CN101143165B - 含管花肉苁蓉及其提取物治疗骨质疏松的组合物 - Google Patents
含管花肉苁蓉及其提取物治疗骨质疏松的组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101143165B CN101143165B CN2007101315579A CN200710131557A CN101143165B CN 101143165 B CN101143165 B CN 101143165B CN 2007101315579 A CN2007101315579 A CN 2007101315579A CN 200710131557 A CN200710131557 A CN 200710131557A CN 101143165 B CN101143165 B CN 101143165B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- cistanche tubulosa
- naringin
- preparation
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
一种防治骨质疏松症的药物组合物,含粗的管花肉苁蓉水和/或醇提取物、精制管花肉苁蓉水和/或醇提取物、管花肉苁蓉与柚皮苷部位混合物、管花肉苁蓉粉末或松果菊苷中的一种或它们的混合物,实验表明其均有促进成骨细胞增殖及使骨质疏松大鼠骨重系数、骨灰含量、骨小梁宽度、骨磷含量显著增加的作用,其中管花肉苁蓉与柚皮苷部位混合物的作用最强。
Description
技术领域
本发明涉及含中药提取物的治疗骨质疏松症的药物组合物,具体为含管花肉苁蓉或者源于管花肉苁蓉的有效成分或有效部位的治疗骨质疏松症的药物组合物。
背景技术
骨质疏松症(Osteoporasis,OP)是指骨量减少,骨组织显微结构受损,继而引起的骨骼脆性增加和骨折危险性增加的系统性骨骼疾病,它是老年人和绝经后妇女的常见病和多发病。西药的治疗主要使用骨吸收抑制剂(如雌激素,孕激素、降钙素、异丙氧黄酮、双膦酸盐和维生素及其衍生物等)和骨形成刺激剂(如氟制剂、雄性激素及蛋白同化激素、甲状旁腺激素及其片段和胰岛素样生长因子等)治疗。由于西医对OP的病因缺乏明确的认识,用药针对性不强,而且用药时间长、副作用大、禁忌证多,药价昂贵等问题的存在,现在人们把关注的热点转向从天然的中药中寻找治疗骨质疏松的有效药物、单体成分及其有效部位上。
发明内容
本发明旨在研发含中药提取物的治疗骨质疏松症的药物组合物,具体为含管花肉苁蓉或者源于管花肉苁蓉的有效成分或有效部位的治疗骨质疏松症的药物组合物。
为解决上述问题,本发明提供如下技术方案。
一种管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物作为活性成分在制备防治骨质疏松的制剂中的应用:管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物包括管花肉苁蓉用水或者低级醇提取,或者用水和低级醇的混合物提取得到的粗提物,以及所述粗提物精制后得到的精制管花肉苁蓉提取物。所述管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物是用如下方法制备:取管花肉苁蓉,用水和/或C1-C3的直链或支链的低级醇提取,得提取液,浓缩提取液,得到管花肉苁蓉粗提物。C1-C3的直链或支链的低级醇优选甲醇或乙醇。如:选1-99%(V/V)水和醇的混合物作为提取溶剂。
所述防治骨质疏松的制剂中的应用,优选用40-80%乙醇提取管花肉苁蓉,将提取液浓缩干燥后,得管花肉苁蓉粗提物;将管花肉苁蓉粗提物溶于热水中,冷却后用石油醚萃取,石油醚萃取后的水溶液再用正丁醇萃取,将萃取的正丁醇液减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;或者,将管花肉苁蓉粗提物用大孔树脂柱精制,先用水洗脱,弃掉水洗脱液,再用30-50%乙醇洗脱,收集30-50%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;精制的管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%(W/W)。
所述防治骨质疏松的制剂中的应用,更优选用60%乙醇(水和乙醇V/V)提取管花肉苁蓉;将提取液浓缩干燥后,用大孔树脂柱精制,先用水洗脱,弃掉水洗脱液,再用40%乙醇洗脱,收集40%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;精制的管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量为50-55%;大孔树脂型号选自D101、DA201、DM301或者DS401。
选自管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物、管花肉苁蓉粉末、松果菊苷、柚皮苷或柚皮苷提取物中的二种或二种以上组成的混合物作为活性成分在制备防治骨质疏松制剂中的应用。优选管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物作为活性成分,管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为3-1∶1-3;精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%,柚皮苷提取物中柚皮苷含量至少50%。更优选精制管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为2-1∶1-2;精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量为50-55%,柚皮苷提取物中柚皮苷含量为50-70%。所述混合物作为活性成分在制备防治骨质疏松的制剂中的应用,其管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物中,精制管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为1∶1;精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%,柚皮苷提取物中柚皮苷含量至少50%(W/W)。
