CN104459109B - 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液 - Google Patents
一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104459109B CN104459109B CN201410685176.5A CN201410685176A CN104459109B CN 104459109 B CN104459109 B CN 104459109B CN 201410685176 A CN201410685176 A CN 201410685176A CN 104459109 B CN104459109 B CN 104459109B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nitrite ion
- tmb
- component
- tmb nitrite
- enzyme linked
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO，每1000mL所述氧化效果好的单组份TMB显色液中还包括EDTA1-3g。通过将本发明所述范围内的单组份TMB显色液用于酶联免疫反应中的显色阶段，避免了TMB显色液在使用之间需要将A、B液混合，减少了操作时间，避免了TMB显色液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度；本发明所用的TMB溶剂为DMSO，以溶剂乙醇相比，其溶解TMB的速度快，溶解充分，溶解后的溶液稳定性更好；EDTA的加入能进一步的提高TMB溶剂的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及TMB显色液领域，具体地，涉及一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液。
背景技术
TMB是一种过氧化物酶底物，用于ELISA反应。底物产生一种可溶性淡蓝色的末端产物，可在370或635nm在分光光度计上读取。其适用于酶联免疫反应中的显色阶段的定量和定性分析。其检验的原理是：当标记在抗体或抗原上的酶与显色液中的TMB、双氧水等反应，加入终止液后溶液由无色变成黄色，黄色深浅反应ELISA体系中抗原抗体结合的多少，从而判断某种抗原或抗体的多少。在通过酶标仪测度吸光值，判断免疫反应的程度。
现有市售的酶联免疫试剂盒所采用TMB显色剂液大多为双组份，分A液和B液，使用之前需要先混匀，在使用上存在缺点一是不够方便，二是在包装材料上存在成本提高和资源浪费；三是使用中的混合过程容易造成批间质量不均一；四是还存在稳定性差、保存时间短、显色背景高、灵敏度低等的缺点，市售的酶联免疫试剂盒也有采用单组份的TMB显色液，但是现有的单组份TMB显色液的稳定性不是不是特别好。
现有技术的TMB显色液及其制备方法，由A液和B液等体积混合后得到，所述A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氢二钠0.01-0.5mol/L，过氧化氢0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括TMB、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩尔浓度为0.1-1mmol/L，所述HCl的摩尔浓度为0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1-10%；现有的单组份TMB显色液的氧化剂为过氧化脲。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，以克服现有显色液操作麻烦、稳定性差的问题。
此外，本发明还包括上述单组份TMB显色液的应用。
本发明解决上述问题所采用的技术方案是：一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO，每1000mL所述单组份TMB显色液中还包括EDTA1-3g。
现有的TMB显色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氢二钠0.01-0.5mol/L，过氧化氢0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括TMB、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩尔浓度为0.1-1mmol/L，所述HCl的摩尔浓度为0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1-10%，现有TMB显色剂的缺点在于A、B两种液体在显色之前需要等体积混匀，操作不方便、耗时间、效率较低、批此之间存在差异，同时成本也高，且A液B液自混合的过程中，HCl会挥发，会导致显色的有效成分的浓度发生改变，因而会导致混合后的TMB显色液的在显色过程中的灵敏度降低；本发明为单组份TMB显色液，避免了TMB显色液在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，简化操作流程，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果；不会存在因HCl挥发导致的TMB显色液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度；并且，本发明在TMB显色液中加入加入了1-3g的EDTA，实验证明，EDTA的加入提高了TMB显色液的稳定性；本发明用过硼酸钠替代现有的过氧化氢、过氧化脲，实验证明，与过氧化氢、过氧化脲相比，过硼酸钠具有更好的氧化性；本发明将传统溶剂乙醇替换成DMSO，DMSO为一种极性非质子溶剂，具有较好的渗透性，能与有机溶剂、水互溶，因此，DMSO能加快TMB的溶解，使之溶解的更充分，且使溶解后的溶液更稳定。
进一步地，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。
实验证明，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的TMB显色液具有更好的稳定性。
进一步地，DMSO为20-30mL。20-30mL的DMSO具有较快的溶解速度，溶解的更充分，稳定性更好。
进一步地，TMB的质量设置为10-30mg。将TMB的质量设置为10-30mg能有效的提高显色效果，提高显色的灵敏度。
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液的应用，将所述单组份TMB显色液应用到酶联免疫试剂盒。
综上，本发明的有益效果是：
1、通过将本发明所述范围内的单组份TMB显色液用于酶联免疫反应中的显色阶段，避免了TMB显色液在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果。
2、通过将本发明所述范围内的单组份TMB显色液用于酶联免疫反应中的显色阶段，避免了TMB显色液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度。
