CN102876604A - 一种枯草芽孢杆菌dj-6菌株及在草莓病害防治上的用途 - Google Patents

Abstract

本发明为一种枯草芽孢杆菌DJ-6菌株（其在CGMCC的保藏编号为CGMCCNo.6314）及发酵液制备成悬浮剂的方法。该制剂能有效防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病。

Description

一种枯草芽孢杆菌DJ-6菌株及在草莓病害防治上的用途

发明领域

本发明涉及一种微生物及用途，更具体地说涉及一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DJ-6菌株、用途及其制剂的制备方法，属于生物农药技术领域。 

背景技术

由植物病原真菌围小丛壳菌（Glomerella cingulata）侵染引发的草莓炭疽病、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）侵染引发的草莓灰霉病、尖孢镰刀菌草莓专化型（Fusarum oxysporium Schl.f.sp.fragariae Winks et Willams）侵染引发的草莓枯病和由大丽花轮枝孢菌（Verticillium alboatrum 和 Verticillium dahliae）侵染引发的草莓黄萎病是草莓上主要的真菌病害。草莓病害防治效果的高低，将直接影响到产量和种植户的收益。草莓病害的防控常用化学药剂有嘧菌酯（azoxystrobin）、醚菌酯(kresoxim-methyl)、苯醚甲环唑(difenoconazole)、烯肟菌酯(enestroburin)、啶酰菌胺（boscalid）、多菌灵(carbendazim)、吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）和咪鲜胺（prochloraz）等。长期以来，由于多频次、多剂量施用化学药剂，造成病原菌对常用化学药剂都产生了不同程度的抗（耐）药性，生产上屡屡出现防治失败的事例。 

目前成功用于防治病害的生物农药专用制剂还没有。文献已报道生物防治控制病害的生防菌属（种）主要有（1）木霉菌属真菌（Trichoderma spp.）中的绿色木霉（Trichoderma viride）和哈茨木霉（Trichoderma harzianum）；（2）芽孢杆菌属细菌（Bacillus spp.）中的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）和巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）；（3）假单胞菌属细菌（Pseudomonas spp.）中的荧光假单胞细菌（Pseudomonas fluorescens）等。 

因草莓是即采即食的应时鲜果，且无果皮防护，所以对药剂的选择有很大的局限性。因此对草莓病害的生物防治在生产上具有一定迫切需求。本发明提供的可同时兼治草莓各类病害的颉颃细菌枯草芽孢杆菌DJ-6菌株及制剂，在现有技术中没有提及和公开。 

发明内容

本发明解决现有技术存在的不足，提供一株分离自黄杜鹃花的内生芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DJ-6菌株，该菌株可用于防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病。同时本发明还提供用该枯草芽孢杆菌DJ-6菌株加工成悬浮剂的制备方法。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

本发明的枯草芽孢杆菌（拉丁文学名为Bacillus subtilis）DJ-6菌株，已于2012年7月2日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所，保藏号为：CGMCC No. 6314。本发明的菌种具有如下特征：

（1）DJ-6菌株的细胞形态及生理生化特征（见表1）

表1、DJ-6菌株细胞形态及理化特征

实验项目	结果	实验项目	结果
				革兰氏染色	阳性	碳水化合物产酸
细胞形状	杆状	葡萄糖	+
				细胞直径>1um	-	木糖	+
形成芽孢	+	L-阿拉伯糖	+
				芽孢膨大	-	甘露醇	+
芽孢圆形	-	乳糖	-
				伴孢晶体	-	发酵葡萄糖产气	-
接触酶	+	利用柠檬酸盐	+
				氧化酶	+	50℃生长	+
厌氧生长	-	pH5.7生长	+
				VP试验	+	7%NaCl生长	+
VP<pH6	+	淀粉水解	+
				VP>pH7	-	分解酪素	+
硝酸盐还原	+	水解明胶	+

（2）本发明的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的16S rRNA基因序列为：

TATCATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCYYGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCA；

