CN104906406B - 一种防治酒精性肝损伤的天然药物组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种解酒保肝作用的天然药物组合物，该组合物由枇杷叶总三萜酸、枇杷叶总黄酮、显齿蛇葡萄总黄酮及玉米须提取物所组成。本发明还涉及所述组合物在制备防治急慢性酒精性肝损伤的保健食品以及在制备治疗非酒精性脂肪肝的保健食品或饮料中的应用。本发明组合物的各组份之间产生了良好的协同作用，疗效显著，且原料易得，成本相对较低，具有较强的实用性。

Description

一种防治酒精性肝损伤的天然药物组合物及制备方法

技术领域

本发明属医药领域，具体涉及种具有防治酒精性肝损伤等相关疾病的天然产物的组合物。

背景技术

酒精性肝损伤（ALD）是因长期过量饮酒引起的中毒性肝脏疾病，ALD 是西方国家患者导致肝硬化的最主要原因。在我国酒精性肝病近年来有逐渐增加的趋势，目前已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病病因。

酒精性肝病是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病，初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化，严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死甚或肝功能衰竭。至今临床上还没有有效防治肝脏疾病发生发展的理想药物。目前认为，酒精有直接损害肝细胞的毒性作用，是造成肝损害的基本原因，氧化应激和脂质过氧化是酒精引起肝脏损伤的重要因素之一。一般每日饮酒80～150g，连续5年即可造成肝损伤；大量饮酒在20年以上，40％～50％会发生肝硬化。

目前ALD 的发病机制并不十分清楚，自由基及其介导的脂质过氧化被认为是最主要的致病因素。乙醇在肝脏代谢时可产生大量自由基：O₂ ^-、H₂O₂、OH^-、C₂H₅O^-和C₂H₅OH^-，过量的自由基可引起肝细胞膜发生脂质过氧化反应，使细胞膜和细胞器结构破坏，膜流动性失

常；大量肝细胞内酶（ALT、AST）释放入血，并可使清除自由基酶（SOD、GPx）耗竭，肝细胞损伤进一步加重，肝功能异常，脂肪代谢紊乱，最终导致肝细胞广泛坏死，细胞肿胀死亡。因此，清除自由基抑制脂质过氧化反应，保护肝细胞，恢复肝脏正常功能，是防治ALD 发生和发展的关键。

因此研究一种可以降低酒精毒性，并可对酒精所致肝损伤有恢复作用的药物有着较大的社会效益及应用前景。

本发明就是将从天然植物中发现和提取的一种具有防治酒精性肝损伤的天然药物组合物。该组合物是由有效成分创新组合成天然产物组合物，从几种不同作用机制上入手治疗酒精性肝损伤，多组分多靶点协同作用，达到长短结合，标本兼治的效果，以期从疗效和安全性上有显著的突破和提高。

枇杷叶总黄酮及总三萜酸是从蔷薇科常绿小乔木植物枇杷Eriobotrya japonica Thunb.的干燥叶中提取分离得到, 枇杷叶又名巴叶，是传统常用中草药，药用历史悠久，始载于《名医别录》，列为中品。其味苦，性微寒，归肺、胃二经。《本草纲目》曰：“和胃降气，清热解暑毒。” 《本草再新》曰：“清肺气，降肺火，止咳化痰，止吐血呛血，治痈痿热毒。”可见枇杷叶具有润肺止咳、降逆止呕之功效，常用于治肺热咳嗽，吐血、胃热逆呕，烦热口渴等疾病。近年研究还发现，枇杷叶有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、保肝利胆、清除氧自由基、增强机体免疫功能等作用。药物化学研究表明，枇杷中主要含有三萜类及黄酮类化学成分。其中黄酮类成分具有降低心肌耗氧量、防治血管硬化、抗炎、保肝等作用，也是一种天然抗氧化剂，具有抗衰老、增强机体免疫力的功效；三萜类成分具有抗炎、降血糖、保肝、解毒等作用。枇杷叶中的齐墩果酸能对CCl₄引起的急慢性肝炎损伤有明显保护作用，其显著降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性，能防止实验性肝硬化的发生。乌苏酸与齐墩果酸同属五环三萜类化合物，两者为同分异构体，熊筱娟等从实验结果分析认为乌苏酸重在对抗自由基、抑制脂质过氧化物，免疫功能增强，诱导细胞凋亡的作用。

