CN104583199A - 用作csf-1r激酶抑制剂的2-氨基吡嗪衍生物 - Google Patents

用作csf-1r激酶抑制剂的2-氨基吡嗪衍生物 Download PDF

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Abstract

本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物：其中：环A、R1、R2、n、X、V、W、Z、环B、[接头]和R如本文中所定义。所述化合物用作CSF-1R激酶的抑制剂。因此所述化合物可用于药物中。

Description

用作CSF-1R激酶抑制剂的2-氨基吡嗪衍生物
本发明涉及一系列氨基酸酯和环氨基酸酯化合物、含有这些化合物的组合物、用于其制备的方法及其在药品中作为CSF-1R抑制剂治疗CSF-1R激酶介导的疾病和病症中用途。这类疾病和病症包括细胞增殖疾病(如癌症和银屑病)、多谷氨酰胺疾病(如亨廷顿病)、神经退行性疾病(如阿尔茨海默病)、自身免疫疾病(如类风湿性关节炎)、糖尿病、血液疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化和感染的炎性后遗症。
背景技术
集落刺激因子-1受体(FMS，也称作CSF-1R)是由FMS原癌基因编码的集落刺激因子-1(CSF-1或巨噬细胞集落刺激因子M-CSF)的同源二聚化的III类受体酪氨酸激酶且已成为近期综述的焦点[Nat.Rev.Immunol.2008,8,533]。CSF-1调节巨噬细胞谱系(包括单核细胞、组织巨噬细胞、树突细胞、小胶质细胞和破骨细胞)的存活、增殖、分化和功能[Trends Cell Biol.2004,14,628-638]。这些单核巨噬细胞通过维持组织平衡来对抗入侵的病原体。CSF-1以3种主要同种型的形式存在，即分泌的糖蛋白和分泌的蛋白聚糖(两者均在整个体内循环)以及细胞表面蛋白(其参与目标细胞的局部调节)。
III类受体酪氨酸激酶(RTK)包括c-FMS、c-Kit、Flt-3和PDGFR，其特征是一个胞外配体结合结构域、一个单跨膜结构域(TM)、一个近膜结构域(JM)、由一个激酶插入结构域(KI)隔开的两个胞内激酶结构域(TK1和TK2)和一个C端结构域。
CSF-1与FMS的胞外结构域的结合稳定了受体二聚化，诱导胞内FMS结构域的反式自身磷酸化并激活下游的胞质信号，导致巨噬细胞谱系细胞的分化和激活。
FMS活性位点的小分子抑制剂阻断受体自身磷酸化并随后阻断控制巨噬细胞存活、表达、增殖和分化的信号。将巨噬细胞数目与数种疾病(包括癌症和炎性疾病)联系的证据使得人们进行了很多努力来研发FMS的小分子抑制剂。在研究中，已证明目标组织内高巨噬细胞水平与以下事件相关：RA[Ann.Rheum.Dis.2005,64,834-838]和免疫肾炎[Nephrol.Dial.Transplant.2001,16,1638-1647]的疾病严重性以及一些癌症中较差的可存活率和肿瘤发展[J.Clin.Oncol.2005,23,953-964.Cancer Res.2006,66,605-612]。因此，调节巨噬细胞数目是CSF-1功能的关键。
集落刺激因子(CSF)是一类造血细胞生长因子，包括M-CSF和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(这两者都是相对谱系特异性的)以及粒细胞/巨噬细胞CSF(GM-CSF)(其在细胞谱系的较早阶段通过调节造血祖细胞发挥功能)[1]。最近鉴定到了新的FMS配体白介素34(IL-34)，其功能为FMS的特异性和独立的配体，在人骨髓培养物中刺激胞外信号调节激酶-1和-2(ERK1/2)的FMS依赖的磷酸化并促进集落形成单位巨噬细胞(CFU-M)的形成[Science 2008,320,807-811]。
FMS是CSF-1通路中的关键成员并已成为用于调节多种疾病(包括癌症、炎症和自身免疫疾病)中巨噬细胞水平的可用靶点。因此，鉴定全新的和选择性小分子CSF-1拮抗剂已成为广泛的竞争性研究工作的焦点。
通过调节单核巨噬细胞的发育和激活，CSF-1在针对病毒、细菌和真菌感染的先天免疫应答中起重要作用并提高了疫苗的效力。CSF-1还涉及在数种疾病中促进和维持炎症。在胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型中观察到了CSF-1消耗在自身免疫和炎性疾病中具有治疗益处的早期证据。CSF-1缺陷型小鼠对关节炎的发展具有抗性，但对II型胶原具有正常的免疫应答[23]。实际上，与RA患者的滑液中发现的情况类似，CSF-1水平的升高与诸如RA和免疫肾炎的病症的疾病严重性之间表现出强相关。刺激这些滑膜巨噬细胞生产的促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)和TNF-α也起一定作用。在CIA模型中，CSF-1的单克隆抗体和小分子抑制剂已显示能够有效地减少关节中的巨噬细胞数目并延缓疾病的总体进程。
发明内容
本发明涉及一类新的CSF-1R抑制剂，该CSF-1R抑制剂在CSF-1R激酶介导的疾病和病症(如癌症、自身免疫和炎性疾病)的治疗中具有药学上的应用。本发明的抑制剂的特征是具有α氨基酸基序或α氨基酸酯基序，其是与母体分子模板共价连接的胞内羧酸酯酶的底物(本文中也称作“酯酶基序”)。疏水性酯酶基序使得分子能够通过细胞壁，从而使胞内羧酸酯酶对酯进行水解以释放母体酸。带电荷的酸不能被容易地运出细胞，因此其发生积累以增加的活性CSF-1R抑制剂的胞内浓度。这导致相对于母体CSF-1R抑制剂模板增加了作用的效力和持续时间。
因此，本发明提供了一种化合物，该化合物是式(I)氨基酸或氨基酸酯或其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物：
其中：
环A是C6-12芳基、5至12元杂环基或C3-7碳环基环；
R1和R2独立地代表氢、卤素或未取代的基团，该未取代的基团选自C1-4烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷基、C2-4卤代烯基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、-SR3、氰基、硝基、C1-4羟基烷基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；
n是0或1；
X是NH或O；
V和W独立地代表–N＝或–C(Z)＝；
各Z相同或不同且代表氢、氟、氯、溴、碘、氰基、未取代的C1-3氟烷基或未取代的C1-3烷基；
环B是C6-12芳基、5至12元杂环基或C3-7碳环基环；
[接头]代表式-(CH2)m-X1-L1-Y1-的基团，其中：
-m是0、1、2或3；
-X1代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S(＝O)2-、–NR5C(＝O)-、-C(＝O)NR5-、-NR5C(＝O)NR6-、-NR5S(＝O)2-或-S(＝O)2NR5-，其中R5和R6独立地是氢或C1-6烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
-L1代表式–(Alk1)x-(Q)y-(Het)w-(Alk2)z-或–(Alk1)x-(Het)w-(Q)y-(Alk2)z-的二价基团，其中
-x、y、w和z独立地是0或1；
-Q代表二价C6-12芳基、5至12元杂环基或C3-7碳环基环；
-Het代表-O-、-S-或-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
-AlK1和AlK2独立地代表二价C3-7环烷基基团，或者直链或支链的，C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基基团；
-Y1代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S(＝O)2-、–NR5C(＝O)-、-C(＝O)NR5-、-NR5C(＝O)NR6-、-NR5S(＝O)2-或-S(＝O)2NR5-，其中R5和R6独立地是氢或C1-6烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
-R表示式(X)或(Y)的基团：
其中：
-R8是-COOH基团或可由一种或多种胞内羧酸酯酶水解成-COOH基团的酯基；
-R9和R10相同或不同且各自代表天然或非天然α-氨基酸的α-取代基，或者R9和R10与其连接的碳一起形成3至6元饱和螺环烷基或杂环基环；
-R11代表氢原子或C1-4烷基基团；
-环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的氮原子或碳原子；
其中当R是(X)时，[接头]不通过O、N或S原子与(X)相连；
并且除非另有说明，其中：
-R5、R6、R8、R9、R10、R11、Alk1和Alk2中的任何烷基、烯基和炔基基团和部分都是相同或不同的且各自是未取代的或被1、2或3个未取代的取代基取代，该未取代的取代基相同或不同且选自卤素原子和C1-4烷氧基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、-SR3、氰基、硝基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；
-环A、B、Q、D、Alk1和Alk2以及由R9和R10形成的环中的任何芳基、杂环基、环烷基和碳环基基团和部分相同或不同且各自是未取代的或被1、2、3或4个未取代的取代基取代，该未取代的取代基选自卤素原子和氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷基、C2-4卤代烯基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、C1-4羟基烷基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基，或来自式COOR12、-COR12、-SO2R12、-CONR12R13、-SO2NR12R13、-OCONR12R13、-NR1 2COR13、-NR12COOR13、-NR12SO2R13、-NR12SO2OR13或–NR12CONR12R13的取代基，其中R12和R13相同或不同且代表氢或未取代的C1-4烷基，或者当连接至同一氮原子时R12和R13形成非稠合的5或6元杂环基团，
前提是该化合物不是：
4-(4-{6-氨基-5-[1-(2,6-二氯-3-氟-苯基)-乙氧基]-吡啶-3-基}-吡唑-1-基)-吡咯烷-2-羧酸甲酯。按照医学化学实践的一般原理，本发明涉及的化合物的分子量优选不应大于600。
本发明还提供了用于人体或动物体的治疗方法的上文所定义的化合物。
本发明还提供了包含上文所定义化合物和一种或多种药学上可接受的运载体和/或赋形剂的药物组合物。
在另一个方面中，本发明提供了用于治疗CSF-1R激酶介导的疾病或病症的上文所定义的化合物。本发明还提供了上文所定义的化合物在制造用于治疗或预防CSF-1R激酶介导的疾病或病症的药物过程中的用途。
此外，本发明提供了一种治疗或预防对象中CSF-1R激酶介导的疾病或病症的方法，该方法包括向所述对象给予有效量的上文所定义化合物。
具体实施方式
术语
R5、R6、R8、R9、R10、R11、Alk1和Alk2中的烷基、烯基和炔基基团和部分都是未取代或被1、2或3个(优选1或2个)未取代的取代基取代，该未取代的取代基相同或不同且选自卤素原子和C1-4烷氧基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、-SR3、氰基、硝基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。更优选的取代基是卤素、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。
当上述烷基、亚烷基、亚烯基和亚炔基部分被2或3个取代基取代时，优选不超过两个取代基选自羟基、氰基和硝基。更优选地，不超过一个取代基选自羟基、氰基和硝基。
本文中使用的C1-6烷基基团或部分是包含1至6个碳原子的直链或支链烷基或部分，例如包含1至4个碳原子的C1-4烷基基团或部分。C1-4烷基的示例包含甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基。为了避免疑问，当一个基团中存在两个烷基部分时，该烷基部分可以相同或不同。
本文中使用的C2-6烯基基团或部分是直链或支链烯基或部分，当可应用并且包含2至6个碳原子时具有E或Z立体化学的至少一个双键，例如包含2至4个碳原子的C2-4烯基基团或部分，如-CH＝CH2或-CH2-CH＝CH2、-CH2-CH2-CH＝CH2、-CH2-CH＝CH-CH3、-CH＝C(CH3)-CH3和-CH2-C(CH3)＝CH2。为了避免疑问，当一个基团中存在两个烯基部分时，其可以相同或不同。
本文中使用的C1-6亚烷基基团或部分是直链或支链亚烷基基团或部分，例如C1-4亚烷基基团或部分。示例包括亚甲基、正亚乙基、正亚丙基和-C(CH3)2-基团和部分。
本文中使用的C2-6亚烯基基团或部分是直链或支链亚烯基基团或部分，例如C2-4亚烯基基团或部分。示例包括-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH-和-CH＝CH-CH＝CH-。
本文中使用的C2-6亚炔基基团或部分是直链或支链亚炔基基团或部分，例如C2-4亚炔基基团或部分。示例包括-C≡C-、-C≡C-CH2-和-CH2-C≡C-。
本文中使用的卤素原子是氯、氟、溴或碘。
本文中使用的C1-4烷氧基基团或C2-4烯氧基基团通常分别是与氧原子相连的所述C1-4烷基基团或所述C2-4烯基基团。
卤代烷基、卤代烯基、卤代烷氧基或卤代烯氧基基团通常分别是由一种或多种所述卤素原子取代的所述烷基、烯基、烷氧基或烯氧基。通常，其被1、2或3个所述卤素原子取代。优选的卤代烷基和卤代烷氧基包含全卤代烷基和全卤代烷氧基如-CX3和-OCX3，其中X是所述卤素原子，例如氯或氟。氟烷基基团通常是被一个或多个氟原子取代的所述烷基基团。通常，其被1、2或3个所述氟原子取代。
本文中使用的C1-4羟基烷基基团是由一个或多个羟基基团取代的C1-4烷基基团。通常，其被一个、两个或三个羟基基团取代。优选地，其被单个羟基基团取代。
本文中使用的C6-12芳基基团或部分是具有6至12个碳原子的单环6至12元芳族烃环，例如苯基和萘基。优选苯基。
本文中使用的无限制的术语“杂芳基”指包含一个或多个(例如1、、3或4个，特别是1或2个)选自S、N和O的杂原子的单、双或三环芳族基团，并且包含直接通过共价键连接的两个这种单环或一个这种单环和一个单环芳环的基团。此类基团的示例是噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基，特别是吡唑。
本文中使用的无限制的术语“杂环基”或“杂环”包括上文所定义的“杂芳基”，并且在其非芳族含义中涉及包含一个或多个(例如1、2、3或4个，特别是1或2个)选自S、N和O的杂原子的饱和或不饱和的单、双或三环非芳族基团，以及涉及由含有一个或多个此类杂原子的单环非芳族基团组成的基团，其中杂原子共价连接到另一个这种基团或单环碳环基团上。此类基团的示例是吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吗啉基、哌嗪基、吲哚基、苯并呋喃基、吡喃基、异噁唑基、苯并咪唑基、亚甲二氧基苯基、亚乙二氧基苯基、马来酰亚氨基和琥珀酰亚氨基，特别是哌啶基、哌嗪基和吡唑基。
本文中使用的C3-7碳环基团或部分是有3至7个碳原子的非芳族饱和或不饱和烃环。优选其是有3至7个碳原子，更优选具有3至6个碳原子的饱和或单不饱和烃环(即环烷基部分或环烯基部分)。示例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基及其单不饱和变体。优选的C3-7碳环基团或部分的示例是环戊基和环己基。C3-7碳环基基团或部分也包括上述C3-7碳环基基团或部分，但是其中一个或多个环碳原子被-C(O)-基团取代。更优选地，0、1或2个环碳原子(最优选0或2个)被-C(O)-取代。优选的这类基团是苯醌。
本文中使用的术语“环烷基”是指有3-8个碳原子的单环饱和碳环基，并包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
当环A、B、Q和D以及由Alk1和Alk2形成的环和由R9和R10形成的环中的芳基、杂环基、环烷基和碳环基基团和部分被两个、三个或四个取代基取代时，优选不超过两个取代基选自羟基、氰基和硝基。更优选地，不超过一个取代基选自羟基、氰基和硝基。此外，当芳基、杂环基、杂环基和碳环基部分被两个或三个取代基取代时，优选不超过一个取代基选自COOR12、-COR12、-SO2R12、-CONR12R13、-SO2NR12R13、-OCONR12R13、-NR1 2COR13、-NR12COOR13、-NR12SO2R13、-NR12SO2OR13或–NR12CONR12R13。
本文中使用的术语“盐”包括碱加成盐、酸加成盐和季盐。酸性的本发明的化合物可以与碱或有机碱形成盐，包括药学可接受的盐，该碱是例如碱金属氢氧化物(如氢氧化钠和氢氧化钾)、碱土金属氢氧化物(如氢氧化钙、氢氧化钡和氢氧化镁)，该有机碱是例如N-甲基-D-葡糖胺、胆碱三(羟甲基)氨基-甲烷、L-精氨酸、L-赖氨酸、N-乙基哌啶、二苄基胺等。碱性的那些化合物可以与无机酸或有机酸形成盐，包括药学可接受的盐，该无机酸是例如氢卤酸(如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸或磷酸等，该有机酸是例如乙酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、苯磺酸、谷氨酸、乳酸和扁桃酸等。
预测可以水合物或溶剂合物的形式回收本发明的化合物。本文中使用的术语“溶剂合物”描述了一种包含本发明的化合物和化学计量的一种或多种药学上可接受的溶剂分子(如乙醇)的分子复合物。当该溶剂是水时，则使用术语“水合物”。
由于存在不对称碳原子，包含一个或多个实际或潜在手性中心的本发明的化合物可以多种非对映异构体的形式存在，其中各手性中心为R或S立体化学结构。本发明包括所有这类非对映异构体及其混合物。
优选地，环A代表苯基或5至6元杂环基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，该取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。更优选地，环A代表苯基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，该取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。例如，环A可代表苯基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，该取代基相同或不同且选自氟和氯。
优选地，R1和R2独立地代表氢、卤素或未取代的C1-4烷基；更优选地是氢。
优选n是1。
优选X是NH。
含有V和W的环含有总共1、2或3个氮原子。在一个实施方式中，V是–N＝且W是–C(Z)＝。在另一个实施方式中，V是–C(Z)＝且W是–N＝。优选地，V是–N＝且W是–C(Z)＝；更优选地是-CH＝。
优选地，Z代表氢、氟、氯或未取代的C1-3烷基；更优选地是氢。
优选地，环B代表苯基或5至6元杂环基基团，优选地是含有1、2或3个氮原子的苯基或5至6元杂环基基团，例如吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或吡唑基，特别是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，该取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。
更优选地，环B代表1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团、1,3-吡唑基基团或吡啶基基团，特别是1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团或1,3-吡唑基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，该取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。例如，环B可代表未取代的1,3-吡唑基基团或者未取代的或被1、2或3个取代基取代的1,4-亚苯基或1,3-亚苯基基团，该取代基相同或不同且选自氟、氯、甲基和乙基。
通常，环B代表1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团或吡啶基基团，特别是1,4-亚苯基基团或1,3-亚苯基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，该取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。例如，环B可代表未取代的或被1、2或3个取代基取代的1,4-亚苯基或1,3-亚苯基基团，该取代基相同或不同且选自氟、氯、甲基和乙基。
当B如上文所定义时，X优选是NH。
[接头]代表式-(CH2)m-X1-L1-Y1-的基团。
优选地，m是0、1或2。
在一些实施方式中，X1优选代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。更优选地，X1代表键或-C(＝O)-。
L1代表式–(Alk1)x-(Q)y-(Het)w-(Alk2)z-或–(Alk1)x-(Het)w-(Q)y-(Alk2)z-的二价基团。
优选地，Q代表未取代的或被1、2或3个取代基取代的苯基或5至6元杂环基基团，该取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。优选地，Q是未取代的苯基，优选是未取代的1,4-亚苯基。
优选地，Alk1和Alk2独立地代表未取代的或被1、2或3个取代基取代的C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或C2-3亚炔基基团，该取代基相同或不同且选自卤素原子和C1-2烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。更优选地，Alk1和Alk2独立地代表未取代的C1-3亚烷基。
优选地，Het是–O-或-NR7-，优选地其中R7是氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。更优选地，Het是–O-。
在一个实施方式中，y和w各是1且x和z中至少一个是1，例如L1是–Alk1-Het-Q-或–Q-Het-Alk2-。优选地，Q代表上文所述苯基或5至6元杂环基基团，优选是未取代的苯基，优选是未取代的1,4-亚苯基；Alk1和Alk2独立地代表上文所述C1-3亚烷基、C2-3亚烯基或C2-3亚炔基基团，优选是未取代的C1-3亚烷基；且Het代表上文所述–O-或-NR7-，优选是–O-。
在一个优选实施方式中，x和z中至少一个是1，y和w各是0且Alk1和Alk2独立地代表未取代的C1-3亚烷基。在另一个优选实施方式中，x、y和z各是0。
在一些实施方式中，Y1可优选代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。更优选地，Y1优选代表键或-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，优选代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。
在一个实施方式中，[接头]代表-(CH2)m-X1-(Alk1)x-Y1，其中m、x、X1、Y1和Alk1如本文所定义。优选地，Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团，X1和Y1独立地代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。更优选地，X1代表键或-C(＝O)-且Y1代表键或-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，优选氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。最优选地，[接头]基团是-(CH2)v-、-C(＝O)NR7-、-CH2NR7-、-CH2C(＝O)NR7-和-C(＝O)-，其中v是1或2且R7代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。
在一个实施方式中，R代表式(X)的基团。当R是(X)时，[接头]不通过[接头]部分的O、S或N原子与(X)相连。因此，当R是(X)且x、y和z各是0时，X1和Y1优选独立地选自键、-C(＝O)-、-OC(＝O)-和-NR5C(＝O)-，其中R5是氢或C1-6烷基；或者当R是(X)且x、y和z中至少一个是1时，Y1优选选自键、-C(＝O)-、-OC(＝O)-和-NR5C(＝O)-，且X1优选选自键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。优选地，当R是(X)时，[接头]是-(CH2)m-X1-(Alk1)-或-(CH2)v-，其中v是1或2，m是0、1、2或3；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团且X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。最优选地，当R是(X)时，[接头]是基团-(CH2)v-，其中v是1或2。
