CN102876605B - 一种枯草芽孢杆菌dj-6菌株及在葡萄病害防治上的用途 - Google Patents

Abstract

本发明为一种枯草芽孢杆菌DJ-6菌株（其在CGMCC的保藏编号为CGMCC No.6314）及发酵液制备成悬浮剂的方法。该制剂能有效防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗轴褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病。

Description

一种枯草芽孢杆菌DJ-6菌株及在葡萄病害防治上的用途

发明领域

本发明涉及一种微生物及用途，更具体地说涉及一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DJ-6菌株、用途及其制剂的制备方法，属于生物农药技术领域。

背景技术

由植物病原真菌围小丛壳菌（Glomerella cingulata）侵染引发的葡萄炭疽病、囊孢壳菌（Physalospora baccae）侵染引发的葡萄房枯病、链格孢菌（Alternaria viticola）引发的葡萄穗轴褐腐（枯）病、Coniothyrium dlodiella侵染引发的葡萄白腐病、单轴霉属（Plasmopara viticola）侵染引发的葡萄霜霉病、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）侵染引发的葡萄灰霉病和痂囊腔菌（Elsinae ampelina) 侵染引发的葡萄黑痘病是我国葡萄上发生的主要病害。

葡萄病害当前主要通过化学防治来防控，常用以下化学药剂防治：甲基硫菌灵(thiophanate-methyl)、波尔多液（bordeaux mixture）、五氯酚钠（sodium pentachlorophenol）、乙酸铜（cupric acetate）、嘧菌酯（azoxystrobin）、醚菌酯(kresoxim-methyl)、嘧霉胺(pyrimethanil)、苯醚甲环唑(difenoconazole)、烯肟菌酯(enestroburin)、氟吗啉（flumorph）、啶酰菌胺（boscalid）、甲霜灵（metalaxyl）、霜霉威（propamocarb）、多菌灵(carbendazim)、咪鲜胺（prochloraz）、吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）和烯酰吗啉（dimethomorph）等。长期以来，由于多频次、多剂量施用化学药剂，造成葡萄病原菌对常用化学药剂都产生了不同程度的抗（耐）药性，生产上屡屡出现防治失败的事例。

目前成功用于防治葡萄病害的生物农药专用制剂还没有。文献已报道生物防治控制葡萄病害的生防菌属（种）主要有（1）木霉菌属真菌（Trichoderma spp.）中的绿色木霉（Trichoderma viride）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）和长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）；（2）芽孢杆菌属细菌（Bacillus spp.）中的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)、多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）、巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）和解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）；（3）单格孢菌( Ulocladium atrum)；（4）链霉菌属细菌（Streptomycesspp.）中的灰绿链霉菌( Streptomyces griseovirides)、吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）、金色链霉菌（Streptomyces aureochromogenes）和链霉菌（Streptomyces kitasazwaensis）；（5）假单胞菌属细菌（Pseudomonas spp.）中的洋葱假单胞菌( Pseudomonas cepacia)、荧光假单胞细菌（Pseudomonas fluorescens）和恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）；（6）酵母菌中的季也蒙毕赤氏酵母（Pichia guilliermondii）和罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）等。

本发明提供的可同时兼治葡萄多种病害的颉颃细菌枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，在现有技术中没有提及和公开。

发明内容

本发明解决现有技术存在的不足，提供一株分离自黄杜鹃花的内生芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DJ-6菌株，该菌株可用于防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗轴褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病。同时本发明还提供用该枯草芽孢杆菌DJ-6菌株加工成悬浮剂的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的枯草芽孢杆菌（拉丁文学名为Bacillus subtilis）DJ-6菌株，已于2012年7月2日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所，保藏号为：CGMCC No. 6314。本发明的菌种具有如下特征：

（1）DJ-6菌株的细胞形态及生理生化特征（见表1）

表1、DJ-6菌株细胞形态及理化特征

（2）本发明的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的16S rRNA基因序列为：

TATCATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCYYGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCA；