显齿蛇葡萄是国家规定的新资源食品。显齿蛇葡萄总黄酮是从葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄（藤茶）Ampelopsis Grossedenta（Hand-Mazz.）W.T.Wa中提取纯化而得。显齿蛇葡萄嫩茎叶中总黄酮的含量高达 43.4%-45.52%。显齿蛇葡萄中的黄酮化合物种类多样，有二氢杨梅素、槲皮素、花旗松素、山奈酚、显齿蛇葡萄素、杨梅苷、橙皮素、洋芹素等。其中二氢杨梅素是显齿蛇葡萄中的主要活性成分。显齿蛇葡萄为民间传统用药，早在《名医别录》中就有记载，广泛用于消炎解毒，治疗骨髓炎，急性淋巴结炎，急性乳腺炎，脓疱疮，湿疹，丹毒疖肿，嗜盐菌食物中毒等。并可治疗恶心，呕吐腹泻兼能通利小便；预防肝内部分纤维变化为肝硬化。研究表明，显齿蛇葡萄总黄酮毒性小，小鼠灌胃给药，最大耐受量为22.5g/kg（钟正贤, 广西藤茶总黄酮保肝作用的实验研究，广西科学， 2002，第1期，57），并且具有广泛的生理活性，其抗氧化作用可清除氧自由基，可抑制机体内的氧化损伤，免疫功能的调节作用可调节人体免疫机能；降低血糖血脂作用可用于防治糖尿病、动脉粥样硬化、高血脂等症。显齿蛇葡萄含有二氢杨梅素，具有明显的保肝护肝作用，抑制脂肪肝的形成。研究发现蛇葡萄中的杨梅树皮素能明显降低四氯化碳、D-半乳糖胺和异硫氰酸萘酯致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST活性和T-BIL含量，减轻肝组织的变性和坏死，从而达到保肝降酶退黄的作用。陈晓军研究表明显齿蛇葡萄总黄酮可明显降低蛋黄型高脂血症小鼠血清TC、TG及AI值，对实验性高脂血症鹌鹑可明显降低血清TC、TG，升高血清HDL-C，降低AI值；明显减少主动脉及肝脏TC含量，抑制动脉粥样硬化及肝脏脂肪化病变，具有降血脂、抗动脉粥样硬化和抑制脂肪肝形成的作用（广西中医药，2001，第5期，53）。

玉米须提取物是从禾本科玉蜀黍属植物玉米Zeamays L. 的花柱和柱头中提取得到，玉米须收载于《中华人民共和国卫生部药材标准》1985 版（一部），最早药用记载见于《滇南本草》，味甘，性平。有平肝清热、利尿祛湿的功效。可用于治疗高血压、糖尿病、黄疸肝炎、泌尿系统感染以及吐血、衄血、疮疡等症。民间常用于药茶，药膳中，作为糖尿病、高血压等慢性疾病的辅助治疗药物。具有利水消肿，降压等功效。古籍《岭南采药录》、《本草求真》、《雷公炮炙论》、《唐本草》等都记载了玉米须的食品保健应用实例。美国食品药品监督管理局（FDA）已将玉米须和玉米须浸提物（Corn silk and corn silk extract）列为安全可靠的食品添加剂类物质；日本、韩国、印度和欧洲也将其列为常用草药。玉米须含有多糖、黄酮、皂苷及糖蛋白类成分，具有调节血糖、调节血脂、保肝护肝及调整胃肠功能等多种药理活性，另外由于玉米须的入药部位是花柱和柱头，ATP 酶活性高，对物质的转运和运输十分活跃，并含有玉米素等能够促进菌丝生长的细胞分裂素。玉米须煎剂对高脂血症患者同样具有降血脂作用，从而起到保护心脑，降低缺血性心血管病( 包括冠状动脉性心脏病和缺血性脑卒中) 的发病率。玉米须黄酮提取物对小鼠的脂质代谢具有明显的调节作用，并呈现明显的量效关系。陈志谦用玉米须配合决乌汤治疗血脂异常病人65例表明，治疗后TC、LDL-C显著下降，治疗前后比较，差异均有非常显著的意义，其有效率达89.2%。《中华本草》记载玉米须毒性甲的毒性很小，对兔的致死量约为250mg·kg^-1（静脉注射），在此剂量时对心脏、血压、呼吸、末梢血管、肠肌等无作用，故安全范围较大。玉米须多糖毒性很低，无法测到LD50，小鼠对玉米须多糖的最大耐受量为45g·kg^-1；同时美国食品与药品管理局确认玉米须为安全、无毒的物质。

