CN104830745B - 一种生产γ-氨基丁酸的方法 - Google Patents

一种生产γ-氨基丁酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104830745B
CN104830745B CN201510208490.9A CN201510208490A CN104830745B CN 104830745 B CN104830745 B CN 104830745B CN 201510208490 A CN201510208490 A CN 201510208490A CN 104830745 B CN104830745 B CN 104830745B
Authority
CN
China
Prior art keywords
glutamate decarboxylase
glutamate
medium
decarboxylase
gadb
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510208490.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104830745A (zh
Inventor
王小元
赵安琪
胡晓清
李烨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201510208490.9A priority Critical patent/CN104830745B/zh
Publication of CN104830745A publication Critical patent/CN104830745A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104830745B publication Critical patent/CN104830745B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/005—Amino acids other than alpha- or beta amino acids, e.g. gamma amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01—Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01015—Glutamate decarboxylase (4.1.1.15)

Abstract

本发明公开了一种高效生产γ‑氨基丁酸的方法，属于发酵工程领域。本发明将一种双精氨酸信号肽基因(torA)和谷氨酸脱羧酶基因(gadB)融合，并转化大肠杆菌宿主(Escherichia coli BL21(DE3))得到可以分泌表达谷氨酸脱羧酶的重组菌pET20b(+)‑torA‑gadB/E.coli BL21(DE3)。该菌的胞外谷氨酸脱羧酶酶活，在摇瓶水平可达5.11U/mL，在3L发酵罐水平可达15.82U/mL。利用该体系，以一水和谷氨酸钠为底物γ‑氨基丁酸产量可达203.7g/L。

