CN104585039B - 蓝莓组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
一种蓝莓组培快繁方法,以蓝莓半木质化茎段为外植体,接种到含有改良READ培养基、玉米素、萘乙酸、蔗糖和琼脂的培养基中连接培养,新梢转入含有改良READ培养基、玉米素、蔗糖和琼脂的培养基中进行连续增殖培养;将再生苗剪成小段后扦插于复合基质上,实现瓶外生根。本发明在组培瓶内阶段,包括初代诱导及继代增殖中以玉米素为植物生长调节剂,它具有促进细胞分裂,促进细胞生长等作用,用量较低,增殖系数高,植株强壮,可不经壮苗直接进用瓶外生根程序;同时采用瓶外生根技术,相对瓶内生根速度快,效率高、成本低,进一步加快了繁殖速度。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种蓝莓繁殖方法,具体涉及的是蓝莓组培瓶内增殖加瓶外生根的快繁育苗方法。
背景技术
蓝莓为杜鹃花科(Edeaceae)越橘属(Vaccinium)多年生灌木树种,蓝莓具有较高的保健功能,在防止视网膜退货、脑神经衰老、增强心脏功能、抗氧化、抗溃疡、抗炎及抗癌等方面有着独特功效,被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一,被誉为“21世纪功能性保健浆果”和“水果中的皇后”。因此开发前景十分广阔。蓝莓种植,种苗是关键。采用常规扦插育苗方法因受取材及繁育时节的限制,繁殖速度较慢而难以满足生产需求,更为重要的是,常规繁育的种苗在生长势、抗逆性及果实品质等诸方面均不如组培苗。而采用瓶外生根技术,可大大降低生产成本,提高繁苗速率,建立稳定高效的组培快繁体系具有重要的现实意义。
经过对现有技术的检索发现,廉家盛等在“培养基种类、玉米素浓度及pH值对蓝莓“美登”组培增殖生长的影响”中记载了以蓝莓"美登"品种茎段为外植体,研究基本培养基种类、ZT浓度和培养基pH值对其组培苗增殖的影响,结果表明,B5培养基比MS、White和改良WPM更适于"美登"不定芽增殖培养,当B5培养基中加入2.0mg/L ZT时,每株可分化出6.8个不定芽,ZT浓度低于或高于2.0mg/L时,分化芽数降低,"美登"组培苗生长受到抑制.pH值对美登组培苗增殖生长也有影响,pH值为5.4时分化的芽数最多(11.5个/株),且生长良好。但该技术采用的玉米素使用浓度偏高,造成不定芽丛生,再生苗长势弱,不利于芽的持续增殖,同时本专利技术下得到的再生苗可不经炼苗直接进行瓶外生根,繁殖快、操作简单、效率高、成本低。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足,提出一种蓝莓组培快繁的方法,该方法能够有效提高苗木繁殖速度。
本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明包括以下步骤:
1)以蓝莓半木质化新梢为外植体制备成茎段
所述的蓝莓新梢经消毒处理且优选为当年生长初期的蓝莓新梢。
所述的茎段具有至少两个腋芽,且茎段底部预先剪除2‐3毫米。
2)将茎段接种到含有改良READ培养基、萘乙酸、蔗糖和琼脂的混合培养基中继代培养,然后转入含有改良READ培养基、玉米素、蔗糖和琼脂的增殖培养基进行增殖培养。
所述的混合培养基的组分(每升)为:改良READ培养基、ZT 2.0mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖20g/L以及琼脂6.5g/L,该混合培养基的pH为5.4~5.6。
所述的继代培养重复2‐3次。
所述的增殖培养基的组分(每升)为:改良READ培养基、玉米素0.05‐0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.5g/L,该增殖培养基的pH为5.4~5.6。
所述的增殖培养每60天继代一次,繁殖系数为4~6。
所述的改良READ培养基的组分为:KNO3202mg/L、NH4NO3400mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、H3BO36.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·7H2O 0.025mg/L、CoCl2·2H2O0.025mg/L、VB11mg/L、肌醇100mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2‐EDTA 37.3mg/L。
3)对增殖后的瓶苗可不经炼苗直接剪成小段扦插于复合基质上,实现瓶外生根。
所述的小段是指:将得到的再生苗剪成1.5‐2厘米的小段,每段浸泡生根液。
所述的生根液的组分为:IBA(吲哚丁酸)100mg/L、VB1(盐酸硫胺素)0.1g/L。
所述的浸泡时间优选为3分钟。
所述的复合基质为经800倍多菌灵消毒后的草炭与蛭石(体积比为3:1)的混合基质上。
所述的小段扦插于复合基质后置于小棚,14天可见明显生根,1月可见新芽生出,成活率超过90%。
所述的小棚内空气相对湿度为85%以上,温度在15‐30℃。
技术效果
与现有技术相比,本发明在组培瓶内阶段,包括初代诱导及继代增殖中以玉米素为植物生长调节剂,它具有促进细胞分裂,促进细胞生长等作用,用量较低,增殖系数高,植株强壮,可不经炼苗直接进入瓶外生根程序;同时采用瓶外生根技术,相对瓶内生根速度快,效率高、成本低,进一步加快了繁殖速度。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明,本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例包括以下操作步骤:
1)4月初于上海青浦地区采集当年生长初期蓝莓半木质化新梢(蓝莓品种为V3),经消毒处理后(75%的乙醇消毒30秒后,无菌水冲洗2次,再用0.1%的升汞消毒处理6分钟,后有无菌水处理4次),剪切成带2个腋芽的茎段,接种前剪除底端2‐3毫米;
2)将茎段接种到初代培养基改良READ+ZT 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上,pH5.4‐5.6;30天后将新长出的芽茎接种到改良READ+玉米素1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上,经过2‐3次继代培养,每次玉米素的含量逐渐降低0.1‐0.2mg/L,直至降至0.05mg/L的水平上,可持续增殖,增殖培养基为改良READ+玉米素0.05mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上,pH5.4‐5.6;每60天继代一次,繁殖系数在4‐6之间,培养条件:温度25℃,光照时间14小时/天,光强2000‐3000lx;
3)当瓶苗增殖到一定数量时,将再生苗剪成1.5‐2厘米的小段,茎段浸泡生根液(IBA100mg/L+VB10.1g/L)3分钟后直接扦插于经800倍多菌灵消毒后的复合基质上,遮小棚以保湿(空气相对湿度为85%以上,温度在15‐30℃),14天可见明显生根,1月可见新芽生出,成活率超过90%。
实施例2
本实施例包括以下操作步骤:
1)4月初于上海青浦地区采集当年生长初期蓝莓半木质化新梢(蓝莓品种为奥尼尔),经消毒处理后(75%的乙醇消毒30秒后,无菌水冲洗2次,再用0.1%的升汞消毒处理6分钟,后有无菌水处理4次),剪切成带2个腋芽的茎段,接种前剪除底端2‐3毫米;
2)将茎段接种到初代培养基改良READ+ZT 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上,pH5.4‐5.6;30天后将新长出的芽茎接种到改良READ+玉米素1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上,经过2‐3次继代培养,每次玉米素的含量逐渐降低0.1‐0.2mg/L,直至降至0.2mg/L的水平上,可持续增殖,增殖培养基为改良READ+玉米素0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L上,pH5.4‐5.6;每60天继代一次,繁殖系数在4‐6之间,培养条件:温度25℃,光照时间14小时/天,光强2000‐3000lx;
3)当瓶苗增殖到一定数量时,直接将再生苗剪成1.5‐2厘米的小段,茎段浸泡生根液(IBA100mg/L+VB10.1g/L)3分钟后直接扦插于经800倍多菌灵消毒后的复合基质上,遮小棚以保湿(空气相对湿度为85%以上,温度在15‐30℃),14天可见明显生根,1月可见新芽生出,成活率超过90%。
Claims (7)
1.一种蓝莓组培快繁的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)以蓝莓半木质化新梢为外植体制备成茎段;
2)将茎段接种到含有改良READ培养基、玉米素、萘乙酸、蔗糖和琼脂的混合培养基中,然后转入含有改良READ培养基、玉米素、蔗糖和琼脂的增殖培养基进行增殖培养;
3)增殖后的瓶苗不必经过炼苗,直接剪成小段扦插于复合基质上,实现瓶外生根;
所述的混合培养基的组分为:改良READ培养基、ZT 2.0mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖20g/L以及琼脂6.5g/L,该混合培养基的pH为5.4~5.6;
所述的增殖培养基的组分为:改良READ培养基、玉米素0.05-0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂6.5g/L,该增殖培养基的pH为5.4~5.6;
所述的改良READ培养基的组分为:KNO3 202mg/L、NH4NO3 400mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3BO3 6.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·7H2O 0.025mg/L、CoCl2·2H2O 0.025mg/L、VB1 1mg/L、肌醇100mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L。
2.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法,其特征是,所述的蓝莓半木质化新梢经消毒处理且为当年生长初期的蓝莓新梢。
3.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法,其特征是,所述的茎段具有至少两个腋芽,且茎段底部预先剪除2-3毫米。
4.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法,其特征是,所述的小段是指:再生苗剪成1.5-2厘米的小段,每段浸泡生根液。
5.根据权利要求4所述的蓝莓组培快繁的方法,其特征是,所述的生根液的组分为:IBA100mg/L、VB10.1g/L。
6.根据权利要求1所述的蓝莓组培快繁的方法,其特征是,所述的小段扦插于基质后置于小棚,14天见明显生根,1月见新芽生出,成活率超过90%。
7.根据权利要求6所述的蓝莓组培快繁的方法,其特征是,所述的小棚内空气相对湿度为85%以上,温度在15-30℃。
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