CN104667253A - 一种鳄鱼纳米化多肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鳄鱼纳米化多肽，其组分及其质量百分比如下：鳄鱼多肽96％～98％，食品级纳米氧化锌余量。还公开了一种鳄鱼纳米化多肽的制备方法，依次有以下步骤：1)将鳄鱼多肽与食品级纳米氧化锌配位络合；2)冷却；3)洗涤、沉降和离心分离；4)冷冻干燥；5)质控分析。其结构和生物活性更稳定，提高了蛋白质和锌的生物学效价及营养价值，具有阻止淀粉样蛋白生成和沉积，预防神经炎性斑块形成，从而达到预防或延缓老年痴呆的病程进展的功能，还具有抗氧化、抗疲劳、增强免疫力、提高脑细胞的活性、增强记忆力和思维能力的功能，非常适用于开发预防高血压、心脑血管疾病、老年痴呆症等慢性疾病产品，以及进行营养治疗的新型原料。

Description

一种鳄鱼纳米化多肽及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物提取物，特别是涉及一种鳄鱼纳米化多肽及其制备方法。

背景技术

鳄鱼是迄今为止发现的最早和最原始的动物之一。现代研究表明，鳄鱼肉提取物具有增强免疫力、增强学习和记忆能力、提高缺氧耐受力和抗脂质氧化作用。现有鳄鱼来源的生物提取物多未在其原理及分子机制上深入探索，存在生物功能物质的浪费。

生物活性多肽不仅具有消化吸收易、安全性高的特点，还具备特殊的生理调节功能，包括降低血脂、延缓衰老、增强记忆、增强免疫力、改善睡眠和抑制肿瘤。然而，选择适当的蛋白酶控制一定的水解程度水解大分子蛋白质制备小分子生物活性多肽的方法，受到小分子多肽在运输和保存过程中要求条件更高、易于降解而失去生物学功能的限制。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是弥补上述现有技术的缺陷，提供一种鳄鱼纳米化多肽。

本发明所要解决的另一个技术问题是弥补上述现有技术的缺陷，提供一种鳄鱼纳米化多肽的制备方法。

本发明的鳄鱼纳米化多肽技术问题通过以下技术方案予以解决。

本发明基于小分子多肽与锌形成的络合物能促进金属元素的吸收利用率的提高，进而增强体内酶的活性，提高蛋白质、脂肪和维生素的利用率，体现较高的生物学效价；还基于通过纳米化技术使酶解获得的小分子多肽被吸附在纳米颗粒中，甚至形成化合物，从而不仅使其在运输和保存过程中保持生物活性的时间更长，而且达到功能更强或更持久的分子结构。

这种鳄鱼纳米化多肽，是一种小分子鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合物。

这种鳄鱼纳米化多肽的特点是：

其组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽    96％～98％；

食品级纳米氧化锌  余量；

所述鳄鱼多肽是去除脂肪组织的鳄鱼肉用胰蛋白酶水解所得的小分子鳄鱼多肽，分子量分布范围主要集中在1000Da～1500Da。

所述食品级纳米氧化锌是粒径为10nm～100nm的白色细微颗粒且经过安全性评价可安全食用的氧化锌。

氧化锌是一种难溶解于水的无机化合物，大量使用时可产生毒性反应，而微量锌离子却有利于健康发育和神经系统功能，是细胞生物功能过程中不可或缺的化合物，其具有广谱的抗紫外线能力和抗菌、杀菌功能，加入到鳄鱼多肽中通过鳄鱼多肽络合食品级纳米氧化锌，形成的新结构，无机氧化锌在体外完成有机态的转变，既提高了锌的生物效价，又大幅度降低氧化锌的毒副作用，明显加强生物学功效，不仅可增加氧化锌的溶解度与吸收度，而且可以产生抗菌、杀菌、保持多肽不被降解等新功能，此外，食品级纳米氧化锌的微细颗粒还可极大程度地增加比表面积，通过与鳄鱼多肽中的氨基酸残基相互作用，可使其生物利用度增加。

本发明的鳄鱼纳米化多肽技术问题通过以下进一步的技术方案予以解决。

优选的是，这种鳄鱼纳米化多肽的组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽         97％；

食品级纳米氧化锌  3％；

所述组分及其质量百分比可以达到最好的配位络合的要求。

本发明的鳄鱼纳米化多肽的制备方法技术问题通过以下技术方案予以解决。

这种鳄鱼纳米化多肽的制备方法，包括鳄鱼多肽的制备方法。

这种鳄鱼纳米化多肽的制备方法的特点是：

依次有以下步骤：

1)按照组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽    96％～98％；

食品级纳米氧化锌  余量；

将鳄鱼多肽与食品级纳米氧化锌配位络合，络合条件：料液比为1:(4～5)，pH为5～6，温度为70℃～80℃，时间为30min～40min；

2)将络合反应后的溶液静置冷却至常温；

3)加入3倍的浓度为95％的乙醇进行至少一次的洗涤、沉降和离心分离，制得鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合沉淀物；

4)在冷冻干燥室冷冻干燥鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合沉淀物，冷冻干燥室的温度曲线为-30℃保持2h、0℃保持8h、30℃保持8h～10h，总计时间为18h～20h，制得鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合颗粒物；

5)质控分析，纳米颗粒尺度为10nm～100nm的合格品即为纳米化鳄鱼多肽粉。

本发明的鳄鱼纳米化多肽的制备方法技术问题通过以下进一步的技术方案予以解决。

所述鳄鱼多肽制备方法，依次有以下子步骤：

1·1)取清洗并去除脂肪组织的鳄鱼肉，剪成碎块；

1·2)按体积比为鳄鱼肉:水＝1:(2～3)(m³/m³)，加水混合后，置100℃沸水浴，时间为30min；

1·3)取出处理液匀浆，降低温度至37℃～55℃恒温维持，调节pH为7.5～8.5，制得鳄鱼肉水解底物；

1·4)按质量比为鳄鱼肉:食品级胰蛋白酶粉剂＝1:(0.38％～0.50％)，加入食品级胰蛋白酶粉剂混合均匀，在37℃恒温条件下酶解，时间为4h～6h；

1·5)升温至100℃沸水浴，时间为10min，使酶失活；

1·6)将酶失活的酶解液冷却至室温，用离心分离器分离；

1·7)用200目滤布过滤，回收上清液；

1·8)在50℃恒温条件下用旋转蒸发器蒸发回收上清液至黏稠体；

1·9)在冷冻干燥室冷冻干燥黏稠体，冷冻干燥室的温度曲线为-30℃保持3h、0℃保持10h、30℃保持10h～15h，总计时间为23h～28h，制得鳄鱼多肽。

所述步骤1)的组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽         97％；

食品级纳米氧化锌  3％；

所述组分及其质量百分比可以达到最好的配位络合的要求。

本发明的鳄鱼纳米化多肽的制备方法技术问题通过以下再进一步的技术方案予以解决。

所述步骤5)的质控分析是采用国产或瑞士Nanosurf公司出品的原子力显微镜通过离心沉降法制备样品。

所述步骤1·1)的碎块是体积为1cm³～2cm³的碎块。

本发明与现有技术相比的有益效果是：

本发明的鳄鱼纳米化多肽与鳄鱼肉冻干粉水解所得小分子鳄鱼肽相比，更利于鳄鱼肉蛋白质的消化、吸收、运转、储存和利用；与鳄鱼多肽粉相比，结构和生物活性更稳定，提高了蛋白质和锌的生物学效价及营养价值，具有阻止淀粉样蛋白生成和沉积，预防神经炎性斑块形成，从而达到预防或延缓老年痴呆的病程进展的功能，还具有抗氧化、抗疲劳、增强免疫力、提高脑细胞的活性、增强记忆力和思维能力的功能，非常适用于开发预防高血压、心脑血管疾病、老年痴呆症等慢性疾病产品，以及进行营养治疗的新型原料。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行说明。

具体实施方式一

一种鳄鱼纳米化多肽，其组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽         97％；

食品级纳米氧化锌  3％；

可以达到最好的配位络合的要求。

鳄鱼多肽是去除脂肪组织的鳄鱼肉用胰蛋白酶水解所得的小分子鳄鱼多肽，分子量分布范围主要集中在1000Da～1500Da。

食品级纳米氧化锌是粒径为10nm～100nm的白色细微颗粒且经过安全性评价可安全食用的氧化锌。

本具体实施方式一的制备方法依次有以下步骤：

1)先制备鳄鱼多肽，依次有以下子步骤：

1·1)取清洗并去除脂肪组织的鳄鱼肉，剪成碎块；

1·2)按体积比为鳄鱼肉:水＝1:(2～3)(m³/m³)，加水混合后，置100℃沸水浴，时间为30min；

1·3)取出处理液匀浆，降低温度至37℃～55℃恒温维持，调节pH为7.5～8.5，制得鳄鱼肉水解底物；

1·4)按质量比为鳄鱼肉:食品级胰蛋白酶粉剂＝1:(0.38％～0.50％)，加入食品级胰蛋白酶粉剂混合均匀，在37℃恒温条件下酶解，时间为4h～6h；

1·5)升温至100℃沸水浴，时间为10min，使酶失活；

1·6)将酶失活的酶解液冷却至室温，用离心分离器分离；

1·7)用200目滤布过滤，回收上清液；

1·8)在50℃恒温条件下用旋转蒸发器蒸发回收上清液至黏稠体；

1·9)在冷冻干燥室冷冻干燥黏稠体，冷冻干燥室的温度曲线为-30℃保持3h、0℃保持10h、30℃保持10h～15h，总计时间为23h～28h，制得鳄鱼多肽；

再按照组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽         97％；

食品级纳米氧化锌  3％，

将鳄鱼多肽与食品级纳米氧化锌配位络合，络合条件：料液比为1:(4～5)，pH为5.5，温度为70℃，络合时间为30min；

2)将络合反应后的溶液静置冷却至常温；

3)加入3倍的浓度为95％的乙醇进行至少一次的洗涤、沉降和离心分离，制得鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合沉淀物；

4)在冷冻干燥室冷冻干燥鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合沉淀物，冷冻干燥室的温度曲线为-30℃保持2h、0℃保持8h、30℃保持8h～10h，总计时间为18h～20h，制得鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合颗粒物；

5)采用国产原子力显微镜通过离心沉降法制备样品，进行质控分析，纳米颗粒尺度为10nm～100nm的合格品即为纳米化鳄鱼多肽粉。

本具体实施方式制得的鳄鱼多肽酶解液中蛋白质的水解度为：50％以上；鳄鱼多肽-纳米氧化锌配合反应的配合率为：90％；鳄鱼纳米化多肽的得率为10％以上。

具体实施方式二

一种鳄鱼纳米化多肽，其组分及其质量百分比同具体实施方式一，制备方法也基本同具体实施方式一，区别在于：

1)络合时间为40min；

1·2)体积比为鳄鱼肉:水＝1:2.5(m³/m³)；

1·3)降低温度至55℃恒温维持，调节pH为7.8；

1·4)质量比为鳄鱼肉:食品级胰蛋白酶粉剂＝1:0.40％，酶解时间为5h；

5)采用瑞士Nanosurf公司出品的原子力显微镜通过离心沉降法制备样品。

本具体实施方式制得的鳄鱼多肽酶解液中蛋白质的水解度为：60％以上；鳄鱼多肽-纳米氧化锌配合反应的配合率为：90％；鳄鱼纳米化多肽的得率为15％以上。

具体实施方式三

一种鳄鱼纳米化多肽，其组分及其质量百分比同具体实施方式一，制备方法也基本同具体实施方式一，区别在于：

1)络合时间为30min；

1·2)体积比为鳄鱼肉:水＝1:2.0(m³/m³)；

1·3)降低温度至55℃恒温维持，调节pH为7.5；

1·4)质量比为鳄鱼肉:食品级胰蛋白酶粉剂＝1:0.38％，酶解时间为5h；

本具体实施方式制得的鳄鱼多肽酶解液中蛋白质的水解度为：53％；鳄鱼多肽-纳米氧化锌配合反应的配合率为：91％；鳄鱼纳米化多肽的得率为10％。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。

Claims (7)

1.一种鳄鱼纳米化多肽，是一种小分子鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合物，其特征在于：

其组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽        96％～98％；

食品级纳米氧化锌      余量；

所述鳄鱼多肽是去除脂肪组织的鳄鱼肉用胰蛋白酶水解所得的小分子鳄鱼多肽，分子量分布范围主要集中在1000Da～1500Da；

所述食品级纳米氧化锌是粒径为10nm～100nm的白色细微颗粒且经过安全性评价可安全食用的氧化锌。

2.如权利要求1所述的鳄鱼纳米化多肽，其特征在于：

其组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽            97％；

食品级纳米氧化锌    3％。

3.一种鳄鱼纳米化多肽的制备方法，包括鳄鱼多肽的制备方法，其特征在于：

依次有以下步骤：

1)按照组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽        96％～98％；

食品级纳米氧化锌      余量；

将鳄鱼多肽与食品级纳米氧化锌配位络合，络合条件：料液比为1:(4～5)，pH为5～6，温度为70℃～80℃，时间为30min～40min；

2)将络合反应后的溶液静置冷却至常温；

3)加入3倍的浓度为95％的乙醇进行至少一次的洗涤、沉降和离心分离，制得鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合沉淀物；

4)在冷冻干燥室冷冻干燥鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合沉淀物，冷冻干燥室的温度曲线为-30℃保持2h、0℃保持8h、30℃保持8h～10h，总计时间为18h～20h，制得鳄鱼多肽-纳米氧化锌络合颗粒物；

5)质控分析，纳米颗粒尺度为10nm～100nm的合格品即为纳米化鳄鱼多肽粉。

4.如权利要求3所述的鳄鱼纳米化多肽的制备方法，其特征在于：

所述鳄鱼多肽制备方法，依次有以下子步骤：

1·1)取清洗并去除脂肪组织的鳄鱼肉，剪成碎块；

1·2)按体积比为鳄鱼肉:水＝1:(2～3)(m³/m³)，加水混合后，置100℃沸水浴，时间为30min；

1·3)取出处理液匀浆，降低温度至37℃～55℃恒温维持，调节pH为7.5～8.5，制得鳄鱼肉水解底物；

1·4)按质量比为鳄鱼肉:食品级胰蛋白酶粉剂＝1:(0.38％～0.50％)，加入食品级胰蛋白酶粉剂混合均匀，在37℃恒温条件下酶解，时间为4h～6h；

1·5)升温至100℃沸水浴，时间为10min，使酶失活；

1·6)将酶失活的酶解液冷却至室温，用离心分离器分离；

1·7)用200目滤布过滤，回收上清液；

1·8)在50℃恒温条件下用旋转蒸发器蒸发回收上清液至黏稠体；

1·9)在冷冻干燥室冷冻干燥黏稠体，冷冻干燥室的温度曲线为-30℃保持3h、0℃保持10h、30℃保持10h～15h，总计时间为23h～28h，制得鳄鱼多肽。

5.如权利要求3所述的鳄鱼纳米化多肽的制备方法，其特征在于：

所述步骤1)的组分及其质量百分比如下：

鳄鱼多肽          97％；

食品级纳米氧化锌  3％。

6.如权利要求3所述的鳄鱼纳米化多肽的制备方法，其特征在于：

所述步骤5)的质控分析是采用国产或瑞士Nanosurf公司出品的原子力显微镜通过离心沉降法制备样品。

7.如权利要求4所述的鳄鱼纳米化多肽的制备方法，其特征在于：

所述步骤1·1)的碎块是体积为1cm³～2cm³的碎块。