Description

一种生产γ-氨基丁酸的方法
技术领域
本发明涉及一种生产γ-氨基丁酸的方法，尤其是利用一株分泌表达谷氨酸脱羧酶的基因工程菌生产γ-氨基丁酸的方法，属于发酵工程领域。
背景技术
γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，简称GABA)，又称4-氨基丁酸、氨酪酸，是一种在自然界中广泛存在并具有重要的生理功能的非蛋白类氨基酸。在人体中GABA是中枢神经系统中三大抑制性神经递质之一，具有缓解焦虑、降低血压、安眠镇定等生理功效，因此在医疗保健方面应用广泛。发酵法生产GABA主要是利用微生物自身的谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase，GAD，EC 4.1.1.15)，催化谷氨酸或谷氨酸钠发生脱羧反应生成γ-氨基丁酸。
为实现γ-氨基丁酸的合成，需要添加一水合谷氨酸钠作为底物。谷氨酸脱羧酶是一种胞内酶，在大肠杆菌胞内中过表达谷氨酸脱羧酶来生产γ-氨基丁酸时，由于细胞膜壁对底物和酶的分隔，导致γ-氨基丁酸产量及生产效率的降低。此外，胞内表达的谷氨酸脱羧酶在大批量分离纯化方面也有诸多困难。因此，实现谷氨酸脱羧酶的胞外表达将有利于提升γ-氨基丁酸生产效率以及谷氨酸脱羧酶的获得。
在细菌中，大多数分泌蛋白都是通过Sec系统以未折叠的形式被转运到周质空间中，再在周质空间中进行折叠。而谷氨酸脱羧酶是一个同源六聚体蛋白，实验室此前研究显示，Sec系统信号肽PelB不能在胞外分泌有活性的谷氨酸脱羧酶，可能是由于在周质空间中的正确折叠难以有效进行。
除了Sec系统，还有少量蛋白通过双精氨酸系统转送到胞外。双精氨酸系统转运胞内已经折叠好的蛋白，以此，对于不能在细胞质以外的环境中正确折叠的蛋白，双精氨酸信号肽是一个良好的选择。该系统包括具有转运蛋白能力的转运通道复合体TatA和能够特异性识别的双精氨酸信号肽的信号识别复合体TatBC。
本发明用双精氨酸信号肽TorA对E.coli w3110来源的谷氨酸脱羧酶(GadB)在E.coli BL21(DE3)进行分泌表达。并在发酵罐水平进行了GABA的生产，6h内GABA产量可达203g/L。此外，谷氨酸脱羧酶的胞外表达对降低其分离纯化的成本将产生积极的作用。
发明内容
本发明提供了首先提供了一种分泌表达谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌基因工程菌，所述基因工程菌是以双精氨酸信号肽TorA分泌谷氨酸脱羧酶。
编码所述双精氨酸信号肽TorA的基因来自大肠杆菌基因组。
编码所述谷氨酸脱羧酶的基因来自大肠杆菌基因组。
本发明还提供一种构建所述大肠杆菌基因工程菌的方法，是以大肠杆菌E.coliw3110基因组DNA作模板，PCR获得信号肽torA基因和谷氨酸脱羧酶的基因gadB；用限制性内切酶分别消化处理torA基因和gadB基因的PCR产物，酶切产物纯化后，连接载体并转化E.coli BL21(DE3)，获得分泌表达谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌基因工程菌。
本发明还提供一种应用所述大肠杆菌基因工程菌产谷氨酸脱羧酶的方法，是将37℃、200rpm下过夜培养的种子以5％的接种量转入TB培养基，于37℃、200rpm条件下培养，OD600值为1.0时，添加终浓度为0.7mM的IPTG诱导表达。
本发明还提供了另一种应用所述大肠杆菌基因工程菌产谷氨酸脱羧酶的方法，是将种子培养液以5-10％的接种量转入装有发酵培养基的发酵罐，于37℃、200rpm条件下培养；待培养基中初始甘油消耗尽，即发酵罐中溶氧上升时，以比生长速率0.12-0.20h-1指数流加补料培养基，通过搅拌转速与溶氧偶联控制溶氧约30％；待OD600达到40-50，补料培养基由指数流加转为恒速流加，流加速率12mL/h，并开始以0.8g/L/h的速度流加200g/L的乳糖进行诱导，诱导12-24h。
种子培养基为LB培养基(1L)：胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl 10g，pH调至7.0。
TB培养基(1L)：胰蛋白胨12g，酵母抽提物24g，甘油5g，K2HPO4 14.6g,NaH2PO4·2H2O3.6g，甘氨酸7.5g，NaCl5g。
发酵培养基(1L)：胰蛋白胨30g，酵母抽提物20g，甘油8g，Na2SO4 2.0g,(NH4)2SO42.5g，(NH4)2-H-citrate1.0g，K2HPO4 14.6g，NaH2PO4·2H2O3.6g，MgSO4·7H2O2.0g，维生素B1100mg。