一种防治骨质疏松的制剂,含前述管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物作为活性成分,管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为3-1∶1-3;
管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物是用如下方法制备:取管花肉苁蓉,用水和/或C1-C3的直链或支链的低级醇提取,得提取液,浓缩提取液,得到管花肉苁蓉粗提物。将管花肉苁蓉粗提物溶于热水中,冷却后用石油醚萃取,石油醚萃取后的水溶液再用正丁醇萃取,将萃取的正丁醇液减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;或者,将管花肉苁蓉粗提物用大孔树脂柱精制,先用水洗脱,弃掉水洗脱液,再用30-50%乙醇洗脱,收集30-50%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;精制的管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%;
柚皮苷提取物用如下方法制备:将化橘红用乙醇回流提取,提取液滤过,减压回收至无乙醇,趁热加入水,室温放冷,沉淀,取沉淀干燥后得柚皮苷提取物,其中柚皮苷含量至少50%(W/W),优选50-80%。
一种防治骨质疏松的药物组合物,其药效原料选自管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物、管花肉苁蓉粉末或单体成分松果菊苷中的一种或它们的混合物。所述药物组合物药效原料中,管花肉苁蓉水和/或低级醇提取物是用如下方法制备:取管花肉苁蓉,用水和/或C1-C3的直链或支链的低级醇提取,得提取液,浓缩提取液,得到管花肉苁蓉粗提物。用水和/或C1-C3的直链或支链的低级醇提取,是指可单独用水或者C1-C3的直链或支链的低级醇进行提取,也可以将水和C1-C3直链或支链的低级醇以各种比例混合后,用其混合溶液进行提取。最常用的C1-C3的直链或支链的低级醇是甲醇或乙醇;所述药物组合物中包括上述所得药效原料与药学上可接受的载体混合,主要是口服药用载体。前述药物组合物,可用水和乙醇的混合溶液提取药效原料,水中乙醇所含比例(体积/体积比,全文同)从10-90%乙醇均可以,优选用40-80%乙醇提取管花肉苁蓉,将提取液浓缩干燥后,得管花肉苁蓉粗提物;将管花肉苁蓉粗提物溶于热水中,用石油醚萃取,石油醚萃取后的水溶液再用正丁醇萃取,将萃取的正丁醇液减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;或者,将管花肉苁蓉粗提物用大孔树脂柱精制,先用水洗脱,弃掉水洗脱液,再用30-50%乙醇洗脱,收集30-50%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;精制的管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%。所述药物组合物,更优选用60%乙醇提取管花肉苁蓉;将提取液浓缩干燥后,用大孔树脂柱精制,先用水洗脱,弃掉水洗脱液,再用40%乙醇洗脱,收集40%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量为50-55%,如果再次精制,可以提高精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量。大孔树脂型号选自D101、DA201、DM301或者DS401。
本发明还包括管花肉苁蓉粉末或单体成分松果菊苷在制备防治骨质疏松制剂中的应用。
本发明还包括精制的管花肉苁蓉提取物和柚皮苷提取物的混合物在制备防治骨质疏松制剂中的应用。
本发明所述药学上可接受的载体有崩解剂如:羟丙纤维素,羧甲基淀粉钠,交联聚维酮,交联羧甲基纤维素钠;填充剂如:乳糖,微晶纤维素,糊精,淀粉,磷酸钙;粘合剂如:预胶化淀粉,聚维酮,羧甲基纤维素钠,羟丙甲纤维素;润滑剂如:滑石粉,硬脂酸镁,微粉硅胶,氢化植物油;润湿剂如:十二烷基硫酸钠,吐温80;骨架材料如:羟丙甲纤维素,乙基纤维素等。口服制剂辅料还有:羟丙纤维素,羧甲基淀粉钠,交联聚维酮,交联羧甲基纤维素钠;乳糖,微晶纤维素,糊精,淀粉,磷酸钙;预胶化淀粉,聚维酮,羧甲基纤维素钠,羟丙甲纤维素;滑石粉,硬脂酸镁,微粉硅胶,氢化植物油;十二烷基硫酸钠,吐温80;羟丙甲纤维素,乙基纤维素等。
具体实施方式
本实验所用管花肉苁蓉药材源于中国新疆,经鉴定为管花肉苁蓉[Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight]。松果菊苷为购自于中国药品生物制品检定所的标准对照品。
本发明管花肉苁蓉提取物包括粗管花肉苁蓉提取物和精制管花肉苁蓉提取物。粗管花肉苁蓉提物包括粗管花肉苁蓉水提物和粗管花肉苁蓉醇提物。
实施例一
粗管花肉苁蓉提取物或粉末的制备
1.取管花肉苁蓉药材10000g(过10目筛),加入10倍量水(按药材重量计),先浸泡,再煎煮2小时,滤过,得水提取液;药渣按上述提取条件再提取两次。合并三次药液,药液浓缩后减压干燥,得5600g深棕色粉状的粗管花肉苁蓉水提物。
