基锂溶液(1.6M在Et2O,189ml，303mmol)滴加至在乙醚(505ml)中的4-甲基噻唑(22.94ml，252mmol)中。将该混合液在-78℃搅拌30min，然后加入碘(83g，328mmol)，并将该混悬液缓慢温至0℃，并搅拌45min。将该反应通过加入水(150ml)淬灭，用乙醚(100ml)稀释，并将各层分离。将水相用乙醚萃取(2 x 200ml)，并将合并的有机相用饱和的硫代硫酸钠水溶液(150ml)、2M Na2CO3(水溶液)(100ml)、水(100ml)和盐水(100ml)洗涤，经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用0-5％TBME/异己烷洗脱纯化，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.87(1H,s),2.48(3H,s)
LC-MS Rt 1.00min[M+H]+2.26(方法2minLowpHv03)
中间体Ga：
3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈
步骤1：1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将氢化钠(60％，在矿物油中，335mg，8.4mmol)加入1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(中间体B步骤1)(1.00g，5.6mmol)、SEM-Cl(1.485mL，8.4mmol)和苄基三乙基氯化铵(76mg，0.34mmol)在THF(15mL)中的冰冷却的部分混悬液中。使该混合液缓慢达到室温，并搅拌18小时。将该反应混合液用饱和的氯化铵溶液(80mL，滴加)小心地淬灭，然后用乙酸乙酯萃取(3 x 40mL)。将合并的有机层用水(1 x 40mL)、盐水(1 x 40mL)洗涤，然后用硫酸镁干燥，并将溶剂在真空下除去。将残余物用异己烷研磨，并在真空下在50℃干燥，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(1H,s),6.47(1H,s),5.26(2H,s),3.48(2H,t),3.41(3H,s),3.40(3H,s),0.93(2H,t),0.00(9H,s)。
LC-MS Rt 1.15min；MS m/z 310.4[M+H]+；(方法2minLowpHv01)
步骤2：1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基硼酸
在-78℃将丁基锂(1.26M,28.4mL，35.8mmol)滴加至二异丙基胺(3.63g，35.8mmol)在THF(20mL)中的溶液中，保持内部温度低于-40℃。一旦添加完成，使烧瓶的内容物温至-5℃，然后再冷却至-78℃。在-78℃历经约30分钟的时间使得到的混合液通过套管进入1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(步骤1)(6.93g，22.4mmol)在THF(75mL)中的混悬液。将该混合液在-78℃搅拌30分钟，然后滴加硼酸三异丙酯(8.3mL，35.8mmol)。将该溶液在-78℃搅拌1.5小时，然后通过小心地加入饱和的氯化铵(200mL)淬灭。使该混合液达到室温，并用乙酸乙酯萃取(3 x 100mL)。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，并将溶剂在真空下除去。将粗制的物质用乙醚/己烷研磨，并在真空下在50℃干燥。将该固体与母液重新合并，将其在真空下浓缩。将生成的半固体物质用异己烷研磨，并在真空下在50℃干燥，得到标题化合物；
LC-MS：Rt 1.19min；MS m/z 354.4[M+H]+；(方法2minLowpHv01)
步骤3：3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈
将1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基硼酸(步骤2)(2.0g，5.7mmol)、3-溴苄腈(937mg，5.2mmol)、Pd-118(168mg，0.26mmol)和碳酸钾(1.42g、10.3mmol)在醋酸正丁酯(40mL)中的混合液加热至80℃，然后加入水(2.23mL，124.0mmol)，并将该混合液在80℃加热90分钟。将该反应混合液用水(100mL)稀释，尽可能地将各层分离，并将水相(和残留的有机部分)用DCM萃取(1 x 100mL，2 x 50mL)。将合并的有机萃取物用盐水(1 x 100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，并将溶剂在真空下除去。将得到的残余物从甲醇重结晶，并在真空下在50℃干燥，得到标题化合物；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87-7.82(2H,多重峰),7.74(1H,d),7.59(1H,t),6.59(1H,s),5.14(2H,s),3.50(2H,t),3.43(3H,s),3.56(3H,s),0.91(2H,t),0.00(9H,s)。
LC-MS：Rt 1.34分钟；MS m/z 411.4[M+H]+；(方法2minLowpHv01)
步骤4：3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈
将TBAF溶液(20.3mL，20.3mmol)加入3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(步骤3)(832mg，2.0mmol)在THF(6mL)中的混悬液中，得到溶液，将其在60℃搅拌1小时。从该反应混合液除去大多数有机溶剂，加入水(100mL)，并将该混合液搅拌5分钟，将该水性混悬液用氯仿萃取(4x100mL)。大量的混合液保留为乳液。将饱和的盐水(100mL)加入以破坏乳液，并将水相用更多的氯仿萃取(4 x 100mL)。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，并将溶剂在真空下除去，得到红色油状物。将该粗制的红色油状物用甲醇研磨，得到粉红色固体，将其在真空下在50℃干燥。将该固体用甲醇再次研磨，并在真空下在50℃干燥，得到标题化合物。
LC-MS：Rt 0.91分钟；MS m/z 281.4[M+H]+；(方法2minLowpHv01)
中间体Gb：
5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