补料培养基(1L)：酵母膏50g，甘油500g，MgSO4·7H2O3.4g。
本发明还提供了一种应用所述大肠杆菌基因工程菌合成γ-氨基丁酸的方法，在3L发酵罐培养所述基因工程菌到发酵液中积累谷氨酸脱羧酶后，调整温度为37-50℃，50-100％磷酸控制pH4.6-5.0，分批次加入总量400-600g/L的一水合谷氨酸钠，转化6h。
本发明实现了谷氨酸脱羧酶的分泌表达，有利于简化酶的分离纯化程序，降低分离纯化成本。且本发明涉及的大肠杆菌基因工程菌经培养诱导产谷氨酸脱羧酶后，可直接利用发酵体系中的一水合谷氨酸钠合成GABA，6h内其GABA产量达203.7g/L。
附图说明
图1重组菌的谷氨酸脱羧酶SDS-PAGE，1、2为空载的胞内和胞外；3、4为重组菌的胞内和胞外。
图2重组菌发酵生产谷氨酸脱羧酶转化生产GABA的过程曲线。
具体实施方式
实施例1重组菌的构建
1)从大肠杆菌E.coliw3110提取基因组DNA作模板，进行PCR扩增，扩增信号肽torA基因的引物为：5’-CGCCATATGATGAACAATAACGATCTCTTTCAGGC-3’和5’-CATCCATGGCCGCTTGCGCCGCAGTC-3’，扩增谷氨酸脱羧酶基因gadB的引物为：5’-CATCCATGGATAAGAAGCAAGTAACG-3’和5’-CCCTCGAGTCAGGTATGTTTAAAGCTGTT-3’。
2)用限制性内切酶NdeI和NcoI消化处理torA基因的PCR产物，用限制性内切酶NcoI和XhoI消化处理gadB基因的PCR产物，载体pET20b(+)用NdeI和XhoI处理。酶切产物纯化后，T4连接酶22摄氏度连接过夜，转化E.coli JM109，筛选正确转化子。对于得到的正确转化子，提取质粒，转化E.coli BL21(DE3)
实施例2摇瓶水平重组菌的胞外谷氨酸脱羧酶SDS-PAGE和谷氨酸脱羧酶酶活检测
1)重组菌摇瓶水平发酵
a)培养基：种子培养基为LB培养基(1L)：胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl 10g，pH调至7.0；发酵培养基为TB培养基(1L)：胰蛋白胨12g，酵母抽提物24g，甘油5g，K2HPO414.6g，NaH2PO4·2H2O3.6g，甘氨酸7.5g，NaCl5g。
b)培养方法：将37℃、200rpm下培过夜培养的种子以5％的接种量转入TB培养基，于37℃、200rpm条件下培养36h。
c)诱导条件：诱导OD600值为1.0，IPTG浓度为0.7mM。
2)SDS-PAGE检验谷氨酸脱羧酶在胞内和胞外的表达情况，以空载作为对照(图1中1,2为空载的胞内和胞外；3,4为重组菌的胞内胞外)。可以看大到，谷氨酸脱羧酶在胞内和胞外都得到了表达
3)胞外酶活测定：底物反应液为含有10mM一水合谷氨酸钠和1mM磷酸吡哆醛的0.2M的磷酸缓冲液(pH4.6)。取100μL发酵液上清加入到900μL37℃预热的底物反应液中，保温10min，煮沸终止反应。HPLC测定发酵液中剩余谷氨酸和生成γ-氨基丁酸的含量。酶活定义为：在实验条件下，每分钟合成1mmolγ-氨基丁酸所需的酶量为一个酶活单位(U)。摇瓶水平，酶活达到5.11U/mL。
实施例3重组菌发酵罐水平发酵
1)种子培养基为LB培养基(1L)：胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl10g，pH调至7.0；发酵培养基为TB培养基(1L)：胰蛋白胨30g，酵母抽提物20g，甘油8g，Na2SO42.0g,(NH4)2SO4 2.5g,(NH4)2-H-citrate1.0g,K2HPO4 14.6g,NaH2PO4·2H2O3.6g,MgSO4·7H2O2.0g,thiamine100mg；补料培养基(1L)：酵母膏50g，甘油500g，MgSO4·7H2O3.4g；诱导(1L)：乳糖200g。
2)培养方法：待培养基中初始甘油消耗尽，即发酵罐中溶氧上升时，以比生长速率0.12h-1指数流加补料培养基；待OD600达到50，补料培养基由指数流加转为恒速流加，流加速率12mL/h，并开以0.8g/L/h的速度流加乳糖进行诱导，诱导24h。
3)发酵42h，胞外酶活达到15.82U/mL。
实施例4重组菌积累γ-氨基丁酸
如图2所示，在发酵罐发酵42h后，调整温度为50℃，50％磷酸控制pH4.6，分批次加入总量450g/L的一水合谷氨酸钠，6h后，γ-氨基丁酸产量达203.7g/L。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (8)