（3）本发明的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的gyrB基因序列为：

GCTTGATGTGACGGTTCACCGTGACGGTAAAATTCACCGCCAAACCTATAAACGCGGAGTTCCGGTTACAGACCTTGAAATCATTGGCGAAACGGATCATACAGGAACGACGACACATTTTGTCCCGGACCCTGAAATTTTCTCAGAAACAACCGAGTATGATTACGATCTGCTTGCCAACCGCGTGCGTGAATTAGCCTTTTTAACAAAGGGCGTAAACATCACGATTGAAGATAAACGTGAAGGACAAGAGCGCAAAAATGAATACCATTACGAAGGCGGAATTAAAAGTTATGTAGAGTATTTAAACCGCTCTAAAGAGGTTGTCCATGAAGAGCCGATTTACATTGAAGGCGAAAAGGACGGCATTACGGTTGAAGTGGCTTTGCAATACAATGACAGCTACACAAGCAACATTTACTCGTTTACAAACAACATTAACACGTACGAAGGCGGTACCCATGAAGCTGGCTTCAAAACGGGCCTGACTCGTGTTATCAACGATTACGCCAGAAAAAAAGGGCTTATTAAAGAAAATGATCCAAACCTAAGCGGAGATGACGTAAGGGAAGGGCTGACAGCGATTATTTCAATCAAACACCCTGATCCGCAGTTTGAGGGCCAAACGAAAACAAAGCTGGGCAACTCAGAAGCACGGACGATCACCGATACGTTATTTTCTACGGCGATGGAAACATTTATGCTGGAAAATCCAGATGCAGCC。

用本发明的防治葡萄病害的菌株DJ-6制备的生防菌剂，其制备方法包括以下步骤：

（A）菌液的获得

用无菌芽签挑取事先在PDA固体培养基上划线培养好的DJ-6菌株单菌落斑，接种于装有5 mL PDA液体培养液的容积为20 mL的三角瓶中，于30 ℃、200 rpm条件下振荡培养16 h，过夜，将上步所得培养液5 mL全部接种于装有400 mL PDA培养液的容积为1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30℃条件下振荡培养16 h；把所得的400mL培养液接种于装有20 L培养液的容积为30L的发酵罐（镇江东方GUS-30），20L发酵培养液中固容物含量为：豆粕100 g、马铃薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、CaCO₃ 20 g、MnSO₄ 1.0 g，设置发酵条件为：溶氧100%，搅拌速度为350 rpm，发酵温度30 ℃，发酵时间36 h，pH 7.0-7.2；

（B）菌剂加工工艺

将发酵好的发酵液按如下方法加工成悬浮剂：

（1）将发酵液离心（8000 rpm）后用20%丙三醇溶液（V/V）（溶液用无菌水配制）重新悬浮，测定悬浮液的活芽孢含量，根据测定结果用20%丙三醇溶液（V/V）调节悬浮液的活芽孢数，终含量调节成芽孢含量为1.0×10¹⁰ cfu/mL（即每毫升含100亿个活芽孢）；（2）在上述调节好的悬浮液中按5 g/L（W/V）的用量加入黄原胶，并搅拌均匀，得成品悬浮剂的浓度为100亿活芽孢/mL。

本发明的有益效果是：

（1）本发明提供一株新的生防芽孢杆菌——枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，由该菌株发酵而制得的悬浮剂，能有效防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗轴褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病；

（2）菌剂贮藏性质稳定，防治效果好，大规模生产的发酵工艺简单、生产成本低廉。

具体实施方式

实施例

本发明的枯草芽孢杆菌（拉丁文学名为Bacillus subtilis）DJ-6菌株，已于2012年7月2日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCC No. 6314。本发明的菌株的细胞形态及生理生化特征见表1。

本实施例的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的16S rRNA基因序列为：

TATCATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCYYGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCA。

