CN104946548A - 一株酿酒酵母菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一株酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株及其应用，属于微生物生防防治技术领域。本发明的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株，保藏号为：CGMCC No.8689。本发明的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株在制备抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢生防制剂中的应用。本发明的有益效果在于：1、酵母菌株MLB1能有效抑制病原菌灰葡萄孢，培养物对果蔬采后病原菌灰葡萄的抑制效果>60%。2、弥补了果蔬采后病原菌灰葡萄孢防治菌株来源和防治效果的不足，扩大了现行果蔬采后病防治生防菌的菌株来源和提高果蔬采后病生防效果。

Description

一株酿酒酵母菌株及其应用
技术领域
本发明涉及一株酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株及其应用，属于微生物生防防治技术领域。
背景技术
新鲜水果和蔬菜在采后需要有一定的贮藏和运输周期，在此期间大量的采后损失，如腐烂、营养和水分损失常常发生。在流通过程中损失的主要原因可归纳为：生理的(果蔬自身生理衰败)、病理的(病原微生物致腐)、物理的(机械损伤、环境湿度不适宜)以及三者共同作用引起的。然而最终呈现在人们眼前的直观损失几乎均为病理性的腐烂损失，其中真菌则是果蔬产品采后最主要的致腐病原菌。据统计，发达国家有10-30%的新鲜果品损失于采后的腐烂，在缺乏贮运冷藏设备的发展中国家，其腐损率高达40-50%。目前我国的果蔬采后病害损失也非常严重，据资料显示，我国每年果蔬腐烂超过8000万吨，造成的经济损失达750亿元，占整个产值的30-40%。
水果采后病害的发生是寄主和病原菌在一定的环境条件下相互斗争，最后导致发病的过程，并经过进一步的发展而使病害扩大和蔓延。
虽然化学杀菌剂以高效、低成本、使用方便等特点得到广泛使用，但其直接作用于果蔬产品，对食品安全具有的潜在威胁。自20世纪80年代中期，在作物病虫害生物防治蓬勃发展的带动下，果蔬采后生物防治作为一种控制采后病害的新途径逐渐被人们所重视，并逐步成为研究热点。
果蔬采后病害生物防治就是重新建立果蔬表面的微生物类群，形成生物学缓冲，以抑制采后病害的发生。与化学杀菌剂不同的是，生物防治不是对病原菌完全杀灭，只是使病原菌处于一种低活性和高抑制的状态；不是对病害完全抑制，而是达到一种稳定而持久的对病害的相对控制。人为引入拮抗菌用于采后果蔬的病害防治，这是目前利用拮抗菌的主要途径。与在大田进行生物防治相比，在采后应用拮抗菌防病具有独特而明显的优势：(1)果蔬贮藏环境容易控制，避免了将生防制剂施于高度变化而难于预测的环境中，而这个问题是以前大田生物防治的重要限制因素；(2)范围小而防治对象明确，拮抗菌容易击中目标病原菌，防治效率提高，同时生产成本也相对降低(罗闰良，1993)。
采后生物防治的拮抗菌主要有细菌、酵母菌和小型丝状真菌。在这些拮抗细菌中，对枯草芽抱杆菌研究较多，实验证明它能有效防治柑桔青霉病、绿霉病和蒂腐病(Gutter1953；Singh和Deverall，1984；范青等，2000a)，桃，油桃，李，杏褐腐病(Pusey和Wilson，1984；范青等，2000b)。其它细菌如Bacillus pumilus和Bacillus amyloliquefaciens可防治梨青霉病和灰霉病(Janisiewcz和Rotiman，1987，1988)。部分小型丝状真菌也被用于果蔬采后生物防治，如Lim和Tohrbock(1950)分离的Penicillum sp.能够防治菠萝青霉病。
由于酵母菌能在较干燥的果蔬表面生存，能够产生胞外多糖加强其自身的生存能力，能迅速利用营养进行繁殖，受杀虫剂的影响较小，故近年来倍受青睐，对其研究也日益广泛和深入。例如能有效防治苹果灰霉病的酵母拮抗菌有：Kloeckera apiculata、Candida guilliermondii(Maclaugahlin等，1992)，Candida oleophila (Mercier和Wilson，1994)，Sporbolomyces roseus(Filonow，1998)，Pichia anomala(Jijakli和Lepoivre，1998)，Candida sake和Candida tenuia(Wilson等，1993)，Cryptococcus albidus(Fna和Tina，2001)，Trichosporon sp(田世平，2001)；对柑桔绿霉病有抑制效果的Candida famata(Arras，1996)；还有能防治苹果、梨、草墓、称猴桃、葡萄青霉病、软腐病和黑斑病等多种病害的Pichia membranefaciens(Fan和Tian，2000)，Candida guilliermondii(范青等，2000c)，Rhodotorula glutinsi和Cryptococcus laurentii(Lima等，1998)，等等。
酵母菌与其它生防微生物相比，具有许多优越性：
1、拮抗效果好。酵母菌能有效地利用贫乏营养快速增殖，干燥情况下可在果蔬表面定殖并存活相当长时间，能耐受低温等不良环境，拮抗效果好。