3、本发明的氧化效果好的单组份TMB显色液中包括1-3g的EDTA，使得所制备的单组份TMB显色液具有更好的吸光度，提高了TMB显色液的稳定性。
4、本发明所用的溶剂为DMSO，以传统溶剂乙醇相比，其溶解TMB的速度快，溶解充分，溶解后的溶液稳定性更好。
具体实施方式
下面结合实施例，对发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml，EDTA1g，TMB5mg，10mLDMSO。
实施例2：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml，EDTA2g，TMB5mg，10mLDMSO。
实施例3：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml，EDTA3g，TMB5mg，10mLDMSO。
实施例4：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml，EDTA2g，TMB10mg，20mLDMSO。
实施例5：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油30ml，EDTA2g，TMB30mg，30mlDMSO。
实施例6：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸10g，磷酸氢二钠20g，过硼酸钠0.5g，甘油30ml，EDTA3g，TMB40mg，40mlDMSO。
实施例7：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷酸氢二钠18g，过硼酸钠0.2g，甘油20ml，EDTA2g，TMB20mg，20mlDMSO。
实施例8：
一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷酸氢二钠18g，过硼酸钠0.2g，甘油20ml，EDTA2g，TMB30mg，30mlDMSO。
表1
表2
表1是单组份显色液的性能比较数据；
表2是单独的过硼酸钠与过氧化氢、过氧化脲的吸光度值比较。
本发明与现有单组份的TMB显色液相比较，不仅将TMB显色液有双组份设置为单组份，使得TMB显色液在操作过程中较为方便；且本发明将现有的TMB显色液所有的乙醇溶剂替换成DMSO，DMSO为一种极性非质子溶剂，具有较好的渗透性，能与有机溶剂、水互溶，因此，DMSO能加快TMB的溶解，使之溶解的更充分，且使溶解后的溶液更稳定。
现有的TMB显色液在酶联免疫反应的显色阶段的显色时间一般都是20min左右，如表1所示，本发明的实施例1至实施例8的显色时间均低于20min，故本发明的氧化效果好的单组份TMB显色液具有更好的灵敏度；其中实施例4、实施例5、实施例7、实施例8的TMB值为10-30mg，显色时间是最短的，故当1000mLTMB显色液中TMB的含量为10-30mg时，具有更好的灵敏度。
现有的TMB显色液没有加入EDTA，其吸光度的值一般都低于5.5，如表1所示，本本发明的实施例1至实施例8的的吸光度均大于5.5，故本发明的稳定性好的单组份TMB显色液具有更好的显色效果，其中实施例5与实施例8相比，实施例8具有更高的吸光度，故实施例的稳定性更好，如此，证明柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的氧化效果好的单组份TMB显色液具有更好的稳定性；实施例5、实施例6、实施例7中，实施例6具有较小的吸光度值，实施例5的DMSO为30mL，实施例7的DMSO为20mL，如此，证明，DMSO为20-30mL的稳定性更好。
如表2所示，过硼酸钠与过氧化氢、过氧化脲相比，吸光度值的平均值更高，故其具有更好的氧化性。
如上所述，可较好的实现本发明。
Claims (5)
1.一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，其特征在于，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO，每1000mL所述单组份TMB显色液中还包括EDTA1-3g。
2.根据权利要求1所述的一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，其特征在于，所述柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。
3.根据权利要求1或2所述的一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，其特征在于，所述DMSO为20-30mL。
4.根据权利要求1或2所述的一种用于酶联免疫反应的单组份TMB显色液，其特征在于，所述TMB的质量设置为10-30mg。
5.一种如权利要求1或2所述单组份TMB显色液的应用，其特征在于，将所述单组份TMB显色液应用到酶联免疫试剂盒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410685176.5A CN104459109B (zh) | 2014-11-25 | 2014-11-25 | 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410685176.5A CN104459109B (zh) | 2014-11-25 | 2014-11-25 | 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104459109A CN104459109A (zh) | 2015-03-25 |
| CN104459109B true CN104459109B (zh) | 2016-03-23 |
Family
ID=52905497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410685176.5A Expired - Fee Related CN104459109B (zh) | 2014-11-25 | 2014-11-25 | 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104459109B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105116141B (zh) * | 2015-07-02 | 2016-09-14 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 一种单组份tmb显色液及其制备方法 |
| US9714939B1 (en) * | 2016-03-13 | 2017-07-25 | Hao Zhang | Concentated liquid single component TMB substrate for detection assay of horseradish peroxidase |
| CN105823871B (zh) * | 2016-04-18 | 2017-11-07 | 苏州新赛美生物科技有限公司 | 一种高效稳定的单组份酶联免疫显色液及其制备方法 |
| CN105974107B (zh) * | 2016-07-13 | 2018-01-30 | 广州捷倍斯生物科技有限公司 | 单组份tmb显色液及其配制方法 |