步骤1：5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基硼酸(中间体Ga步骤2)(7.31g，20.7mmol)、1-溴-3-氟苯(2.10mL，18.8mmol)、Pd-118(245mg，0.38mmol),和氢氧化钡(6.44g，37.6mmol)在醋酸正丁酯(64mL)中的混合液加热至80℃。加入水(4.06mL，226.0mmol)，并将该混合液在80℃剧烈搅拌30分钟。将该反应混合液冷却至室温，用1M HCl(水溶液)(100mL)稀释，并用DCM萃取(3x 100mL)。将合并的有机层用饱和的盐水(1x 100mL)洗涤，经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。将残余物从甲醇再结晶，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(1H,多重峰),7.34(1H,d),7.29(1H,多重峰),7.18(1H,t),6..59(1H,s),5.20(2H,s),3.49-3.43(5H,多重峰),3.38(3H,s),0.88(2H,t),0.00(9H,s)。
LC-MS Rt 1.38min[M+H]+404.2(方法2minLowpHv02)
步骤2：5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
将四-正丁基氟化铵溶液(1.0M,24.8mL，24.8mmol)加入5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(1.00g，2.48mmol)在THF(7mL)中的混悬液中，并将该混合液在60℃搅拌2小时，然后冷却至室温，并搅拌4小时。将该混合液在真空下浓缩，并将残余物溶于乙酸乙酯(50mL)中。将该混合液用水(3x25mL)和盐水(1 x 25mL)洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，并将溶剂在真空下蒸发，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(1H,br s),7.94(1H,d),7.79(1H,d),7.48(1H,dd),7.18(1H,t),6.94(1H,s),3.33(3H,s)*,3.24(3H,s)
LC-MS Rt 0.96min[M+H]+274.5(方法2minLowpHv01)
中间体Gc：
1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
通过与3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(中间体Ga)类似的方法通过用2-碘-4-甲基噻唑(中间体F)替代3-溴苄腈(步骤3)制备标题化合物。
LC-MS Rt 0.95min[M+H]+277.4(方法2minLowpHv03)。
中间体Gd：
1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
通过与3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(中间体Ga)类似的方法通过用4-溴-2-甲基噻唑替代3-溴苄腈(步骤3)制备标题化合物。
LC-MS Rt 0.95min[M+H]+277.4(方法2minLowpHv03)
中间体H:
4-氯噻唑-2-甲醛
步骤1：2,5-二溴-4-氯噻唑
将2,4-二氯噻唑(10g，64.9mmol)溶于乙酸(50.0ml)中，并加热至60℃。滴加溴(15.05ml，292mmol)，然后将该反应混合液在90℃搅拌5.5小时。将该反应混合液冷却至室温，通过缓慢加入固体碳酸钠碱化，然后用水(100mL)稀释，并用Et2O萃取(3x150ml)。将合并的有机萃取物用饱和的硫代硫酸钠水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，减压蒸发，得到标题化合物，为浅黄色油状物。
LC-MS Rt 1.43min[M+H]+275.9/277.9/279.9/281.9(方法2minLowpHv03)
步骤2：2-溴-4-氯噻唑
在-90℃历经20min将nBuLi(2.5M在己烷中,7.21mL，18.03mmol)滴加至在THF(100mL)中的2,5-二溴-4-氯噻唑(步骤1)(5g，18.03mmol)中，并将该混合液在-90℃搅拌30min。加入在THF(2mL)中的水(0.341mL，18.93mmol)，并将该混合液搅拌，同时缓慢温至室温。将该反应混合液用0.1M HCl(水溶液)(100mL)淬灭，并用Et2O萃取(150ml)。将有机相用饱和的NaHCO3(水溶液)(100mL)和水(100mL)洗涤，经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发，得到产物，为浅黄色油状物，将其缓慢结晶，为浅黄色针状物。
1H NMR：(400MHz,CDCl3)δ7.09(1H,s)。
LC-MS：Rt 1.12min[M+H]+199.9(方法2minLowpHv03)
步骤3：4-氯噻唑-2-甲醛
在-78℃历经20min将正丁基锂(1.732ml，2.77mmol)滴加至2-溴-4-氯噻唑(步骤2)(500mg，2.52mmol)在乙醚(25.200ml)中的溶液中。将该混合液在-78℃搅拌20min，并用DMF(0.215ml，2.77mmol)处理，历经40min将该混合液温至-35℃。将该反应用6M HCl淬灭，并将各相分离。将水相用乙醚萃取(20ml)。在5℃通过加入固体碳酸钾将水层的pH调节至pH10，并用乙醚萃取(3 x 35ml)。将合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用己烷洗脱纯化，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.98(1H,s),7.59(1H,s)。
中间体I:
5-(4-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
步骤1：2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)噻唑-4-甲酸乙酯
类似于3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈(中间体Ga，步骤3)从1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基硼酸(中间体Ga步骤2)和商购可得的2-溴噻唑-4-甲酸乙酯制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(1H,s),7.33(1H,s),5.94(2H,s),4.33(2H,q),3.44(2H,t),3.34(3H,s),3.24(3H,s),1.32(3H,t),0.75(2H,t),-0.15(9H,s)