本发明完成前，还未发现由枇杷叶总三萜酸、枇杷叶总黄酮、显齿蛇葡萄总黄酮及玉米须提取物组成的组合物具有防治酒精想性肝损伤的作用，也未发现本发明组合物在防治酒精性肝损伤的药品和保健品中的应用。

发明内容

本发明人依据科学理论、经过反复试验，选用了枇杷叶中提取的总三萜酸与总黄酮、显齿蛇葡萄中提取的总黄酮及玉米须提取物组成，具有保护肝细胞、改善微循环、促进损伤组织修复、增强肝脏排毒，有效缓解酒精性肝损伤、脂肪肝等肝脏疾病的症状及肝脏病理的改变，延缓病情发展作用。同时，本制剂具有原料天然可长期服用、易吸收、效果显著等特点。

本组合物与欧美、日本畅销的以添加兴奋剂、止痛剂、维生素和矿物质等类型解酒剂具有明显的不同，这些解酒剂只能暂时缓解醉酒引起的症状，但对于酒精引起的肝损伤并无确切疗效；同时与目前已有的护肝解酒类保健食品相比，具有作用更确切，药效物质组成更清楚的优势，具有明显的特色，这是本发明的突出贡献。

本发明的突出贡献在于：本发明组合物体现了复方药效成分相互协同、多靶点、多途径作用，从根本上全面调节肝损伤人的机体，改善身体健康状况。本发明适用于饮酒较多造成酒精性肝损伤者，通过降低乙醇在血中的浓度，促进乙醇的清除，消除酒后体内产生的过量自由基，阻碍过氧化脂质的形成，从而减轻了乙醇对肝组织的损伤，起到对肝损伤的辅助保护功能，并有美容护肤的功效。具有明显的创新性和技术进步。

本发明另一突出贡献在于：本发明组合物配方设计科学合理，制剂工艺简单可行，质量可控，安全性高，比相同剂量下的单一的枇杷叶总黄酮与总三萜酸、单一显齿蛇葡萄总黄酮及单一的玉米须提取物具有更优的改善酒精性肝损伤症状的作用，适宜于广大酒精性肝损伤人群的使用。

本发明所要解决的技术问题在于从天然植物枇杷叶、显齿蛇葡萄及玉米须中提取具有防治酒精性肝损伤作用的活性组分、制备天然产物组合物。本发明提供了一种具有防治酒精性肝损伤的天然药物组合物，该组合物包括枇杷叶总三萜酸150-400份，枇杷叶总黄酮200-500份，显齿蛇葡萄总黄酮200-500份，玉米须水煎提取物200-500份。优选枇杷叶总三萜酸200份，枇杷叶总黄酮300份，显齿蛇葡萄总黄酮300份，玉米须水煎提取物300份。按照上述比例混合组成活性成份与药用辅料制成的。

本发明的另一目的是提供了本组合物的制备方法：

（1）枇杷叶用水煎煮提取2-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液备用，药渣用50-95%乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，合并滤液，加入药液体积0.1-1.0%药用活性炭，搅拌，过滤，滤液回收乙醇，浓缩，过滤，滤饼干燥，得枇杷叶总三萜酸；

（2）将枇杷叶水提取液浓缩，浓缩液通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用40-80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得枇杷叶总黄酮；（3）显齿蛇葡萄叶用50-85%乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取物，乙醇提取物通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用10-25%乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用60-90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酮；

（4）玉米须用水煎煮提取2-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，得玉米须提取物；（5）将枇杷叶总三萜酸、枇杷叶总黄酮、显齿蛇葡萄总黄酮、玉米须提取物，按照比例混合均匀后，加入辅料均匀，即得。

由于本发明首次公开了由枇杷叶总三萜酸、枇杷叶总黄酮、显齿蛇葡萄总黄酮及玉米须提取物组成的组合物具有防治酒精性肝损伤的作用，因此，将本组合物单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，只要是该药剂用于预防和治疗酒精性肝损伤，均属于本发明的保护范围。本发明的组合物在制成任何一种剂型时，均具有预防和治疗酒精性肝损伤的作用。

本发明药物服法及用量：口服，成人2-3克/日，分2-3次服。

由枇杷叶总三萜酸、枇杷叶总黄酮、显齿蛇葡萄总黄酮及玉米须提取物组成的组合物（简称组合物）具有防治酒精性肝损伤作用，通过以下药效学实验得到证实。

本发明需要的各样品均由吉林省现代中药工程研究中心有限公司提供。阳性对照药联苯双酯滴丸由北京协和药厂生产（20120801）、东宝肝泰由吉林通化东宝药业股份有限公司生产（20121202）。