2、取管花肉苁蓉药材10000g(过10目筛),加入10倍量(按药材重量计)60%乙醇,浸泡后,回流提取2小时,滤过,得提取液;药渣按上述提取条件再提取两次,合并三次药液,减压回收乙醇,药液浓缩、干燥,得棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物得3000g。
3、取管花肉苁蓉药材10000g(过10目筛),加入10倍量(按药材重量计)40%乙醇,浸泡后,回流提取2小时,滤过,得提取液;药渣按上述提取条件再提取两次,合并三次药液,减压回收乙醇,药液浓缩、干燥,得棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物3200g。
4、取管花肉苁蓉药材10000g(过10目筛),加入10倍量(按药材重量计)80%乙醇,浸泡后,回流提取2小时,滤过,得提取液;药渣按上述提取条件再提取两次,合并三次药液,减压回收乙醇,药液浓缩、干燥,得棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物2800g。
提取溶剂中乙醇的含量可以选用10%、20%或95%的乙醇进行回流提取;亦可用甲醇代替乙醇进行提取,其余操作步骤相同;均可得到基本相同的结果,即所得粗管花肉苁蓉提取物均具有一定的抗骨质疏松作用。
5、管花肉苁蓉粉末的制备:取管花肉苁蓉药材,60℃干燥,粉碎成100目的粉末,即得。
管花肉苁蓉粉末样品的制备:取管花肉苁蓉药材,60℃干燥,粉碎成100目的粉末,每1克药材加入50毫升(W/V)甲醇,超声提取30分钟,过滤,得甲醇提取液,减压蒸干,每克干燥物相当于管花肉苁蓉药材5克,此干燥物即管花肉苁蓉粉末样品。
实施例二
精制管花肉苁蓉提取物的制备(正丁醇萃取法)
1、将实施例一(1)得到的深棕色粉状的粗管花肉苁蓉水提物取100克,溶于200毫升热水中,放冷,以100毫升石油醚(b.p.60-90℃)萃取脱脂,反复萃取脱脂5次,将脱脂后的水溶液用正丁醇萃取,每次用正丁醇100毫升,反复萃取6次,将萃取的正丁醇液合并后,经水浴减压液蒸干,得到精制管花肉苁蓉提取物26.8克(精制管花肉苁蓉水提物)。
精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷的含量测定:HPLC分析测定条件:岛津LC-20AT液相色谱仪,反相柱(Kromasil,KR100-5C18;150×4.6mm);流动相为0.1%甲酸-甲醇(0.715∶0.285);流速1mL/min.,测定波长330nm(按中华人民共和国药典2005一部HPLC测定条件进行)。
取精制管花肉苁蓉水提物50mg待测样品,置于25ml量瓶中,以30%甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45μm微孔滤膜滤过,吸取20μl注入液相色谱仪,测定。结果:精制管花肉苁蓉水提物中松果菊苷的含量为50.4%。
2、将实施例一(2)得到的深棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物取100克溶于200毫升热水中,冷却后,以100毫升石油醚(b.p.60-90℃)萃取脱脂,反复萃取脱脂5次,脱脂后的水溶液用正丁醇反复萃取6次,每次用正丁醇100毫升,将萃取的正丁醇液合并后经水浴减压液蒸干后,得到精制管花肉苁蓉提取物48.4克(精制管花肉苁蓉醇提物)。
精制管花肉苁蓉提取物中松果菊苷的含量测定:HPLC分析测定条件:岛津LC-20AT液相色谱仪,反相柱(Kromasil,KR100-5C18;150×4.6mm);流动相为0.1%甲酸-甲醇(0.715∶0.285);流速1mL/min.,测定波长330nm(按中华人民共和国药典2005一部HPLC测定条件进行)。
取精制管花肉苁蓉醇提物50mg待测样品,置于25ml量瓶中,以30%甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45μm微孔滤膜滤过,吸取20μl注入液相色谱仪,测定。结果:精制管花肉苁蓉醇提物中松果菊苷的含量为51.3%。
实施例三
精制管花肉苁蓉提取物的制备(大孔树脂吸附法)
1、将实施例一(2)提取得到的棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物取10克,用D101大孔树脂柱精制(大孔树脂也可用DA201,DM301或者DS401,)按常规步骤操作,先用500毫升水洗脱(水量相当于4-7倍的柱体积;药材重量与大孔树脂重量比约等于1∶2)。用薄层层析监测柱层析洗脱,薄层层析条件:以聚酰胺膜为吸附材料,36%的乙酸水溶液作展开剂,展距6cm,Rf值约0.6-0.7,检测成分为松果菊苷。水洗脱时,以水洗脱液中尚未出现松果菊苷为度。弃掉水洗脱液。再以40%乙醇洗脱,以洗脱液中已没有松果菊苷为度,洗脱液中已没有松果菊苷了,表明洗脱完毕。收集40%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制管花肉苁蓉提取物4.7克,其中松果菊苷的含量为为51.9%(测定方法同上)。(精制管花肉苁蓉醇提物)。
2、将实施例一(3)提取得到的棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物取10克,用DA201大孔树脂柱精制,按常规步骤操作,先用500毫升水洗脱。薄层监测柱层析洗脱,薄层层析条件同上,以水洗脱液中尚不出现松果菊苷为度。弃掉水洗脱液,再以30%-40%乙醇洗脱,以洗脱液中已没有松果菊苷为度。收集乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制管花肉苁蓉提取物4.8克,其中松果菊苷的含量为为50.8%(测定方法同上)。