LC-MS Rt 1.55min[M+H]+465.3(方法2minLowpHv03)
步骤2：5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
在0℃将硼氢化钠(0.856g，22.62mmol)加入2-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3,4,6-四氢-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)噻唑-4-甲酸乙酯(步骤1)(5.254g，11.31mmol)和氯化锂(0.959g，22.62mmol)在乙醇(145ml)和THF(290ml)中的溶液中。将该混合液在室温搅拌16小时。加入另外部分的氯化锂(0.959g，22.62mmol)和硼氢化钠(0.856g，22.62mmol)，并将该混合液再搅拌4小时。将该反应用饱和的NaHCO3(水溶液)(250ml)淬灭，用水(100ml)稀释，并用氯仿萃取(3 x 350ml)。将合并的有机萃取物用水(200ml)和盐水(2 x 200ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在真空下蒸发，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(1H,s),7.23(1H,s),5.80(2H,s),5.38(1H,t),4.63(2H,dd),3.37(2H,m),3.33(3H,s),3.22(3H,s),0.73(2H,m),-0.12(9H,s)。
LC-MS Rt 1.28min[M+H]+423.2(方法2minLowpHv03)
步骤3：5-(4-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮和5-(4-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮的混合物
在0℃将氢化钠(60重量％,0.637g，15.93mmol)分批加入至5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(步骤2)(4.43g，7.97mmol)在NMP(44ml)中的溶液中，并搅拌1小时。加入对甲氧基苄基氯(1.404ml，10.36mmol)，并将该混合液在室温搅拌5小时。加入另外部分的对甲氧基苄基氯(220μl)和氢化钠(60重量％，64mg)，并将该混合液再搅拌16小时。用饱和的NaHCO3(水溶液)(50ml)将该反应在0℃淬灭，用水(200ml)和EtOAc(100ml)稀释，并将各相分离。将水相用EtOAc萃取(3 x 100ml)。将合并的有机萃取物用水(2 x 100ml)和盐水(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在真空下蒸发。经硅胶色谱用40-60％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到标题的化合物的混合物，将其未经进一步纯化地用于下一个步骤。
步骤5：5-(4-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮
在60℃将四-正丁基氟化铵溶液(1.0M，在THF中，48.3ml，48.3mmol)加入5-(4-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-6-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮和5-(4-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(3H,6H)-二酮(步骤4)(5.24g)在THF(13.91ml)中的溶液中。在60℃搅拌6小时后，将该混合液冷却至室温，并在真空下蒸发。将残余物在EtOAc(100ml)和水(150ml)之间分配，并将各相分离。将有机相用水(3x200ml)洗涤，并将两相放置60小时。将两相过滤，并将固体在真空下干燥，得到标题化合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(1H,s),7.76(1H,s),7.45(2H,d),7.12-7.05(3H,m),4.77(2H,s),4.68(2H,s),3.90(3H,s),3.48(3H,s),3.40(3H,s)
LC-MS Rt 1.24分钟[M+H]+413.5(方法2minLowpHv03)

Claims (17)

1.式(I)的化合物或其可药用盐:
其中R1表示苯基、(C4-C7)环烯基或Het1，所述R1基团可以是未被取代的或在一个或两个碳原子被取代基Ra取代，还可在氮原子上被取代基Ra1取代；
Ra各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、卤代(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、R6OC(O)-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
Ra1表示(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、芳基(C1-C4)烷基-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
R2表示(C1-C6)烷基、(C3-C7)环烷基、(C4-C7)环烯基、苯基、呋喃基、噻唑基、噻吩基或吡唑基，所述R2可以是未被取代的或在1至3个碳原子上被取代基Rb取代，还可在氮原子上被(C1-C4)烷基取代；
Rb各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、(R6)2NC(O)(C1-C4)烷基-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-；
X表示O、NH或NMe；或
X表示–CH2-O-，其中所述O原子连接于环的–C(R4)(R4’)原子；
R3各自独立地表示甲基或乙基；
R4表示氢、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、羟基(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、氨基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、苯基、Het1(C1-C4)烷基-、Het2(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基S(O)2NH(C1-C4)烷基-、或R7C(O)NH(C1-C4)烷基-；