（3）本发明的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的gyrB基因序列为：

GCTTGATGTGACGGTTCACCGTGACGGTAAAATTCACCGCCAAACCTATAAACGCGGAGTTCCGGTTACAGACCTTGAAATCATTGGCGAAACGGATCATACAGGAACGACGACACATTTTGTCCCGGACCCTGAAATTTTCTCAGAAACAACCGAGTATGATTACGATCTGCTTGCCAACCGCGTGCGTGAATTAGCCTTTTTAACAAAGGGCGTAAACATCACGATTGAAGATAAACGTGAAGGACAAGAGCGCAAAAATGAATACCATTACGAAGGCGGAATTAAAAGTTATGTAGAGTATTTAAACCGCTCTAAAGAGGTTGTCCATGAAGAGCCGATTTACATTGAAGGCGAAAAGGACGGCATTACGGTTGAAGTGGCTTTGCAATACAATGACAGCTACACAAGCAACATTTACTCGTTTACAAACAACATTAACACGTACGAAGGCGGTACCCATGAAGCTGGCTTCAAAACGGGCCTGACTCGTGTTATCAACGATTACGCCAGAAAAAAAGGGCTTATTAAAGAAAATGATCCAAACCTAAGCGGAGATGACGTAAGGGAAGGGCTGACAGCGATTATTTCAATCAAACACCCTGATCCGCAGTTTGAGGGCCAAACGAAAACAAAGCTGGGCAACTCAGAAGCACGGACGATCACCGATACGTTATTTTCTACGGCGATGGAAACATTTATGCTGGAAAATCCAGATGCAGCC。

用本发明的防治草莓病害的菌株DJ-6制备的生防菌剂，其制备方法包括以下步骤： 

（A）菌液的获得

用无菌芽签挑取事先在PDA固体培养基上划线培养好的DJ-6菌株单菌落斑，接种于装有5 mL PDA液体培养液的容积为20 mL的三角瓶中，于30 ℃、200 rpm条件下振荡培养16 h，过夜，将上步所得培养液5 mL全部接种于装有400 mL PDA培养液的容积为1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30℃条件下振荡培养16 h；把所得的400mL培养液接种于装有20 L培养液的容积为30L的发酵罐（镇江东方GUS-30），20L发酵培养液中固容物含量为：豆粕100 g、马铃薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、CaCO₃ 20 g、MnSO₄ 1.0 g，设置发酵条件为：溶氧100%，搅拌速度为350 rpm，发酵温度30 ℃，发酵时间36 h，pH 7.0-7.2；

（B）菌剂加工工艺

将发酵好的发酵液按如下方法加工成悬浮剂： 

（1）将发酵液离心（8000 rpm）后用20%丙三醇溶液（V/V）（溶液用无菌水配制）重新悬浮，测定悬浮液的活芽孢含量，根据测定结果用20%丙三醇溶液（V/V）调节悬浮液的活芽孢数，终含量调节成芽孢含量为1.0×10¹⁰ cfu/mL（即每毫升含100亿个活芽孢）；（2）在上述调节好的悬浮液中按5 g/L（W/V）的用量加入黄原胶，并搅拌均匀，得成品悬浮剂的浓度为100亿活芽孢/mL。

本发明的有益效果是： 

（1）本发明提供一株新的生防芽孢杆菌——枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，由该菌株发酵而制得的悬浮剂，能有效防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病；

（2）菌剂贮藏性质稳定，防治效果好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。

具体实施方式

实施例

本发明的枯草芽孢杆菌（拉丁文学名为Bacillus subtilis）DJ-6菌株，已于2012年7月2日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCC No. 6314。本发明的菌株的细胞形态及生理生化特征见表1。 

本实施例的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的16S rRNA基因序列为： 

TATCATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCYYGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCA。