3、将实施例一(4)提取得到的棕色粉状的粗管花肉苁蓉醇提物取10克,用DM301大孔树脂柱精制按常规步骤操作,先用500毫升水洗脱,薄层监测洗脱条件同上。弃掉水洗脱液,再以40%-50%乙醇洗脱,洗脱液中已没有松果菊苷了,表明洗脱完毕。收集40%-50%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制管花肉苁蓉提取物4.6克,其中松果菊苷的含量为50.4%(测定方法同上)。
深棕色粉状的管花肉苁蓉水粗提物也可用上述大孔树柱法精制,步骤、条件相同,得到精制管花肉苁蓉水提物。
实施例四、柚皮苷、柚皮苷提取物的制备
1.柚皮苷购于中国药品生物制品检定所,批号081-200601。
2.柚皮苷提取物的制备
化橘红Exocarpium citrl Grandis为市售药材。柚皮苷购自宝鸡市虹源生物科技有限公司
将化橘红100g粉碎成大米粒大小的颗粒,用10倍量(按药材重量计即1000ml)的95%乙醇回流提取,每次3小时,共提取4次,提取液滤过,合并,减压回收至无乙醇,趁热加入50ml的水,室温放冷,柚皮苷在溶液中析出,滤过,得到柚皮苷沉淀物,剩余的水溶液在水浴上浓缩至40ml左右,再于室温放冷,柚皮苷在溶液中析出,滤过,得到柚皮苷沉淀物,如需要可反复进行水沉,收集柚皮苷沉淀物,为柚皮苷提取物,干燥后得柚皮苷提取物15g。
HPLC测定柚皮苷提取物中柚皮苷含量(药典法):
仪器与色谱分析条件:日本岛津LC-10A高效液相色谱仪,日本岛津SPD-10A型紫外检测器;色谱柱Kromasil 100-5C18(4.6mmX15cm)及预柱;流动相:甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶61),抽气过滤,脱气,柱温30℃;检测波长283nm;流速1ml/分钟;数据处理定量方法:外标峰面积标准曲线法。
对照品溶液的制备:精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品,制成含柚皮苷0.15mg/ml的甲醇溶液。
柚皮苷提取物样品溶液的制备:精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷提取物样品,制成含柚皮苷0.30mg/ml的甲醇溶液。
测定:精密量取对照品溶液和柚皮苷提取物样品溶液各20ul,注入色谱柱,测定。
标准曲线的绘制:精密吸取上述对照品溶液0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml于10ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度。按样品测定项下色谱条件进行HPLC分析,记录峰面积,以样品液浓度(μg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归计算。结果表明,柚皮苷在检测范围内显示了良好的线性关系。实验测定结果详见下表。
柚皮苷含量测定标准曲线方程
移取量(ml) | 0.2 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 5.0 |
浓度(μg/ml) | 3.0 | 7.5 | 15.0 | 30.0 | 45.0 | 60.0 | 75.0 |
峰面积(Area) | 32722.6 | 74437 | 151506 | 290682.2 | 448838.4 | 592943.7 | 734951.8 |
线性方程为A=9804.2C+2455.1(r2=0.9998),线性范围为3.0~75.0μg/ml。
测得结果:柚皮苷提取物中柚皮苷的含量为56%。
实施例五
1、精制管花肉苁蓉水提物普通胶囊剂的制备
将精制管花肉苁蓉水提物(按实施例二(1)方法制备)200g,加入淀粉适量,加水溶液适量,制软材,过20目筛制粒。40-50℃烘箱鼓风干燥。干颗粒过20目筛整粒,加入处方量的滑石粉,混合均匀。按处方量灌装1号胶囊,制成1000粒即得,每粒含管花肉苁蓉水提物提取物200mg。用法:每天三次,每次二粒。
2、精制管花肉苁蓉醇提物普通胶囊剂的制备
将精制管花肉苁蓉醇提物(按实施例三(1)方法制备)200g,,加入淀粉适量,加水溶液适量,制软材,过20目筛制粒。40-50℃烘箱鼓风干燥。干颗粒过20目筛整粒,加入处方量的滑石粉,混合均匀。按处方量灌装1号胶囊,制成1000粒即得,每粒含管花肉苁蓉醇提物200mg。用法:每天三次,每次二粒。
3.肉与柚部位混合物(1∶1)胶囊的制备
精制管花肉苁蓉提取物按实施例二方法或者用实施例三方法制备;柚皮苷提取物按实施例四(2)方法制备(下同)。
(1).精制管花肉苁蓉提取物(按实施例二(2)方法制备)与柚皮苷提取物混合物(1∶1)的制备[简称肉与柚部位混合物(1∶1)]:取精制管花肉苁蓉醇提物与柚皮苷提取物,按1∶1重量份比,等量物理混合均匀,即得肉与柚部位混合物。
(2).肉与柚部位混合物(1∶1)胶囊的制备:取肉与柚部位混合物(1∶1)200g,加入淀粉适量,加水溶液适量,制软材,过20目筛制粒。40-50℃烘箱鼓风干燥。干颗粒过20目筛整粒,加入处方量的滑石粉,混合均匀。按处方量灌装1号胶囊,制成1000粒即得,每粒含管花肉苁蓉水提物提取物100mg,含柚皮苷提取物100mg。用法:每天三次,每次二粒。
4.肉与柚部位混合物(2∶1)胶囊的制备
精制管花肉苁蓉提取物(按实施例二(1)方法制备)与柚皮苷提取物的混合物(2∶1)的制备[简称肉与柚部位混合物(2∶1)]:取精制管花肉苁蓉水提物与柚皮苷提取物,按2∶1重量份比,等量物理混合均匀即得。
