CN104585039B - 蓝莓组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
一种蓝莓组培快繁方法，以蓝莓半木质化茎段为外植体，接种到含有改良READ培养基、玉米素、萘乙酸、蔗糖和琼脂的培养基中连接培养，新梢转入含有改良READ培养基、玉米素、蔗糖和琼脂的培养基中进行连续增殖培养；将再生苗剪成小段后扦插于复合基质上，实现瓶外生根。本发明在组培瓶内阶段，包括初代诱导及继代增殖中以玉米素为植物生长调节剂，它具有促进细胞分裂，促进细胞生长等作用，用量较低，增殖系数高，植株强壮，可不经壮苗直接进用瓶外生根程序；同时采用瓶外生根技术，相对瓶内生根速度快，效率高、成本低，进一步加快了繁殖速度。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种蓝莓繁殖方法，具体涉及的是蓝莓组培瓶内增殖加瓶外生根的快繁育苗方法。
背景技术
蓝莓为杜鹃花科(Edeaceae)越橘属(Vaccinium)多年生灌木树种，蓝莓具有较高的保健功能，在防止视网膜退货、脑神经衰老、增强心脏功能、抗氧化、抗溃疡、抗炎及抗癌等方面有着独特功效，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一，被誉为“21世纪功能性保健浆果”和“水果中的皇后”。因此开发前景十分广阔。蓝莓种植，种苗是关键。采用常规扦插育苗方法因受取材及繁育时节的限制，繁殖速度较慢而难以满足生产需求，更为重要的是，常规繁育的种苗在生长势、抗逆性及果实品质等诸方面均不如组培苗。而采用瓶外生根技术，可大大降低生产成本，提高繁苗速率，建立稳定高效的组培快繁体系具有重要的现实意义。
经过对现有技术的检索发现，廉家盛等在“培养基种类、玉米素浓度及pH值对蓝莓“美登”组培增殖生长的影响”中记载了以蓝莓"美登"品种茎段为外植体，研究基本培养基种类、ZT浓度和培养基pH值对其组培苗增殖的影响，结果表明，B5培养基比MS、White和改良WPM更适于"美登"不定芽增殖培养，当B5培养基中加入2.0mg/L ZT时，每株可分化出6.8个不定芽，ZT浓度低于或高于2.0mg/L时，分化芽数降低，"美登"组培苗生长受到抑制.pH值对美登组培苗增殖生长也有影响，pH值为5.4时分化的芽数最多(11.5个/株)，且生长良好。但该技术采用的玉米素使用浓度偏高，造成不定芽丛生，再生苗长势弱，不利于芽的持续增殖，同时本专利技术下得到的再生苗可不经炼苗直接进行瓶外生根，繁殖快、操作简单、效率高、成本低。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种蓝莓组培快繁的方法，该方法能够有效提高苗木繁殖速度。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明包括以下步骤：
1)以蓝莓半木质化新梢为外植体制备成茎段
所述的蓝莓新梢经消毒处理且优选为当年生长初期的蓝莓新梢。
所述的茎段具有至少两个腋芽，且茎段底部预先剪除2‐3毫米。
2)将茎段接种到含有改良READ培养基、萘乙酸、蔗糖和琼脂的混合培养基中继代培养，然后转入含有改良READ培养基、玉米素、蔗糖和琼脂的增殖培养基进行增殖培养。
所述的混合培养基的组分(每升)为：改良READ培养基、ZT 2.0mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖20g/L以及琼脂6.5g/L，该混合培养基的pH为5.4～5.6。
所述的继代培养重复2‐3次。
所述的增殖培养基的组分(每升)为：改良READ培养基、玉米素0.05‐0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.5g/L，该增殖培养基的pH为5.4～5.6。
所述的增殖培养每60天继代一次，繁殖系数为4～6。
所述的改良READ培养基的组分为：KNO3202mg/L、NH4NO3400mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、H3BO36.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·7H2O 0.025mg/L、CoCl2·2H2O0.025mg/L、VB11mg/L、肌醇100mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2‐EDTA 37.3mg/L。
3)对增殖后的瓶苗可不经炼苗直接剪成小段扦插于复合基质上，实现瓶外生根。
所述的小段是指：将得到的再生苗剪成1.5‐2厘米的小段，每段浸泡生根液。
所述的生根液的组分为：IBA(吲哚丁酸)100mg/L、VB1(盐酸硫胺素)0.1g/L。
所述的浸泡时间优选为3分钟。
所述的复合基质为经800倍多菌灵消毒后的草炭与蛭石(体积比为3：1)的混合基质上。
所述的小段扦插于复合基质后置于小棚，14天可见明显生根，1月可见新芽生出，成活率超过90％。
所述的小棚内空气相对湿度为85％以上，温度在15‐30℃。
技术效果
与现有技术相比，本发明在组培瓶内阶段，包括初代诱导及继代增殖中以玉米素为植物生长调节剂，它具有促进细胞分裂，促进细胞生长等作用，用量较低，增殖系数高，植株强壮，可不经炼苗直接进入瓶外生根程序；同时采用瓶外生根技术，相对瓶内生根速度快，效率高、成本低，进一步加快了繁殖速度。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例包括以下操作步骤：