本实施例的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的gyrB基因序列为： 

GCTTGATGTGACGGTTCACCGTGACGGTAAAATTCACCGCCAAACCTATAAACGCGGAGTTCCGGTTACAGACCTTGAAATCATTGGCGAAACGGATCATACAGGAACGACGACACATTTTGTCCCGGACCCTGAAATTTTCTCAGAAACAACCGAGTATGATTACGATCTGCTTGCCAACCGCGTGCGTGAATTAGCCTTTTTAACAAAGGGCGTAAACATCACGATTGAAGATAAACGTGAAGGACAAGAGCGCAAAAATGAATACCATTACGAAGGCGGAATTAAAAGTTATGTAGAGTATTTAAACCGCTCTAAAGAGGTTGTCCATGAAGAGCCGATTTACATTGAAGGCGAAAAGGACGGCATTACGGTTGAAGTGGCTTTGCAATACAATGACAGCTACACAAGCAACATTTACTCGTTTACAAACAACATTAACACGTACGAAGGCGGTACCCATGAAGCTGGCTTCAAAACGGGCCTGACTCGTGTTATCAACGATTACGCCAGAAAAAAAGGGCTTATTAAAGAAAATGATCCAAACCTAAGCGGAGATGACGTAAGGGAAGGGCTGACAGCGATTATTTCAATCAAACACCCTGATCCGCAGTTTGAGGGCCAAACGAAAACAAAGCTGGGCAACTCAGAAGCACGGACGATCACCGATACGTTATTTTCTACGGCGATGGAAACATTTATGCTGGAAAATCCAGATGCAGCC。

用本发明的防治草莓病害的DJ-6菌株制备的生防菌剂，其制备方法包括以下步骤： 

（A）菌液的获得

用无菌芽签挑取事先在PDA固体培养基上划线培养好的DJ-6菌株单菌落斑，接种于装有5 mL PDA液体培养液的容积为20 mL的三角瓶中，于30 ℃、200 rpm条件下振荡培养16 h，过夜，将上步所得培养液5 mL全部接种于装有400 mL PDA培养液的容积为1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30℃条件下振荡培养16 h；把所得的400mL培养液接种于装有20 L培养液的容积为30L的发酵罐（镇江东方GUS-30），20L发酵培养液中固容物含量为：豆粕100 g、马铃薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、CaCO₃ 20 g、MnSO₄ 1.0 g，设置发酵条件为：溶氧100%，搅拌速度为350 rpm，发酵温度30 ℃，发酵时间36 h，pH 7.0-7.2；

（B）菌剂加工工艺

将发酵好的发酵液按如下方法加工成悬浮剂： 

（1）将发酵液离心（8000 rpm）后用20%丙三醇溶液（V/V）（溶液用无菌水配制）重新悬浮，测定悬浮液的活芽孢含量，根据测定结果用20%丙三醇溶液（V/V）调节悬浮液的活芽孢数，终含量调节成芽孢含量为1.0×10¹⁰ cfu/mL（即每毫升含100亿个活芽孢）；（2）在上述调节好的悬浮液中按5 g/L（W/V）的用量加入黄原胶，并搅拌均匀，得成品悬浮剂的浓度为100亿活芽孢/mL。

实施效果

DJ-6悬浮剂对草莓病害的田间防治试验

田间防治效果试验在江苏省句容市白兔镇大棚草莓园进行，草莓品种为红颊。试验处理方案如下：

(A) 草莓炭疽病的防治

试验药剂处理：枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液，对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液，空白对照用清水喷雾。亩用水量50 kg，小区面积为20 m²。试验设4重复。处理时间为2011年11月，防治间隔期10天。连续细喷雾防治3次。最后一次防治后10天调查病情指数；

(B) 草莓灰霉病的防治

试验药剂处理：枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液，对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液，空白对照用清水喷雾。亩用水量50 kg，小区面积为20 m²。试验设4重复。处理时间为2012年2月，防治间隔期10天。连续细喷雾防治3次。最后一次防治后10天调查病情指数；

 (C) 草莓枯萎病的防治

药剂处理方法：枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液，对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液，在草莓移栽时每棵苗灌根200ml药液，空白对照灌清水, 200棵苗每小区, 随机区组排列，4次重复。灌根时间在2011年8月25日，60天后调查病情指数；

(D) 草莓黄萎病的防治

药剂处理方法：枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液，对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液，在草莓移栽时每棵苗灌根200ml药液，空白对照灌清水, 200棵苗每小区, 随机区组排列，4次重复。灌根时间在2011年8月25日，60天后调查病情指数。