1、本发明组合物对酒精性肝损伤的保护作用

小鼠100只，随机分为10组，即本发明组合物分别按150、300及600mg/kg三个剂量组，枇杷叶总三萜酸剂量组、枇杷叶总黄酮剂量组、显齿蛇葡萄总黄酮剂量组、玉米须提取物剂量组各600mg/kg灌胃小鼠，酒精模型组，空白对照组和阳性对照组（联苯双酯滴丸）60mg/kg， 1次/d，共14d，酒精模型组和空白组对照组分别灌胃等体积蒸馏水，1次/d，共14d。末次给药后禁食12小时，除空白对照组仍然灌胃等量蒸馏水外，其他9组动物(本发明组合物低、中、高三个剂量组，枇杷叶总三萜酸剂量组，枇杷叶总黄酮剂量组，显齿蛇葡萄总黄酮剂量组，玉米须提取物剂量组，阳性药对照组，酒精模型组)分别灌胃50%乙醇15mL/kg，6h后眼静脉取血，测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量，取小鼠肝脏称重，测定肝器指数，取右叶测定超氧化物歧化酶的（SOD），谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性，丙二醛(MDA)含量。

表1 本发明组合物对酒精损伤小鼠血清ALT、AST及肝脏系数的影响

与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；酒精组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

从表1可知，灌胃酒精使小鼠肝指数显著增加，灌胃本发明组合物可使酒精损伤小鼠肝脏指数显著降低。灌胃酒精使小鼠血清ALT、AST显著增加，灌胃本发明组合物可使酒精损伤小鼠血清ALT、AST显著降低。阳性对照药可使小鼠血清ALT、AST显著降低，也可显著降低小鼠肝脏指数。相同剂量下组合物较各单一组分活性更强。

表2 本发明组合物对酒精损伤小鼠肝脏MDA、GSH-PX、SOD的影响

与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；酒精组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

从表2结果表明，酒精能引起小鼠肝脏MDA含量显著升高、引起GSH-PX酶、SOD活性显著降低，而本发明组合物能显著降低MDA含量，能显著升高GSH-PX酶、SOD活性。阳性对照药也能显著降低MDA含量、显著升高GSH-PX酶、SOD活性。相同剂量下本发明组合物较各单一组分活性更强。

2、本发明组合物对酒精引起的脂肪肝的改善功能

试验大鼠100只，随机分为正常对照组；脂肪肝模型组；阳性对照药东宝肝泰600mg/kg，给药剂量组：本发明组合物设150mg/kg、300mg/kg和600mg/kg三个剂量组，枇杷叶总三萜酸剂量组、枇杷叶总黄酮剂量组、显齿蛇葡萄总黄酮剂量组、玉米须提取物剂量组各600mg/kg。共10组，每组10只。除正常对照组外，其余各组大鼠每日上午8：30灌胃给予（56%乙醇＋0.5mL鱼油）1次，乙醇剂量开始为7g/kg，随后每周递增0.2g/kg，连续4周。正常对照组大鼠灌胃给予等热量的56%葡萄糖＋0.5mL鱼油。受试药物用蒸馏水配制成混悬液，每日下午1：00灌胃给予1次，正常对照组与模型对照组大鼠灌胃给予等量的蒸馏水，灌胃体积为10ml/kg/d。试验过程中大鼠自由摄食饮水，每周称量体重1次，以调整给药剂量。于给药第四周末处死动物。标本采集及观测指标，试验结果以均数加减标准差(±s)表示，统计学处理方法采用组间t检验。实验结果见表3和表4。

表3 本发明组合物对酒精性脂肪肝大鼠血清ALT、AST和LDH活性的影响

与正常对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；模型组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001。

本发明组合物高、中剂量组动物血清ALT和AST活性非常明显的低于模型组，本试验结果表明，本发明组合物可明显降低酒精性脂肪肝大鼠血清中异常升高的ALT、AST的活性，说明本发明组合物对肝细胞具有良好的保护作用。本发明组合物高、中剂量组对酒精性脂肪肝动物血清LDH水平的异常升高具有明显的降低作用，此项试验结果表明，本发明组合物对酒精所致脂肪肝有很好的保护作用。相同剂量下本发明组合物较各单一组分活性更强。

表4 本发明组合物对酒精性脂肪肝大鼠血清TC、TG和MDA含量及肝组织TG含量的影响

与正常对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；模型组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