1)4月初于上海青浦地区采集当年生长初期蓝莓半木质化新梢(蓝莓品种为V3)，经消毒处理后(75％的乙醇消毒30秒后，无菌水冲洗2次，再用0.1％的升汞消毒处理6分钟，后有无菌水处理4次)，剪切成带2个腋芽的茎段，接种前剪除底端2‐3毫米；
2)将茎段接种到初代培养基改良READ+ZT 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上，pH5.4‐5.6；30天后将新长出的芽茎接种到改良READ+玉米素1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上，经过2‐3次继代培养，每次玉米素的含量逐渐降低0.1‐0.2mg/L，直至降至0.05mg/L的水平上，可持续增殖，增殖培养基为改良READ+玉米素0.05mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上，pH5.4‐5.6；每60天继代一次，繁殖系数在4‐6之间，培养条件：温度25℃，光照时间14小时/天，光强2000‐3000lx；
3)当瓶苗增殖到一定数量时，将再生苗剪成1.5‐2厘米的小段，茎段浸泡生根液(IBA100mg/L+VB10.1g/L)3分钟后直接扦插于经800倍多菌灵消毒后的复合基质上，遮小棚以保湿(空气相对湿度为85％以上，温度在15‐30℃)，14天可见明显生根，1月可见新芽生出，成活率超过90％。
实施例2
本实施例包括以下操作步骤：
1)4月初于上海青浦地区采集当年生长初期蓝莓半木质化新梢(蓝莓品种为奥尼尔)，经消毒处理后(75％的乙醇消毒30秒后，无菌水冲洗2次，再用0.1％的升汞消毒处理6分钟，后有无菌水处理4次)，剪切成带2个腋芽的茎段，接种前剪除底端2‐3毫米；
2)将茎段接种到初代培养基改良READ+ZT 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上，pH5.4‐5.6；30天后将新长出的芽茎接种到改良READ+玉米素1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上，经过2‐3次继代培养，每次玉米素的含量逐渐降低0.1‐0.2mg/L，直至降至0.2mg/L的水平上，可持续增殖，增殖培养基为改良READ+玉米素0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上，pH5.4‐5.6；每60天继代一次，繁殖系数在4‐6之间，培养条件：温度25℃，光照时间14小时/天，光强2000‐3000lx；
3)当瓶苗增殖到一定数量时，直接将再生苗剪成1.5‐2厘米的小段，茎段浸泡生根液(IBA100mg/L+VB10.1g/L)3分钟后直接扦插于经800倍多菌灵消毒后的复合基质上，遮小棚以保湿(空气相对湿度为85％以上，温度在15‐30℃)，14天可见明显生根，1月可见新芽生出，成活率超过90％。
Claims (7)
1.一种蓝莓组培快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)以蓝莓半木质化新梢为外植体制备成茎段；
2)将茎段接种到含有改良READ培养基、玉米素、萘乙酸、蔗糖和琼脂的混合培养基中，然后转入含有改良READ培养基、玉米素、蔗糖和琼脂的增殖培养基进行增殖培养；
3)增殖后的瓶苗不必经过炼苗，直接剪成小段扦插于复合基质上，实现瓶外生根；
所述的混合培养基的组分为：改良READ培养基、ZT 2.0mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖20g/L以及琼脂6.5g/L，该混合培养基的pH为5.4～5.6；
所述的增殖培养基的组分为：改良READ培养基、玉米素0.05-0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.5g/L，该增殖培养基的pH为5.4～5.6；
所述的改良READ培养基的组分为：KNO3 202mg/L、NH4NO3 400mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·7H2O 0.025mg/L、CoCl2·2H2O 0.025mg/L、VB1 1mg/L、肌醇100mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L。
2.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法，其特征是，所述的蓝莓半木质化新梢经消毒处理且为当年生长初期的蓝莓新梢。
3.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法，其特征是，所述的茎段具有至少两个腋芽，且茎段底部预先剪除2-3毫米。
4.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法，其特征是，所述的小段是指：再生苗剪成1.5-2厘米的小段，每段浸泡生根液。
5.根据权利要求4所述的蓝莓组培快繁的方法，其特征是，所述的生根液的组分为：IBA100mg/L、VB10.1g/L。
6.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法，其特征是，所述的小段扦插于基质后置于小棚，14天见明显生根，1月见新芽生出，成活率超过90％。
7.根据权利要求6所述的蓝莓组培快繁的方法，其特征是，所述的小棚内空气相对湿度为85％以上，温度在15-30℃。
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