取肉与柚部位混合物(2∶1)200g,加入淀粉适量,加水溶液适量,制软材,过20目筛制粒。40-50℃烘箱鼓风干燥。干颗粒过20目筛整粒,加入处方量的滑石粉,混合均匀。按处方量灌装1号胶囊,制成1000粒即得,每粒含管花肉苁蓉水提物提取物133.3mg,含柚皮苷提取物66.7mg。用法:每天三次,每次二粒。
5.肉与柚部位混合物(1∶2)胶囊的制备
精制管花肉苁蓉提取物(按实施例三(1)方法制备)与柚皮苷提取物混合物(1∶2)的制备[简称肉与柚部位混合物(2∶1)]:取精制管花肉苁蓉水提物与柚皮苷提取物,按1∶2重量份比,等量物理混合均匀即得。
取肉与柚部位混合物(1∶2)200g,加入淀粉适量,加水溶液适量,制软材,过20目筛制粒。40-50℃烘箱鼓风干燥。干颗粒过20目筛整粒,加入处方量的滑石粉,混合均匀。按处方量灌装1号胶囊,制成1000粒即得,每粒含管花肉苁蓉水提物提取物66.7mg,含柚皮苷提取物133.3mg。用法:每天三次,每次二粒。
实施例六
松果菊苷、精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、粗管花肉苁蓉水提物、粗管花肉苁蓉醇提物、肉与柚部位混合物、柚皮苷、管花肉苁蓉粉末对骨细胞体外增殖活性的影响研究
精制管花肉苁蓉水提物按实施例二(1)方法制备;精制管花肉苁蓉醇提物按实施例三(1)方法制备;粗管花肉苁蓉水提物按实施例一(1)方法制备;粗管花肉苁蓉醇提物按实施例一(2)方法制备;管花肉苁蓉粉末按实施例一(5)方法制备;肉与柚部位混合物按实施例五(3)项下[肉与柚部位混合物(1∶1)]方法制备(下同);柚皮苷(购自中国药品生物制品检定所,批号081-200601);松果菊苷(111670-200502)购自中国药品生物制品检定所。胰蛋白酶购自南京生兴生物技术有限公)。MEM(培养基)购自Gibco.USA。MTT(四甲基偶氮唑盐)购自Sigma.USA。小牛血清购自Hyclone.ew Zealand。己烯雌酚(diaethylstilbestrol,简写DES),上海信谊药业有限公司。
实验样品液的制备:将己烯雌酚、松果菊苷、精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、粗管花肉苁蓉水提物、粗管花肉苁蓉醇提物、管花肉苁蓉粉末样品、肉与柚部位混合物、柚皮苷,分别溶于含5%DMSO(二甲亚砜)的MEM溶液中。其中己烯雌酚、松果菊苷、柚皮苷样品液的浓度为10mmol/L,精制管花肉苁蓉水提物样品液、精制管花肉苁蓉醇提物样品液、粗管花肉苁蓉水提物样品液、粗管花肉苁蓉醇提物样品液、肉与柚部位混合物、管花肉苁蓉粉末样品液浓度均为10mg/L。样品溶液分别以0.2μm微孔滤膜滤过,4℃冷藏,用前以MEM稀释至需要浓度,空白对照组为含有与待测样品相同比例DMSO的MEM溶液。
成骨细胞的培养:采用酶消化法从新生大鼠颅盖骨中分离出成骨细胞,置于培养瓶中,以含10%小牛血清、50U/ml青霉素、50Ag/ml链霉素的MEM为培养基,CO2培养箱中培养。细胞70%融合后,用0.25%胰蛋白酶消化,接种于培养瓶传代或以1×104cells/孔接种于96孔板,以含10%小牛血清、50U/ml青霉素、50Ag/ml链霉素的MEM为培养基,每间隔3天更换一次新鲜培养基。
增殖活性的测定:成骨细胞以5×104个/ml接种于96孔板(200ul/孔),以含10%小牛血清的MEM培养24小时。然后吸掉培养基以PBS洗涤一次,分别换含有不同浓度粗提物、精制物、松果菊苷的不含血清的培养基。培养48小时后每孔加20ulMTT溶液(5mg/ml),继续培养4小时。最后,吸掉培养基,每孔加DMSO150ul。酶标仪测定吸收值(TECAN,Sunrise),测定波长570nm,参比波长650nm。
统计分析:测定结果以平均值±标准偏差表示。采用T检验评价显著性。p<0.05表示有显著性差异。p<0.01表示有极显著性差异。增殖率计算公式:GSR%=(A样品-A空白)/A空白×100,A是六个孔的平均吸收值。
表1、松果菊苷、管花肉苁蓉提取物、管花肉苁蓉粉末和肉与柚部位混合物骨细胞增殖效果
样品 | 浓度 | A空白(x±SD) | A570nm/650nm(x±SD) | 增值率(%) |
己烯雌酚(mmol/L) | 1.0×10-11.0×10-21.0×10-3 | 0.344±0.013 | 0.365±0.0190.446±0.0170.390±0.017 | 6.1*29.6**13.3** |
松果菊苷(mmol/mL) | 1.0×10-11.0×10-21.0×10-3 | 0.344±0.013 | 0.362±0.0150.395±0.0190.456±0.017 | 5.3*14.7**32.5** |
粗管花肉苁蓉水提物(mg/mL) | 1.0×10-1 | 0.328±0.021 | 0.341±0.020 | 4.0* |
1.0×10-2 | 0.352±0.013 | 7.3* | ||
1.0×10-3 | 0.350±0.017 | 6.7* | ||
粗管花肉苁蓉醇提物(mg/mL) | 1.0×10-1 | 0.328±0.021 | 0.340±0.011 | 3.7* |
1.0×10-2 | 0.355±0.021 | 8.2* | ||
1.0×10-3 | 0.352±0.010 | 7.3* | ||
精制管花肉苁蓉水提物(mg/mL) | 1.0×10-11.0×10-21.0×10-3 | 0.344±0.013 | 0.360±0.0190.448±0.0180.396±0.019 | 4.7*30.2**15.1** |
精制管花肉苁蓉醇提物(mg/mL) | 1.0×10-11.0×10-21.0×10-3 | 0.332±0.018 | 0.359±0.0190.426±0.0130.398±0.019 | 8.1*28.3**19.9** |
管花肉苁蓉粉末样品(mg/mL) | 3.0×10-1 | 0.332±0.018 | 0.342±0.016 | 3.0* |