本发明组合物可降低脂肪肝模型动物血清MDA含量，抑制脂肪肝时肝细胞的脂质过氧化反应，从而发挥保护肝细胞免受损伤的作用。本发明组合物高、中两个剂量组动物血清中TC、TG含量及肝组织TG含量显著低于模型对照组。表明本发明组合物可以降低酒精所致脂肪肝大鼠血脂含量及肝脏脂类含量的升高，具有抑制肝脏脂肪堆积的作用。相同剂量下本发明组合物较各单一组分活性更强。

从以上的药效学实验可知，本发明组合物具有预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝的作用，并且长期服用没有副作用。

本发明是通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明仅限于此，具体实施方案如下：

实施例1、枇杷叶总三萜酸的制备

（1）枇杷叶5kg，用10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液备用；药渣用6倍量80%乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，加入400g药用活性炭，搅拌，过滤，滤液回收乙醇，浓缩，过滤，滤饼干燥，得枇杷叶总三萜酸。

实施例2、枇杷叶总黄酮的制备

（2）将枇杷叶水提取液浓缩至7500ml，通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱4倍柱体积，弃去洗脱液，再用60%乙醇洗脱5倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得枇杷叶总黄酮。

实施例3、枇杷叶总黄酮的制备显齿蛇葡萄叶5kg，用8倍量60%乙醇回流提取2次，每次3小时，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至7500ml，通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱5倍柱体积，弃去洗脱液，再用10%乙醇洗脱3倍柱体积，弃去洗脱液，继用65%乙醇洗脱4倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酮。

实施例4、玉米须提取物的制备 玉米须5kg，用12倍量水煎煮提取2次，每次1小时，过滤，

合并滤液，浓缩，干燥，得玉米须提取物。

实施例5、胶囊剂的制备 取枇杷叶总三萜酸50g，枇杷叶总黄酮60g，显齿蛇葡萄总

黄酮60g，玉米须提取物60g，混合均匀，加入适量淀粉，用95%乙

醇制粒，干燥，装胶囊，制成1000粒。

实施例6、片剂的制备 取枇杷叶总三萜酸50g，枇杷叶总黄酮60g，显齿蛇葡萄总

黄酮60g，玉米须提取物60g，混合均匀，加入适量淀粉，用95%乙

醇制粒，干燥，压片，制成1000片。

实施例7、饮料的制备 取枇杷叶总三萜酸100g，枇杷叶总黄酮120g，显齿蛇葡萄总

黄酮120g，玉米须提取物120g，蔗糖2.5kg，柠檬酸5g，苹果酸5g，

加入50kg水加热溶解，灌装，制成100瓶。

Claims (5)

1.一种防治酒精性肝损伤的天然药物组合物，其特征在于，由下述重量份的原料混合组成：枇杷叶总三萜酸150-400份，枇杷叶总黄酮200-500份，显齿蛇葡萄总黄酮200-500份，玉米须水煎提取物200-500份。

2.根据权利要求1所述一种防治酒精性肝损伤的天然药物组合物，其特征在于，由下述重量份的原料混合组成：枇杷叶总三萜酸200份，枇杷叶总黄酮300份，显齿蛇葡萄总黄酮300份，玉米须水煎提取物300份。

3.一种权利要求1或2所述防治酒精性肝损伤的天然药物组合物的制备方法，步骤如下：

(1)枇杷叶用水煎煮提取2-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液备用；药渣继用50-95％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，合并滤液，加入药液体积0.1-1.0％药用活性炭，搅拌，过滤，滤液回收乙醇，浓缩，过滤，滤饼干燥，得枇杷叶总三萜酸；

(2)将枇杷叶水提取液浓缩，浓缩液通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用40-80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得枇杷叶总黄酮；

(3)显齿蛇葡萄叶用50-85％乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取液，乙醇提取液通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用10-25％乙醇洗脱，弃去洗脱液，继续 用60-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酮；

(4)玉米须用水煎煮提取2-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，得玉米须提取物；

(5)将枇杷叶总三萜酸、枇杷叶总黄酮、显齿蛇葡萄总黄酮、玉米须提取物，按照比例混合均匀后，加入辅料均匀，即得。

4.一种具有防治酒精性肝损伤的天然药物组合物口服制剂，其特征在于将权利要求1或2所述的天然药物组合物，与药用辅料混合，制成口服制剂，它可以是硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、袋泡茶、软糖、口服液、饮料中的任意一种。

5.根据权利要求1或2所述的天然药物组合物在制备对酒精性肝损伤具有辅助保护作用的保健品及药品中的应用。