CN107397843B - 藤茶提取物在制备法尼醇x受体激动剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用。本发明制备得到的藤茶提取物AG具有一定的FXR激活作用，藤茶提取物AG‑A2、AG‑B1和二氢杨梅素对FXR的激活作用较强，可以作为潜在的法尼醇X受体激动剂；本发明制备得到的藤茶提取物AG‑A2、AG‑B1和二氢杨梅素对ANIT诱导的胆汁淤积所导致的Tbil、ALT、APL和γ‑GT活性升高有显著的抑制作用，对ANIT导致的肝细胞损伤、炎症细胞浸润以及胆汁排泄的抑制有显著的改善，对ANIT诱导的胆汁淤积型肝炎具有较好的治疗作用，可以作为潜在的治疗胆汁淤积性肝病的药物。
Description
技术领域
本发明属于天然药物领域，具体涉及藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用。
背景技术
胆汁淤积性肝病是一组以胆汁淤积为主要表现的临床常见疾病，其发病原因多种多样，例如：肝细胞、毛细胆管、肝内胆管以及肝外胆管任何部位器质性或功能性异常，致使胆汁排泄障碍、胆汁流量减少、胆汁成分返流入血液中，引起一系列器质性损害，导致发黄疸，皮肤瘙痒，糖代谢及脂代谢紊乱等，主要涉及人群为中老年人、孕妇、小孩等，严重危害人们的身体健康，甚至死亡。
藤茶提取物抗慢性肝纤维化作用(《中国实验方剂学杂志》，2011，17(3)，132-134)公开了藤茶提取物能明显降低肝纤维化大鼠血清中异常升高的MDA含量并使GSH-Px含量提高，提示TF抑制肝纤维化可能与抗氧化有关。
然而，藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用未见报道。
发明内容
为此，本发明提出藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用。
优选地，本发明上述藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用，藤茶所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，再用A：B体积比为10％：90％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，，加入1～4体积倍量的乙酸乙酯萃取1～5次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，加入1～4体积倍量的乙酸乙酯萃取1～5次，合并水层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，重结晶，即得。
进一步优选地，本发明上述藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用，藤茶所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，再用A：B体积比为10％：90％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并水层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，重结晶，即得。
本发明还提供藤茶提取物在制备法尼醇X受体激动剂中的应用。
优选地，本发明上述藤茶提取物在制备法尼醇X受体激动剂中的应用，藤茶所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，再用A：B体积比为10％：90％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，，加入1～4体积倍量的乙酸乙酯萃取1～5次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，加入1～4体积倍量的乙酸乙酯萃取1～5次，合并水层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，重结晶，即得。
进一步优选地，本发明上述藤茶提取物在制备法尼醇X受体激动剂中的应用，藤茶所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，再用A：B体积比为10％：90％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并水层，浓缩、干燥，即得；或者
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，经大孔树脂柱层析纯化，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，进行梯度洗脱，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，浓缩、干燥，重结晶，即得。
进一步优选地，本发明上述应用，藤茶所述大孔树脂选自AB-8、D101、XAD1600、LX-2000或者LX-9。
进一步优选地，本发明上述应用，藤茶所述大孔树脂柱的直径为8cm，柱体积为3.5L。
进一步优选地，本发明上述应用，藤茶梯度洗脱的流速为3BV/h。
进一步优选地，本发明上述应用，藤茶所述藤茶提取物按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。
所述药学上可接受的辅料为：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000、PEG4000、虫蜡等。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