2、能和化学杀菌剂共同使用。酵母菌对化学杀菌剂有较大的抗性，可以和化学杀菌剂混用，减少杀菌剂的用量，提高生防效果。
3、不产生抗菌素。酵母菌不产生抗菌素，能够避免病原菌对抗菌素产生抗性而降低生物防治抑菌效果，另一方面也能够避免某些抗菌素对人体的不利影响。
目前，投入市场的生防制剂并不多，能进行商业化生产的酵母菌只有毕赤氏酵母、假丝酵母等少数几种，且文献报道的拮抗酵母大多用来防治果蔬伤口的病原菌，而不是直接用在果蔬表皮防止正常果蔬的病原菌入侵；另一方面在商业化生产条件下，由于环境条件的不确定性，其防效或者达不到要求或者不稳定，且与化学杀菌剂相比防治成本较高。
经过文献检索，未见与本发明相同的公开文献报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现行酵母菌作为拮抗生防菌应用于果蔬采后病的不足，而提供一株能直接应用于果蔬采后灰葡萄孢浸染病防治的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株菌株及其应用。
本发明通过从从自然界中进行菌株分离、培养，获得一株能对果蔬采后病原菌灰葡萄有拮抗作用的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株，该菌株2014年1月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.8689。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株的基本生理特征为：25℃培养，细胞圆形、卵圆形或洋梨形。在幼年菌落中，细胞为3~7×4~10微米，长和宽的比是1:1~2:1；20℃培养21 天在麦芽汁中沉淀。子囊孢子圆形，平滑；为野生型菌株，而非基因工程菌株。
本发明的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株在制备抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢制剂中的应用。
本发明的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株，是通过如下常规过程获得：
将采集自云南省元江县城郊的土壤样品(2克)，用麦芽液体培养基富集培养48小时，然后按稀释涂布法取一定量的富集液进行涂布分离，挑取单菌落纯化保存备用，采用的培养基为YNB培养基。
本发明实现的能直接抑制果蔬灰葡萄孢培养物按如下常规发酵步骤实现：
首先，将麦芽按微生物常规麦芽处理方法制备成麦芽液体培养基备用，灭菌条件115℃20分钟。
其次，将MLB1菌株按微生物发酵常规液体种子培养方法、以灭菌麦芽培养基进行培养，经摇瓶、种子罐一系列培养后，当每毫升培养液含酵母数大于1×108个时，按发酵罐培养液1/15的量投入到发酵罐中进行培养，温度控制在28℃，保持持续通入无菌空气。培养48-72小时。
最后，收集发酵液，即为目的培养物备用，经常规生测后确定抑制效果。
本发明的有益效果在于：
1、酵母菌株MLB1能有效抑制病原菌灰葡萄孢，培养物对果蔬采后病原菌灰葡萄的抑制效果>60%。
2、弥补了果蔬采后病原菌灰葡萄孢防治来源和防治效果的不足，扩大了现行果蔬采后病防治生防菌的菌株来源和提高果蔬采后病生防效果。
具体实施方式
本发明实施例的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株，是通过如下常规过程获得：
将采集自云南省元江县城郊的土壤样品(2克)，用麦芽液体培养基富集培养48小时，然后按稀释涂布法取一定量的富集液进行涂布分离，挑取单菌落纯化保存备用，采用的培养基为YNB培养基。
本发明能抑制病原菌灰葡萄孢的实施例如下：
实施例一：
抑制果蔬灰葡萄孢酵母培养物按如下常规发酵步骤实现：
首先，将麦芽按微生物常规麦芽处理方法制备成麦芽液体培养基备用，灭菌条件115℃20分钟。
其次，将MLB1菌株按微生物发酵常规液体种子培养方法、以灭菌麦芽培养基进行培养，经摇瓶、种子罐一系列培养后，当每毫升培养液含酵母数大于1×108个时，按发酵罐培养液1/15的量接入到发酵罐中进行培养，温度控制在28℃，保持持续通入无菌空气。培养48小时。
最后，收集发酵液，即为目的培养物备用，经常规的生测后确定抑制效果为60%。
    实施例二：
与实施例一不同之处：种子培养液的糖浓度为3%，种子培养液酵母数大于1.8×108个时接入发酵罐，发酵罐培养液的糖浓度为7%，培养时间72小时。经常规生测后确定抑制效果为80%。
    实施例三：
与实施例一不同之处：种子培养液的糖浓度为3%，种子培养液酵母数达到2.5×108个时接入发酵罐，发酵罐培养液的糖浓度为7%，培养时间60小时。经常规生测后确定抑制效果为70%。
    实施例四：
与实施例一不同之处：种子培养液的糖浓度为3%，种子培养液酵母数大于2.0×108个时接入发酵罐，发酵罐培养液的糖浓度为9%，培养时间72小时。经常规生测后确定抑制效果为85%。

Claims (2)

1.一株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株，保藏号为：CGMCC No..8689。
2.权利1 所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) MLB1菌株在制备抑制果蔬采后植物病原菌灰葡萄孢生防制剂中的应用。
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