结果与分析：枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液，对草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病的防治效果分别为88.22%、93.56%、85.07%和82.21%（表2），而对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液，对草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病的防治效果分别为69.64%、62.97%、56.68%和47.21%（表2）。 

以上结果表明，枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂的田间防治效果显著高于对照药剂，枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂对草莓多种病害的兼治作用显著。试验中所有处理均未发生药害现象，表明枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂施用安全。 

表2  枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂对草莓病害的田间防治试验结果 

注：不同大写字母表示 P < 0.01。

Claims (7)

1.一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DJ-6菌株，该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCC No. 6314。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，其特征在于该菌株的16S rRNA基因序列为：

TATCATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCYYGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCA。

3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，其特征在于该菌株的gyrB基因序列为：

GCTTGATGTGACGGTTCACCGTGACGGTAAAATTCACCGCCAAACCTATAAACGCGGAGTTCCGGTTACAGACCTTGAAATCATTGGCGAAACGGATCATACAGGAACGACGACACATTTTGTCCCGGACCCTGAAATTTTCTCAGAAACAACCGAGTATGATTACGATCTGCTTGCCAACCGCGTGCGTGAATTAGCCTTTTTAACAAAGGGCGTAAACATCACGATTGAAGATAAACGTGAAGGACAAGAGCGCAAAAATGAATACCATTACGAAGGCGGAATTAAAAGTTATGTAGAGTATTTAAACCGCTCTAAAGAGGTTGTCCATGAAGAGCCGATTTACATTGAAGGCGAAAAGGACGGCATTACGGTTGAAGTGGCTTTGCAATACAATGACAGCTACACAAGCAACATTTACTCGTTTACAAACAACATTAACACGTACGAAGGCGGTACCCATGAAGCTGGCTTCAAAACGGGCCTGACTCGTGTTATCAACGATTACGCCAGAAAAAAAGGGCTTATTAAAGAAAATGATCCAAACCTAAGCGGAGATGACGTAAGGGAAGGGCTGACAGCGATTATTTCAATCAAACACCCTGATCCGCAGTTTGAGGGCCAAACGAAAACAAAGCTGGGCAACTCAGAAGCACGGACGATCACCGATACGTTATTTTCTACGGCGATGGAAACATTTATGCTGGAAAATCCAGATGCAGCC。

4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6在防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病方面的应用。

5.一种用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株发酵液制备而成的悬浮剂。

6.一种制备权利要求4所述的悬浮剂的方法，其特征在于包括以下步骤：

（A）菌液的获得

用无菌芽签挑取事先在PDA固体培养基上划线培养好的DJ-6菌株单菌落斑，接种于装有5 mL PDA液体培养液的容积为20 mL的三角瓶中，于30 ℃、200 rpm条件下振荡培养16 h，过夜，将上步所得培养液5 mL全部接种于装有400 mL PDA培养液的容积为1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30℃条件下振荡培养16 h；把所得的400mL培养液接种于装有20 L培养液的容积为30L的发酵罐（镇江东方GUS-30），20L发酵培养液中固容物含量为：豆粕100 g、马铃薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、碳酸钙20 g、MnSO₄ 1.0 g，设置发酵条件为：溶氧100%，搅拌速度为350 rpm，发酵温度30 ℃，发酵时间36 h，pH 7.0-7.2；

（B）菌剂加工工艺

将发酵好的发酵液按如下方法加工成悬浮剂： 

（1）将发酵液离心（8000 rpm）后用20%丙三醇溶液（V/V）（溶液用无菌水配制）重新悬浮，测定悬浮液的活芽孢含量，根据测定结果用20%丙三醇溶液（V/V）调节悬浮液的活芽孢数，终含量调节成芽孢含量为1.0×10¹⁰ cfu/mL（即每毫升含100亿个活芽孢）；（2）在上述调节好的悬浮液中按5 g/L（W/V）的用量加入黄原胶，并搅拌均匀，得成品悬浮剂的浓度为100亿活芽孢/mL。

7.根据权利要求5所述的制备悬浮剂的方法，其特征在于步骤（B）中所述的悬浮剂中的添加剂为：丙三醇和和黄原胶。