3.0×10-2 | 0.399±0.012 | 20.2** | ||
3.0×10-3 | 0.370±0.018 | 11.4** |
肉与柚部位混合物样品(mg/mL) | 1.0×10-1 | 0.341±0.014 | 0.404±0.021 | 18.5** |
1.0×10-2 | 0.473±0.017 | 38.7** | ||
1.0×10-3 | 0.431±0.013 | 26.4** |
柚皮苷(mmol/mL) | 1.0×10-1 | 0.341±0.014 | 0.366±0.019 | 7.3* |
1.0×10-2 | 0.436±0.023 | 27.9** | ||
1.0×10-3 | 0.394±0.014 | 15.5** |
*p<0.05;**p<0,与空白组比较。
成骨细胞在骨形成和骨重建中起重要作用。能促进成骨细胞活性的药物可以成为治疗骨质疏松或其他骨病的有效药物。从表1中可以看出,当细胞与1.0×10-1--1.0×10-2mmol/L的松果菊苷、精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、管花肉苁蓉粗提物、管花肉苁蓉醇粗提物、肉与柚部位混合物、柚皮苷、管花肉苁蓉粉末样品共培养时,细胞增殖明显;松果菊苷(增值率32.5%)增殖效果高于阳性对照组己烯雌酚的各个浓度;精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、肉与柚部位混合物、柚皮苷的增殖效果是中浓度组最好,与阳性对照组己烯雌酚的中浓度组增殖作用相当;管花肉苁蓉粉末同样具有促进成骨细胞增殖的作用,但是当它的剂量增大3倍时才能具有精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物的相当作用。实验表明,松果菊苷、精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、管花肉苁蓉粗提物、管花肉苁蓉醇粗提物、柚皮苷、管花肉苁蓉粉末均有促进成骨细胞活性的作用,所以,其中任意二种或二种以上混合物也具有促进成骨细胞活性,其中肉与柚部位混合物的增殖作用最强,比任何组份的单独使用作用都强。
实施例七
管花肉苁蓉中的精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物及管花肉苁蓉粉末对维甲酸骨质疏松模型抗骨质疏松的作用(参见:徐叔云、卞如濂、陈修主编,药理试验方法学,人民卫生出版社,第二版,1991年11月:1293;2.陈奇主编,中药药理研究方法学,人民卫生出版社,1993.9.第一版:798~800)
取大鼠110只,雄雌各半,体重在260-300g范围内,随机分为11组,一组作为正常对照组,给予0.5%CMC-Na,其余10组大鼠均给予维甲酸70mg/kg,以制备骨质疏松模型,在这10组大鼠中,1组作为模型对照组给予0.5%CMC-Na,1组给予依膦片剂40mg/kg,作为阳性对照组,其余8组分别给予精制管花肉苁蓉水提物高剂量0.25g/kg、低剂量0.125g/kg;精制管花肉苁蓉醇提物高剂量0.25g/kg、低剂量0.125g/kg;管花肉苁蓉粉末样品高剂量0.50g/kg、低剂量0.25g/kg;肉与柚部位混合物高剂量0.25g/kg、低剂量0.125g/kg。动物同时灌胃维甲酸及药物2周后,停服维甲酸,继续给药2周,于停药后第二天将大鼠处死,解剖双侧股骨,左侧股骨用于测定骨重系数、骨矿密度、骨灰含量和骨钙、骨磷,右侧股骨用于作病理组织学检测。结果见表2、3、4。
组别 | 剂量(g/kg) | 骨重系数(g/100g体重) | 骨灰含量(g/g骨重) |
正常对照 | - | 0.355±0.033 | 0.279±0.016 |
模型对照 | - | 0.2699±0.019△△△ | 0.201±0.018△△△ |
依膦片剂 | 0.04 | 0.338±0.028*** | 0.249±0.021*** |
精制管花肉苁蓉水提物 | 0.25 | 0.345±0.027*** | 0.257±0.017*** |
0.125 | 0.339±0.016*** | 0.249±0.015*** | |
精制管花肉苁蓉醇提物 | 0.25 | 0.344±0.021*** | 0.250±0.025*** |
0.125 | 0.341±0.014*** | 0.248±0.023*** | |
管花肉苁蓉粉末样品 | 0.25 | 0.325±0.025** | 0.235±0.024** |
0.50 | 0.330±0.023*** | 0.241±0.018*** | |
肉与柚部位混合物 | 0.25 | 0.348±0.016*** | 0.259±0.017*** |
0.125 | 0.344±0.019*** | 0.250±0.021*** |
**P<0.05,***P<0.01,与模型对照组比较;△△△P<0.01,与正常对照组比较
组别 | 剂量(g/kg) | 骨钙(mg/g骨重) | 骨磷(mg/g骨重) |
正常对照 | - | 96.0±4.3 | 2.55±0.18 |
模型对照 | - | 60.1±7.2△△△ | 2.14±0.24△△△ |
依膦片剂 | 0.04 | 81.4±6.2*** | 3.40±0.21*** |
精制管花肉苁蓉水提物 | 0.25 | 85.5±6.1*** | 2.55±0.18*** |
0.125 | 67.5±4.0 | 2.40±0.11*** | |
精制管花肉苁蓉醇提物 | 0.25 | 82.2±5.7*** | 2.57±0.23*** |
0.125 | 69.0±6.4 | 2.37±0.31*** | |
管花肉苁蓉粉末样品 | 0.50 | 77.8±4.3*** | 2.49±0.35*** |
0.25 | 63.4±3.6 | 2.30±0.24*** | |
肉与柚部位混合物 | 0.25 | 87.3±4.5*** | 3.51±0.15*** |
0.125 | 71.2±5.6 | 2.59±0.22*** |
△△△P<0.01,与正常对照组比较,***P<0.01,与模型对照组比较
组 别 | 剂量(g/kg) | 骨小梁宽度(mm) |
正常对照 | - | 0.017±0.007 |
模型对照 | - | 0.009±0.005△△△ |
依膦片剂 | 0.04 | 0.018±0.002** |
精制管花肉苁蓉水提物 | 0.25 | 0.020±0.004±*** |
0.125 | 0.016±0.006*** | |
精制管花肉苁蓉醇提物 | 0.25 | 0.019±0.005*** |
0.125 | 0.016±0.003** | |
管花肉苁蓉粉末样品 | 0.25 | 0.017±0.005** |
0.50 | 0.016±0.007** | |
肉与柚部位混合物 | 0.25 | 0.021±0.005*** |
0.125 | 0.019±0.003*** |
**P<0.05,***P<0.01与模型对照组比较,△△△P<0.01,与正常对照组比较
表2-1至2-4中是精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物的实验数据。由表2-1至2-4可见,精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、管花肉苁蓉粉末样品、肉与柚部位混合物及依膦组可使骨质疏松大鼠的骨重系数、骨灰含量、骨小梁宽度、骨磷含量显著增加(P<0.01,P<0.05),精制管花肉苁蓉水提物、精制管花肉苁蓉醇提物、管花肉苁蓉粉末样品、肉与柚部位混合物高剂量组及依膦片剂组可使骨钙含量显著升高(P<0.01)。其中肉与柚部位混合物比任何组份的单独使用作用都强。而且,肉与柚部位混合物中,精制管花肉苁蓉提物与柚皮苷提取物的混合比例,按重量份计3-1∶1-3均可产生明显作用,其中优选管花肉苁蓉水提物与柚皮苷提取物2-1∶1-2混合;更优选按1∶1重量份配比。
同样,如果用柚皮苷代替柚皮苷提取物,将精制管花肉苁蓉水提物与柚皮苷混合,同样可使骨质疏松大鼠的骨重系数、骨灰含量、骨小梁宽度、骨磷含量显著增加。
Claims (5)
1.松果菊苷在制备防治骨质疏松制剂中的应用。
2.管花肉苁蓉提取物在制备防治骨质疏松制剂中的应用,其特征在于该提取物中松果菊苷含量至少50%。
3.管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物作为活性成分在制备防治骨质疏松的制剂中的应用,其特征在于:管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物中,管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为3-1∶1-3;管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%,柚皮苷提取物中柚皮苷含量至少50%。
4.权利要求3的混合物作为活性成分在制备防治骨质疏松的制剂中的应用,其特征在于:管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物中,管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为2-1∶1-2;管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量为50-55%,柚皮苷提取物中柚皮苷含量为50-70%。
5.一种防治骨质疏松的制剂,其特征在于:权利要求1所述管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物的混合物作为活性成分,管花肉苁蓉提取物与柚皮苷提取物重量份比为3-1∶1-3;
管花肉苁蓉提取物是用如下方法制备:取管花肉苁蓉,用水和/或C1-C3的直链或支链的低级醇提取,得提取液,浓缩提取液,得到管花肉苁蓉粗提物;将管花肉苁蓉粗提物溶于热水中,冷却后用石油醚萃取,石油醚萃取后的水溶液再用正丁醇萃取,将萃取的正丁醇液减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;或者,将管花肉苁蓉粗提物用大孔树脂柱精制,先用水洗脱,弃掉水洗脱液,再用30-50%乙醇洗脱,收集30-50%乙醇洗脱部分,浓缩,减压干燥,得到精制的管花肉苁蓉提取物;精制的管花肉苁蓉提取物中松果菊苷含量至少50%;
柚皮苷提取物用如下方法制备:将化橘红用乙醇回流提取,提取液滤过,减压回收至无乙醇,趁热加入水,室温放冷,沉淀,取沉淀干燥后得柚皮苷提取物,其中柚皮苷含量至少50%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2007101315579A CN101143165B (zh) | 2007-09-14 | 2007-09-14 | 含管花肉苁蓉及其提取物治疗骨质疏松的组合物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2007101315579A CN101143165B (zh) | 2007-09-14 | 2007-09-14 | 含管花肉苁蓉及其提取物治疗骨质疏松的组合物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101143165A CN101143165A (zh) | 2008-03-19 |