1.一种分泌表达谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以双精氨酸信号肽TorA分泌表达谷氨酸脱羧酶，所述表达谷氨酸脱羧酶的基因为gadB，所述双精氨酸信号肽TorA和表达谷氨酸脱羧酶的基因gadB均来源于大肠杆菌。
2.一种构建权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌的方法，其特征在于，以大肠杆菌E.coli w3110基因组DNA作模板，PCR获得信号肽torA基因和谷氨酸脱羧酶的基因gadB；用限制性内切酶分别消化处理torA基因和gadB基因的PCR产物，酶切产物纯化后，连接载体并转化E.coli BL21(DE3)，获得分泌表达谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌基因工程菌。
3.一种应用权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌产谷氨酸脱羧酶的方法，其特征在于，是将37℃、200rpm下在种子培养基中过夜培养的种子以5％的接种量转入TB培养基，于37℃、200rpm条件下培养，OD600 值为1.0时，添加终浓度为0.7mM的IPTG诱导表达。
4.一种应用权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌产谷氨酸脱羧酶的方法，其特征在于，是将种子培养液以5-10％的接种量转入装有发酵培养基的发酵罐，于37℃、200rpm条件下培养，待培养基中初始甘油消耗尽，即发酵罐中溶氧上升时，以比生长速率0.12-0.20 h-1指数流加补料培养基；待OD600 达到40-50，补料培养基由指数流加转为恒速流加，流加速率12mL/h，并开始以0.8g/L/h的速度流加200g/L的乳糖进行诱导，诱导12-24h。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，种子培养基每1L含有：胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl 10g，pH调至7.0；TB培养基每1L含有胰蛋白胨12g，酵母抽提物24g，甘油5g，K2HPO4 14.6g，NaH2PO4 · 2H2O 3.6g，甘氨酸 7.5g，NaCl 5g。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，发酵培养基每1L含有：胰蛋白胨30g，酵母抽提物20g，甘油8g，Na2SO4 2.0g，(NH4)2SO4 2.5g，柠檬酸氢二铵1.0g，K2HPO4 14.6g，NaH2PO4 · 2H2O 3.6g，MgSO4 · 7H2O 2.0g，维生素B1 100mg。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，补料培养基每1L含有：酵母膏50g，甘油500g，MgSO4 · 7H2O 3.4g。
8.一种应用权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌合成γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，将种子培养液以5-10％的接种量转入装有发酵培养基的发酵罐，于37℃、200rpm条件下培养，待培养基中初始甘油消耗尽，即发酵罐中溶氧上升时，以比生长速率0.12-0.20 h-1指数流加补料培养基；待OD600 达到40-50，补料培养基由指数流加转为恒速流加，流加速率12mL/h，并开始以0.8g/L/h的速度流加200g/L的乳糖诱导谷氨酸脱羧酶基因表达，待发酵液中积累谷氨酸脱羧酶后，调整温度为37-50℃，50-100％磷酸控制pH 4.6-5.0，分批次加入总量400-600g/L的一水合谷氨酸钠作为底物生产γ-氨基丁酸。
CN201510208490.9A 2015-04-28 2015-04-28 一种生产γ-氨基丁酸的方法 Active CN104830745B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510208490.9A CN104830745B (zh) 2015-04-28 2015-04-28 一种生产γ-氨基丁酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510208490.9A CN104830745B (zh) 2015-04-28 2015-04-28 一种生产γ-氨基丁酸的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104830745A CN104830745A (zh) 2015-08-12
CN104830745B true CN104830745B (zh) 2018-06-05