| CN109085342A (zh) * | 2018-09-14 | 2018-12-25 | 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司 | 一种提高检测灵敏度的elisa样本稀释液及制备方法 |
| CN111505274B (zh) * | 2020-04-28 | 2023-06-20 | 武汉生命起源科技有限公司 | 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液的制备方法 |
| CN113376366B (zh) * | 2021-04-25 | 2022-10-25 | 深圳市计量质量检测研究院（国家高新技术计量站、国家数字电子产品质量监督检验中心） | 一种单组份tmb显色液 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101304996A (zh) * | 2005-09-16 | 2008-11-12 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | 抑制igf-1r酪氨酸激酶活性的嘧啶衍生物 |
| CN101365720A (zh) * | 2005-08-26 | 2009-02-11 | 哥伦比亚大学 | 完全人杂交瘤融合配偶体细胞系 |
| CN101603965A (zh) * | 2009-04-08 | 2009-12-16 | 宜康（杭州）生物技术有限公司 | Elisa竞争法定量测定peg修饰药物的试剂盒 |
| CN103698505A (zh) * | 2013-12-13 | 2014-04-02 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种高效稳定的tmb显色液及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19641560A1 (de) * | 1996-10-09 | 1998-04-16 | Boehringer Mannheim Gmbh | Monoklonale Antikörper gegen einen Komplex aus humanem ACT und einer Serinprotease |
| WO2009061739A1 (en) * | 2007-11-06 | 2009-05-14 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Neutralization of hcv |
-
2014
- 2014-11-25 CN CN201410685176.5A patent/CN104459109B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101365720A (zh) * | 2005-08-26 | 2009-02-11 | 哥伦比亚大学 | 完全人杂交瘤融合配偶体细胞系 |
| CN101304996A (zh) * | 2005-09-16 | 2008-11-12 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | 抑制igf-1r酪氨酸激酶活性的嘧啶衍生物 |
| CN101603965A (zh) * | 2009-04-08 | 2009-12-16 | 宜康（杭州）生物技术有限公司 | Elisa竞争法定量测定peg修饰药物的试剂盒 |
| CN103698505A (zh) * | 2013-12-13 | 2014-04-02 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种高效稳定的tmb显色液及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104459109A (zh) | 2015-03-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104459109B (zh) | 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液 | |
| CN104459110B (zh) | 一种单组份tmb显色液 | |
| WO2016206654A2 (zh) | 一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物 | |
| CN105974107B (zh) | 单组份tmb显色液及其配制方法 | |
| CN103063661B (zh) | 一种tmb显色液及其制备方法 | |
| CN104458719B (zh) | 一种单组份tmb显色液的制备方法 | |
| CN105116141B (zh) | 一种单组份tmb显色液及其制备方法 | |
| CN106198504A (zh) | 一种增强型化学发光检测试剂盒及方法 | |
| CN104458717A (zh) | 一种单组份酶底物显色液 | |
| Alam | A model for formulation of protein assay | |
| CN111505274B (zh) | 一种用于酶联免疫反应的单组份tmb显色液的制备方法 | |
| CN110031615A (zh) | 一种超敏化学发光hrp底物液及其制备方法 | |
| CN110118768A (zh) | 化学发光试剂及其应用 | |
| CN103698505A (zh) | 一种高效稳定的tmb显色液及其制备方法 | |
| CN112159733A (zh) | 磁微粒化学发光免疫分析用清洗液及其制备方法 | |
| CN105891202B (zh) | 一种单组份tmb显色液及其制备方法 | |
| CN104459114B (zh) | 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂 | |
| CN103913566B (zh) | 一种酶联免疫显色底物及其制备方法 | |
| CN102645530A (zh) | 甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法 | |
| JP7202559B2 (ja) | 基質溶液 | |
| Gentile et al. | Spectrophotometric Studies of Uranyl-Urea,-Thiourea and-Guanidine Systems in Absolute Ethyl Alcohol1 | |
| CN101101294A (zh) | 酶联免疫体外诊断试剂中显色剂的制备 | |
| JP6737284B2 (ja) | 安定化剤および安定化方法 | |
| JP7329808B2 (ja) | 基質溶液 | |
| JP2015137891A (ja) | 試料の調製方法及びビタミン類の免疫測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160323 Termination date: 20181125 |