CN101143165B true CN101143165B (zh) | 2011-07-27 |
Family
ID=39206021
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2007101315579A Expired - Fee Related CN101143165B (zh) | 2007-09-14 | 2007-09-14 | 含管花肉苁蓉及其提取物治疗骨质疏松的组合物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101143165B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103833809A (zh) * | 2014-01-21 | 2014-06-04 | 李玉山 | 柚皮苷的新型提取分离工艺 |
CN109091430A (zh) * | 2018-09-29 | 2018-12-28 | 广州今盛美精细化工有限公司 | 一种肉丛蓉提取物及其在制备化妆品中的应用 |
CN109106760B (zh) * | 2018-09-29 | 2021-03-23 | 辽宁中医药大学 | 肉苁蓉苯乙醇苷改善睡眠的新用途及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1526400A (zh) * | 2003-03-04 | 2004-09-08 | 杭州天力药业有限公司 | 来源于管花肉苁蓉的含有苯乙醇苷的制剂及其制备方法和用途 |
-
2007
- 2007-09-14 CN CN2007101315579A patent/CN101143165B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1526400A (zh) * | 2003-03-04 | 2004-09-08 | 杭州天力药业有限公司 | 来源于管花肉苁蓉的含有苯乙醇苷的制剂及其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
陈劲柏,郦尧旺.中药防治骨质疏松的研究概述.《中国药业》.2004,第13卷(第6期),76-77. * |
龚理.柚皮苷对骨质疏松模型大鼠MSCs增殖、骨向分化及凋亡影响的实验研究.2007,69. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101143165A (zh) | 2008-03-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101422563B (zh) | 治疗小儿咽喉炎的中药组合物及其制备方法和质量检测方法 | |
CN101366721A (zh) | 一种治疗骨科疾病的原料药及其制备方法 | |
CN102228506A (zh) | 补骨脂提取物的组合物及其制备方法和用途 | |
CN102091111B (zh) | 雪莲巴布剂及其生产方法 | |
CN100540014C (zh) | 一种植物提取物和它的制备方法及用途 | |
CN103463156B (zh) | 一种黑骨藤提取物及其制备方法和用途 | |
CN101143165B (zh) | 含管花肉苁蓉及其提取物治疗骨质疏松的组合物 | |
CN102935104B (zh) | 朝鲜槐总黄酮提取物及其制备方法和应用 | |
CN1981852A (zh) | 一种天麻醒脑制剂及其制法和质控方法 | |
CN101391070B (zh) | 一种具有抗癌作用的中药组合物的检测方法 | |
CN101057895B (zh) | 治疗妇科疾病的妇炎舒制剂及其质量检测方法 | |
CN103083388B (zh) | 猪牙皂总皂苷的制备方法 | |
CN103417597B (zh) | 油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和应用 | |
Zhang et al. | Safety investigation on total steroid saponins extracts from Dioscorea zingiberensis CH Wright: Sub-acute and chronic toxicity studies on dogs | |
CN105535219A (zh) | 文冠木黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法和应用 | |
CN101375938B (zh) | 一种柘木提取物、其制备及应用 | |
CN101239093A (zh) | 合欢皮中具有抑制血管生成作用的活性成份及其制备方法和应用 | |
CN101375937A (zh) | 一种柘木提取物、其制备及应用 | |
CN105311085A (zh) | 忍冬藤或其基源植物忍冬的叶或花提取物及其制备方法和应用 | |
CN101028336B (zh) | 一种头花蓼和独一味的药物组合物 | |
CN102028698B (zh) | 一种治疗结肠癌的药物及其制备方法 | |
CN103110890B (zh) | 协日嘎四味有效部位及其制备方法、质量检测方法和应用 | |
CN101700370B (zh) | 治疗泌尿系统疾病的药物组合物的制备方法 | |
CN103454373B (zh) | 一种治疗痛经的药物的检测方法 | |
CN101073611B (zh) | 一种抗肿瘤的药物组合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110727 Termination date: 20200914 |