R4’表示H或甲基；
R4a表示氢、(C1-C4)烷基、卤代(C1-C4)烷基、氨基(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基氨基(C1-C4)烷基-、二[(C1-C4)烷基]氨基(C1-C4)烷基-、Het1(C1-C4)烷基-、Het2(C1-C4)烷基-、或R6OC(O)-；
R6表示氢、(C1-C4)烷基；
R7表示(C1-C2)烷基、(C1-C2)烷氧基、(C1-C2)烷氧基(C1-C2)烷基或苯基；
Het1表示5-或6-元的杂芳基环，其包含a)一个氧或硫原子，且任选地包含一个或两个氮原子；或b)1至4个氮原子；且
Het2表示4-至7-元的杂环，其包含a)1或2个选自N、O和S的杂原子；或b)–C(O)-和1或2个选自N和O的杂原子。
2.根据权利要求1的化合物，其中X表示O。
3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中R1表示苯基、环己烯基、噻唑基、吡唑基、噻吩基、嘧啶-2-基或吡啶-2-基，且其中R1可以是未被取代的或在一个或两个碳原子上被取代基Ra取代，还可在氮原子上被取代基Ra1取代。
4.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中Ra各自独立地表示(C1-C4)烷基、卤代、卤代(C1-C4)烷基、氰基、(C1-C4)烷氧基、R6OC(O)-或R6OC(O)(C1-C4)烷基-。
5.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R2表示苯基、呋喃基、噻唑基、噻吩基或吡唑基，所述R2可以是未被取代的或在1至3个碳原子上被取代基Rb取代，还可在氮原子上被(C1-C4)烷基取代。
6.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中Rb各自独立地表示(C1-C2)烷基、卤代、卤代(C1-C2)烷基或氰基。
7.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R3各自表示甲基。
8.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中R4表示氢、甲基、苯基或HOCH2-。
9.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中化合物为式(Ia)的化合物:
10.根据前述权利要求中任意一项的化合物，其中所述化合物选自:
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(4-溴噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-5-苯基-10-(噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻吩-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-5-苯基-10-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(5-乙基呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
5-(4-氟苯基)-1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(5-甲基噻吩-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(2,3-二氟苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-5,10-二苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(间甲苯基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(环己-3-烯-1-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(4-溴呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
3-(1,3-二甲基-2,4-二氧代-5-苯基-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-10-基)苄腈；
10-(呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(2-甲基噻唑-4-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(4-氟苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(4-氯苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
3-(1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(5-乙基呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-5-苯基-10-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(2,3-二氟苯基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-环己基-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-5,10-二苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
3-(1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苄腈；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
5-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
5-(3-甲氧基苯基)-1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-甲氧基苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