在另一个实施方式中，R代表式(Y1)的基团：
其中环D是环中具有至少两个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的氮原子。
当R是(Y1)时，[接头]优选不通过[接头]部分的O、S或N原子与(Y1)相连。因此，当R是(Y1)且x、y和z各是0时，X1和Y1优选选自键、-C(＝O)-、-OC(＝O)-和-NR5C(＝O)-，其中R5是氢或C1-6烷基；或者当R是(Y1)且x、y和z中至少一个是1时，Y1优选选自键、-C(＝O)-、-OC(＝O)-和-NR5C(＝O)-，且X1优选选自键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。优选地，当R是(Y1)时，[接头]是-(CH2)m-X1-(Alk1)x-或-(CH2)v-，其中v是1或2，m是0、1、2或3；x是0或1；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团；且X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，当x是0时，X1是键或C(＝O)。更优选地，[接头]基团是-(CH2)v-和-C(＝O)-，其中v是1或2。
优选地，式(Y1)的基团是式(Y1′)的基团：
在另一个实施方式中，R代表式(Y2)的基团：
其中环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的碳原子。
通常，当R是Y2时，环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的碳原子，前提是D不是吡咯烷基基团。例如，D可以是吡咯基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吗啉基、哌嗪基基团，例如哌啶基或哌嗪基基团，例如哌嗪基基团。
当R是(Y2)时，[接头]中的Y1优选代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。更优选地，Y1代表键或-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，优选代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。当R是(Y2)时，[接头]优选通过[接头]部分的N原子与(Y2)相连。因此，当R是(Y2)时，Y1优选是-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，优选代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。
因此，当R是(Y2)时，[接头]通常代表-(CH2)m-X1-(Alk1)x-Y1-，其中m是0、1、2或3；x是0或1；X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，优选是键或-C(＝O)，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团；且Y1是键或-NR7-，优选是-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。更优选地，[接头]基团是-C(＝O)NR7-、-CH2NR7-、-CH2CH2NR7-、NR7-和-CH2C(＝O)NR7-，其中R7代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。
优选地，式(Y2)的基团是式(Y2′)的基团：
优选在上式中
R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中
(i)R15是氢、氟或可选取代的C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-或C2-3烯基-(Z1)a-[C1-3烷基]b-，其中a和b独立地是0或1，且Z1是–O-、-S-、或–NR18-，其中R18是氢或C1-3烷基；且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；
(ii)R15是氢或可选取代的R19R20N-C1-3烷基，其中R19是氢或C1-3烷基且R20是氢或C1-3烷基；或者R19和R20与其连接的氮一起形成可选取代的5或6个环原子的单环杂环或8至10个环原子的双环杂环，且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基；或者
(iii)R15和R16与其连接的碳一起形成可选取代的3至7个环原子的单环碳环或8至10个环原子的双环碳环系统，且R17是氢；或者
(iv)R15和R16与其连接的碳一起形成可选取代的3至7个环原子的单环杂环，其中至少一个环原子选自–O-、-S-或–NR18-，其中R18是氢或C1-3烷基或8至10个环原子的双环杂环系统，其中至少一个环原子选自–O-、-S-或–NR18-，其中R18是氢或C1-3烷基且R17是氢。
在这些种类中，R14可以是例如甲基、乙基、正丙基或异丙基、正丁基、仲丁基或叔丁基、二甲基丙基、戊基、环戊基、甲基取代的环戊基、环戊基甲基、环己基、N-甲基哌啶-4-基、N-甲基吡咯烷-3-基、四氢呋喃-3-基、甲氧基乙基、茚满基、降冰片烷基、二甲基氨基乙基或吗啉基乙基。
在一个实施方式中，R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢。R14处优选是环戊基和叔丁基。
优选地，R9和R10相同或不同且各自代表天然氨基酸的侧链或者：
(i)氢原子；
(ii)C1-6烷基；
(iii)R9和R10与其连接的碳一起形成3至6元饱和的螺环烷基环；
(iv)基团–L2-B1，其中L2代表键或C1-6亚烷基基团
且B1代表C6-10芳基或5至10元杂芳基基团；或者
(v)选自吲哚-3-基甲基、-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-CH2CONH2、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、环己基、环己基甲基和1-苄硫基-1-甲基乙基的基团；
-(ii)中的所述C1-6烷基基团是未取代的或被1或2个取代基取代，所述取代基相同或不同且代表卤素、C1-4烷氧基、C1-2卤代烷基、羟基、-COOR3、-COONR3R4、-SR3和-NR3R4，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；
-(iv)中的所述C1-6亚烷基基团是未取代的或被1、2或3个未取代的取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和C1-4烷氧基、羟基、C1-2卤代烷基和-NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；且
-(iv)中的所述C6-10芳基或5至10元杂芳基基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。
更优选地，R9和R10独立地代表氢原子；未取代的或被1或2个取代基取代的C1-6烷基基团相同或不同且代表卤素、C1-4烷氧基、羟基、-COOR3、-COONR3R4、-SR3和–NR3R4，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；R9和R10与其连接的碳一起形成3至6元饱和螺环烷基环；或式–L2-B1的基团，其中L2是键或未取代的C1-4亚烷基基团且B1代表苯基或者未取代的或被1、2或3个未取代的取代基取代的5至10元杂芳基基团，所述取代基相同或不同且代表卤素原子、C1-4烷基、C1-2烷氧基、C1-2烷硫基和羟基。优选地，(i)R9和R10是天然氨基酸的侧链，(ii)R9和R10之一是氢或未取代的C1-4烷基且另一个是未取代的C1-6烷基或被C1-4烷氧基取代的C1-6烷基，或者(iii)R9和R10与其连接的碳一起形成饱和螺环丁基环。优选(ii)或(iii)。
优选地，R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基，优选是氢原子。
在本发明的优选实施方式中，提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物，其中：
-环A代表苯基或5至6元杂环基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；
-R1和R2各代表氢；
-n是1；
-X是NH；
-V是–N＝；
-W是–C(Z)＝，其中Z代表氢、氟、氯或未取代的C1-3烷基，优选是氢；且
-环B代表苯基或5至6元杂环基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。
在本发明的该实施方式中，基团[接头]-R优选对应于下列(a)至(c)之一：
(a)R代表式(X)的基团；
R8如下所示；
R9和R10是天然氨基酸的侧链，R9和R10之一是氢或未取代的C1-4烷基且另一个是未取代的C1-6烷基或被C1-4烷氧基取代的C1-6烷基，或者R9和R10与其连接的碳一起形成饱和螺环丁基环；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基；
[接头]代表-(CH2)m-X1-(Alk1)-或-(CH2)v-，其中v是1或2，m是0、1、2或3；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团且X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。
(b)R代表式(Y1)的基团；
R8如下所示；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基。
[接头]是-(CH2)m-X1-(Alk1)x-或-(CH2)v-，其中v是1或2，m是0、1、2或3；x是0或1；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团且X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，当x是0时X1是键或C(＝O)。
(c)R代表式(Y2)的基团；
R8如下所示；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基。
[接头]代表-(CH2)m-X1-(Alk1)x-Y1，其中m是0、1、2或3；x是0或1；X1是键或-C(＝O)；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团；且Y1是键或-NR7-，优选是-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。
通常，在该实施方式中，当R是Y2时，环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的碳原子，前提是D不是吡咯烷基基团。例如，D可以是吡咯基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吗啉基、哌嗪基基团，例如哌啶基或哌嗪基基团，例如哌嗪基基团。
在该实施方式中，优选地，环B代表1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团或吡啶基基团，特别是1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。例如，环B可代表未取代的或被1、2或3个取代基取代的1,4-亚苯基或1,3-亚苯基基团，所述取代基相同或不同且选自氟、氯、甲基和乙基。
在上述(a)至(c)的每一个中，R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢。
优选地，基团[接头]-R对应于上述(b)或(c)。
更优选地，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物，其中：
-环A代表苯基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基；
-R1和R2各代表氢；
-n是1；
-X是NH；
-V是–N＝；
-W是–C(H)＝；且
-环B代表1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团、1,3-吡唑基基团或吡啶基基团，特别是1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团或1,3-吡唑基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。
在本发明的该实施方式中，基团[接头]-R优选对应于上述(a)至(c)之一，优选(b)或(c)。更优选地，基团[接头]-R对应于下列(a’)、(b’)或(c’)。
(a’)R代表式(X)的基团；
R8如下所示；
R9和R10之一是氢或未取代的C1-4烷基且另一个是未取代的C1-6烷基；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基。
[接头]代表-(CH2)v-，其中v是1或2。
(b’)R代表式(Y1′)的基团；
R8如下所示；
[接头]是-(CH2)v-或-C(＝O)-，其中v是1或2。
(c’)R代表式(Y2)的基团；
R8如下所示；
[接头]是-C(＝O)NR7-、-CH2NR7-或-CH2C(＝O)NR7-，其中R7代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。
通常，在该实施方式中，当R是Y2时，环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的碳原子，前提是D不是吡咯烷基基团。例如，D可以是吡咯基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吗啉基、哌嗪基基团，例如哌啶基或哌嗪基基团，例如哌嗪基基团。
在该实施方式中，优选地，环B代表1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团或吡啶基基团，特别是1,4-亚苯基基团、1,3-亚苯基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个取代基取代，所述取代基相同或不同且选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同且代表氢或未取代的C1-2烷基。例如，环B可代表未取代的或被1、2或3个取代基取代的1,4-亚苯基或1,3-亚苯基基团，所述取代基相同或不同且选自氟、氯、甲基和乙基。
在上述(a’)至(c’)的每一个中，R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢。优选地，R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是环戊基或叔丁基。
优选地，基团[接头]-R对应于上述(b’)或(c’)。
特别优选的本发明的化合物是：
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
(2S)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
(2R)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
(2R)-4-[乙酰基(4-{5-氨基-6-[(2,6--二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
(2R)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
1-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]环丁烷基羧酸环戊酯
N-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯
(2S)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-乙基苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
用途
如上文所述，本发明所涉及的化合物是CSF-1R激酶的抑制剂，及其在治疗多种疾病中的用途。因此，本发明提供了用于人体或动物体的治疗方法的本文所定义的化合物。
具体而言，本发明提供了用于治疗CSF-1R激酶介导的疾病或病症的本文所定义的化合物，所述疾病和病症包括细胞增殖疾病(如癌症和银屑病)、聚谷胺酰胺疾病(如亨廷顿病)、神经退行性疾病(如阿尔茨海默病)、自身免疫疾病(如类风湿性关节炎)、糖尿病、血液疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化和感染的炎性后遗症。
本发明还提供了一种治疗或预防对象中CSF-1R激酶介导的疾病或病症的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的本文所定义的化合物，以及本文所定义的化合物在制造用于治疗或预防CSF-1R激酶介导的疾病或病症的药物中的用途。具体而言，提供了一种治疗或预防以下疾病的方法：细胞增殖疾病(如癌症和银屑病)、聚谷胺酰胺疾病(如亨廷顿病)、神经退行性疾病(如阿尔茨海默病)、自身免疫疾病(如类风湿性关节炎)、糖尿病、血液疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化和感染的炎性后遗症，治疗方法为给予有效量的本文所定义的式(I)的化合物。还提供了本文所定义的式(I)的化合物在制造治疗或预防以下疾病的药物中的用途：细胞增殖疾病(如癌症和银屑病)、聚谷胺酰胺疾病(如亨廷顿病)、神经退行性疾病(如阿尔茨海默病)、自身免疫疾病(如类风湿性关节炎)、糖尿病、血液疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化和感染的炎性后遗症。
自身免疫疾病通常有炎性成分。这类病症包括急性播散性普秃、ANCA阳性疾病、贝切特病、美洲锥虫病(Chagas’disease)、慢性疲劳综合征、家族性自主神经异常、脑脊髓炎、强直性脊柱炎、再生障碍性贫血、化脓性汗腺炎、自体免疫肝炎、自体免疫卵巢炎、乳糜泻、炎性肠病、克罗恩氏病、1型糖尿病、范可尼综合征、巨细胞性动脉炎、急性肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、格雷夫症、格-巴二氏综合征、桥本氏疾病、亨-舒综合征、川崎病、系统性红斑狼疮、显微结肠炎、显微镜下多动脉炎、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、阵挛肌阵挛综合征、视神经炎、奥德甲状腺炎(Ord’s thyroiditis)、天疱疮、结节性多动脉炎、多肌痛、类风湿性关节炎、莱特尔综合征、舍格伦综合征、颞动脉炎、韦格纳肉芽肿病、温暖自体免疫溶血性贫血、间质性膀胱炎、莱姆病、硬斑病、牛皮癣、结节病、硬皮病、溃疡性结肠炎和白癜风。
可用本发明化合物治疗的其他炎性病症包括例如阑尾炎、皮炎、皮肌炎、心内膜炎、纤维组织炎、牙龈炎、舌炎、肝炎、化脓性汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳腺炎、心肌炎、肾炎、中耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心外膜炎、腹膜炎(peritonoitis)、咽炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、肾盂肾炎、和口腔炎、移植物排斥(涉及器官如肾、肝、心、肺、胰腺(如胰岛细胞)、骨髓、角膜、小肠、皮肤同种异体移植物(allograft)、皮肤自体移植物(homograft)和心脏瓣膜异种移植物(xengraft)、血清病以及移植物抗宿主病)、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、急性呼吸窘迫综合征、赛塞里综合征(Sexary syndrome)、先天性肾上腺增生、非化脓性甲状腺炎、癌相关高钙血症、天疱疮、大泡疱疹样皮炎、重症多形红斑、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、季节性和常年性变应性鼻炎、支气管哮喘、接触性皮炎、特应性皮炎、药物超敏反应、变应性结膜炎、角膜炎、眼带状疱疹、虹膜炎和虹膜睫状体炎、脉络膜视网膜炎、视神经炎、症状性结节病(symptomaticsarcoidosis)、暴发性或播散性肺结核化疗、成人特发性血小板减少性紫癜、成年继发性血小板减少症、获得性(自体免疫)溶血性贫血、成人白血病和淋巴瘤、儿童急性白血病、局限性肠炎、自体免疫血管炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺病、实体器官移植排斥、败血症、原发性胆汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎。
使用本发明化合物的优选治疗包括对类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、1型糖尿病、哮喘、炎性肠病、系统性红斑狼疮，和伴随感染病情的炎症(如败血症)、牛皮癣、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、慢性阻塞性肺病、多发性硬化、特应性皮炎和移植物抗宿主病的治疗。
本发明化合物的另一个优选用途是在癌症治疗过程中。
本发明还提供了包含上文所定义式(I)的化合物和一种或多种药学上可接受的运载体和/或赋形剂的药物组合物。
应理解，针对任何特定对象的具体剂量水平取决于各种因素，包括所采用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康情况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度、药物组合以及正在治疗的特定疾病的严重程度。通过临床试验确定最佳剂量水平和给药频率。然而，预期典型剂量在约0.001-50mg/kg体重的范围内。
可制备本发明涉及的化合物用于通过与其药代动力学性质相一致的任何途径进行给药。可口服给药的组合物可以是片剂、胶囊剂、粉末剂、颗粒剂、锭剂、液体或凝胶制剂的形式，例如口服、局部或无菌的胃肠外溶液或悬浮液。口服给药的片剂和胶囊可以是单位剂量形式，并且可含有常规的赋形剂，例如粘合剂(如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮)、填充剂(如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸)、压片润滑剂(如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅)、崩解剂(如马铃薯淀粉)或者可接受的湿润剂(如十二烷基硫酸钠)。可按照常规药学实践中熟知的方法对片剂进行包衣。口服液体制剂可以是例如水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或者可以是临用前用水或其他合适载剂重建的干燥产品。这类液体制剂可含有常规的添加剂，例如助悬剂(如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶、氢化食用油)、乳化剂(如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶)、非水性载剂(可包括食用油，如杏仁油、分馏椰子油，油酯(如甘油)、丙二醇或乙醇)、防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或者山梨酸)，需要时还可含有常规的调味剂或着色剂。
对于在皮肤上局部的施用而言，可将药物制成乳膏剂、洗剂或油膏剂。可用于该药物乳膏剂或油膏剂的制剂是本领域熟知的常规制剂，例如药剂学标准教科书如英国药典(British Pharmacopoeia)所述。
对通过吸入的局部应用而言，可将药物制成气雾剂递送(例如通过压力驱动喷射雾化器或超声雾化器)，或优选通过推进剂驱动定量气雾剂或无推进剂情况下给予微粉化粉末(例如吸入胶囊或其他“干粉”递送系统)。这类吸入制剂中可含有赋形剂，例如推进剂(如定量气雾剂情况下的氟利根(Frigen))、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂和填料(如粉末吸入器情况下的乳糖)。为了吸入的目的，可使用多种能生成和给予具有最佳颗粒尺寸的气雾剂的仪器，使用对患者合适的吸入技术。对定量气雾剂特别是粉末吸入器而言，除了使用衔接子(间隔子、扩展子)和梨形容器(如 )和发射喷药器(puffer)喷雾的自动装置外，还可使用多种技术方法(如或吸入器，例如欧洲专利申请EP 0 505 321所述)。