本实施例的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株的gyrB基因序列为：

GCTTGATGTGACGGTTCACCGTGACGGTAAAATTCACCGCCAAACCTATAAACGCGGAGTTCCGGTTACAGACCTTGAAATCATTGGCGAAACGGATCATACAGGAACGACGACACATTTTGTCCCGGACCCTGAAATTTTCTCAGAAACAACCGAGTATGATTACGATCTGCTTGCCAACCGCGTGCGTGAATTAGCCTTTTTAACAAAGGGCGTAAACATCACGATTGAAGATAAACGTGAAGGACAAGAGCGCAAAAATGAATACCATTACGAAGGCGGAATTAAAAGTTATGTAGAGTATTTAAACCGCTCTAAAGAGGTTGTCCATGAAGAGCCGATTTACATTGAAGGCGAAAAGGACGGCATTACGGTTGAAGTGGCTTTGCAATACAATGACAGCTACACAAGCAACATTTACTCGTTTACAAACAACATTAACACGTACGAAGGCGGTACCCATGAAGCTGGCTTCAAAACGGGCCTGACTCGTGTTATCAACGATTACGCCAGAAAAAAAGGGCTTATTAAAGAAAATGATCCAAACCTAAGCGGAGATGACGTAAGGGAAGGGCTGACAGCGATTATTTCAATCAAACACCCTGATCCGCAGTTTGAGGGCCAAACGAAAACAAAGCTGGGCAACTCAGAAGCACGGACGATCACCGATACGTTATTTTCTACGGCGATGGAAACATTTATGCTGGAAAATCCAGATGCAGCC。

用本发明的防治葡萄病害的DJ-6菌株制备的生防菌剂，其制备方法包括以下步骤：

（A）菌液的获得

用无菌芽签挑取事先在PDA固体培养基上划线培养好的DJ-6菌株单菌落斑，接种于装有5 mL PDA液体培养液的容积为20 mL的三角瓶中，于30 ℃、200 rpm条件下振荡培养16 h，过夜，将上步所得培养液5 mL全部接种于装有400 mL PDA培养液的容积为1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30℃条件下振荡培养16 h；把所得的400mL培养液接种于装有20 L培养液的容积为30L的发酵罐（镇江东方GUS-30），20L发酵培养液中固容物含量为：豆粕100 g、马铃薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、CaCO₃ 20 g、MnSO₄ 1.0 g，设置发酵条件为：溶氧100%，搅拌速度为350 rpm，发酵温度30 ℃，发酵时间36h，pH 7.0-7.2。

（B）菌剂加工工艺

将发酵好的发酵液按如下方法加工成悬浮剂：

（1）将发酵液离心（8000 rpm）后用20%丙三醇溶液（V/V）（溶液用无菌水配制）重新悬浮，测定悬浮液的活芽孢含量，根据测定结果用20%丙三醇溶液（V/V）调节悬浮液的活芽孢数，终含量调节成芽孢含量为1.0×10¹⁰ cfu/mL（即每毫升含100亿个活芽孢）；（2）在上述调节好的悬浮液中按5 g/L（W/V）的用量加入黄原胶，并搅拌均匀，得成品悬浮剂的浓度为100亿活芽孢/mL。

实施效果

DJ-6悬浮剂对葡萄病害的田间防治试验

试验处理方法：在江苏省万山红遍农业科技示范园（江苏省句容市后白镇）, 葡萄品种为巨峰, 试验园面积约8.6亩。采用水平棚架式栽植, 树龄6年生。试验时间2011年6～9月。药剂处理为枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液，对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液，空白对照为不防治, 每小区6棵树，喷雾用水量为3 kg/棵，实验4重复，小区随机区组排列。试验于2011年6月15日第1次喷药, 每隔10天（遇到下雨天时调整喷药日期）共防治5次，最后1次防治日期为8月8日。于最后1次施药后14天( 8月22日) 调查防效。调查时在每个小区中间随机选4株葡萄，在上、中、下、左、右5个方位分别取1个果穗，共20个果穗, 记载每个果穗轴、果粒和果柄中各种病害的发病率, 计算出病指和防治效果。

结果与分析：第5次喷药后14天, 枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂（100亿活芽孢/mL）1000倍液对葡萄炭疽病，葡萄房枯病，葡萄穗轴褐腐，葡萄灰霉病，葡萄黑痘病和白腐病的防治效果分别为89.40%、91.19%、90.51%、94.16%、84.99%和94.63%（表2），而对照药剂50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液对葡萄炭疽病，葡萄房枯病，葡萄穗轴褐腐，葡萄灰霉病，葡萄黑痘病和白腐病的防治效果分别为76.93%、73.37%、77.30%、82.13%、63.28%和64.43%（表2）。