5-(3,5-二甲基苯基)-1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3,5-二甲基苯基)-1,3-二甲基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1’,2’:1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苯甲酸甲酯；
3-(1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡嗪并[1’,2’:1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-5-基)苯甲酸甲酯；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(3-(三氟甲基)苯基)-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(5-甲基呋喃-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-溴呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(3-氯苯基)-1,3-二甲基-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
1,3-二甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮
1,3,7-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
3-(10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈；
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-5-(4-(羟基甲基)噻唑-2-基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-(2-甲基噻唑-4-基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
5-(3-氯苯基)-10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
3-(10-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-2,3,4,7,8,10-六氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-5-基)苄腈；
10-(4-氯噻唑-2-基)-5-(3-氟苯基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,9,10-四氢吡嗪并[1',2':1,2]吡咯并[3,4-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；
1,3,8-三甲基-10-(4-甲基噻唑-2-基)-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8-三甲基-5-(间甲苯基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-(甲氧基甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5,8-二苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氯苯基)-8-((二甲基氨基)甲基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
10-(5-氯呋喃-2-基)-1,3,8,8-四甲基-5-苯基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
11-(4-氯噻唑-2-基)-1,3-二甲基-5-苯基-7,8,10,11-四氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-2,4(1H,3H)-二酮；
3-(11-(4-氯噻唑-2-基)-8-(羟基甲基)-1,3-二甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4,7,8,10,11-八氢嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[1,2-d][1,4]氧杂氮杂-5-基)苄腈；
8-((1H-咪唑-1-基)甲基)-10-(5-氯呋喃-2-基)-5-(3-氟苯基)-1,3-二甲基-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
(5-氯呋喃-2-基)-1,3-二甲基-5-(4-甲基噻唑-2-基)-8-((2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-1H-嘧啶并[4',5':3,4]吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-2,4(3H,10H)-二酮；
及其可药用盐。
11.药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐以及一种或多种可药用载体。
12.组合产品，其包含治疗有效量的根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐及一种或多种共同使用的治疗活性剂。
13.在个体中调节CFTR活性的方法，其中所述方法包括向个体施用治疗有效量的根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐。
14.治疗选自多囊性肾病和腹泻的障碍或疾病的方法，其包括向个体施用治疗有效量的根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐。
15.用作药物根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐。
16.用于治疗选自多囊性肾病和腹泻的障碍或疾病的根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐。
17.根据权利要求1至10中任意一项的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗选自多囊性肾病和腹泻的障碍或疾病。
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