对眼睛的局部应用而言，可将药物制成合适的无菌水性或非水性载剂中的溶液或悬浮液。还可包括添加剂，例如缓冲剂(如焦亚硫酸钠或依地酸二钠(disodium edeate))、防腐剂(包括杀菌和杀真菌剂如(苯基汞乙酸盐或硝酸盐、苯扎氯铵或氯己定))和增稠剂(如羟丙甲纤维素)。
也可以在无菌介质中经胃肠外途径给予活性成分。根据所用的载剂和浓度，可将药物悬浮或溶解于载剂中。优选地，可将佐剂(如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂)溶解于载剂中。
本发明的化合物可以部分药物组合物的形式给予，所述组合物包含本发明的化合物和第二抑制剂。如果以部分药物组合物的形式给予，可同时给予或以任何方式分开依次给予治疗有效量的化合物。所述化合物是否以相同剂型给予并不重要，例如一种化合物可以局部给予而另一种化合物可以口服给予。给予治疗有效量的抑制剂组合优于给予单个抑制剂，原因在于与单独给予治疗有效量的组分化合物相比，组合可提供一种或多种以下改进的性质：i)比多数活性单个试剂更好的治疗效果，ii)协同的或高度协同的活性，iii)使副作用降低的给药方案，iv)毒性作用的降低，v)治疗窗口的增加或vi)一种或多种组分化合物的生物利用度的增加。
合适的药物组合的示例包括本发明的化合物与mTor抑制剂、B-Raf抑制剂、AKT抑制剂或PI3激酶抑制剂的组合。
合成
有用于合成本发明涉及的化合物(I)的多种合成策略，但是所有的路线都依赖于合成有机化学家已知的化学反应。因此，式(I)的化合物能根据标准文献所述方法进行合成，并且为本领域技术人员熟知。典型的文献来源有“Advanced organic chemistry(《高等有机化学》)”，第4版(威利出版社(Wiley))，J March，“Comprehensive Organic Transformation(《综合有机转化》)”，第2版(威利出版社)，R.C.Larock，“Handbook of Heterocyclic Chemistry(《杂环化学手册》)”，第2版(培格曼出版社(Pergamon))，A.R.Katritzky，综述文章，如参见“Synthesis”、“Acc.Chem.Res.”、“Chem.Rev”或者由在线标准文献搜索识别的一级文献来源，或者来自二级来源如“ChemicalAbstracts”或“Beilstein”。
本发明的化合物可以通过多种下文中一般描述且在下文实施例中更特定描述的方法制备。在下述反应中，可能需要保护在终产品中需要的活性官能团如羟基、氨基和羧基，以避免其不需要地参与到反应中[参见例如Greene,T.W.，“Protecting Groups in Organic Synthesis(《有机合成中的保护基团》)”，约翰韦利父子公司(John Wiley and Sons)，1999]。常规的保护基团可与标准实践联用。在一些示例中，去保护可以是通式(I)的化合物合成的最终步骤，并且应理解可将下文所述发明中的方法扩展至这类保护基团的移除。
下文中详细描述的方案显示了用于合成式(I)的化合物的通用方案。应理解，与方案中罗马数字对应的化合物不对应于本发明其他部分中使用的权利要求书中所要求的化合物的罗马数字。
通式(VII)的化合物可通过(但不限于)方案A中所列反应来制备。
式(II)的化合物2-氨基吡嗪是市售可得的。
可通过在0℃的温度下在合适溶剂(如DCM)中与溴化剂(如N-溴代琥珀酰亚胺)反应将2-氨基吡嗪转化为式(III)的化合物。
式(IV)的化合物可获自式(III)的化合物，方法为使用苄基胺通过攻击进行选择性亲核芳族取代。可在150℃的温度和微波辐射下，在合适溶剂(如正丁醇)中并在碱(如DIPEA)存在的情况下进行该反应。
可使用铃木偶联条件通过与合适的芳族硼酸酯或酸反应由式(IV)的化合物获得式(V)的化合物。所述铃木偶联可在80℃的温度下，在催化剂(如二氯双(三苯基膦)钯(II))、碱(如Na2CO3)存在的情况下并在溶剂(如DME)中进行。本领域技术人员应理解，多种经取代的杂环和经取代的芳族硼酸酯和酸可在铃木偶联条件下与式(IV)的化合物反应以合成式(V)的化合物的环B类似物。
可在从室温至回流的温度范围下在溶剂(如乙醇、甲醇或THF)和水中与碱(如氢氧化锂或氢氧化钠)反应由式(V)的化合物获得式(VI)的化合物。
可在室温下在非质子溶剂(如N,N二甲基甲酰胺)中在N-羟基苯并三唑存在情况下使用适当的氨基官能团和合适的偶联剂(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)处理式(VI)的化合物。
通式(IX)的化合物可通过(但不限于)方案B中所列反应来制备。
可使用制备式(V)的化合物所述的条件(方案A)将式(IV)的化合物转化为式(VIII)的化合物。
可在合适溶剂(如DCE)中使用适当还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)通过合适的胺在还原性胺化条件下由式(VIII)的化合物制备式(IX)的化合物。
在上述方案A和B中，可通过本领域技术人员已知的用于保护氨基的适当方法首先保护式(VI)的化合物中的氨基。合适的用于氨基的保护基团是(但不限于)例如酰基、烷酰基(如乙酰基)、烷氧基羰基(如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基)、芳基甲氧基羰基(如苄氧基羰基)或芳酰基(如苯甲酰基)。随后，反应的最终阶段可以是使用必须的去保护条件进行氨基去保护，所需去保护条件因保护基团的选择而异。因此，例如，可通过使用合适的碱(如碱金属氢氧化物(如氢氧化锂或氢氧化钠))进行水解来移除酰基(如烷酰基)、烷氧基羰基或芳酰基。或者，可通过例如与合适的酸(如盐酸、硫酸或三氟乙酸)反应以移除酰基(如叔丁氧基羰基)并可通过例如在催化剂(如钯碳(palladium on carbon))上进行氢化来移除芳基甲氧基羰基(如苄氧基羰基)。
通式(X)和(XI)的化合物可通过(但不限于)方案C中所列反应来制备。
当R＝NHY2’时，可使用制备式(IX)的化合物所述的条件(方案B)在添加或不添加酸(如乙酸)的情况下将式(IX)的化合物转化为式(X)的化合物。或者，当R＝NHY2’时，可通过形成酰胺键将式(IX)的化合物转化为式(XI)的化合物，具体方法为在0℃至室温的温度范围内在合适的溶剂(如DCM)中与酰基氯进行反应。
通式(XVI)的化合物可通过(但不限于)方案D中所列反应来制备。
可通过本领域技术人员已知的用于保护氨基的适当方法将式(IV)的化合物转化为式(XII)的化合物。合适的保护基团(Pg)是上文描述的那些。
可使用制备式(V)的化合物所述的条件(方案A)由式(XII)的化合物获得式(XIII)的化合物。可在适当溶剂(如DCM)中使用氧化剂(如戴斯-马丁氧化剂)通过氧化将式(XIII)的化合物转化为式(XIV)的化合物。或者，可使用制备式(V)的化合物所述的条件(方案A)通过与适当的经取代的硼酸或酯进行反应由式(XII)的化合物直接获得式(XIV)的化合物。
可使用制备式(IX)的化合物所述的条件(方案B)通过还原性胺化由式(XIV)的化合物制备式(XV)的化合物。
可使用必要的因保护基团的选择而异的去保护条件(例如使用上述方法之一)通过式(XV)的化合物的氨基去保护制备式(XVI)的化合物。
式(VII)、(IX)或(XVI)的化合物(其中R是Y1′或NR7Y2′/NHY2′)可通过以下方法形成：(i)分别根据方案A、B和D将式(VI)、(VIII)或(XIV)的化合物与氨基官能团(其中环氮原子被基团R′取代，例如叔丁氧基羰基)反应，以及(ii)使用合适的酸(盐酸或三氟乙酸)处理所得化合物。
下面描述了用于说明本发明的多个实施例。在多数情况下，也可使用替代性技术。在以下实施例中，应理解使用或建议的溶剂和试剂是非限制性的并可使用本领域技术人员已知的溶剂和试剂进行适当地取代。可通过本领域已知方法分离反应产物，例如使用合适的溶剂萃取、由合适的溶剂进行沉淀、使用合适的溶剂系统进行层析(包括硅胶柱色谱、HPLC等)。
本发明的化合物可以通过多种上文中一般描述且在下文实施例中更具体描述的方法合成。因此，通式(I)的化合物可通过(但不限于)方案1-30中所列方法制备。
实施例
缩写
Boc＝叔丁氧基羰基
Cs2CO3＝碳酸铯
DCE＝1,2-二氯乙烷
DCM＝二氯甲烷
DIPEA＝二异丙基乙胺
DMAP＝二甲基氨基吡啶
DMF＝二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲亚砜
EDC＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EtOAc＝乙酸乙酯
HCl＝盐酸
HOBt＝1-羟基苯并三唑
HPLC＝高效液相色谱
KOAc＝乙酸钾
LCMS＝高效液相色谱/质谱
MeCN＝乙腈
MeOH＝甲醇
MgSO4＝硫酸镁
Na2CO3＝碳酸钠
NaHCO3＝碳酸氢钠
NaOH＝氢氧化钠
NMR＝核磁共振
PdCl2(dppf)2＝二氯化1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)
ppm＝百万分率
RT＝室温
STAB＝三乙酰氧基硼氢化钠
TBME＝叔丁基甲基醚
THF＝四氢呋喃
hrs＝小时
mins＝分钟
g＝克
mg＝毫克
L＝升
mL＝毫升
μL＝微升
mol＝摩尔
mmol＝毫摩尔
sat＝饱和的
市售可得的试剂和溶剂(HPLC级)不需进一步纯化即可使用。溶剂使用Buchi旋转蒸发仪除去。使用Biotage InitiatorTM8微波合成仪进行微波辐射。使用获自Fluorochem的硅凝胶、粒度40–63μm(230-400网)通过快速色谱柱进行化合物纯化。在配备Telos、或GraceResolv导管的或系统上进行自动快速柱色谱。使用下文所述梯度法使用反向Waters XSelect C18柱(5u,50x 19mm)在吉尔森(Gilson)系统上通过制备型HPLC对化合物进行纯化。
10分钟内梯度10-100％B(A＝水/0.1％甲酸，B＝乙腈)，流速20mL/分钟，在254nm下进行UV检测。或者，可使用水性缓冲盐中(NH4)2CO3的代替甲酸。
在氘代溶剂中于Bruker 300MHz AV光谱仪上记录1H NMR光谱。化学位移(δ)以百万分之计。用Kieselgel 60F254(默克公司(Merck))板进行薄层色谱(TLC)分析和用UV光观察。
在Agilent HP1100LC系统上进行分析型HPLC/MS，使用反相Luna C18柱(3μm,50x 4.6mm)，2.25分钟内梯度5-95％B(A＝水+0.1％甲酸,B＝乙腈+0.1％甲酸)，流速＝2.25mL/分钟。使用G1315B DAD检测器在220和254nm记录UV光谱。在LC/MSD SL G1956B检测器上于范围m/z 150–800内获得质谱。使用ChemStation和ChemStation数据浏览器(Data Browser)软件对数据进行积分运算和报告。
中间体
中间体1：5-溴-N3-(2,6-二氯苄基)吡嗪-2,3-二胺
使用方案1所示途径合成5-溴-N3-(2,6-二氯苄基)吡嗪-2,3-二胺。
阶段1. 3,5-二溴吡嗪-2-胺
在0℃下向氨基吡嗪(11.36g,0.12mol)的DCM溶液(700mL)中逐部分加入N-溴代琥珀酰亚胺(44.64g,0.25mol)。将反应物搅拌2小时。对反应物使用饱和Na2CO3(3x 200mL)清洗，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，之后通过柱色谱(20％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到黄色固体状的标题化合物(15.9g,53％)。
LCMS:m/z 252/254/256[M+H]+.
阶段2. 5-溴-N3-(2,6-二氯苄基)吡嗪-2,3-二胺
向3,5-二溴吡嗪-2-胺(5.01g,19.8mmol)的正丁醇(5mL)溶液中加入2,6-二氯苄胺(10.47g,59.4mmol)和DIPEA(3.8mL,21.8mmol)。使用微波炉将反应物在150℃下加热4小时。将反应物倒在EtOAc(100mL)上并用水(50mL)、盐水(50mL)清洗，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。使用庚烷研磨所得固体，随后加入DCM(40mL)并将悬浮液剧烈搅拌15分钟。通过过滤收集固体以得到灰白色固体状的标题化合物(5.14g,75％)。
LCMS:m/z 347/349/381[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:7.45-7.43(2H,m),7.32(1H,dd,J＝7.2,8.9Hz),7.21(1H,s),4.81(2H,s).
中间体2：5-溴-N3-(2,6-二氟苄基)吡嗪-2,3-二胺
以类似于中间体1的方式合成5-溴-N3-(2,6-二氟苄基)吡嗪-2,3-二胺，其中使用2,6-二氟苄胺作为方案1所示途径的阶段2中的反应物。使用庚烷中的EtOAc(梯度0-40％)通过自动柱色谱纯化产物。
LCMS:m/z 315/317[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:7.49(1H,s),7.4-7.2(1H,m),7.07-6.85(2H,m),4.71(2H,d,J＝1.8Hz),4.70-4.55(1H,m),4.30(2H,br,s).
中间体3：5-溴-N3-(2-氯-6-氟苄基)吡嗪-2,3-二胺
以类似于中间体1的方式合成5-溴-N3-(2-氯-6-氟苄基)吡嗪-2,3-二胺，其中使用2-氟-6-氟苄胺作为方案1所示途径的阶段2中的反应物。使用庚烷中的EtOAc(梯度0-70％)通过自动柱色谱纯化产物。
LCMS:m/z 331/333[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:7.6-7.47(1H,m),7.42-7.17(2H,m),7.15-6.95(1H,m),4.78(2H,dd,J＝1.8,0.5Hz),4.63-4.95(1H,m),4.06(2H,br,s).
中间体4：{5-溴-3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
通过方案2所示途径制备{5-溴-3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯。
阶段1：{5-溴-3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
在60℃下向中间体1(3.76g,10.8mmol)的DCE(60mL)溶液中加入DMAP(0.13g,1.08mmol)，随后加入溶解在DCE(5mL)中的二碳酸二叔丁酯(14.1g,65.0mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌4小时以使反应完全。将反应冷却至室温，随后加入水(60mL)。分离有机层并且用DCM(2x 60mL)萃取水层。合并的有机物使用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到橙色油状物质，对该物质使用柱色谱(10％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到黄色固体状的标题化合物(3.98g,57％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.40(1H,s),7.32(1H,m),7.29(1H,s),7.18(1H,dd,J＝8.7,6.9Hz),5.12(2H,s),1.56(18H,s),1.47(9H,s).
中间体5：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛
通过下文方案3中所示途径制备3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛。
阶段1. 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛
向3-甲酰基苯基硼酸(5g,33mmol)的无水THF(50mL)溶液中加入频哪醇(4.34g,37mmol)。使反应混合物在室温和氮气下搅拌18小时，之后真空浓缩。将粗残留物溶解在DCM(150mL)中并使用水(3x 100mL)清洗。有机层用MgSO4干燥并真空蒸发以得到黄色油状的标题化合物(7.73g,100％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:10.06(1H,s),8.31(1H,s),8.07(1H,d,J＝7.4Hz),7.99(1H,dt,J＝1.5,7.4Hz),7.54(1H,t,J＝7.4Hz),1.38(12H,s).
中间体6：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛
以类似于中间体5的方式合成4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛，其中使用(4-甲酰基苯基)硼酸作为方案3中的起始材料。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:10.06(1H,s),7.97(2H,d,J＝8.1Hz),7.87(2H,d,J＝8.1Hz),1.37(12H,s).
中间体7：2-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛
以类似于中间体5的方式合成2-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛，其中使用3-乙基-4-甲酰基苯基硼酸作为方案3中的起始材料。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:10.34(1H,s),7.85-7.74(3H,m),3.09(2H,q,J＝7.5Hz),1.38(12H,s),1.29(3H,t,J＝7.5Hz).
中间体8：2-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙醇
通过下文方案4中所示途径制备2-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙醇。
阶段1：2-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙醇
向2-(3-溴苯基)-乙醇(3.0g,15mmol)的无水DMSO(30mL)溶液中加入KOAc(4.39g,45mmol)、双(频哪醇合)二硼(5.68g,22mmol)和PdCl2(dppf)2(0.61g,0.74mmol)并将反应混合物在120℃和氮气气氛下加热18小时。将反应冷却至室温并加入EtOAc(60mL)。通过过滤反应混合物并使用EtOAc(500mL)清洗。用饱和NaHCO3(150mL)、水(150mL)、盐水(150mL)洗涤滤液，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过使用庚烷中EtOAc(梯度0-100％)的自动柱色谱并随后使用柱色谱(33％EtOAc/庚烷)对粗材料进行纯化以得到淡黄色油状的标题化合物(3.30g,89％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:7.70(2H,m),7.35(2H,m),3.89(2H,t,J＝6.6Hz),2.90(2H,t,J＝6.6Hz),1.51(1H,s),1.37(12H,s).
中间体9：2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛
以类似于中间体8的方式合成2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲醛，其中使用4-溴-2-甲基苯甲醛作为方案4中的起始材料。
LCMS:m/z 430.2[2M]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:10.32(1H,s),7.85-7.75(2H,m),7.72(1H,s),2.69(3H,s),1.38(12H,s).
中间体10：[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙酸甲酯
根据方案5中所示合成途径制备[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙酸甲酯。
向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(560mg,2.9mmol)的无水DMF(10mL)溶液中加入Cs2CO3(1.03g,3.16mmol)和溴乙酸甲酯(0.30mL,3.16mmol)并将反应在90℃和氮气气氛下搅拌18小时。使反应冷却，用EtOAc(50mL)稀释，用水(2x 25mL)、盐水(25mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱(50％EtOAc/庚烷)纯化粗材料以得到无色油状的标题化合物(360mg,47％)。
LCMS:m/z 267[M+H]+.
中间体11：2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙醇
以类似于中间体10的方式合成2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙醇，其中使用溴乙醇作为方案5中所示途径的起始材料。通过柱色谱(80-100％EtOAc/庚烷)纯化粗材料以得到无色油状的标题化合物(528mg,49％)。
LCMS:m/z 239[M+H]+.
中间体12：4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸
使用方案6中所示途径合成4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸。
阶段1. 4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸甲酯
向中间体1(3.82g,11.0mmol)的DME(75mL)溶液中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸甲酯(4.48g,16.5mmol)和2N Na2CO3(13.7mL,27.4mmol)并使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(385mg,0.5mmol)并将反应在80℃和氮气气氛下搅拌18小时。加入另一0.05当量的二氯双(三苯基膦)钯(II)(385mg,0.5mmol)并将反应在80℃和氮气气氛下搅拌24小时以使反应完全。反应混合物通过过滤并用EtOAc(2x 50mL)洗涤滤饼。对合并的滤液使用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，之后通过柱色谱(60％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到黄/绿色固体状的标题化合物(3.88g,88％)。
LCMS:m/z 403/405[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:8.09-8.02(4H,m),7.82(1H,s),7.47-7.44(2H,m),7.36-7.29(1H,m),5.00(2H,s),3.92(3H,s).
阶段2. 4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸
向4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸甲酯(2.31g,5.7mmol)的THF、MeOH和水的1:1:1混合物(30mL)的悬浮液中加入一水合氢氧化锂(1.20g,28.6mmol)。将反应在室温下搅拌20小时以使反应完全。减压去除溶剂并使粗残留物在水(100mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离水层并使用1N HCl酸化至pH3。通过过滤收集所得固体，用水清洗并在40℃下在真空箱中干燥以得到黄色固体状的标题化合物(1.43g,64％)。
LCMS:m/z 389/391[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)ppm:12.81(1H,br,s),8.07-8.04(2H,m),7.95-7.93(3H,m),7.56-7.54(2H,m),7.41(1H,dd,J＝7.2,8.9Hz),6.44(1H,t,J＝4.1Hz),6.40(2H,br s),4.83(2H,d,J＝4.1Hz).
中间体13：3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸
使用方案6中所示途径以类似于中间体12的方式合成3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酸，其中使中间体1与3-甲氧基羰基苯基硼酸频哪醇酯反应。
LCMS:m/z 389/391[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:8.68-8.55(1H,m),8.12-8.05(1H,m),7.95-7.85(1H,m),7.78(1H,m),7.77-7.37(3H,m),7.35-7.29(1H,m),5.04(2H,s).
中间体14：4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛
使用方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛，其中使中间体1与中间体6反应。
LCMS:m/z 373/375[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6,)ppm:9.99(1H,s),8.17(2H,d,J＝8.4Hz),9.01(1H,s),7.91(2H,d,J＝8.4Hz),7.57-7.54(2H,m),7.42(1H,dd,J＝7.1,8.6Hz),6.49(3H,br,s),4.85(2H,d,J＝4.1Hz).
中间体15：4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛
根据方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛，其中使中间体2与中间体6反应。
LCMS:m/z 341[M+H]+.
中间体16：4-{5-氨基-6-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛
根据方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成4-{5-氨基-6-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛，其中使中间体3与中间体6反应。
LCMS:m/z 357/359[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:10.08(1H,s),8.3-7.85(5H,m),4.95(2H,d J＝1.6Hz),4.90-4.7(1H,m),4.69-4.40(2H,m).
中间体17：4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苯甲醛
使用方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苯甲醛，其中使中间体1与3-氯-4-甲酰基苯基硼酸反应。
LCMS:m/z 407/409[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:10.51(1H,s),8.12-7.94(2H,m),7.9-7.8(1H,m),7.48-7.0(4H,m),5.03(2H,d,J＝1.6Hz).
中间体18：4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-甲基苯甲醛
根据方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-甲基苯甲醛，其中使中间体1与中间体9反应。
LCMS:m/z 387/389[M+H]+.
中间体19：4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-乙基苯甲醛
根据方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-乙基苯甲醛，其中使中间体1与中间体7反应。
LCMS:m/z 401/402[M+H]+.
中间体20：3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛
使用方案6中所示途径的阶段1以类似于中间体12的方式合成3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲醛，其中使中间体1与中间体5反应。
LCMS:m/z 373/375[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:10.13(1H,s),8.6-8.5(1H,m),8.33-8.2(1H,m),8.03(1H,m),7.95-7.85(1H,m),7.7-7.58(1H,m),7.49-73(3H,m),5.15-5.0(2H,m),4.6-4.4(1H,m),4.3-4.15(2H,m).
中间体21：{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[3-(2-氧代乙基)苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
如下文方案7所示合成{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[3-(2-氧代乙基)苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯。
阶段1：{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[3-(2-羟基乙基)苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
向中间体4(175mg,0.27mmol)的DME(2.6mL)溶液中加入中间体8(100mg,0.40mmol)和2N Na2CO3(0.34mL,0.67mmol)。使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(19mg,0.02mmol)并将反应在80℃和氮气下搅拌18小时以使反应完全。反应混合物通过过滤并用EtOAc(60mL)洗涤滤饼。对合并的滤液使用水(2x 30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，之后通过自动柱色谱(使用庚烷中EtOAc(梯度0-70％))进行纯化以得到白色固体状的标题化合物(192mg,103％)。
LCMS:m/z 695/697/699[M+Na]+.
阶段2：{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[3-(2-氧代乙基)苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
将{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[3-(2-羟基乙基)苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(169mg,0.25mmol)溶解在无水DCM(4mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(125mg,0.29mmol)。将反应混合物在室温和氮气下搅拌1.5小时。使用饱和NaHCO3(2mL)和饱和硫代硫酸钠溶液(2mL)淬灭反应并剧烈搅拌50分钟。分离水层并使用DCM(3x 10mL)洗涤。合并的有机层用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩以得到淡黄色油状的标题化合物(174mg,
>100％)。不对材料进行进一步纯化。
LCMS:m/z 709/711/713[M+H]+.
中间体22：(2R)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
通过方案8中所示途径合成(2R)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯。
阶段1.(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将(2R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代哌啶-2-羧酸(6g,24.7mmol)溶解在DCM(100mL)中并冷却至0℃。加入环戊醇(6.7mL,74mmol)、EDC(7.1g,37mmol)和DMAP(0.30g,2.5mmol)。使反应升温至室温并搅拌18小时。加入饱和Na2CO3并分离有机层。用DCM(3x 30mL)萃取水层并用Na2SO4干燥合并的有机层。真空去除溶剂并通过自动柱色谱(使用DCM中的EtOAc(梯度0-30％))纯化残留物以得到标题化合物(3.83g,97％)。
LCMS:m/z 334[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-(苄基氨基)哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(3.82g,12.3mmol)溶解在DCM(40mL)中并加入苄胺(1.4mL,12.9mmol)。向反应混合物中加入乙酸(0.84mL,14.7mmol)和STAB(3.9g,18.4mmol)并将反应在室温下搅拌1小时。用DCM(20mL)稀释混合物并加入饱和NaHCO3(100mL)。用DCM(2x50mL)萃取水层并对合并的有机层用MgSO4干燥，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用DCM中的EtOAc(梯度0-35％))进行纯化以得到无色油状的标题化合物(4.38g,84％)。
LCMS:m/z 403.2[M+H]+.
阶段3.(2R)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
在氮气气氛下将(2R)-4-(苄基氨基)哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(4.38g,10mmol)溶解在甲醇(40mL)中并加入10％Pd/C催化剂(1.4g)。将反应在氢气球下搅拌72小时以使反应完全。通过过滤溶液并将滤液蒸干以得到无色油状物质(3.7g,100％)。
LCMS:m/z 313[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.58(2H,br,s),5.3-5.2(1H,m),4.65-4.52(1H,m),4.0-3.6(2H,m),3.42-3.15(1H,m),2.43-1.52(12H,m),1.46(9H,s).
中间体23：(2S)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
以类似于中间体22的方式合成(2S)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯，其中使用(2S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代哌啶-2-羧酸作为方案8中的起始材料。
LCMS:m/z 313[M+H]+.
中间体24：(2R)-4-(甲基氨基)哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
以类似于中间体22的方式合成(2R)-4-(甲基氨基)哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯，其中在方案8中所示途径的阶段2处使用甲基苄胺。
LCMS:m/z 327[M+H]+.
中间体25：(2R)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
以类似于上述中间体22的方式合成(2R)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯，其中在方案8的阶段2处使用(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯起始。(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯的合成如下文方案9所示。
阶段1.(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
在氮气下将(2R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代哌啶-2-羧酸(10g,41.1mmol)溶解无水甲苯(100mL)中并加热至80℃。随后逐滴加热N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(33.4g,164mmol)并使反应在80℃下搅拌2小时。随后将反应混合物冷却至室温并加入EtOAc(150mL)和水(150mL)。使用EtOAc(2x 150mL)萃取水层并通过快速柱色谱(20％EtOAc/庚烷)纯化合并的有机层以得到标题化合物(8.82g,72％)。
LCMS:m/z 322[M+Na]+.
中间体26：(2S)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
以类似于上述中间体22的方式合成(2S)-4-氨基哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯，其中在方案8的阶段2处使用(2S)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯起始。以类似于方案9中所示(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯的方式合成(2S)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯。
LCMS:m/z 322[M+Na]+.
中间体27：(2R)-4-(甲基氨基)哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
以类似于中间体22的方式合成(2R)-4-(甲基氨基)哌啶-1,2-二羧酸二叔丁
酯，其中在方案8中所示的阶段2处使用(2R)-4-氧代哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯起始并与甲基苄胺反应。
LCMS:m/z 315[M+H]+.
中间体28：哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
使用方案10所示途径合成哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯。
阶段1：哌嗪-1,2,4-三羧酸4-苄基1-叔丁基2-环戊基酯
将4-[(苄氧基)羰基]-1-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-羧酸(9.96g,27mmol)溶解在DCM(50mL)中并冷却至0℃。随后加入环戊醇(7.4mL,82mmol)、EDC(7.86g,41mmol)和DMAP(0.33g,2.7mmol)并使反应升温至室温并搅拌24小时。然后加入水(100mL)和DCM(50mL)并分离各层。用DCM(2x 50mL)再萃取水层，并用MgSO4干燥合并的有机层并真空浓缩。通过柱色谱(40％EtOAc/庚烷)进行纯化以提供无色油状的标题化合物(10.4g,88％)。
LCMS:m/z 455[M+Na]+.
阶段2.哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将哌嗪-1,2,4-三羧酸4-苄基1-叔丁基2-环戊基酯(10.4g)溶解在EtOAc(100mL)中，并且用10％钯碳(2g,20％w/w)在氢气和大气压下搅拌18小时。随后通过过滤反应混合物，并且真空去除溶剂以得到白色固体状的标题化合物(6.62g,92％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:5.27(1H,m),4.50(1H,m),3.81(1H,m),3.50(1H,m),2.82-3.2(3H,m),2.72(1H,m),1.55-1.95(8H,br m),1.45(9H,s).
中间体29：(2S)-哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
以类似于中间体28的方式合成(2S)-哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯，其中使用(2S)-4-[(苄氧基)羰基]-1-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-羧酸作为方案10中的起始材料。
阶段1.(2S)-哌嗪-1,2,4-三羧酸4-苄基1-叔丁基2-环戊基酯
将(2S)-4-[(苄氧基)羰基]-1-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-羧酸(0.5g,1.37mmol)溶解在二甲基甲酰胺(7mL)中并冷却至0℃。边搅拌边加入环戊醇(0.25mL,2.74mmol)、EDC(0.395g,2.06mmol)和DMAP(0.017g,0.14mmol)。将反应升温至室温并搅拌23小时。使用水(40mL)淬灭反应并将产物萃取至EtOAc(3x 20mL)中。随后用水(2x 20mL)和盐水(20mL)洗涤合并的有机层，之后用MgSO4干燥。真空去除溶剂并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-60％))纯化残留物以得到标题化合物(0.345g,58％)。
LCMS:m/z 455[M+Na]+.
阶段2.(2S)-哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将(2S)-哌嗪-1,2,4-三羧酸4-苄基1-叔丁基2-环戊基酯(0.35g)溶解在EtOAc(5mL)中，并且用10％钯碳(0.069g,20％w/w)在氢气和大气压下搅拌16.5小时。然后通过过滤反应混合物，并真空去除溶剂以得到标题化合物(0.213g,90％)。
LCMS:m/z 299[M+H]+.
1H NMR(300MHz；CD3OD)δppm:5.27(1H,br,s),4.44-4.66(1H,m),3.71-3.89(1H,m),3.49(1H,t,J＝13.0Hz),2.84-3.16(3H,m),2.63-2.76(1H,m),1.87(2H,br.s),1.58-1.78(6H,m),1.47(12H,d,J＝8.7Hz).
中间体30：(2R)-哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
以类似于中间体29的方式合成(2R)-哌嗪-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯，其中使用(2R)-4-[(苄氧基)羰基]-1-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-羧酸作为方案10中的起始材料。
LCMS:m/z 299[M+H]+.
1H NMR(300MHz；CD3OD)δppm:5.27(1H,br,s.),4.41-4.67(1H,m),3.69-3.91(1H,m),3.49(1H,t,J＝12.6Hz),2.83-3.17(3H,m),2.63-2.77(1H,m),1.81-1.97(2H,m),1.58-1.78(6H,m),1.47(12H,d,J＝8.3Hz).
中间体31：哌嗪-1,2-二羧酸二叔丁酯
使用方案11所示途径合成哌嗪-1,2-二羧酸二叔丁酯。
阶段1.哌嗪-1,2,4-三羧酸4-苄基1,2-二叔丁基酯
在氮气气氛下将4-[(苄氧基)羰基]-1-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-羧酸(1.0g,2.74mmol)溶解在甲苯(10mL)中并加热至80℃。随后逐滴加入DMF二叔丁基缩醛(2.6mL,11mmol)并持续搅拌2小时。使反应混合物冷却并在EtOAc(200mL)和水(200mL)之间分配。分离有机层并用EtOAc(2x 100mL)重新萃取水层。合并的有机层用MgSO4干燥，真空浓缩并通过自动柱色谱(0-100％EtOAc/庚烷)纯化残留物以得到无色油状的标题化合物(1.08g,94％)。
LCMS:m/z 443[M+Na]+.
阶段2.哌嗪-1,2-二羧酸二叔丁酯
将哌嗪-1,2,4-三羧酸4-苄基1.2-二叔丁基酯(1.08g)溶解在EtOAc(20mL)中，并且用10％钯碳(0.22g,20％w/w)在氢气和大气压下搅拌17小时。然后通过过滤反应混合物，并真空去除溶剂以得到标题化合物(0.810g,>100％)。
LCMS:m/z 287[M+H]+.
1H NMR(300MHz；CD3OD)δppm:3.72-3.96(1H,m),3.46-3.66(1H,m),2.98-3.22(2H,m),2.91(1H,dd,J＝12.7,4.4Hz),2.55-2.83(3H,m),1.40-1.55(18H,m).
中间体32：L-亮氨酸环戊酯
使用下文所述方法制备L-亮氨酸环戊酯。
向L-亮氨酸(5g,30.5mmol)的环己烷浆液(150mL)中加入环戊醇(27.5mL,305mmol)和对甲苯磺酸(6.33g,33.3mmol)。对反应装配迪安斯塔克(Dean-Stark)接收器，并且加热至135℃以使溶解完全。在该温度维持12小时，之后反应完成。将反应冷却到室温，有白色固体沉淀。通过过滤收集固体并用EtOAc洗涤，然后减压干燥。以甲苯磺酸盐的形式分离所需产物(10.88g,85％)。
LCMS:m/z 200[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm:1.01(6H,t,J＝5.8Hz),1.54-2.03(11H,m),2.39(3H,s),3.96(1H,t,J＝6.5Hz),5.26-5.36(1H,m),7.25(2H,d,J＝7.9Hz),7.72(2H,d,J＝8.3Hz).
中间体33：2-甲基丙氨酸环戊酯
使用下文所述方法制备2-甲基丙氨酸环戊酯：
对含有环己烷(125mL)、环戊醇(267mL,2.91mol)和对甲苯磺酸(101.5g,0.53mol)中2-氨基-2-甲基丙氨酸(50g,0.48mol)的烧瓶装配迪安斯塔克接收器并将反应加热至135℃持续18小时。加入另一部分对甲苯磺酸(34g,0.18mol)并在回流下加热2小时，之后反应完成。将反应物倒在冰冷的TBME(1L)上并通过过滤收集所得固体。将固体在二乙醚(2L)中剧烈搅拌，过滤并在真空箱内干燥以得到甲苯磺酸盐形式的所需产物(161g,97％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.36(3H,s),7.48(2H,d,J＝8.1Hz),7.12(2H,d,J＝8.1Hz),5.18(1H,t,J＝5.7Hz),2.29(3H,s),1.90-1.80(2H,m),1.75-1.55(6H,m),1.43(6H,s).
中间体34：1-氨基环丁烷羧酸环戊酯
通过方案12中所示途径合成1-氨基环丁烷羧酸环戊酯。
阶段1. 1-[(叔丁氧基羰基)氨基]环丁烷羧酸
在室温下向1-氨基-1-环丁烷羧酸(2.92g,25.4mmol)、NaOH(3.04g,76.2mmol)、THF(100mL)和水(100mL)的溶液中刚加入二碳酸二叔丁酯(8.30g,38.1mmol)并将反应搅拌24小时。使用2M HCl将反应混合物酸化至pH5并使用EtOAc(2x 200mL)萃取混合物。合并的有机层用MgSO4干燥、过滤并真空浓缩以得到白色固体状的标题化合物(1.05g,19％)。
LCMS:m/z 238[M+H]+.
阶段2. 1-[(叔丁氧基羰基)氨基]环丁烷羧酸环戊酯
向1-[(叔丁氧基羰基)氨基]环丁烷羧酸(5.2g,24.2mmol)、环戊醇(7.9mL,96.7mmol)和DMAP(2.95g,24.2mmol)的DCM(100mL)溶液中逐部分加入EDC(5.54g,29.0mmol)并将反应在室温下搅拌3小时。使用DCM(200mL)稀释反应并使用0.5M HCl(2x 150mL)、饱和NaHCO3(2x 150mL)和盐水(100mL)清洗混合物。分离有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-50％))进行纯化以得到白色固体状的标题化合物(4.04g,59％)。
LCMS:m/z 589[M+Na]+.
阶段3. 1-氨基环丁烷羧酸环戊酯
将1-[(叔丁氧基羰基)氨基]环丁烷羧酸环戊酯(1.03g,3.63mmol)溶解在含2N HCl的醚(25mL)中并在室温下搅拌24小时。加入额外的含2N HCl的醚(6mL)并将反应再搅拌24小时。真空浓缩溶剂以获得白色固体状的标题化合物(739mg,92％)。
LCMS:m/z 184.2[M+H]+.
中间体35：O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯
通过方案13所示途径合成O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯。
阶段1.N-[(苄氧基)羰基]-O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯
将N-[(苄氧基)羰基]-O-叔丁基-L-丝氨酸(37.4g,0.13mol)、环戊醇(45.9mL,0.50mol)、EDC(29.1g,0.15mol)和DMAP(370mg,3.0mmol)在DCM中和室温下搅拌18小时。加入额外的环戊醇(23mL,0.25mol)和DMAP(1.0g,8.2mmol)并将反应在室温下搅拌6小时，随后在30℃下搅拌16小时。加入水(500mL)并分离有机层并真空浓缩。通过干式快速色谱纯化所得残留物以得到标题化合物(32.4g,69％)。
1H NMR(300Hz,CDCl3)ppm:7.30-7.46(5H,m),5.63(1H,d,J＝8.7Hz),5.19-5.30(1H,m),5.15(2H,s),4.42(1H,dt,J＝9.0,3.2Hz),3.82(1H,dd,J＝8.7,2.8Hz),3.57(1H,dd,J＝8.7,2.8Hz),1.51-1.96(8H,m),1.14(9H,s).
阶段2.O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯
在氮气下向N-[(苄氧基)羰基]-O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯(32.4g,94.4mmol)的EtOAc(350mL)溶液中加入10％钯碳催化剂(1.7g,5％w/w)。将反应在氢气气氛和室温下搅拌16小时。通过过滤反应物并用EtOAc洗涤滤饼。真空浓缩溶剂以获得标题化合物(22.3g,>100％)。
1H NMR(300Hz,CDCl3)ppm:5.15(1H,m),3.37-3.60(3H,m),1.41-1.89(10H,m),1.09(9H,s).
实施例
实施例1：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案14中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将中间体12(100mg,0.26mmol)溶解在DMF(5mL)中并加入EDC(59mg,0.31mmol)和HOBt(42mg,0.31mmol)。将反应搅拌20分钟，随后加入中间体22(96mg,0.31mmol)。将反应在室温下搅拌18小时。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物，用2N NaOH(20mL)、水(2x 20mL)、盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)纯化粗材料以得到黄色固体状的标题化合物(95mg,54％)。
LCMS:m/z 683/685[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(95mg,0.14mmol)溶解在DCM(20mL)中并加入含2M HCl的二乙醚(2mL)。将所得悬浮液在室温下搅拌18小时。真空去除溶剂并将粗产物溶解在Na2CO3(20mL)中并使用EtOAc(3x 20mL)萃取产物。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以获得黄色油状物质，将该物质溶解在1:4MeCN/水(10mL)中并冷冻干燥以得到黄色固体状的标题化合物(63mg,78％)。
LCMS:纯度95％,m/z 583/585[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:8.06(2H,d,J＝8.5Hz),7.88(2H,d,J＝8.5Hz),7.81(1H,s),7.42(2H,d,J＝7.7Hz),7.35-7.29(1H,m),5.26-5.21(1H,m),4.15-4.04(1H,m),3.50-3.45(1H,m),3.24-3.18(1H,m),2.76(1H,td,J＝2.5,12.6Hz),2.34(1H,d,J＝12.2Hz),1.98-1.41(11H,m).
实施例2：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例1类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案14中所示途径的阶段1处使用中间体24。
LCMS:纯度100％,m/z 597/599[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.04(2H,d,J＝8.1Hz),7.92(1H,s),7.46(2H,d,J＝8.1Hz),7.39-7.36(2H,m),7.25-7.19(2H,m),5.23(1H,br s),5.05(2H,d,J＝5.5Hz),4.51(1H,t,J＝5.4Hz),4.33(2H,br s),3.28(1H,br s),2.90(4H,br s),1.90-1.60(11H,m).
实施例3：4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例1类似的方式合成4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案14中所示途径的阶段1处使用由制备型HPLC纯化的中间体28。
LCMS:纯度100％,m/z 569/571[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.03(2H,d,J＝8.2Hz),7.92(1H,s),7.48(2H,d,J＝8.2Hz),7.38-7.35(2H,m),7.22(1H,dd,J＝7.4,8.7Hz),5.24(1H,br s),5.04(2H,d,J＝5.5Hz),4.68(1H,br,s),4.56(2H,br s),3.53-3.31(3H,m),3.14-3.10(1H,m),2.84(1H,br s),2.18-1.58(10H,m).
实施例4：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
通过方案15中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯。
阶段1.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
将中间体12(100mg,0.26mmol)溶解在DMF(5mL)中并加入EDC(59mg,0.31mmol)和HOBt(42mg,0.31mmol)。将反应搅拌20分钟，随后加入中间体25(96mg,0.31mmol)。将反应在室温下搅拌18小时。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物，用2N NaOH(20mL)、水(2x 20mL)、盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)纯化粗材料以得到黄色油状的标题化合物(153mg,89％)。
LCMS:m/z 671/673[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯(153mg,0.23mmol)溶解在二噁烷(5mL)中并冷却至0℃，之后加入含4M HCl的二噁烷(20mL)。将反应在0℃下搅拌2小时。使用2N NaOH将反应碱化至pH12并使用EtOAc(3x 20mL)萃取。合并的有机层使用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到黄色固体，通过制备型HPLC纯化该固体以得到灰白色固体状的标题化合物(50mg,38％)。
LCMS:纯度98％,m/z 571/573[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.06(2H,d,J＝8.5Hz),7.97(1H,s),7.82(2H,d,J＝8.5Hz),7.36-7.33(2H,m),7.19(1H,dd,J＝7.4,8.6Hz),6.13(1H,d,J＝8.1Hz),5.05(2H,d,J＝5.5Hz),4.61(1H,t,J＝5.5Hz),4.41(2H,br s),4.23-4.11(1H,m),3.39(1H,dd,J＝2.7,11.0Hz),3.26-3.19(1H,m),2.83-2.74(1H,m),2.44(1H,d,J＝12.4Hz),2.07-2.01(1H,m),1.47(9H,s),1.45-1.36(2H,m).
实施例5：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例4类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案15中所示途径的阶段1处使用中间体27。
LCMS:纯度96％,m/z 585/587[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.04(2H,d,J＝8.3Hz),7.96(1H,s),7.46(2H,d,J＝7.9Hz),7.38-7.36(2H,m),7.22(1H,dd,J＝7.4,8.7Hz),5.05(2H,d,J＝5.5Hz),4.58(1H,t,J＝5.5Hz),4.38(2H,br s),3.26(2H,br s),2.99-2.91(4H,m),2.19-1.98(1H,m),1.76(2H,under H2O peak),1.49(9H,s).
实施例6：4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)哌嗪-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例4类似的方式合成4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)哌嗪-2-羧酸叔丁酯，其中在方案15中所示途径的阶段1处使用中间体31。
LCMS:纯度98％,m/z 557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:8.03(2H,d,J＝8.2Hz),7.94(1H,s),7.48(2H,d,J＝8.2Hz),7.36-7.34(2H,m),7.20(1H,dd,J＝7.4,8.9Hz),5.03(2H,d,J＝5.3Hz),4.61(1H,t,J＝5.3Hz),4.43(2H,br s),3.44-3.37(2H,m),3.33-3.26(1H,m),3.12-3.08(1H,m),2.81(1H,br s),2.12(2H,br s),1.47(9H,s).
实施例7：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案16中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将中间体14(150mg,0.40mmol)和中间体22(138mg,0.44mmol)溶解在DCE(15mL)中并在室温下搅拌2小时。加入STAB(170mg,0.80mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(20mL)并剧烈搅拌20分钟以淬灭反应。分离水层并用DCM(2x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(168mg,62％)。
LCMS:m/z 669/671[M+H]+.
阶段2：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(168mg,0.25mmol)溶解在DCM(20mL)中并加入含2M HCl的二乙醚(5mL)。将该混合物在室温下搅拌18小时。真空去除溶剂并将粗产物溶解在Na2CO3(20mL)中并使用EtOAc(3x 20mL)萃取产物。合并的有机层使用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到黄色固体，通过制备型HPLC纯化该固体以得到灰白色固体状的标题化合物(83mg,60％)。
LCMS:纯度100％,m/z 569/571[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:7.95(2H,d,J＝8.1Hz),7.72(1H,s),7.48-7.41(4H,m),7.35-7.30(1H,m),5.23-5.18(1H,m),5.01(2H,s),3.91(2H,brs),3.18-3.14(1H,m),2.81(1H,br s),2.67-2.59(1H,m),2.31(1H,d,J＝12.2Hz),2.00(1H,d,J＝12.8Hz),1.93-1.86(2H,m),1.85-1.60(6H,m),1.39-1.21(2H,m),(1H缺失.在MeOH峰下).
实施例8：(2S)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成(2S)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体23。
LCMS:纯度95％,m/z 569/571[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:7.92(2H,d,J＝8.1Hz),7.91(1H,s),7.41-7.33(4H,m),7.19(1H,dd,J＝7.3,8.7Hz),5.24-5.18(1H,m),5.04(2H,d,J＝5.5Hz),4.51(1H,t,J＝5.3Hz),4.35(2H,br s),3.90(2H,s),3.29(1H,dd,J＝2.8,11.5Hz),3.24-3.18(1H,m),2.75-2.58(2H,m),2.29(1H,d,J＝13.2Hz),2.06-1.56(9H,m),1.33-1.20(4H,m).
实施例9：4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体28。
LCMS:纯度99％,m/z 555/557[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)ppm:7.96-7.91(3H,m),7.39-7.32(4H,m),7.17(1H,dd,J＝7.4,8.6Hz),5.21(1H,t,J＝5.8Hz),5.03(2H,d,J＝5.3Hz),4.57(1H,t,J＝5.3Hz),4.37(2H,br s),3.64-3.47(3H,m),3.11-3.05(1H,m),2.92-2.80(2H,m),2.61-2.57(1H,m),2.46(1H,t,J＝8.9Hz),2.28(1H,t,J＝8.4Hz),2.04(1H,br s),1.90-1.81(2H,m),1.72-1.57(6H,m).
实施例10：(2S)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成(2S)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体29。
LCMS:纯度98％,m/z 555/557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)ppm:7.87(2H,d,J＝7.9Hz),7.79(1H,s),7.56(1H,s),7.53(1H,s),7.37-7.44(1H,m),7.28(2H,d,J＝8.1Hz),6.32(1H,t,J＝3.8Hz),6.18(2H,s),5.07(1H,t,J＝5.7Hz),4.82(2H,d,J＝3.8Hz),3.48-3.56(1H,m),3.36-3.42(2H,m),2.89-2.99(1H,m),2.53-2.69(3H,m),2.32-2.45(2H,m),2.19-2.30(1H,m),1.72-1.87(2H,m),1.44-1.63(6H,m).
实施例11：(2R)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成(2R)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体30。
LCMS:纯度100％,m/z 555/557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)ppm:7.86(2H,d,J＝8.1Hz),7.78(1H,s),7.49-7.56(2H,m),7.35-7.44(1H,m),7.28(2H,d,J＝8.1Hz),6.26(1H,t,J＝4.0Hz),6.08(2H,s),5.09(1H,t,J＝5.8Hz),4.85(2H,d,J＝4.1Hz),3.36-3.58(4H,m),2.92-3.03(1H,m),2.60-2.75(2H,m),2.42(2H,dd,J＝10.3,7.1Hz),2.22-2.33(1H,m),1.73-1.90(2H,m),1.43-1.68(6H,m).
实施例12：N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸环戊酯
使用中间体32的游离碱根据方案16中所示途径的阶段1合成N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸环戊酯。
LCMS:纯度100％,m/z 556/558[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:7.91(2H,d,J＝8.3Hz),7.71(1H,s),7.47-7.44(2H,m),7.38-7.29(3H,m),5.22-5.16(1H,m),5.01(2H,s),3.81(1H,d,J＝13.0Hz),3.68(1H,d,J＝13.0Hz),3.28(1H,d,J＝7.4Hz),1.94-1.82(2H,m),1.79-1.64(7H,m),1.53-1.48(2H,m),0.94(3H,d,J＝6.6Hz),0.89(3H,d,J＝6.6Hz).
实施例13：N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸叔丁酯
使用L-亮氨酸叔丁酯作为反应物根据方案16中所示途径的阶段1合成N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸叔丁酯。
LCMS:纯度100％,m/z 544/546[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)ppm:7.90(2H,d,J＝8.3Hz),7.69(1H,s),7.45-7.43(2H,m),7.38-7.27(3H,m),5.00(2H,s),3.80(1H,d,J＝12.9Hz),3.65(1H,d,J＝12.9Hz),3.20(1H,t,J＝7.3Hz),1.78-1.69(1H,m),1.50(9H,s),1.48-1.42(2H,m),0.93(3H,d,J＝6.6Hz),0.88(3H,d,J＝6.6Hz).
实施例14：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯二甲酸盐
使用与实施例7类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体15起始并与中间体22进行反应。在使用制备型HPLC后以甲酸盐的形式分离化合物。
LCMS:纯度98％,m/z 537[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.2(2H,s),7.9-7.75(2H,m),7.7(1H,s),7.4-7.15(3H,m),7.12-6.95(2H,m),6.65-6.5(1H,m),6.14(2H,s),5.1-5.0(1H,m),4.60(2H,m),3.7(2H,m),3.3-1.9(5H,m),1.70-1.65(3H,m),1.60-1.35(6H,m).
实施例15：N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸环戊酯，其中根据方案16中所示途径的阶段1使用中间体15起始并与中间体32的游离碱进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 524[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.84(2H,d,J＝8.1Hz),7.77(1H,s),7.47-7.32(1H,m),7.28(2H,d,J＝8.3Hz),7.10(2H,t,J＝8.0Hz),6.63(1H,t,J＝5.0Hz),6.16(2H,s),5.11(1H,t,J＝5.8Hz),4.68(2H,d,J＝4.7Hz),3.82-3.4(2H,m),3.2-3.05(1H,m),2.40-2.25(1H,m),1.90-1.78(2H,m),1.77-1.50(7H,m),1.49-1.30(2H,m),0.83(6H,d,J＝2.2Hz).
实施例16：N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸叔丁酯
使用与实施例7类似的方式合成N-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸叔丁酯，其中根据方案16中所示途径的阶段1使用中间体15起始并与L-亮氨酸叔丁酯进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 512[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.85(2H,d,J＝8.3Hz),7.77(1H,s),7.4-7.3(1H,m),7.29(2H,d,J＝8.1Hz),7.2-7.0(2H,m),6.7-6.6(1H,m),6.16(2H,s),4.68(2H,d,J＝4.7Hz),3.9-3.5(2H,m),3.12-3.0(1H,m),2.3-2.1(1H,m),1.8-1.7(1H,m),1.44(9H,s),1.4-1.3(2H,m),0.84(6H,d,J＝2.2Hz).
实施例17：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体16起始并与中间体22进行反应。
LCMS:m/z 553[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.83(2H,d,J＝8.3Hz),7.76(1H,s),7.46-7.2(5H,m),6.55-6.4(1H,m),6.15(2H,s),5.12-5.0(1H,m),4.8-4.65(2H,m),3.72(2H,br,s),3.2-2.86(2H,m),2.6-2.3(2H,m),2.1-1.9(3H,m),1.85-1.70(3H,m),1.65-1.45(6H,m),1.15-0.91(2H,m).
实施例18：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体17起始并与中间体22进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 603/605[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.95-7.88(1H,m),7.87-7.79(2H,m),7.60-7.48(3H,m),7.46-7.35(1H,m),6.48-6.38(1H,s),6.29(2H,s),5.13-5.0(1H,m),4.82(2H,d,J＝4.3Hz),3.81(2H,s),3.30(1H,m),3.12(1H,m),2.95(1H,m),2.65-2.4(2H,m),2.08(2H,m),1.79(3H,m),1.70-1.45(6H,m),1.05(2H,m).
实施例19：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-甲基苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-甲基苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体18起始并与中间体22进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 583/585[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.77(1H,s),7.73-7.63(2H,m),7.60-7.48(2H,m),7.45-7.2(2H,m),6.4-6.3(1H,s),6.14(2H,s),5.15-5.0(1H,m),4.82(2H,d,J＝4.0Hz),3.70(2H,s),3.45-2.9(4H,m),2.6-2.32(3H,m),2.34(3H,s),2.1-2.0(1H,m),1.90-1.75(3H,m),1.74-1.40(5H,m,)1.15-0.95(2H,m).
实施例20：4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-乙基苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例7类似的方式合成4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-乙基苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案16中所示途径的阶段1处使用中间体19起始并与中间体28进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 583/585[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.77(1H,s),7.76-7.74(1H,m),7.70-7.64(1H,m),7.60-7.50(2H,m),7.48-7.35(1H,m),7.24-7.18(1H,m),6.40-6.30(1H,m),6.17(2H,s),5.10-5.00(1H,m),4.83(2H,d,J＝1.4Hz),3.50-3.40(2H,m),3.39-3.25(2H,m在水峰下),2.99-2.86(1H,m),2.71(2H,q,J＝2.5Hz),2.65-2.40(3H,m在DMSO峰下),2.38-2.22(2H,m),1.90-1.68(2H,m),1.67-1.40(6H,m),1.19(3H,t,J＝2.5Hz).
实施例21：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
通过方案17中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯。
阶段1.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
将中间体14(100mg,0.27mmol)和中间体25(89mg,0.29mmol)溶解在DCE(10mL)中并在室温下搅拌2小时。加入STAB(114mg,0.29mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(20mL)并剧烈搅拌20分钟以淬灭反应。分离水层并用DCM(2x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(143mg,81％)。
LCMS:m/z 657/659[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯(143mg,0.22mmol)溶解在二噁烷(5mL)中并冷却至0℃，之后加入含4M HCl的二噁烷(20mL)。将反应在0℃下搅拌2小时。使用2N NaOH将反应碱化至pH12并使用EtOAc(3x 25mL)萃取。合并的有机层使用盐水(20mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到黄色油状物质，通过制备型HPLC纯化该物质以得到淡黄色固体状的标题化合物(37mg,31％)。
LCMS:纯度100％,m/z 557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:7.96-7.91(3H,m),7.41-7.33(4H,m),7.21-7.16(1H,m),5.04(2H,d,J＝5.5Hz),4.52(1H,t,J＝5.5Hz),4.31(2H,br s),3.90(2H,s),3.25-3.17(2H,m),2.72-2.57(2H,m),2.30(1H,d,J＝12.2Hz),1.94(1H,d,J＝11.9Hz),1.73(2H,br,s),1.47(9H,s),1.29-1.17(2H,m).
实施例22：(2S)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例21类似的方式合成(2S)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案17中所示途径的阶段1处使用中间体26。
LCMS:纯度96％,m/z 557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:7.96(2H,d,J＝8.3Hz),7.93(1H,s),7.45-7.35(4H,m),7.21(1H,dd,J＝7.3,8.7Hz),5.04(2H,d,J＝5.5Hz),4.43(1H,t,J＝5.5Hz),4.22(2H,br,s),3.91(2H,s),3.25-3.17(2H,m),2.75-2.58(2H,m),2.31(1H,d,J＝12.4Hz),1.96(1H,d,J＝12.4Hz),1.47(9H,s),1.35-1.21(2H,s).
实施例23：4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例21类似的方式合成4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸叔丁酯，其中在方案17中所示途径的阶段1处使用中间体31。
LCMS:纯度100％,m/z 543/545[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:7.96-7.93(3H,m),7.41-7.37(4H,m),7.20(1H,dd,J＝7.3,8.7Hz),5.04(2H,d,J＝5.7Hz),4.45(1H,t,J＝5.5Hz),4.25(2H,br,s),3.64(1H,d,J＝13.2Hz),3.51-3.46(2H,m),3.11-3.05(1H,m),2.93-2.82(2H,m),2.61(1H,d,J＝11.3Hz),2.42(1H,t,J＝9.1Hz),2.26(1H,t,J＝8.6Hz),1.94(1H,br,s),1.46(9H,s).
实施例24：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例21类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氟苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案17中所示途径的阶段1处使用中间体15起始并与中间体25进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 525[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.9-7.8(2H,m),7.76(1H,s),7.47-7.26(3H,m),7.18-7.0(2H,m),6.62(1H,t,J＝4.9Hz),6.14(2H,s),4.68(2H,d,J＝4.7Hz),3.73(2H,s),3.2-2.85(2H,m),2.6-2.25(2H,m),2.15-2.00(1H,m),1.99-1.85(1H,m),1.80-1.60(1H,m),1.40(9H,s),1.14-0.90(2H,m).
实施例25：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例21类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案17中所示途径的阶段1处使用中间体17起始并与中间体25进行反应。
LCMS:纯度96％,m/z 591/593[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.98-7.88(1H,m),7.87-7.75(2H,m),7.58-7.48(3H,m),7.45-7.35(1H,m),6.48-6.4(1H,m),6.29(2H,s),4.82(2H,d,J＝4.0Hz),3.82(2H,s),3.32-3.26(1H,m),3.1-2.9(2H,m),2.5-2.4(2H,m),2.15-2.00(1H,m),1.99-1.85(2H,m),1.80-1.6(1H,m),1.39(9H,s),1.25-0.90(2H,m).
实施例26：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-甲基苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用与实施例21类似的方式合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-甲基苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案17中所示途径的阶段1处使用中间体18起始并与中间体25进行反应。
LCMS:纯度98％,m/z 571/573[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.84-7.74(1H,m),7.7-7.62(2H,m),7.59-7.45
(2H,m),7.44-7.25(2H,m),6.41-6.24(1H,m),6.22-6.04(2H,m),4.91-4.7(2H,m),3.79-3.63(2H,m),3.6-3.2(4H,m),3.15-2.8(2H,m),2.5-2.4(1H,m),2.35(3H,s),2.2-2.0(1H,m),1.95-1.60(1H,m),1.39(9H,s),1.15-0.9(1H,m).
实施例27：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案18中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将中间体14(150mg,0.40mmol)和中间体22(138mg,0.44mmol)溶解在DCE(15mL)中并在室温下搅拌2小时。加入STAB(170mg,0.80mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(20mL)以淬灭反应并剧烈搅拌20分钟。分离水层并用DCM(2x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(168mg,62％)。
LCMS:m/z 669/671[M+H]+.
阶段2：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
向(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(168mg,0.28mmol)的无水MeCN(4mL)溶液中加入乙醛(37mg,0.85mmol)。将反应在室温和氮气下搅拌10分钟，随后加入乙酸(34mg,0.56mmol)和STAB(132mg,0.62mmol)。将反应搅拌1小时并随后加入饱和NaHCO3(10mL)以淬灭反应。用DCM(3x 20mL)萃取水层，并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱(50％EtOAc/庚烷，随后70％EtOAc/庚烷)获得产物以得到黄色固体状的标题化合物(77mg,39％)。
LCMS:m/z 697/698/699/700/701[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(77mg,0.11mmol)在含2M HCl的二乙醚(5mL)中在室温下搅拌24小时。真空去除溶剂并通过制备型HPLC纯化粗材料以获得灰白色固体状的标题化合物(32mg,49％)。
LCMS:纯度100％,m/z 597/598/599/600[M+H]+
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.85(2H,d,J＝8.1Hz),7.78(1H,s),7.49-7.59(2H,m),7.37-7.45(1H,m),7.33(2H,d,J＝8.1Hz),6.27-6.36(1H,m),6.15(2H,s),5.06(1H,t,J＝5.7Hz),4.82(2H,d,J＝3.8Hz),3.59(2H,s),3.13(1H,d,J＝10.9Hz),3.00(1H,d,J＝12.2Hz),2.66(1H,t,J＝11.7Hz),2.34-2.47(2H,m),2.03(11H,br,s),1.16-1.41(2H,m),0.95(3H,t,J＝6.9Hz).
实施例28：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案19中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将中间体14(150mg,0.40mmol)和中间体22(138mg,0.44mmol)溶解在DCE(15mL)中并在室温下搅拌2小时。加入STAB(170mg,0.80mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(20mL)以淬灭反应并剧烈搅拌20分钟。分离水层并用DCM(2x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(168mg,62％)。
LCMS:m/z 669/671[M+H]+.
阶段2：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
向(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(150mg,0.22mmol)的MeCN(4mL)溶液中加入37％甲醛水溶液(16.8μL,0.22mmol)。将反应在室温下搅拌1.5小时，随后加入STAB(71mg,0.34mmol)。将反应搅拌3小时，随后再加入37％甲醛水溶液(8.4μL,0.11mmol)。将反应搅拌18小时并随后加入饱和NaHCO3(20mL)以淬灭反应。用EtOAc(4x 20mL)萃取水层，并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-80％))纯化粗产物以得到淡黄色固体状的含有一些杂质的标题化合物(125mg,83％)。
LCMS:m/z 683/684/685[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(125mg,0.18mmol)在含2M HCl的二乙醚(7mL)中在室温下搅拌24小时。真空去除溶剂并通过制备型HPLC纯化粗材料以获得灰白色固体状的标题化合物(13mg,12％)。
LCMS:纯度100％,m/z 583/585/587[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.86(2H,d,J＝8.1Hz),7.79(1H,s),7.50-7.58(2H,m),7.36-7.46(1H,m),7.30(2H,d,J＝8.1Hz),6.28-6.35(1H,m),6.17(2H,br,s),5.03-5.12(1H,m),4.82(2H,d,J＝3.6Hz),3.56(2H,s),3.10-3.20(1H,m),2.96-3.08(1H,m),2.54-2.66(1H,m),2.33-2.45(1H,m),2.12(3H,s),1.90-2.07(2H,m),1.74-1.88(2H,m),1.46-1.71(7H,m),1.19-1.44(2H,m).
实施例29：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(2-甲基丙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案20中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(2-甲基丙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1：{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[4-甲酰基苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
向中间体4(569mg,0.88mmol)的DME(5.5mL)溶液中加入中间体6(305mg,1.3mmol)和2N Na2CO3(1.1mL,2.2mmol)并使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(62mg,0.088mmol)并将反应在80℃和氮气下搅拌18小时以使反应完全。反应混合物通过过滤并用EtOAc(100mL)洗涤滤饼。对合并的滤液使用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，之后通过柱色谱(20％-30％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到无色油状的标题化合物(0.513g,87％)。
LCMS:m/z 695/697/699[M+Na]+.
阶段2：(2R)-4-[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[4-甲酰基苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(250mg,0.37mmol)和中间体22(128mg,0.41mmol)溶解在DCE(6mL)中并在室温和氮气下搅拌1小时。加入STAB(157mg,0.74mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(10mL)和DCM(10mL)以淬灭反应。分离水层并用DCM(3x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(40％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(252mg,70％)。
LCMS:m/z 969/970/971[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(2-甲基丙基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将(2R)-4-[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(80mg,0.08mmol)、异丁醛(113μL,1.20mmol)和乙酸(94μL,1.6mmol)溶解在DCE(3mL)中并在室温和氮气下搅拌1小时。加入STAB(35mg,0.33mmol)并将反应搅拌2.5小时。加入额外的异丁醛(75μL,0.8mmol)并将反应搅拌1.5小时，随后加入额外的STAB(35mg,0.33mmol)。将反应搅拌1.5小时并随后使用饱和NaHCO3(10mL)和DCM(10mL)淬灭反应。分离有机层并用DCM(3x 10mL)萃取水层。对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-30％))进行纯化以得到无色油状的标题化合物(70mg,83％)。
LCMS:m/z 1025/1027/1029[M+H]+.
阶段4：(2R)-4-[乙酰基(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(2-甲基丙基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(106mg,0.10mmol)在二噁烷(2mL)中搅拌并加入含4M HCl的二噁烷(3mL)。将反应搅拌18小时直至反应完全。真空去除溶剂以得到黄色固体，通过制备型HPLC纯化该黄色固体以获得灰白色固体状的标题化合物(16mg,26％)。
LCMS:纯度100％,m/z 625/627/629[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 7.86(2H,d,J＝8.1Hz),7.79(1H,s),7.50-7.59(2H,m),7.37-7.45(1H,m),7.32(2H,d,J＝8.1Hz),6.27-6.36(1H,m),6.17(2H,s),5.06(1H,t,J＝5.7Hz),4.82(2H,d,J＝3.8Hz),3.59(2H,s),3.08(1H,d,J＝9.8Hz),2.98(1H,d,J＝13.6Hz),2.54-2.64(1H,m),2.36(1H,t,J＝10.9Hz),2.20(2H,d,J＝6.8Hz),2.05(1H,br,s),1.72-1.93(3H,m),1.48-1.71(8H,m),1.15-1.40(2H,m),0.81(6H,d,J＝6.4Hz).
实施例30：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用方案21中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯。
阶段1.(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
将中间体14(100mg,0.27mmol)和中间体25(89mg,0.29mmol)溶解在DCE(10mL)中并在室温下搅拌2小时。加入STAB(114mg,0.29mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(20mL)以淬灭反应并剧烈搅拌20分钟。分离水层并用DCM(2x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(80％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(143mg,81％)。
LCMS:m/z 657/659[M+H]+.
阶段2：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
向(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯(150mg,0.23mmol)的MeCN(4mL)溶液中加入乙醛(20mg,0.46mmol)。将反应在室温和氮气下搅拌25分钟，随后加入乙酸(27mg,0.46mmol)和STAB(106mg,0.50mmol)。将反应搅拌30分钟并随后加入饱和NaHCO3(10mL)以淬灭反应。用EtOAc(3x 20mL)萃取水层，并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-100％))纯化产物以得到黄色油状的标题化合物(83mg,53％)。
LCMS:m/z 685/687/689[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
将(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯(47mg,0.069mmol)溶解在DCM(0.5mL)中并冷却至0℃，之后加入含4M HCl的二噁烷(2.5mL)。将反应在0℃下搅拌1小时。使用2N NaOH(10mL)将反应碱化至pH14并使用EtOAc(3x 30mL)萃取。合并的有机层使用盐水(25mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到黄色油状物质，通过制备型HPLC纯化该物质以得到淡白色固体状的标题化合物(6mg,15％)。
LCMS:纯度97.5％,m/z 585/587/589[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.85(2H,d,J＝8.1Hz),7.77(1H,s),7.50-7.54(2H,m),7.36-7.43(1H,m),7.33(2H,d,J＝8.3Hz),6.24(1H,t,J＝4.2Hz),6.05(2H,s),4.85(2H,d,J＝4.3Hz),3.62(2H,s),2.98-3.09(2H,m),2.66(1H,t,J＝11.7Hz),2.53(2H,d,J＝7.2Hz),2.37-2.47(1H,m),1.93(1H,d,J＝12.1Hz),1.58-1.69(1H,m),1.41(9H,s),1.19-1.37(2H,m),0.96(3H,t,J＝7.0Hz).
实施例31：(2R)-4-[乙酰基(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案22中所示途径合成(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1：{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[4-甲酰基苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
向中间体4(569mg,0.88mmol)的DME(5.5mL)溶液中加入中间体6(305mg,1.3mmol)和2N Na2CO3(1.1mL,2.2mmol)并使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(62mg,0.088mmol)并将反应在80℃和氮气下搅拌18小时以使反应完全。反应混合物通过过滤并用EtOAc(100mL)洗涤滤饼。对合并的滤液使用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，之后通过柱色谱(20％-30％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到无色油状的标题化合物(0.513g,87％)。
LCMS:m/z 695/697/699[M+Na]+.
阶段2：(2R)-4-[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[4-甲酰基苯基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(250mg,0.37mmol)和中间体22(128mg,0.41mmol)溶解在DCE(6mL)中并在室温和氮气下搅拌1小时。加入STAB(157mg,0.74mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(10mL)和DCM(10mL)以淬灭反应。分离水层并用DCM(3x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(40％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(252mg,70％)。
LCMS:m/z 969/970/971[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-[乙酰基(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将(2R)-4-[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(134mg,0.14mmol)溶解在无水DCM(2mL)中。加入三乙胺(21mg,0.21mmol)并将反应冷却至0℃。5分钟后加入乙酰氯(16mg,0.27mmol)并使反应在3小时内缓慢升温至室温。加入额外的乙酰氯(8mg,0.10mmol)并将反应再搅拌2小时直至反应完全。加入饱和NaHCO3(10mL)并将产物萃取至DCM(3x 20mL)中。对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-100％))进行纯化以得到无色油状的标题化合物(107mg,77％)。
LCMS:m/z 911/912/913/914[M-Boc]+.
阶段4：(2R)-4-[乙酰基(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[乙酰基(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(107mg,0.11mmol)溶解在二乙醚(0.5mL)中并加入含2M HCl的二乙醚(10mL)。将反应搅拌18小时直至反应完全。真空去除溶剂以得到黄色固体，通过制备型HPLC纯化该黄色固体以获得灰白色固体状的标题化合物(18mg)。
LCMS:纯度99％,m/z 611/613/615[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.72-7.95(3H,m),7.48-7.56(2H,m),7.34-7.44(1H,m),7.16-7.27(2H,m),6.25(1H,br,s),6.01-6.13(2H,m),4.99-5.06(1H,m),4.85(2H,d,J＝4.1Hz),4.56(1.6H,s),4.35-4.48(1H,m),3.91(0.4H,br,s),3.24-3.33(1H,m),2.95(1H,br,s),2.19(1H,br,s),1.99(3H,br,s),1.68-1.81(3H,m),1.33-1.66(10H,m).
实施例32：(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用下文方案23中所示途径合成(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1.(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将中间体13(100mg,0.26mmol)溶解在DMF(6mL)中并加入中间体22(96mg,0.3mmol)，随后加入HOBt(41mg,0.3mmol)和EDC(56mg,0.3mmol)。将反应混合物搅拌18小时，然后真空浓缩。在不进行纯化的情况下利用粗残留物(170mg)。
LCMS:m/z 683/685[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(170mg,0.24mmol)溶解在DCM(1mL)中并加入含2M HCl的二乙醚(1mL)。将反应搅拌16小时，然后真空浓缩。通过制备型HPLC纯化粗残留物以获得黄色固体状的标题化合物(50mg)。
LCMS:纯度97％,m/z 583/585[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.43-8.3(2H,m),8.09(1H,d,J＝7.8Hz),7.91(1H,s),7.72(1H,d,J＝7.8Hz),7.65-733(4H,m),6.46-6.35(1H,m),6.28(2H,s),5.18-5.05(1H,m),4.84(2H,d,J＝4.0Hz),4.05-3.83(1H,m),3.5-2.4(3H,m),2.2-2.0(1H,m),1.95-1.2(12H,m).
实施例33：(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用与上述实施例32类似的方式合成(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯甲酰基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案23的阶段1处使用中间体25。
LCMS:纯度97％,m/z 571/573[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.35(2H,m),8.09(1H,d,J＝7.9Hz),7.91(1H,s),7.72(1H,d,J＝7.9Hz),7.60-7.34(4H,m),6.46-6.34(1H,m),6.28(2H,s),4.84(2H,d,J＝4.1Hz),4.05-3.95(1H,m)3.3-2.4(3H,m),2.1-2.0(2H,m),1.7-1.6(1H,m),1.4(9H,s)1.45-1.25(2H,m).
实施例34：(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
使用下文方案24中所示途径合成(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1.(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯
将中间体20(78mg,0.2mmol)悬浮于DCE(6mL)中并加入中间体22(97mg,0.31mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，之后加入STAB(85mg,0.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌72小时，之后加入饱和NaHCO3(100mL)并使用DCM(3x 30mL)萃取产物。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过自动柱色谱(EtOAc/DCM)进行纯化以得到产物(115mg)，该产物仍含有少量杂质但可用于阶段2。
LCMS:m/z 669/671[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯
将(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸1-叔丁基2-环戊基酯(115mg,0.17mmol)溶解在DCM(1mL)中并加入含2N HCl的二乙醚。将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后真空浓缩。通过制备型HPLC纯化粗残留物以获得灰白色固体状的标题化合物(29mg)。
LCMS:纯度97％,m/z 569/571[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.85-7.6(3H,m),7.5-7.0(5H,m),6.32-6.23(1H,m),6.11(2H,s),5.1-4.9(1H,m),4.8-4.7(2H,m),3.7(2H,s),3.15-2.9(2H,m),2.4-2.3(1H,m),2.1-1.9(3H,m),1.85-1.65(3H,m),1.62-1.35(7H,m),1.1-0.9(2H,m).
实施例35：(2S)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯二甲酸盐
使用与实施例34类似的方式合成(2S)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案24中所示途径的阶段1处使用中间体22。通过制备型HPLC进行最终化合物的纯化以得到灰白色固体状的标题化合物的二甲酸盐(18.0mg,18％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 8.23(2H,s),7.90(1H,s),7.85-7.78(2H,m),7.58-7.5(2H,m),7.48-7.2(3H,m),6.39-6.3(1H,s),6.20(2H,s),5.15-5.0(1H,m),4.83(2H,d,J＝4.1Hz),3.83(2H,s),3.5-2.8(2H,m),2.7-2.0(3H,m),1.9-1.4(11H,m),1.25-1.0(2H,m)
LCMS:纯度98％,m/z 569/571[M+H]+.
实施例36：(2S)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例34类似的方式合成(2S)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案24中所示途径的阶段1处使用中间体29并使用DCM作为溶剂。
LCMS:纯度93％,m/z 555/557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm:7.93(1H,s),7.83(1H,d,J＝7.9Hz),7.71(1H,s),7.40-7.46(2H,m),7.27-7.39(2H,m),7.20-7.27(1H,m),5.13-5.21(1H,m),5.03(2H,s),3.66-3.72(1H,m),3.53-3.66(2H,m),3.14-3.24(1H,m),2.86-2.97(2H,m),2.63-2.73(1H,m),2.57(1H,dd,J＝11.2,8.0Hz),2.41-2.51(1H,m),1.71-1.90(2H,m),1.67(1H,dd,J＝6.8,2.1Hz),1.44-1.64(5H,m).
实施例37：(2R)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例34类似的方式合成(2R)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案24中所示途径的阶段1处使用中间体30并使用DCM作为溶剂。
LCMS:纯度100％,m/z 555/557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm:7.92(1H,s),7.82(1H,d,J＝7.9Hz),7.71(1H,s),7.39-7.48(2H,m),7.20-7.38(3H,m),5.14(1H,t,J＝5.8Hz),5.02(2H,s),3.50-3.67(3H,m),3.05-3.15(1H,m),2.77-2.92(2H,m),2.58-2.68(1H,m),2.33-2.53(2H,m),1.71-1.89(2H,m),1.47-1.70(6H,m).
实施例38：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸环戊酯
使用与实施例34类似的方式合成N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸环戊酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用中间体32。
LCMS:纯度95％,m/z 556/558[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:7.91-7.80(2H,m),7.81-7.78(1H,m),7.6-7.05(5H,m),5.22-5.10(1H,m),4.96(2H,d,J＝5.7Hz),4.38-4.22(1H,m),4.09(2H,s),3.81(1H,d,J＝13.0Hz),3.61(1H,d,J＝13.0Hz),3.21(1H,t,J＝7.3Hz),1.9-1.3(12H,m),0.83(3H,d,J＝2.2Hz),0.78(3H,d,J＝2.2Hz).
实施例39：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸叔丁酯
使用与实施例34类似的方式合成N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-亮氨酸叔丁酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用L-亮氨酸叔丁酯。
LCMS:纯度92％,m/z 544/546[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:8.05-7.85(3H,m),7.45-7.15(5H,m),5.06(2H,d,J＝1.8Hz),4.5-4.4(1H,m),4.19(2H,s),3.92(1H,d,J＝5.7Hz),3.72(1H,d,J＝5.7Hz),3.3-3.2(1H,m),1.9-1.8(1H,m),1.7-1.45(3H,m),1.58(s,9H),0.94(3H,d,J＝2.2Hz),0.88(3H,d,J＝2.2Hz).
实施例40：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-2-甲基丙氨酸环戊酯
使用与实施例34类似的方式合成N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-2-甲基丙氨酸环戊酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用中间体33(游离碱)并通过制备型HPLC进行最终纯化。
LCMS:纯度97％,m/z 528/530[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.86(1H,s),7.82-7.70(2H,m),7.6-7.5(2H,m),7.46-7.25(3H,m),6.4-6.3(1H,m),6.20(2H,s),5.3-5.0(1H,m),4.83(2H,d,J＝4.0Hz),3.60(2H,s),2.39-2.15(1H,m),1.94-1.4(8H,m),1.25(6H,s).
实施例41：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-2-甲基丙氨酸叔丁酯甲酸盐
使用与实施例34类似的方式合成N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-2-甲基丙氨酸叔丁酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用α-氨基异丁酸叔丁酯并通过制备型HPLC进行最终纯化以获得标题化合物的甲酸盐。
LCMS:纯度98％,m/z 516/518[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.30(1H,br s),7.95-7.86(1H,m),7.85-7.6(2H,m),7.62-7.47(2H,m),7.45-7.1(3H,m),6.40-6.30(1H,m),6.3-6.2(2H,m),4.9-4.8(2H,m),3.7-3.58(2H,m),3.4-3.1(1H,NH在水峰下不可见),1.42(9H,s),1.23(6H,s).
实施例42：1-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]环丁烷羧酸环戊酯二甲酸盐
使用与实施例34类似的方式制备1-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]环丁烷羧酸环戊酯，其中根据方案18中所示途径的阶段1并使用中间体34(游离碱)。通过制备型HPLC纯化最终化合物以得到二甲酸盐形式的标题化合物。
LCMS:纯度98％,m/z 540/541/542[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.30(2H,br,s),7.88(1H,s),7.82-7.75(2H,m),7.6-7.5(2H,m),7.46-7.17(3H,m),6.42-6.3(1H,m),6.21(2H,s),5.15-5.0(1H,m),4.83(2H,d,J＝4.1Hz),3.55(2H,s),2.35-2.15(2H,m),2.1-1.4(13H,m).
实施例43：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯
使用与实施例34类似的方式制备N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-O-叔丁基-L-丝氨酸环戊酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用中间体35(游离碱)。通过制备型HPLC进行最终纯化。
LCMS:纯度98％,m/z 586/588[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.88(1H,s),7.82-7.74(2H,m),7.6-7.5(2H,m),7.46-7.1(3H,m),6.43-6.3(1H,m),6.21(2H,b,s),5.2-5.0(1H,m),4.83(2H,d,J＝1.3Hz),3.9-3.15(5H,m),2.45-2.25(1H,m),1.9-1.4(8H,m),1.04(9H,s).
实施例44：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-O-叔丁基-L-丝氨酸叔丁酯
使用与实施例34类似的方式合成N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-O-叔丁基-L-丝氨酸叔丁酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用盐酸O-叔丁基-L-丝氨酸叔丁酯。通过制备型HPLC进行最终纯化。
LCMS:纯度98％,m/z 574/576[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.89(1H,s),7.84-7.72(2H,m),7.62-7.47(2H,m),7.45-7.12(3H,m),6.42-6.3(1H,m),6.21(2H,s),4.9-4.77(2H,m),3.83(1H,d,J＝4.4Hz),3.64(1H,d,J＝4.4Hz),3.55-3.0(3H,m),2.42-2.2(1H,m),1.39(9H,s),1.05(9H,s)
实施例45：N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-丙氨酸叔丁酯
使用与实施例34类似的方式合成N-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)-L-丙氨酸叔丁酯，其中根据方案24中所示途径的阶段1并使用L-丙氨酸叔丁酯(游离碱)作为氨基酸。
LCMS:纯度95％,m/z 502/504[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.89-7.82(1H,m),7.81-7.7(2H,m),7.59-7.48(2H,m),7.46-7.1(3H,m),6.4-6.3(1H,m),6.20(2H,br,s),4.88-4.80(2H,m),3.86-3.5(2H,m),3.45-3.0(1H,m),2.45-2.2(1H,m),1.41(9H,s),1.16(3H,d,J＝2.2Hz).
实施例46：(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
通过方案25中所示途径合成(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯。
阶段1.(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
将中间体20(90mg,0.24mmol)悬浮于DCE(4mL)中并加入中间体25(108mg,0.36mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，随后加入STAB(101mg,0.48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，之后加入饱和NaHCO3(120mL)并使用DCM(2x 60mL)萃取产物。分离合并的有机层并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过自动柱色谱(EtOAc/DCM)进行纯化以得到产物(130mg,82％)。
LCMS:m/z 657/659[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯
将(2R)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯(130mg,0.197mmol)溶解在二噁烷(3mL)中并冷却至0℃，之后逐滴加入含4M HCl的二噁烷(1mL)。在0℃下的6小时内，加入额外的2.5mL的含4M HCl的二噁烷以使反应完全。向反应混合物中加入2N NaOH(80mL)并使用EtOAc(3x 50mL)萃取产物。分离合并的有机层并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC纯化粗残留物以获得橙色固体状的标题化合物(44mg)。
LCMS:纯度97％,m/z 557/559[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.88(1H,s),7.85-7.8(2H,m),7.62-7.5(2H,m),7.47-7.15(3H,m),6.40-6.3(1H,m),6.18(2H,s),4.83(2H,d,J＝4.1Hz),3.78(2H,s),3.5-3.25(2H,m),3.11-2.88(1H,m),2.55-1.75(5H,m),1.38(9H,s),1.15-0.9(2H,m).
实施例47：(2S)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯二甲酸盐
使用与实施例46类似的方式合成(2S)-4-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯，其中在方案25中所示途径的阶段1处使用中间体26。通过制备型HPLC进行最终化合物的纯化以得到白色固体状的标题化合物的二甲酸盐(19.8mg,8％)。
LCMS:纯度96％,m/z 557/559[M+H]+
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:8.27(2H,br,s),7.9(1H,s),7.85-7.7(2H,m),7.7-7.47(2H,m),7.45-7.15(3H,m),6.4-6.3(1H,m),6.19(2H,s),4.88-4.75(2H,m),3.80(2H,m),3.75-3.2(2H,m),3.17-2.8(2H,m),2.65-2.3(2H,m),2.2-1.7(2H,m),1.38(9H,s),1.2-0.9(2H,m).
实施例48：N-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯
使用下文方案26中所示途径合成N-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯。
阶段1：N-[2-(3-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯
在氮气下将中间体21(168mg,0.24mmol)和中间体33(游离碱)(125mg,0.73mmol)溶解在DCE(4mL)中并在室温下搅拌10分钟。加入STAB(104mg,0.49mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和NaHCO3(15mL)以淬灭反应。分离水层并用DCM(3x 20mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过柱色谱(50％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到橙色油状的标题化合物(64mg,31％)。
LCMS:m/z 842/844/846[M+H]+.
阶段2：N-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯
在含2M HCl的二乙醚(5mL)中搅拌N-[2-(3-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯(64mg,0.076mmol)。将反应搅拌18小时。加入含4M HCl的二噁烷(2mL)并将反应搅拌30分钟以使反应完全。真空去除溶剂以得到黄色固体，通过制备型HPLC纯化该黄色固体以获得灰白色固体状的标题化合物(15mg,36％)。
LCMS:纯度100％,m/z 542/544/546[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.69-7.82(3H,m),7.50-7.57(2H,m),7.36-7.45(1H,m),7.28(1H,t,J＝7.5Hz),7.07(1H,d,J＝7.2Hz),6.35(1H,br.s),6.19(2H,s),4.98(1H,t,J＝5.5Hz),4.83(2H,d,J＝3.8Hz),2.60-2.77(4H,m),1.91(1H,br,s),1.63-1.78(2H,m),1.36-1.61(6H,m),1.15(6H,s).
实施例49：1-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}环丁烷羧酸环戊酯
使用与实施例48类似的方式合成1-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}环丁烷羧酸环戊酯，其中在方案26中所示途径的阶段1处使用1.5当量的中间体34。
LCMS:纯度100％,m/z 554/556/558[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.69-7.82(3H,m),7.50-7.58(2H,m),7.35-7.44(1H,m),7.28(1H,t,J＝7.6Hz),7.08(1H,d,J＝7.5Hz),6.32-6.40(1H,m),6.19(2H,s),5.02(1H,t,J＝5.8Hz),4.83(2H,d,J＝4.1Hz),2.68-2.79(2H,m),2.59(2H,br,s),2.16-2.27(2H,m),2.12(1H,br,s),1.81-1.96(3H,m),1.6-1.79(3H,m),1.38-1.60(6H,m).
实施例50：(2R)-4-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案27中所示途径合成(2R)-4-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1. 1-叔丁基2-环戊基(2R)-4-{[2-(3-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-1,2-二羧酸酯
将中间体21(160mg,0.23mmol)、中间体22(109mg,0.35mmol)和乙酸(99μL,1.7mmol)溶解在DCE(4mL)中并在室温和氮气下搅拌40分钟。加入STAB(99mg,0.47mmol)和乙酸(0.2mL,3.5mmol)并将反应再搅拌18小时。加入饱和Na2CO3(10mL)和DCM(20mL)以淬灭反应。分离水层并用DCM(3x 10mL)进一步萃取并对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-50％))和之后的柱色谱(40-50％EtOAc/庚烷)进行纯化以得到无色油状的标题化合物(103mg,45％)。
LCMS:m/z 983/985/987[M+H]+.
阶段2.(2R)-4-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯
向1-叔丁基2-环戊基(2R)-4-{[2-(3-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-1,2-二羧酸酯(100mg,0.10mmol)的二噁烷(2mL)溶液中加入含4M HCl的二噁烷(3mL)并将反应在室温下搅拌21小时。真空浓缩溶剂并通过制备型HPLC纯化所得残留物以得到淡橙色油状的标题化合物(10mg,17％)。
LCMS:纯度95.6％,m/z 583/585/587[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO):δppm:7.70-7.81(3H,m),7.50-7.58(2H,m),7.35-7.44(1H,m),7.28(1H,t,J＝7.5Hz),7.10(1H,d,J＝7.5Hz),6.36(1H,t,J＝4.2Hz),6.18(2H,s),5.01-5.10(1H,m),4.83(2H,d,J＝4.1Hz),3.14(1H,dd,J＝11.4,2.5Hz),2.94(1H,dt,J＝12.6,3.2Hz),2.67-2.85(4H,m),2.54-2.59(1H,m),2.36-2.47(1H,m),1.47-2.07(12H,m),0.87-1.09(2H,m).
实施例51：(2S)-4-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯
使用与实施例50类似的方式合成(2S)-4-{[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案27中所示途径的阶段1处使用中间体23。
LCMS:纯度94％,m/z 583/585/587[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.79(1H,s),7.70-7.77(2H,m),7.51-7.57(2H,m),7.37-7.43(1H,m),7.28(1H,t,J＝7.6Hz),7.09(1H,d,J＝7.5Hz),6.36(1H,t,J＝4.2Hz),6.19(2H,s),5.05(1H,t,J＝6.1Hz),4.82(2H,d,J＝4.1Hz),3.14(1H,dd,J＝11.3,2.1Hz),2.89-2.97(1H,m),2.67-2.84(4H,m),2.54(1H,br,s),2.36-2.47(1H,m),2.01(2H,d,J＝10.9Hz),1.68-1.85(3H,m),1.44-1.67(7H,m),0.89-1.07(2H,m).
实施例52：4-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]哌嗪-2-羧酸环戊酯
使用与实施例50类似的方式合成4-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]哌嗪-2-羧酸环戊酯，其中在方案27中所示途径的阶段1处使用中间体28。
LCMS:纯度97％,m/z 569/571/573[M+H]+.
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm:7.70-7.81(3H,m),7.49-7.57(2H,m),7.35-7.44(1H,m),7.27(1H,t,J＝7.6Hz),7.10(1H,d,J＝7.5Hz),6.33-6.40(1H,m),6.20(2H,s),5.02-5.11(1H,m),4.83(2H,d,J＝4.1Hz),3.39(2H,d,J＝3.0Hz),2.86-2.98(1H,m),2.67-2.81(3H,m),2.52-2.67(3H,m),2.32-2.47(2H,m),2.16-2.31(1H,m),1.70-1.85(2H,m),1.43-1.68(6H,m).
实施例53：(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯
使用方案28中所示途径合成(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯。
阶段1：(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酸
向中间体1(1.34g,3.8mmol)的DME(20mL)溶液中加入中间体10(956mg,4.2mmol)和2N Na2CO3(4.8mL,9.6mmol)并使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(270mg,0.4mmol)并将反应在90℃和氮气下搅拌18小时。真空浓缩反应混合物并将残留物溶解在水(100mL)中共使用EtOAc(50mL)洗涤。过滤水层并使用1N HCl酸化至pH3。通过过滤收集所得固体，用水清洗并在40℃下在真空箱中干燥以得到米色固体状的标题化合物(400mg,26％)。
LCMS:m/z 393/395[M+H]+.
阶段2：1-叔丁基2-环戊基(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-1.2-二羧酸酯
将(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酸(100mg,0.26mmol)溶解在DMF(5mL)中并加入EDC(59mg,0.31mmol)和HOBt(41mg,0.31mmol)。将反应搅拌20分钟，随后加入中间体22(95mg,0.31mmol)。将反应在室温下搅拌72小时。用EtOAc(25mL)稀释反应混合物，用2N NaOH(10mL)、水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱(5％MeOH/EtOAc)纯化粗材料以得到黄色油状的标题化合物(122mg,70％)。
LCMS:m/z 687/689[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯
将1-叔丁基2-环戊基(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-1.2-二羧酸酯(122mg,0.18mmol)溶解在DCM(5mL)中并加入含2M HCl的二乙醚(20mL)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。使粗残留物在饱和Na2CO3(20mL)和EtOAc(20mL)之间分配。分离有机层并真空浓缩，之后通过制备型HPLC进行纯化以得到灰白色固体状的标题化合物(41mg,39％)。
LCMS:纯度98％,m/z 587/589[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:8.03(1H,s),7.92(1H,s),7.68(1H,s),7.37-7.34(2H,m),7.23-7.18(1H,m),6.36(1H,d,J＝7.9Hz),5.21-5.15(1H,m),4.97(2H,d,J＝5.5Hz),4.82(2H,s),4.59(1H,t,J＝5.5Hz),4.22(2H,br,s),3.96-3.86(1H,m),3.33(1H,dd,J＝2.7,11.4Hz),3.19-3.13(1H,m),2.69(1H,td,J＝2.5,12.4Hz),2.27(1H,d,J＝12.2Hz),1.89-1.55(10H+H2O,m),1.30-1.14(2H,m).
实施例54：(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-2-羧酸叔丁酯
使用方案29中所示途径合成(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-2-羧酸叔丁酯。
阶段1：(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酸
向中间体1(1.34g,3.8mmol)的DME(20mL)溶液中加入中间体10(956mg,4.2mmol)和2N Na2CO3(4.8mL,9.6mmol)并使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(270mg,0.4mmol)并将反应在90℃和氮气下搅拌18小时。真空浓缩反应混合物并将残留物溶解在水(100mL)中共使用EtOAc(50mL)洗涤。过滤水层并使用1N HCl酸化至pH3。通过过滤收集所得固体，用水清洗并在40℃下在真空箱中干燥以得到米色固体状的标题化合物(400mg,26％)。
LCMS:m/z 393/395[M+H]+.
阶段2：(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯
将(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酸(100mg,0.26mmol)溶解在DMF(5mL)中并加入EDC(59mg,0.31mmol)和HOBt(41mg,0.31mmol)。将反应搅拌20分钟，随后加入中间体25(92mg,0.31mmol)。将反应在室温下搅拌18小时。用EtOAc(25mL)稀释反应混合物，用2N NaOH(10mL)、水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱(5％MeOH/EtOAc)纯化粗材料以得到黄色油状的标题化合物(150mg,87％)。
LCMS:m/z 675/677[M+H]+.
阶段3：(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-2-羧酸叔丁酯
将(2R)-4-{[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-1,2-二羧酸二叔丁酯(150mg,0.22mmol)溶解在二噁烷(1mL)中并将反应冷却至0℃。加入含4M HCl的二噁烷(20mL)。将反应混合物在0℃下搅拌2小时直至反应完全。将反应物倒在2N NaOH(50mL)上并使用EtOAc(3x 25mL)萃取。对有机层用盐水(25mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，之后通过制备型HPLC进行纯化以得到灰白色固体状的标题化合物(10mg,8％)。
LCMS:纯度96％,m/z 575/577[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)8.03(1H,s),7.92(1H,s),7.69(1H,s),7.38-7.35(2H,m),7.24-7.19(1H,m),6.36(1H,d,J＝7.9Hz),4.98(2H,d,J＝5.6Hz),4.83(2H,s),4.55(1H,t,J＝5.4Hz),4.18(2H,br s),3.98-3.87(1H,m),3.28(1H,dd,J＝2.5,11.3Hz),3.16(1H,d,J＝12.6Hz),2.73-2.64(1H,m),2.26(1H,d,J＝12.1Hz),1.92-1.83(2H,m),1.44(9H,s),1.29-1.12(2H,m).
实施例55：(2R)-4-{[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯二甲酸盐
使用方案30中所示途径合成(2R)-4-{[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯二甲酸盐。
阶段1.{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
向中间体4(951mg,1.46mmol)的DME(20mL)溶液中加入中间体11(524mg,2.20mmol)和2N Na2CO3(1.8mL,3.65mmol)并使氮气气泡通过反应混合物以对溶液进行20分钟的脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(270mg,0.4mmol)并将反应在80℃和氮气下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温并使用EtOAc(100mL)稀释。通过过滤反应物并用EtOAc(50mL)洗涤滤饼。过滤的物质用盐水(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度10-100％))进行纯化以得到灰白色固体状的标题化合物(920mg,93％)。
LCMS:m/z 579/581/583[M-Boc]+.
阶段2.{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[1-(2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯
在0℃下向{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(900mg,1.32mmol)的DCM(14mL)溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(618mg,1.46mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌4小时并升温至室温。加入额外的0.5当量的戴斯-马丁氧化剂(300mg)并将反应搅拌30分钟。使用DCM(30mL)稀释反应物，加入饱和NaHCO3(50mL)和饱和硫代硫酸钠溶液(50mL)并剧烈搅拌1小时。分离水层并使用DCM(100mL)洗涤。合并的有机层使用饱和NaHCO3和饱和硫代硫酸钠溶液(1:1混合物，200mL)、盐水(200mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以得到黄色固体状的标题化合物(830mg,93％)。在不进行纯化的情况下利用该材料。
LCMS:m/z 577/579[M-Boc]+.
阶段3. 1-叔丁基2-环戊基(2R)-4-{[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-1,2-二羧酸酯
将{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[1-(2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(100mg,0.15mmol)、中间体22(69mg,0.22mmol)和乙酸(168μL,0.94mmol)溶解在DCE(5mL)中并在室温下搅拌2小时。加入STAB(93mg,0.44mmol)并将反应再搅拌2小时直至反应完全。对反应物用DCM(20mL)稀释并用饱和NaHCO3(20mL)洗涤。分离水层并使用DCM(20mL)进一步萃取。对合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩并通过自动柱色谱(使用庚烷中的EtOAc(梯度0-100％))进行纯化以得到无色油状的标题化合物(63mg,44％)。
LCMS:m/z 973/975/977[M+H]+.
阶段4.(2R)-4-{[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯
向1-叔丁基2-环戊基(2R)-4-{[(4-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙酰基]氨基}哌啶-1,2-二羧酸酯(63mg,0.065mmol)的二噁烷(2mL)溶液中加入含4M HCl的二噁烷(2mL)并将反应在室温下搅拌17小时。真空浓缩反应物并通过制备型HPLC纯化所得残留物以得到棕色固体状的标题化合物的二甲酸盐(11.1mg,30％)。
LCMS纯度96％,m/z 573/575/577[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm:8.57(2H,br,s),8.04(1H,s),7.92(1H,s),7.39-7.57(3H,m),7.32(1H,s),5.18-5.35(1H,m),4.96(2H,s),4.28-4.42(2H,m),3.77(1H,d,J＝11.1Hz),3.21-3.30(2H,m),2.82-3.05(2H,m),2.35-2.46(1H,m),2.03-2.14(1H,m),1.83-1.97(2H,m),1.74(9H,br,s)
实施例56：(2S)-4-{[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯二甲酸盐
使用与实施例55类似的方式合成(2S)-4-{[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}哌啶-2-羧酸环戊酯，其中在方案30中所示途径的阶段3处使用中间体23。
LCMS:纯度98％,m/z 573/575/577[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm:8.19-8.87(2H,m),8.04(1H,s),7.92(1H,s),7.37-7.56(3H,m),7.22-7.36(1H,m),5.17-5.33(1H,m),4.96(2H,s),4.27-4.42(2H,m),3.78(1H,d,J＝11.5Hz),3.23-3.29(2H,m),2.80-3.07(2H,m),2.33-2.52(1H,m),2.02-2.15(1H,m),1.83-2.00(2H,m),1.74(9H,d,J＝3.8Hz).
实施例57：N-[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]-L-亮氨酸环戊酯
使用与实施例55类似的方式合成N-[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]-L-亮氨酸环戊酯，其中在方案30中所示途径的阶段4处使用中间体32的游离碱并在阶段4处使用DCM作为溶剂。通过制备型HPLC对最终产物进行纯化。
LCMS:纯度99％,m/z 560/562/564[M+H]+
1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm:8.06(1H,s),7.90(1H,s),7.40-7.52(3H,m),7.34(1H,s),5.10-5.20(1H,m),4.95(2H,s),4.26(2H,t,J＝5.8Hz),3.01-3.19(2H,m),2.83-2.96(1H,m),1.53-1.90(9H,m),1.38-1.47(2H,m),0.89(6H,d,J＝2.6Hz).
实施例58：N-[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]-L-亮氨酸叔丁酯
使用与实施例55类似的方式合成N-[2-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-1H-吡唑-1-基)乙基]-L-亮氨酸叔丁酯，其中在方案30中所示途径的阶段3处使用盐酸L-亮氨酸叔丁酯并在阶段4处使用DCM作为溶剂。通过制备型HPLC对最终产物进行纯化。
LCMS:纯度95％,m/z 548/550/552(M+H)+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm:8.06(1H,s),7.90(1H,s),7.40-7.52(3H,m),7.34(1H,s),5.10-5.20(1H,m),4.95(2H,s),4.26(2H,t,J＝5.8Hz),3.01-3.19(2H,m),2.83-2.96(1H,m),1.53-1.90(9H,m),1.38-1.47(2H,m),0.89(6H,d,J＝2.8Hz).
实施例59.4-[(5-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}吡啶-2-基)甲基]哌嗪-2-羧酸环戊酯
在二氯甲烷(3mL)中将1-叔丁基2-环戊基4-[(5-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}吡啶-2-基)甲基]哌嗪-1,2-二羧酸酯(0.078g,0.081mmol)与TFA(3mL)在室温下搅拌1小时。减压浓缩反应并通过HPLC纯化残留物以得到标题化合物(28mg)。
LCMS纯度100％,m/z 556/558[M+H]+.
1H NMR(300MHz,CDCl3)9.13(1H,d,J＝1.7Hz),8.23(1H,dd,J＝2.3,8.1Hz),7.93(1H,s),7.47(1H,d,J＝8.1Hz),7.37-7.34(2H,m),7.20(1H,dd,J＝7.4,8.7Hz),5.25-5.19(1H,m),5.03(2H,d,J＝5.5Hz),4.60(1H,t,J＝5.5Hz),4.36(2H,s),3.77(1H,d,J＝13.9Hz),3.67(1H,d,J＝13.9Hz),3.58(1H,dd,J＝3.2,8.1Hz),3.13-3.06(1H,m),2.99-2.86(2H,m),2.69-2.63(1H,m),2.53-2.47(1H,m),2.39-2.31(1H,m),1.89-1.54(9H,m).
上述方法中使用的1-叔丁基2-环戊基4-[(5-{5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}吡啶-2-基)甲基]哌嗪-1,2-二羧酸酯的制备方法如下：{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氟苄基)氨基]-5-[6-甲酰基吡啶-3-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(100mg,0.15mmol)与中间体28(49mg,0.16mmol)在DCE(5mL)中在室温下反应1.5小时。随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(63mg,0.30mmol)并在室温下持续搅拌2小时。加入饱和Na2CO3水溶液(20mL)并持续剧烈搅拌20分钟。使用二氯甲烷(3x 20mL)萃取反应物，干燥(MgSO4)并减压浓缩。通过柱色谱(硅胶；庚烷中50％EtOAc)纯化残留的黄色油状物质以得到所需的无色油状产物(78mg)。LCMS:m/z 956/958[M+H]+.
上文中使用的3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氟苄基)氨基]-5-(6-甲酰基吡啶-3-基)吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯的制备方法如下：将{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[6-(羟基甲基)吡啶-3-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(100mg,0.15mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中并加入二氧化锰(257mg,3mmol)。将反应在室温下搅拌1小时，随后通过过滤。使用二氯甲烷(2x 10mL)清洗滤垫(filter pad)并对合并的滤液进行减压浓缩以得到不经纯化即可使用的橙色油状物质(100mg)。
上文中使用的{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[6-(羟基甲基)吡啶-3-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯的制备方法如下：将{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[6-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基}氧基}甲基)吡啶-3-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯(1.22g,1.5mmol)与四丁基氟化铵(3mL，3mmol，1N，在THF中)在THF(20mL)中室温下搅拌17小时。对反应物用EtOAc(50mL)稀释并用水(2x 50mL)和盐水(1x 50mL)洗涤。对合并的有机层进行干燥(MgSO4)和减压浓缩。通过柱色谱(硅胶；庚烷中80％EtOAc)纯化所得淡黄色泡沫状物质以得到所需的无色油状的材料(809mg)，将该材料静置以固化为白色固体。LCMS:m/z 676/678[M+H]+.
上文中使用的{3-[(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯苄基)氨基]-5-[6-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基}氧基}甲基)吡啶-3-基]吡嗪-2-基}亚氨二碳酸二叔丁酯由中间体4(1.0g,1.5mmol)和添加至DME(20mL)和1.9mL 2M Na2CO3中的2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(0.81g,2.3mmol)制备，随后使用N2对所得混合物进行20分钟的脱气。向反应混合物中加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(108mg,0.2mmol)并在80℃下加热16小时。对反应物冷却并使用EtOAc(50mL)稀释并通过过滤。使用EtOAc(50mL)清洗滤垫并对合并的滤液用盐水(1x 50mL)洗涤、用MgSO4干燥并减压浓缩。通过柱色谱(硅胶，庚烷中20％EtOAc)纯化所得残留物以得到所需材料(1.22g)。
上述方法中使用的2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶由5-溴-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶(1.8g 6.0mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.81g,7.1mmol)和PdCl2(dppf)2(218mg,0.3mmol)以类似于中间体8的方式制备以得到所需的淡绿色油状产物(1.1g)。LCMS:m/z 268[M+H]+.
上述方法中使用的5-溴-2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶由溶解在DMF(25mL)中的5-溴-2-羟甲基吡啶(2.5g,13mmol)和咪唑(1.81g,27mmol)制备并加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.20g,15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌50分钟，随后倒入水(50mL)中。使用二乙醚(3x 50mL)萃取并对合并的有机层用盐水(1x 50mL)洗涤、干燥(MgSO4)并减压浓缩。通过柱色谱(硅胶；庚烷中5％EtOAc)纯化所得残留物以得到所需的无色油状材料(3.75g)。LCMS:m/z 302/304[M+H]+.
生物活性的测量
CSF1R(FMS)激酶活性
在由英国威尔特郡的英杰公司(Invitrogen)进行的试验中测量化合物抑制CSF1R(FMS)激酶活性的能力。Z′-LYTETM生物化学试验使用基于荧光的酶联形式并基于磷酸化和非磷酸化肽对蛋白酶切割的选择性差异。使用形成FRET对的两个荧光团(每端一个)标记肽底物。在初级反应中，激酶将ATP的γ-磷酸转移至合成的FRET肽中的单个丝氨酸或苏氨酸残基。在次级反应中，位点特异性蛋白酶识别并切割非磷酸化的FRET肽。FRET肽的磷酸化抑制了显色剂进行的切割。切割破坏了FRET肽上供体(即香豆素)和受体(即荧光素)荧光团之间的FRET，而未切割且磷酸化的FRET肽维持了FRET。使用计算在400nm处激发供体荧光团后供体发射与受体发射的比率(发射比)的放射性测量对反应过程进行定量。
最终的10μL激酶反应物由50mM HEPES pH 7.5、0.01％BRIJ-35、10mMMgCl2、1mM EGTA中的0.12-12.3ng CSF1R(FMS)、2μM Tyr 01肽和ATP组成。在ATP浓度为(或接近)Km的情况下进行该试验。将激酶反应物在室温下孵育60分钟后，加入5μL的1:256稀释的显色剂。将试验平板在室温下再孵育60分钟并在荧光读板仪上读取。
由DMSO中测试化合物储液的1/3log稀释系列生成重复数据点。从最高10mM的浓度开始进行9次稀释步骤，并包括“无化合物”空白。收集数据并试验来自IDBS的XLfit软件进行分析。剂量应答曲线是拟合至模型号205(S型剂量应答模型)的曲线。从生成的曲线上确定并报道实现50％抑制的浓度。
人全血的巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)刺激
全血使用肝素化的真空收集管(vacutainer)(BD公司(Becton Dickinson))静脉穿刺吸取，并且在等体积RPMI1640组织培养基(西格玛公司(Sigma))中稀释。然后接种100μl到V底96孔组织培养处理板。在100μl的RPMI1640培养基中加入抑制剂后2小时，使用终浓度为50ng/ml的MCSF(派普罗泰克公司(Peprotech)：#300-25-10uG)刺激血液并在37℃和5％CO2下孵育22小时。通过由MCP-1/CCL2Duoset(R&D系统公司(R&D Systems)#DY279)开发的夹心ELISA从无细胞上清液中测量MCP-1水平。ELISA所需的其他试剂购自西格玛公司(BSA：A3059，10x PBS：D1408，吐温20：P5927)、R&D系统公司(显色试剂：#DY999和终止溶液：#DY994)和克斯塔公司(Costar)(96孔EIA板：#2592)。根据生产商的说明书进行试验，并进行了以下修改：试验前将无细胞上清液在稀释剂中以30:70稀释。除捕获抗体外的所有孵育均在550rpm振荡的情况下进行。各步骤间进行3次洗涤，且孵育时间是封闭1.5小时、样品/标准品与检测抗体孵育2小时、HRP孵育30分钟、显色20分钟。
IC50值分配到如下五个范围之一：
范围A：IC50<100nM
范围B：100nM<IC50<300nM
范围C：300nM<IC50<1000nM
范围D：1000nM<IC50<5000nM
范围E：IC50>5000nM
NT＝未测试

Claims (25)

1.一种化合物，所述化合物是式(I)氨基酸或氨基酸酯或其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物：
其中：
环A是C6-12芳基、5至12元杂环基或C3-7碳环基环；
R1和R2独立地代表氢、卤素或未取代的基团，所述未取代的基团选自C1-4烷基、C2-4烯基、C1-4烷氧基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷基、C2-4卤代烯基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、-SR3、氰基、硝基、C1-4羟基烷基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基；
n是0或1；
X是NH或O；
V和W独立地代表–N＝或–C(Z)＝；
各Z相同或不同，代表氢、氟、氯、溴、碘、氰基、未取代的C1-3氟烷基或未取代的C1-3烷基；
环B是C6-12芳基、5至12元杂环基或C3-7碳环基环；
[接头]代表式-(CH2)m-X1-L1-Y1-的基团，其中：
-m是0、1、2或3；
-X1代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S(＝O)2-、–NR5C(＝O)-、-C(＝O)NR5-、-NR5C(＝O)NR6-、-NR5S(＝O)2-或-S(＝O)2NR5-，其中R5和R6独立地是氢或C1-6烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
-L1代表式–(Alk1)x-(Q)y-(Het)w-(Alk2)z-或–(Alk1)x-(Het)w-(Q)y-(Alk2)z-的二价基团，其中
-x、y、w和z独立地是0或1；
-Q代表二价C6-12芳基、5至12元杂环基或C3-7碳环基环；
-Het代表-O-、-S-或-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
-Alk1和Alk2独立地代表二价C3-7环烷基基团，或者直链或支链的，C1-6亚烷基、C2-6亚烯基或C2-6亚炔基基团；
-Y1代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-S(＝O)2-、–NR5C(＝O)-、-C(＝O)NR5-、-NR5C(＝O)NR6-、-NR5S(＝O)2-或-S(＝O)2NR5-，其中R5和R6独立地是氢或C1-6烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
-R表示式(X)或(Y)的基团：
其中：
-R8是-COOH基团或可由一种或多种胞内羧酸酯酶水解成-COOH基团的酯基；
-R9和R10相同或不同，各自代表天然或非天然α-氨基酸的α-取代基，或者R9和R10与其连接的碳一起形成3至6元饱和螺环烷基或杂环基环；
-R11代表氢原子或C1-4烷基基团；
-环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键可以是来自环D中的氮原子或碳原子；
其中当R是(X)时，[接头]不通过O、N或S原子与(X)相连；
并且除非另有说明，其中：
-R5、R6、R8、R9、R10、R11、Alk1和Alk2中的任何烷基、烯基和炔基基团和部分相同或不同，各自是未取代的或被1、2或3个未取代的取代基取代，所述未取代的取代基相同或不同，选自卤素原子和C1-4烷氧基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、-SR3、氰基、硝基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基；2 -->
-环A、B、Q、D、Alk1和Alk2以及由R9和R10形成的环中的任何芳基、杂环基、环烷基和碳环基基团和部分相同或不同，各自是未取代的或被1、2、3或4个未取代的取代基取代，所述未取代的取代基选自卤素原子和氰基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4烯氧基、C1-4卤代烷基、C2-4卤代烯基、C1-4卤代烷氧基、C2-4卤代烯氧基、羟基、C1-4羟基烷基、-SR3和–NR3R4基团，其中各R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基，或来自式COOR12、-COR12、-SO2R12、-CONR12R13、-SO2NR12R13、-OCONR12R13、-NR1 2COR13、-NR12COOR13、-NR12SO2R13、-NR12SO2OR13或–NR12CONR12R13的取代基，其中R12和R13相同或不同，代表氢或未取代的C1-4烷基，或者当连接至同一氮原子时R12和R13形成非稠合的5或6元杂环基团，
前提是所述化合物不是：
4-(4-{6-氨基-5-[1-(2,6-二氯-3-氟-苯基)-乙氧基]-吡啶-3-基}-吡唑-1-基)-吡咯烷-2-羧酸甲酯。
2.如权利要求1所述的化合物，其中X是NH。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中环A和环B独立地代表苯基或5至6元杂环基基团，所述环A或环B基团是未取代的或被1、2或3个相同或不同取代基取代，所述取代基选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中环B是1,4-亚苯基、1,3-亚苯基或吡啶基基团。
5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R1和R2独立地代表氢、卤素或未取代的C1-4烷基。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中
(i)R15是氢、氟或可选取代的C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-或C2-3烯基-(Z1)a-[C1-3烷基]b-，其中a和b独立地是0或1，且Z1是–O-、-S-、或–NR18-，其中R18是氢或C1-3烷基；且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；
(ii)R15是氢或可选取代的R19R20N-C1-3烷基，其中R19是氢或C1-3烷基且R20是氢或C1-3烷基；或者R19和R20与其连接的氮一起形成可选取代的5或6个环原子的单环杂环或8至10个环原子的双环杂环，且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基；或者
(iii)R15和R16与其连接的碳一起形成可选取代的3至7个环原子的单环碳环或8至10个环原子的双环碳环系统，且R17是氢；或者
(iv)R15和R16与其连接的碳一起形成可选取代的3至7个环原子的单环杂环，其中至少一个环原子选自–O-、-S-或–NR18-，其中R18是氢或C1-3烷基或8至10个环原子的双环杂环系统，其中至少一个环原子选自–O-、-S-或–NR18-，其中R18是氢或C1-3烷基，且R17是氢。
7.如权利要求6所述的化合物，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢。
8.如权利要求6所述的化合物，其中R14是环戊基或叔丁基。
9.如前述权利要求中任一项所述的化合物，其中(i)R9和R10是天然氨基酸的侧链，(ii)R9和R10之一是氢或未取代的C1-4烷基且另一个是未取代的C1-6烷基或被C1-4烷氧基取代的C1-6烷基，或者(iii)R9和R10与其连接的碳一起形成饱和螺环丁基环。
10.如前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R代表式(Y1)的基团：
其中环D是环中具有至少两个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键来自环D中的氮原子。
11.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中R代表式(Y2)的基团：
其中环D是环中具有至少一个氮原子的5至7元饱和杂环基，其中R8和R11连接至与环氮原子相邻的环碳原子，且所示被波浪线打断的键来自环D中的碳原子。
12.如权利要求11所述的化合物，其中[接头]代表-(CH2)m-X1-(Alk1)x-Y1，其中m是0、1、2或3，x是0或1；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团且X1和Y1独立地代表键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。
13.如权利要求1-3或5-12中任一项所述的化合物，其中：
-环A代表苯基或5至6元杂环基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个相同的或不同取代基取代，所述取代基选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基；
-R1和R2各代表氢；
-n是1；
-X是NH；
-V是–N＝；
-W是–C(Z)＝，其中Z代表氢、氟、氯或未取代的C1-3烷基，优选是氢；且
-环B代表苯基或5至6元杂环基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个相同或不同取代基取代，所述取代基选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、氰基、硝基、-SR3和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基。
14.如权利要求13所述的化合物，其中基团[接头]-R是(a)至(c)中的一个：
(a)R代表式(X)的基团；
R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢；
R9和R10是天然氨基酸的侧链，或者R9和R10之一是氢或未取代的C1-4烷基且另一个是未取代的C1-6烷基基团；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基基团；
[接头]代表-(CH2)m-X1-(Alk1)-或-(CH2)v-，其中v是1或2，m是0、1、2或3；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团且X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3；
(b)R代表权利要求8中定义的式(Y1)的基团；
R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基基团；
[接头]是-(CH2)m-X1-(Alk1)x-或-(CH2)v-，其中v是1或2，m是0、1、2或3；x是0或1；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团且X1是键、-O-、-S-、-NR7-、-C(＝O)-或-C(＝O)NR5-，其中R5是氢或C1-4烷基且R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3，当x是0时X1是键或C(＝O)；
(c)R代表权利要求9中定义的式(Y2)的基团；
R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢；
R11代表氢原子或未取代的C1-2烷基基团；
[接头]代表-(CH2)m-X1-(Alk1)x-Y1，其中m是0、1、2或3；x是0或1；X1是键或-C(＝O)；Alk1是未取代的C1-3亚烷基基团；且Y1是键或-NR7-，优选是-NR7-，其中R7代表氢、未取代的C1-4烷基或-C(＝O)CH3。
15.如权利要求1-3或5-14中任一项所述的化合物，其中：
-环A代表苯基基团，所述环A基团是未取代的或被1、2或3个相同或不同取代基取代，所述取代基选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基；
-R1和R2各代表氢；
-n是1；
-X是NH；
-V是–N＝；
-W是–C(H)＝；且
-环B代表1,4-亚苯基、1,3-亚苯基或1,3-吡唑基基团，所述环B基团是未取代的或被1、2或3个相同或不同取代基取代，所述取代基选自卤素原子和未取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基和–NR3R4基团，其中R3和R4相同或不同，代表氢或未取代的C1-2烷基。
16.如权利要求15所述的化合物，其中：
-R代表式(Y1′)的基团：
-R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢；
[接头]是-(CH2)v-和-C(＝O)-，其中v是1或2。
17.如权利要求15所述的化合物，其中：
-R代表式(Y2′)的基团：
-R8是基团-COOH或式-(C＝O)OR14的酯基，其中R14是R15R16R17C-，其中R15是氢或C1-3烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立地是0或1且Z1是–O-、-S-或–NH-且R16和R17独立地是氢或C1-3烷基-；或者R15和R16与其连接的碳一起形成3至7元的环烷基环且R17是氢；
-[接头]是-C(＝O)NR7-、-CH2NR7-或-CH2C(＝O)NR7-，其中R7代表氢、未取代的甲基、未取代的乙基、未取代的异丁基或-C(＝O)CH3。
18.如权利要求1所述的化合物，所述化合物是：
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯；
4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯；
(2S)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯；
(2R)-4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯；
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-氯苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯；
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯；
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(甲基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯；
(2R)-4-[(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)(乙基)氨基]哌啶-2-羧酸叔丁酯；
(2R)-4-[乙酰基(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]哌啶-2-羧酸环戊酯；
(2R)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯；
1-[(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)氨基]环丁烷羧酸环戊酯；
N-[2-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苯基)乙基]-2-甲基丙氨酸环戊酯；
4-(4-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}-2-乙基苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯；或
(2S)-4-(3-{5-氨基-6-[(2,6-二氯苄基)氨基]吡嗪-2-基}苄基)哌嗪-2-羧酸环戊酯。
19.用于人体或动物体治疗方法的前述权利要求中任一项所述的化合物。
20.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-18中任一项所述的化合物和一种或多种药学上可接受的运载体和/或赋形剂。
21.用于治疗CSF-1R激酶介导的疾病或病症的权利要求1-18中任一项所述的化合物。
22.用于治疗疾病的权利要求1-18中任一项所述的化合物，所述疾病是细胞增殖疾病、聚谷胺酰胺疾病、神经退行性疾病、自身免疫疾病、糖尿病、血液疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化或感染的炎性后遗症。
23.用于治疗疾病的权利要求22所述的化合物，所述疾病是癌症、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、1型糖尿病、哮喘、炎性肠病、系统性红斑狼疮，伴随感染病情的炎症、牛皮癣、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、慢性阻塞性肺病、多发性硬化、特应性皮炎或移植物抗宿主病。
24.一种治疗或预防对象中CSF-1R激酶介导的疾病或病症的方法，所述方法包括给予所述患者有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物。
25.权利要求1-18中任一项所述的化合物在生产用于治疗或预防CSF-1R激酶介导的疾病或病症的药物中的用途。
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