以上结果表明，枯草芽孢杆菌DJ-6悬浮剂的田间防治效果显著高于对照药剂，且兼治作用显著。试验中所有处理均未发生药害现象，表明制剂对施用作物安全。

表2  NF0919菌株发酵液的提取物对葡萄病害的田间防治试验结果

注：不同大写字母表示 P < 0.01。

Claims (7)

1.一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）DJ-6菌株，该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CGMCC No. 6314。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，其特征在于该菌株的16S rRNA基因序列为：

TATCATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCYYGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCA。

3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株，其特征在于该菌株的gyrB基因序列为：

GCTTGATGTGACGGTTCACCGTGACGGTAAAATTCACCGCCAAACCTATAAACGCGGAGTTCCGGTTACAGACCTTGAAATCATTGGCGAAACGGATCATACAGGAACGACGACACATTTTGTCCCGGACCCTGAAATTTTCTCAGAAACAACCGAGTATGATTACGATCTGCTTGCCAACCGCGTGCGTGAATTAGCCTTTTTAACAAAGGGCGTAAACATCACGATTGAAGATAAACGTGAAGGACAAGAGCGCAAAAATGAATACCATTACGAAGGCGGAATTAAAAGTTATGTAGAGTATTTAAACCGCTCTAAAGAGGTTGTCCATGAAGAGCCGATTTACATTGAAGGCGAAAAGGACGGCATTACGGTTGAAGTGGCTTTGCAATACAATGACAGCTACACAAGCAACATTTACTCGTTTACAAACAACATTAACACGTACGAAGGCGGTACCCATGAAGCTGGCTTCAAAACGGGCCTGACTCGTGTTATCAACGATTACGCCAGAAAAAAAGGGCTTATTAAAGAAAATGATCCAAACCTAAGCGGAGATGACGTAAGGGAAGGGCTGACAGCGATTATTTCAATCAAACACCCTGATCCGCAGTTTGAGGGCCAAACGAAAACAAAGCTGGGCAACTCAGAAGCACGGACGATCACCGATACGTTATTTTCTACGGCGATGGAAACATTTATGCTGGAAAATCCAGATGCAGCC。

4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株在防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗轴褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病方面的应用。

5.一种用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌DJ-6菌株发酵液制备而成的悬浮剂。

6.一种制备权利要求5所述的悬浮剂的方法，其特征在于包括以下步骤：

（A）菌液的获得

用无菌牙签挑取事先在PDA固体培养基上划线培养好的DJ-6菌株单菌落斑，接种于装有5 mL PDA液体培养液的容积为20 mL的三角瓶中，于30 ℃、200 rpm条件下振荡培养16 h，过夜，将上步所得培养液5 mL全部接种于装有400 mL PDA培养液的容积为1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30℃条件下振荡培养16 h；把所得的400mL培养液接种于装有20 L培养液的容积为30L的发酵罐，20L发酵培养液中固容物含量为：豆粕100 g、马铃薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、碳酸钙20 g、MnSO₄ 1.0 g，设置发酵条件为：溶氧100%，搅拌速度为350 rpm，发酵温度30 ℃，发酵时间36 h，pH 7.0-7.2；

（B）菌剂加工工艺

将发酵好的发酵液按如下方法加工成悬浮剂： 

（1）将发酵液在8000 rpm的条件下离心，用20%丙三醇溶液重新悬浮，测定悬浮液的活芽孢含量，其中丙三醇溶液用无菌水配制，根据测定结果用20%丙三醇溶液调节悬浮液的活芽孢数，终含量调节成芽孢含量为1.0×10¹⁰ cfu/mL，即每毫升悬浮液含100亿个活芽孢；

（2）在上述调节好的悬浮液中按5 g/L的用量加入黄原胶，并搅拌均匀，得成品悬浮剂的浓度为100亿活芽孢/mL。

7.根据权利要求6所述的制备悬浮剂的方法，其特征在于步骤（B）中所述的悬浮剂中的添加剂为：丙三醇和和黄原胶。