Family

ID=53808947

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510208490.9A Active CN104830745B (zh) 2015-04-28 2015-04-28 一种生产γ-氨基丁酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104830745B (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105671098A (zh) * 2016-04-06 2016-06-15 河南巨龙生物工程股份有限公司 一种发酵法生产l-2-氨基丁酸的方法
CN106754610B (zh) * 2017-03-29 2019-12-27 华东理工大学 表面展示表达谷氨酸脱羧酶的重组工程菌及其构建方法与应用
CN108300742A (zh) * 2017-07-26 2018-07-20 南通励成生物工程有限公司 一种流加底物酶制备γ-氨基丁酸的方法
CN107723302B (zh) * 2017-11-30 2020-08-04 江南大学 一种过表达产甘油假丝酵母CgGAD1提高渗透压耐受性的方法
CN108467860B (zh) * 2018-03-28 2020-12-29 江南大学 一种高产γ-氨基丁酸的方法
CN109593797A (zh) * 2018-12-28 2019-04-09 上海邦成生物工程有限公司 一种发酵生产γ-氨基丁酸的方法
CN109504717A (zh) * 2018-12-29 2019-03-22 上海邦成生物工程有限公司 一种饲用γ-氨基丁酸的生产方法
CN116004467B (zh) * 2023-01-06 2024-04-16 中国科学院天津工业生物技术研究所 一株耐高温的大肠杆菌及其在生产d-乳酸中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6022952A (en) * 1998-04-01 2000-02-08 University Of Alberta Compositions and methods for protein secretion
CN102154393A (zh) * 2011-01-18 2011-08-17 江南大学 一种γ-氨基丁酸的生产方法及其生产菌株
CN103409385A (zh) * 2013-08-07 2013-11-27 江南大学 一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法
CN103555779A (zh) * 2013-08-01 2014-02-05 江南大学 一种发酵生产γ-氨基丁酸的方法
CN103756989A (zh) * 2013-11-11 2014-04-30 江南大学 一种利用双精氨酸信号肽发酵生产胆盐水解酶的方法及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6022952A (en) * 1998-04-01 2000-02-08 University Of Alberta Compositions and methods for protein secretion
CN102154393A (zh) * 2011-01-18 2011-08-17 江南大学 一种γ-氨基丁酸的生产方法及其生产菌株
CN103555779A (zh) * 2013-08-01 2014-02-05 江南大学 一种发酵生产γ-氨基丁酸的方法
CN103409385A (zh) * 2013-08-07 2013-11-27 江南大学 一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法
CN103756989A (zh) * 2013-11-11 2014-04-30 江南大学 一种利用双精氨酸信号肽发酵生产胆盐水解酶的方法及应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Effects of glutamate decarboxylase and gamma-aminobutyric acid (GABA) transporter on the bioconversion of GABA in engineered Escherichia coli";Tam Dinh Le Vo et al.;《Bioprocess Biosyst Eng》;20111005;第35卷;第645-650页 *
"Lactobacillus plantarum胆盐水解酶的分泌表达和底物结合性能改造";董自星;《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》;20140515(第05期);第16页第2.2.3节，第19页第2段，第28页第1段和图3-1、第3.2.1节和表3-1，第30页第3.2.5节和第3.2.6节，第31页第3.3.1节，第32页图2，第33页图3-3，第35页第3.3.4节和表3-3 *
"一株重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建及其高效生产γ-氨基丁酸转化条件的优化";田灵芝等;《生物工程学报》;20120125;第28卷(第1期);第65-75页 *
"大肠杆菌谷氨酸脱羧酶的结构、功能及其基因表达调控";赵艳等;《食品与发酵工业》;20061231;第32卷(第7期);第75-78页 *
"生物转化法重组谷氨酸脱羧酶合成γ氨基丁酸";王期等;《南京师大学报（自然科学版）》;20100930;第33卷(第3期);第85页摘要、第86页第1.2.1节第1段和第1.2.2-1.2.3节 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104830745A (zh) 2015-08-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104830745B (zh) 一种生产γ-氨基丁酸的方法
CN103709236B (zh) 一种可提高分泌效率的信号肽及其应用
ES2264181T3 (es) Procedimiento para la produccion de proteinas.
CN105349515B (zh) 一种分泌能力提高的天冬酰胺酶突变体及其应用
CN105062941B (zh) 一种利用重组枯草芽孢杆菌全细胞转化生产l-鸟氨酸的方法
CN103937734B (zh) 一种生产透明质酸的基因工程菌及其应用
CN106085983A (zh) 多肽，分离的其多核苷酸，以及包含多肽的添加剂、其用途及方法
CN104830922B (zh) L‑鸟氨酸酶法转化制备方法
CN104611317B (zh) 一种提高l-天冬酰胺酶分泌表达的方法
CN108467860A (zh) 一种高产γ-氨基丁酸的方法
CN107058201A (zh) 一种提高MTSase和MTHase产量的方法
CN105316306B (zh) 一种利用重组大肠杆菌高效生产角蛋白酶的发酵方法
CN104371993B (zh) 一种酶活提高的天冬酰胺酶突变体
CN113481185A (zh) 一种耐盐β-半乳糖苷酶GalNC2-13及其制备方法和应用
CN107287223A (zh) α‑L‑鼠李糖苷酶基因及其应用
CN104031934A (zh) 过量共表达磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶提高钝齿棒杆菌精氨酸产量
CN105886573B (zh) 一种连续胞外酶生物法制备海藻糖的方法
CN106893699A (zh) 一种粗酶制剂、其制备方法及应用
CN104805144B (zh) 一种高效生产l-瓜氨酸的方法
CN102120974B (zh) 一种碱性低温蛋白酶海洋菌株、低温碱性蛋白酶及其生产方法
CN109182313A (zh) 一种纳豆激酶、其表达载体的构建及生产方法
CN101457208B (zh) 一种抗蛋白酶的酸性α-半乳糖苷酶Aga-F75及其基因和应用
CN105950528B (zh) 一种产直链麦芽低聚糖生成酶的基因工程菌及其应用
CN103103234A (zh) 利用固定化酶合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的方法
CN108330096A (zh) 胞外表达L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌的构建方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant