CN104630341B

CN104630341B - 中国西门塔尔牛fgf‑1基因作胴体肉品质的遗传标记

Info

Publication number: CN104630341B
Application number: CN201410678809.XA
Authority: CN
Inventors: 杨润军; 赵志辉; 许黄涛; 谭宇鹏; 房希碧; 芦春艳
Original assignee: Jilin University
Current assignee: Jilin University
Priority date: 2014-11-24
Filing date: 2014-11-24
Publication date: 2017-12-05
Anticipated expiration: 2034-11-24
Also published as: CN104630341A

Abstract

本发明公开了一种中国西门塔尔牛FGF‑1基因作胴体肉品质的遗传标记，该方法以中国西门塔尔牛基因组DNA或包含中国西门塔尔牛FGF‑1基因的DNA序列为模板，利用PCR引物对P1、P 2和P3，扩增中国西门塔尔牛FGF‑1基因功能区域片段，通过测序筛查，限制性内切酶Xsp‑Ⅰ、Hae‑III和Rsa‑I进行酶切、电泳分析，从而确定中国西门塔尔牛FGF‑1基因第2内含子第8528位、第13970位和第72251位的SNPs（A>T、A>T和A>C）。筛查获得的SNPs中SNP1位点的T等位基因和TT基因型、SNP2位点的C等位基因和CC基因型及SNP3位点的T等位基因和TT基因型可作为显著提高中国西门塔尔牛胴体组成性状和肉品质性状的有效分子遗传标记，以用于肉牛胴体组成和肉质形状早期标记辅助选择分子育种。

Description

中国西门塔尔牛FGF-1基因作胴体肉品质的遗传标记

技术领域

本发明公开一种中国西门塔尔牛FGF-1基因作胴体肉品质的遗传标记，涉及中国西门塔尔牛胴体组成和肉质性状分子遗传标记的检测及其作为辅助选择标记在肉乳兼用牛育种中的应用，属于肉乳兼用牛选育技术领域。

背景技术

中国西门塔尔牛是我国肉牛产业化生产中的主导品种。随着国内外市场的变化及消费者对牛肉需求程度的提高，中国西门塔尔牛肉用性能进一步选育和提高成为该品种的主要目标。要提高肉用性能就必须采用常规育种技术和分子育种方法从生长发育性状、胴体组成和肉质性状方面进行选育。

胴体组成和肉质性状是肉牛重要的经济性状，随着人们生活水平的提高，对肉质的要求越来越高，对优质牛肉的需求也越来越大，因此优质牛肉带来的可观经济效益决定了肉牛育种中肉质性状选择的重要性。胴体和肉质性状作为由微效多基因控制的数量性状，由于无法活体测定受到传统育种方法的限制，因此从分子标记入手对肉质性状进行研究成为主要技术手段。

根据生产性状的表型值估计育种值进行肉牛的选种和培育，已经极大促进了肉牛生长发育和肉质性状的遗传改良。随着现代分子生物学技术的飞速发展，遗传学家和育种学家认识到控制数量性状的基因并非在基因组中随机分布，且存在影响数量性状的主效基因。以分子标记为核心的分子标记辅助选择和GWAS等分子育种技术与常规育种技术相结合大大加速了肉牛育种的进程。目前筛查对目标性状具有较大作用的主效基因及其与之紧密连锁的分子标记成为肉牛分子育种的基础和前提，也是将来肉牛分子生物学领域研究的重点。

成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor, FGF）是一个包含23个（目前）家庭成员的多基因家族，每个成员均包含一段高度保守的约合120个氨基酸核心区，核心区内有6个同样的散在氨基酸序列。作为家族中最主要的成员，FGF-1基因编码一个由155个氨基酸序列组成的蛋白，具有较强的诱导DNA合成、促进有丝分裂和细胞增殖的作用，在组织器官发育、成肌细胞增殖、脂肪细胞分化和脂肪沉积等方面发挥重要的作用。另外,FGF-1不但可以在细胞外发挥作用，还可以通过核定位信号（Nuclear Localization Signal，NLS)进入胞内发挥作用。但是目前关于FGF-1基因遗传多态性检测及与中国西门塔尔牛生长发育、胴体组成和肉质性状相关性的研究尚未有报道。

发明内容

本发明的目的在于并提供一种中国西门塔尔牛FGF-1基因作胴体肉品质的遗传标记，用于中国西门塔尔牛FGF-1基因作为胴体组成和肉质性状分子标记的检测及应用方法。

本发明提供的一种中国西门塔尔牛FGF-1基因作为胴体组成和肉质性状分子标记的检测及应用方法，是通过以下技术方案来实现：

利用DNA池测序和PCR-RFLP技术筛查和检测中国西门塔尔牛FGF-1基因功能突变的的方法。通过关联分析寻找与中国西门塔尔牛胴体组成和肉质性状相关的SNPs作为分子遗传标记，应用于肉牛早期选择和分子聚合育种，进一步加快中国西门塔尔牛肉用性能的选育和提高。

本发明提供一种中国西门塔尔牛FGF-1基因作为胴体组成和肉质性状的遗传标记，其特征在于：

核苷酸序列如序列表Seq ID NO.3、Seq ID NO.6和Seq ID NO.9所示，在序列表Seq ID NO.3第184 bp处有184A-184T的突变，导致Xsp-Ⅰ-RFLP多态性；在序列表Seq IDNO.6第327处有327A-327C的突变，导致Hae--RFLP多态性；在序列表Seq ID NO.9第301处有301A-301T的突变，导致Rsa--RFLP多态性。

本发明公开的中国西门塔尔牛FGF-1基因作为胴体组成和肉质性状分子标记的检测方法，其特征在于:

设计扩增如权利要求1 所述的中国西门塔尔牛FGF-1基因分子遗传标记的引物对，得到的引物序列如下所示：

P1正向引物F：5' TCCCTGGTTCAGAGTTCAAG 3'，

P1反向引物R：5' GGGTGTGGGTGCTGTTATC 3'；

P2正向引物F：5' GTTCGTAGAGAGCCACAGATG 3'，

P2反向引物R：5' ATCACTGTGCCAAAGGAAAT 3'；

P3正向引物F：5' GTAGACGGCACACACCTCAG 3'，

P3反向引物R：5' GATAATGGTTTTGCGACAGC 3'。

用所示的特异性引物在中国西门塔尔牛基因组中进行PCR扩增，PCR产物纯化、克隆测序，获得如序列表SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，其中分别包括FGF-1基因8528 A>T、72251 A>C和13970 A>T的单核苷酸碱基突变，并且利用PCR-RFLP方法对中国西门塔尔牛群体中FGF-1基因3个SNPs进行了检测。

本发明所述中国西门塔尔牛FGF-1基因作为胴体组成和肉质性状的遗传标记的检测方法，其特征在于:

所述的PCR扩增条件是：25 μL反应体系，包括DNA 模板（50 ng/μL）1 μL、上下游引物（10 μmol/L）各1 μL、dNTPs（2 mmol/L）2.5 μL、Taq DNA 聚合酶（5 U/μL）0.3 μL、Mg²⁺（25mmol/L）1.5 μL、10×PCR 缓冲液2.5 μL、超纯水15.2 μL；所述的PCR 扩增反应程序为：95℃变性5 min，95℃变性30 s，55℃（P1）、59℃（P2）、59.5℃（P3）退火30 s，72℃延伸30 s（P3为60s），进行30个循环，最后72℃延伸10 min。

本发明所述中国西门塔尔牛胴体组成和肉质性状遗传标记的检测方法，其特征在于：

检测中国西门塔尔牛群体遗传标记的限制性内切酶为：SNP1（I2-8528 A>T）为Xsp-Ⅰ内切酶，在功能区域识别序列为C/TAG；SNP2（I2-72251 A>C）为Hae-内切酶，在功能区域识别序列为GG/CC；SNP3（I2-13970 A>T）为Rsa-内切酶，在功能区域识别序列为GT/AC。

本发明与现有技术相比具有以下的积极效果：

本发明把DNA池测序筛查SNP与PCR-RFLP 结合起来解决了SSCP的繁琐和不稳定性，提供了一种简单、快速、低成本、精确度高、便于在DNA水平上筛查和检测与中国西门塔尔牛肉用性状密切相关的FGF-1等基因的遗传标记。本发明提供的分子标记可靠，可用于对肉牛群体肉质性状的筛选和肉牛的分子聚合育种。

本发明筛查获得中国西门塔尔牛群体中FGF-1基因3个SNPs位点不同基因型个体与部分肉质性状间具有显著的相关性，可用于中国西门塔尔牛等兼用牛和肉牛的早期辅助选择和分子聚合育种。

附图说明

图1为中国西门塔尔牛FGF1基因第2内含子SNP (I2-8528 A>T) P1引物对PCR扩增产物电泳图、突变位点测序和Xsp-Ⅰ酶切图；

图2为中国西门塔尔牛FGF1基因第2内含子SNP (I2-72251 A>C) P2引物对PCR扩增产物电泳图、突变位点测序和Hae-酶切图；

图3为中国西门塔尔牛FGF1基因第2内含子SNP (I2-13970 A>T) P3引物对PCR扩增产物电泳图、突变位点测序和Rsa-酶切图。

具体实施方式

通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。

实施例1

牛FGF-1基因片段的获得及功能区域多态性检测方法的建立。

1.1 试验材料：

449头28月龄中国西门塔尔牛公牛来自内蒙古通辽市宝龙山肉牛育肥场。颈静脉采血，所采血样均为10 mL/头，用ACD抗凝剂抗凝，-20℃冻存。用基因组DNA提取试剂盒从血样中提取基因组DNA。

1.2 引物设计及PCR扩增：

选择中国西门塔尔牛为试验材料，根据牛FGF-1基因序列设计以下3对引物：

P1正向引物F：5' TCCCTGGTTCAGAGTTCAAG 3'，

P1反向引物R：5' GGGTGTGGGTGCTGTTATC 3'；

P2正向引物F：5' GTTCGTAGAGAGCCACAGATG3'，

P2反向引物R：5' ATCACTGTGCCAAAGGAAAT 3'；

P3正向引物F：5' GTAGACGGCACACACCTCAG 3'，

P3反向引物R：5' GATAATGGTTTTGCGACAGC 3'。

用上述引物对在中国西门塔尔牛基因组中进行PCR扩增。PCR扩增反应为25 μL体系，包括：上、下游引物（10 μmol/L）1 μL；dNTPs（2 mmol/L）2.5 μL；Taq DNA 聚合酶（5 U/μL）0.3 μL；DNA 模板（50 ng/μL）1 μL；Mg²⁺（25 mmol/L）1.5 μL；10×PCR 缓冲液2.5 μL；超纯水15.2 μL。PCR 扩增反应程序：95℃变性5 min；95℃变性30 s， 55℃（SNP1，P1基因片段）、59℃（SNP2，P2基因片段）、59℃（SNP3，P3基因片段）退火30 s，72℃延伸30 s（P3为60s），进行30个循环；最后72℃延伸10 min保存用于后续分析。

PCR产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳检测后获得目的基因片段P1、P2和P3（图1a、图2a和图3a所示）。凝胶回收纯化目的基因片段，pMD18-T载体连接、转化DH_5α，菌液PCR检测后，阳性克隆进行测序和系列比对分析。FGF-1基因调控区域存在3个突变位点：8528 A>T、72251A>C和13970 A>T碱基突变引起Xsp-Ⅰ、Hae-III和Rsa- 酶切位点多态（图1b、图2b和图3b所示）。

1.3 PCR-RFLP 检测：

每个样本取8 μL PCR 产物用限制性内切酶（Xsp-Ⅰ、Hae-III和Rsa- ）进行酶切，以检测中国西门塔尔牛群体中FGF-1基因的多态性。酶切反应总体积为20 μL，其中RNaseFree水9.8 μL，内切酶(10 u/μL) 0.2 μL，10×buffer 2 μL，37℃恒温条件下酶切1.5 h，经1.2%琼脂糖凝胶电泳分析，在凝胶成像系统观察并记录酶切分型结果。

酶切图谱如如图1c、图2c和图3c所示，对于SNP1（I2-8528 A>T）、SNP2（I2-72251 A>C）和SNP3（I2-13970 A>T）均显示3 种基因型：SNP1（I2-8528 A>T）仅有542 bp目的片段的样本不含Xsp-Ⅰ酶切位点，命名为AA 型；含有183 bp和359 bp两条带的为含有Xsp-Ⅰ酶切位点的纯合型，命名为TT 型；同时含有542 bp、359 bp和183 bp三条带的为杂合型样本，命名为AT 型。AA 和TT 相比在第2内含子区域的8528 bp处有一个A>T的突变。当I2-8528 bp处为T时，Xsp-Ⅰ酶切产生359 bp和183 bp的片段；当I2-8528 bp 处为A 时，无Xsp-Ⅰ酶切位点。

SNP2（I2-72251 A>C）仅有385 bp 目的片段的样本不含Hae-III酶切位点，命名为AA 型；含有325 bp和60 bp的为含有Hae-III酶切位点的纯合型（60 bp片段较小，电泳时跑出凝胶），命名为CC 型；同时含有385 bp、325 bp和60 bp 三条带的为杂合型样本，命名为AC型。AA和CC相比在第2内含子区域的72251 bp处有一个A>C的突变。当I2-72251 bp 处为C时，Hae-III酶切产生325 bp和60 bp的片段；当I2-72251 bp 处为A 时，无Hae-III酶切位点。

SNP3（I2-13970 A>T）仅有685 bp 目的片段的样本不含Rsa-酶切位点，命名为AA型；含有384 bp和301 bp的为含有Rsa-酶切位点的纯合型，命名为TT 型；同时含有685 bp、384 bp和301 bp 三条带的为杂合型样本，命名为AT 型。AA和TT相比在第2内含子区域的13970 bp处有一个A>T的突变。当I2-13970 bp 处为T时，Rsa-酶切产生301 bp和384 bp的片段；当I2-13970 bp 处为A 时，无Rsa-酶切位点。

实施例2

筛查获得的遗传标记在中国西门塔尔牛群体中的多态性分布检测。

在中国西门塔尔牛群体中检测FGF-1基因第2内含子PCR-Xsp-Ⅰ-RFLP、PCR- Hae-III-RFLP和PCR-Rsa--RFLP多态性分布频率。检测结果显示，SNP1（I2-8528 A>T）的三种基因型中，野生型AA个体所占比例较高，突变型TT个体所占比率甚低，等位基因A和T的在群体中的频率分布差异显著，等位基因A频率为0.77，为优势基因。SNP2（I2-72251 A>C）的三种基因型中野生型AA个体所占比例较高，突变型CC个体很少所占比率为0.045；等位基因A频率为0.75，为优势基因。SNP3(I2-13970 A>T)的三种基因中，突变型个体较占优势，野生型的比率只有0.13，等位基因T有明显的优势，比率为0.66（表1）。

表1.中国西门塔尔牛群体FGF-1基因内含子区A 8528 T、A 72251 C、A 13970 T突变位点基因频率及基因型频率。

SNP定位	群体样本含量	等位基因频率	基因型频率
				I2-8528 A>T	420	A(0.773) T(0.228)	AA (0.581) AT(0.383) TT(0.046)
I2-72251 A>C	395	A(0.762) C(0.238)	AA (0.565) AC(0.395) CC(0.040)
				I2-13970 A>T	347	A(0.362) T(0.638)	AA (0.144) AT(0.435) TT(0.421)

实施例3

筛查获得的FGF-1基因功能区域遗传标记与中国西门塔尔牛胴体和肉质性状的关联分析及应用。

性状测定：研究的胴体性状和肉质性状包括胴体重、净肉率、后腿围、后腿宽、后腿长、大腿肉厚、腰部肉厚、胴体长、胴体深、胴体胸深、背膘和胴体脂肪覆盖率、活体眼肌面积和背腰最长肌间14种不饱和脂肪酸含量等性状。所有性状的测定根据国家标准GB/T1723821998 执行。

为了确定FGF-1基因内含子区A 8528 T、A 72251 C、A 13970 T突变位点与中国西门塔尔牛的胴体和肉质性状的相关性，采用实施例1所建立的PCR - Xsp -Ⅰ-RFLP、PCR -Hae-III-RFLP和PCR - Rsa - - RFLP方法进行多态性检测，采用SPSS 13.0的ANOVA方法分析各SNPs不同基因型对中国西门塔尔杂交牛胴体组成和肉质性状的影响，各基因型间的多重比较采用LSD法。

牛FGF-1基因内含子区A 8528 T、A 72251 C、A 13970 T多态位点各基因型肉质和胴体性状的均值及标准偏差如表2、表3和表4所示。SNP1（I2-8528 A>T）主要与中国西门塔尔牛的肉质有极显著的相关性，大理石花纹方面，TT基因型高于AA、AT基因型，且极显著高于AA基因型（p<0.01，表2）。另外，生长性状方面，肾脏脂肪、牛鞭；胴体性状方面，后腿围；肉质方面，排酸pH、脂肪颜色均接近于显著水平。结果表明，该SNP1（I2-8528 A>T）类型主要与中国西门塔尔牛的肉品质性状（大理石花纹和牛肉排酸后pH）有关。

表2. 牛FGF-1基因FGF-1-I2-8528 A>T（PCR-XspⅠ-RFLP）多态位点基因型与肉质和胴体性状的关联分析。

注：同列不同小写字母表示差异显著(p<0.05)，同列不同大写字母表示差异极显著(p<0.01)。

SNP2 (I2-72251 A>C) 与中国西门塔尔牛的肉质和胴体性状有显著的相关性。在肉质方面，排酸后pH方面 AC基因型显著高于CC基因型（p<0.05）,但AA基因型与AA、AC基因型差异不显著，且数值位于两者之间。在胴体方面，后腿长CC基因型显著高于AA基因型（p<0.05），但同样AC基因型与AA、CC基因型间差异不显著，且数值位于两者之间。另外，在胴体性状方面，前蹄重、牛尾也接近于显著水平（表3）。结果表明，该突变类型主要与中国西门塔尔牛的胴体组成性状（排酸pH）和肉品质性状（排酸后pH）有关。

SNP3（I2-13970 A>T）与中国西门塔尔牛胴体组成及肉质性状的相关性。后蹄重方面，AA基因型显著高于TT基因型（p<0.05）,但AT基因型型与AA、TT基因型差异不显著；肾脏脂肪方面，TT基因型与AA、AT基因型差异极显著，其中AA基因型极显著低于TT基因型（p<0.01）；在胴体长方面，AA基因型显著低于AT基因型。另外，在睾丸重与脂肪颜色性状方面，各基因型也接近于差异水平（表4）。结果表明，该突变类型主要与中国西门塔尔牛的胴体组成性状（肾脏脂肪、胴体长）有关。

另外，牛FGF-1基因SNPs基因型与西门塔尔牛背腰最长肌肌间14种不饱和脂肪酸含量的相关性分析结果显示，在检测、筛查到的三个SNPs中，SNP2(I2-72251 A>C)位点与肉豆寇油酸、十七碳一烯酸及α亚麻酸的含量存在显著相关性。其中肉豆寇油酸和十七碳一烯酸含量方面，CC基因型个体显著高于AA基因型个体(p<0.05，表5)，α亚麻酸含量方面，AC基因型个体显著高于AA基因型个体(p<0.05，表5)。SNP3(I2-13970 A>T) 位点同时也与十七碳一烯酸含量存在显著相关性，携带TT基因型个体含量显著高于AA和AT基因型个体(p<0.05，表5)，另外，TT基因型个体亚油酸含量也显著高于AA基因型个体(p<0.05，表5)。结果表明，牛FGF-1基因的SNP2和SNP3位点处A>C与A>T的突变导致中国西门塔尔牛群体中部分携带C等位基因和T等位基因的个体背腰最长肌中具有较高含量的十七碳一烯酸、亚油酸和α亚麻酸含量。该不饱和脂肪酸可以保持动物细胞膜的相对流动性、维持细胞的正常生理功能；酯化胆固醇，降低血液中胆固醇和甘油三酯含量，调节血脂、改善内分泌，改善血液微循环，可以增强机体免疫力、提高脑细胞的活性等作用。SNP2(I2-72251 A>C)和SNP3(I2-13970 A>T)可以作为分子遗传标记应用于富含不饱和脂肪酸优质、高档牛肉生产和优良肉牛的选育。满足消费者的营养、健康消费的需要。

表3.牛FGF-1基因FGF-1-I2-72251 A>C（PCR-Hae-III-RFLP）多态位点基因型与肉质和胴体性状的关联分析。

注：同列不同小写字母表示差异显著(p<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(p<0.01)。

表4.牛FGF-1基因FGF-1-I2-13970 A>T（PCR- Rsa-I-RFLP）多态位点基因型与肉质和胴体性状的关联分析

表5. 牛FGF-1基因SNPs基因型与西门塔尔牛背最长肌肌间脂肪酸含量的关联分析

注：表中数值以Mean±Std. Deviation表示，同列不同小写字母表示差异显著(p<0.05)，同列不同大写字母表示差异极显著(p<0.01)。

<110> 吉林大学

<120> 中国西门塔尔牛FGF-1基因作为胴体和肉品质性状的遗传标记

<160> 6

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P1上游引物

<400> 1

tccctggttc agagttcaag 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P1下游引物

<400> 2

gggtgtgggt gctgt tatc 19

<210> 3

<211> 542

<212> DNA

<213> 中国西门塔尔牛（Bos Taurus，bovine，Chinese simmental）

<220>

<223>牛FGF-1基因第2内含子P1引物扩增核苷酸序列

<400> 3

tccctggttc agagttcaag gctggcgtgg ccctggctcc tttgtcttca gtgctaaggt 60

ggtggttagg ttaaaggagc aaaatgttct tccttaagcc tctactggtt tttcatgttt 120

gaaatgctaa tggggatgtt tctgggacag agatgcaggt tagccttggg atcgtttcct 180

cccaagggta aaatccctgc ttggttggcc acacagaatg agctgccatt ttccagggct 240

ggtgctggga tgtctctgct gaagacttgg gaggcagtgt cctaagttca ttggaaaggg 300

agctgatgtg gtagaccaag agctctcctg atgcctccac ttccggccca tctctctcat 360

catccttttc ttattccata gtgacagtct gcagggcctg aggataggag tataccagtt 420

ggggcaggca ggactgcttg agtttgaatt ctggttctga cacacaagag ctgtaaggcc 480

ttggcccaat tctggaacct ttccacttct gaaacagaga cgtgataaca gcacccacac 540

cc 542

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P2上游引物

<400> 4

gttcgtagag agccacagat g 21

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P2下游引物

<400> 5

atcactgtgc caaaggaaat 20

<210> 6

<211> 385

<212> DNA

<213> 中国西门塔尔牛（Bos Taurus，bovine，Chinese simmental）

<220>

<223> 牛FGF-1基因第2内含子P2引物扩增核苷酸序列

<400> 6

gttcgtagag agccacagat gcgtttgtac actggtaata cgaacttgtg tagagtgtgt 60

ccactaatct atttgtacac tgataatata aatttgtgta cagtgggtcc actaatgcat 120

ttatacatat gtgcgtttct gataatataa tttgtgtaca gtgggtatgc atagcattag 180

agggtcatag aaggtcatac aatggtttct gtgtcataag acttctcatt aggaagtaat 240

tagggtgaag gtagtctttg taccagggat agactactgt cttccctgtg tgatctgagg 300

atgtacagga agctgtggac gcaggcaaca gccagcagaa ccttcaaaat actccacccc 360

ataaaatttc ctttggcaca gtgat 385

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P3上游引物

<400> 7

gtagacggca cacacctcag 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> P3下游引物

<400> 8

gataatggtt ttgcgacagc 20

<210> 9

<211> 685

<212> DNA

<213> 中国西门塔尔牛（Bos Taurus，bovine，Chinese simmental）

<220>

<223> 牛FGF-1基因第2内含子P3引物扩增核苷酸序列

<400> 9

gtagacggca cacacctcag aggatataat aaaacaggta atgctcttca ggcaccagac 60

tagcacagga caaatgctca ggagaaagcg attcttatta ttacaaaggc agggggaggc 120

tttccttacg aggttagttc tttgggaaac tccttcccag ccaacgctgc aagacccatg 180

gaaaaagaat tttaaaagca ctcaacatac cctccggctt cactgccttt ttactctttg 240

gatatgcatg tgcacacatg tgtgtatgag tgtgaaagcc taaagtagta aaaaacaacg 300

aactcgtttt ccctcccttg ccaagaacca ggtctgctgg attagagata tttaaattct 360

gttgttcaca gctgcatgaa gaatgtagct tttctttcca ttttgccagc tgtgttttgt 420

aactgtctat cctaaaataa aaacaaagcc aaccaaaaaa agcaggactg tctatatcag 480

tcctaaattg ctctcagttt tatacaacaa aacagagaat atctaacccc taaaacacag 540

tctacagaaa gaatccatcc gactcataca ctgtctaaca aggacacatg agtggcacat 600

cggaggtgct cgctgaacct tgttgaatat gtttattgaa tacatgtttt ccttacaaat 660

aacaagctgt cgcaaaacca ttata 685

Claims

1.一种FGF-1基因作为中国西门塔尔牛胴体组成和肉质性状的分子标记的检测方法，其特征在于：

提取中国西门塔尔牛的基因组DNA，设计扩增中国西门塔尔牛FGF-1基因SNP的引物对：

P1正向引物F：5' GTTCGTAGAGAGCCACAGATG 3'，

P1反向引物R：5' ATCACTGTGCCAAAGGAAAT 3'；

用所示的特异性引物在中国西门塔尔牛基因组中进行PCR扩增，PCR产物纯化、克隆测序，获得如序列表Seq ID NO.6所示的核苷酸序列，其中分别包括FGF-1基因I2-72251A>C单核苷酸碱基突变，并且利用聚合酶链式反应---限制性片段长度多态方法对中国西门塔尔牛群体中FGF-1基因SNP突变位点进行检测，内切酶为Hae-III，在功能区域识别序列为GG/CC；

所述的FGF-1基因的核苷酸序列如序列表Seq ID NO.6所示；

FGF-1基因I2-72251 SNP突变位点C等位基因与中国西门塔尔牛胴体后腿长性状、肌内不饱和脂肪酸性状间存在相关性。