(1)本发明制备得到的藤茶提取物AG具有一定的FXR激活作用，藤茶提取物AG-A2、AG-B1和二氢杨梅素对FXR的激活作用较强，可以作为潜在的法尼醇X受体激动剂；
(2)本发明制备得到的藤茶提取物AG-A2、AG-B1和二氢杨梅素对ANIT诱导的胆汁淤积所导致的Tbil、ALT、APL和γ-GT活性升高有显著的抑制作用，对ANIT导致的肝细胞损伤、炎症细胞浸润以及胆汁排泄的抑制有显著的改善，对ANIT诱导的胆汁淤积型肝炎具有较好的治疗作用，可以作为潜在的治疗胆汁淤积性肝病的药物。
具体实施方式
实施例1藤茶提取物AG的制备
取干燥藤茶叶，以55％的乙醇水溶液为溶剂提取，料液比为1：10，回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，减压浓缩、干燥，得藤茶提取物AG。
实施例2藤茶提取物AG-A1、AG-A2、AG-A3的制备
将实施例1制备的藤茶提取物AG用热水溶解，配制成浓度为20mg/mL的水溶液，上样体积300mL，经LX-2000大孔树脂柱层析纯化，大孔树脂柱的直径为8cm、柱体积为3.5L，以水为流动相A、以乙醇为流动相B，梯度洗脱的流速为3BV/h，按照如下程序进行梯度洗脱：先用A：B体积比为100％：0％的流动相洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩干燥，得藤茶提取物AG-A1，再用A：B体积比为50％：50％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，减压浓缩、干燥，得藤茶提取物AG-A2，再用A：B体积比为10％：90％的流动相洗脱4BV，收集洗脱液，减压浓缩、干燥，得藤茶提取物AG-A3。
实施例3藤茶提取物AG-B1、AG-B2的制备
将实施例1制备的藤茶提取物AG用热水溶解，配制成浓度为20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩、干燥，得藤茶提取物AG-B1；合并水层，减压浓缩、干燥，得到藤茶提取物AG-B2。
实施例4二氢杨梅素的制备
将实施例2制备的藤茶提取物AG-A2，重结晶，即得二氢杨梅素。
实验例
下述各实验例证明本发明所述的技术效果。
实验例1藤茶提取物对法尼醇X受体(Farnesoid X receptor，FXR)的激活作用的研究
1、实验材料
以实施例1制备的藤茶提取物AG、实施例2制备的藤茶提取物AG-A1、AG-A2、AG-A3、实施例3制备的实施例3制备的藤茶提取物AG-B1、AG-B2和实施例4制备的二氢杨梅素为供试品。
2、实验方法
2.1供试品配置
将藤茶提取物AG、AG-A1、AG-A2、AG-A3、AG-B1、AG-B2和二氢杨梅素，分别配制为50μg/mL的水溶液。
2.2FXR模型筛选实验
2.2.1细胞接种
取对数生长期的的HepG2肝癌细胞进行实验，以50000/孔接种于96孔板中；每组做3个复孔，至细胞在96孔板中覆盖率达到80％-85％时进行转染。
2.2.2质粒转染
按照脂质体LipofectamineTM 2000试剂说明书，采用瞬时转染法。
2.2.3药物处理
细胞转染6小时后，更换含有药物的培养基，设置空白对照组、阳性对照组(鹅去氧胆酸，10μmol/L)，实验组1-7组(供试品分别为藤茶提取物AG、AG-A1、AG-A2、AG-A3、AG-B1、AG-B2和二氢杨梅素)；药物干预24h。
2.2.4报告基因检测
药物干预24h后，去除培养孔中的培养基，用PBS溶液洗涤细胞一次，小心去除PBS溶液，在每孔中注入20μL1×PLB溶液，室温下振荡20min，每孔再加入20μL LARⅡ溶液，检测萤火虫荧光素酶活性；再加入20μL Stop&
Reagent，启动海肾荧光素酶反应，检测海肾荧光素酶活性。每孔酶活性以校正后的相对荧光强度计，相对荧光强度＝萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶。以空白组相对荧光强度为基础表达(以1表示)，其他待测的相对荧光强度与其相比，以相对荧光强度大小表示FXR活性高低，数值越高则表示对FXR的激活作用越强。
3、统计学分析
采用SPSS 20.0软件进行数据处理，组间差异采用单因素方差分析。
4、实验结果
藤茶提取物对法尼醇X受体(Farnesoid X receptor，FXR)的激活作用的实验结果如表1所示。
表1 藤茶提取物对FXR的激活作用的实验结果(
n＝3)
| 组别 | 供试品 | 相对荧光强度 |
| 阳性对照组 | 鹅去氧胆酸 | 9.27±0.35 |
| 实验组1组 | 藤茶提取物AG | 3.52±0.30 |
| 实验组2组 | 藤茶提取物AG-A1 | 0.96±0.47 |
| 实验组3组 | 藤茶提取物AG-A2 | 6.01±0.35 |
| 实验组4组 | 藤茶提取物AG-A3 | 1.98±0.52 |
| 实验组5组 | 藤茶提取物AG-B1 | 6.12±0.33 |
| 实验组6组 | 藤茶提取物AG-B2 | 1.21±0.46 |
| 实验组7组 | 二氢杨梅素 | 7.79±0.49 |
由表1可知，藤茶提取物AG具有一定的FXR激活作用，其相对荧光强度达到3.52；藤茶提取物AG-A2、AG-B1对FXR的激活作用较强，其相对荧光强度分别达到6.01和6.12；二氢杨梅素对FXR的激活作用较强，其相对荧光强度达到7.79。
5、实验结论
本发明制备得到的藤茶提取物AG具有一定的FXR激活作用，藤茶提取物AG-A2、AG-B1和二氢杨梅素对FXR的激活作用较强。
实验例2藤茶提取物对胆汁淤积性肝病大鼠治疗作用的研究
1、实验材料
雄性SD大鼠，体重190-240g，由上海灵畅生物科技有限公司提供；在塑料笼具内分笼饲养，自由摄食与饮水7天，使其适应环境并检疫。
2、实验方法
本实验例应用异硫氰酸-1-萘酯(ANIT)建立大鼠急性肝内胆汁淤积型肝炎模型，研究藤茶提取物对该模型大鼠的治疗作用。
2.1实验分组
大鼠随机分为实验组1组、实验组2组、实验组3组、模型对照组和正常对照组，实验组1组、实验组2组和实验组3组每组4只，供试品分别为藤茶提取物AG-A2、AG-B1和二氢杨梅素，模型对照组和正常对照组每组12只。
2.2给药方法
实验组1组、2组、3组大鼠分别给予藤茶提取物AG-A2、AG-B1、二氢杨梅素100mg/kg，每12小时给药1次，共4次，模型对照组及正常对照组给予相应容量的0.5％CMC-Na；第二次给药30分钟后，除正常对照组外，其余各组动物均灌胃给予ANIT(异硫氰酸-1-萘酯)50mg/kg，所有动物在给予ANIT后36小时，进行胆排泄试验测定2h胆汁流量；然后，股动脉取血制备血清，取左叶肝脏置于10％甲醛溶液中固定备用。
3、实验数据检测与处理
3.1检测指标
3.1.1血清指标测定
全自动生化分析仪测定血清总胆红素(Tbil)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷酰转移酶(γ-GT)活性。
3.1.2肝病理组织学观察
大鼠肝脏用10％中性甲醛固定，石蜡包埋，4-5μm切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，常规HE染色，乙醇脱水，二甲苯透明，树脂封固，使用显微镜观察。
3.1.3胆排泄实验
大鼠腹腔注射乌拉坦1g/kg麻醉，胆总管插管，用预先称重并加入1mol/L的KH2PO4100μL的离心管，冰块上收集胆汁。
3.2统计学分析
采用SPSS 20.0软件进行数据处理，单因素方差分析。
4、实验结果
4.1体征与血清生化指标
藤茶提取物对胆汁淤积大鼠血清生化指标的影响如表2所示，对胆汁淤积大鼠肝组织的作用如表3所示。
表2 藤茶提取物对胆汁淤积大鼠血清生化指标的影响(
n＝4)
#表示和正常对照组相比P<0.05，##表示和正常对照组相比P<0.01，
**表示和模型对照组相比P<0.01，*表示和模型对照组相比P<0.05。
表3 藤茶提取物对胆汁淤积大鼠肝组织的作用(n＝4)
-阴性；±少于2个肝脏显示轻微病变；+轻微；++中度；+++显著
##和正常对照组相比P<0.01；**和模型对照组相比P<0.01；
*表示和模型对照组相比P<0.05
Tbil、ALP和γ-GT活性升高是肝内胆汁淤积的血清学标志，模型对照组Tbil、ALP和γ-GT活性明显升高，且ALT活性明显增加，胆汁排泄量显著减少，表明大鼠急性肝内胆汁淤积型肝炎模型造模成功。
由表2和表3可知，藤茶提取物AG-A2、AG-B1和二氢杨梅素对ANIT诱导的胆汁淤积所导致的Tbil、ALT、APL和γ-GT活性升高有显著的抑制作用，对ANIT导致的肝细胞损伤、炎症细胞浸润以及胆汁排泄的抑制有显著的改善。
5、实验结论
本发明制备得到的藤茶提取物AG-A2、AG-B1和二氢杨梅素对ANIT诱导的胆汁淤积型肝炎具有较好的治疗作用。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (6)
1.藤茶提取物在制备治疗胆汁淤积性肝病的药物中的应用，其特征在于，所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，加入1～4体积倍量的乙酸乙酯萃取1～5次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得。
3.根据权利要求1-2任一项所述的应用，其特征在于，所述藤茶提取物按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂或软膏剂。
4.藤茶提取物在制备法尼醇X受体激动剂中的应用，所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入8～12重量倍量的40％～70％的乙醇水溶液加热回流提取1～5次，每次提取0.5～3小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成15～25mg/mL的水溶液，加入1～4体积倍量的乙酸乙酯萃取1～5次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述藤茶提取物通过以下方法制备而成：
取干燥藤茶叶，加入10重量倍量的55％的乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，浓缩，干燥，配制成20mg/mL的水溶液，加入2体积倍量的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，浓缩、干燥，即得。
6.根据权利要求4-5任一项所述的应用，其特征在于，所述藤茶提取物按照常规工艺，加入常规辅料制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、散剂、合剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂、栓剂、气雾剂或软膏剂。
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