CN112159733A - 磁微粒化学发光免疫分析用清洗液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术分析领域，公开了一种磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，包括免疫复合物保持稳定剂、非离子型表面活性剂、缓冲剂和超纯水；所述免疫复合物保持稳定剂为氯化钠溶剂，所述非离子型表面活性剂为吐温20，所述缓冲剂为Tris‑HCl缓冲剂，能够显著降低检测结果的背景值，提高检测的灵敏度；另外提供一种磁微粒化学发光免疫分析用清洗液的制备方法，其配方简单，原料易于获得，配置后清洗液的保质期较长。

Description

磁微粒化学发光免疫分析用清洗液及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物技术分析领域，尤其涉及磁微粒化学发光免疫分析用清 洗液。

背景技术

磁微粒化学发光免疫分析技术综合了磁微粒载体技术和化学发光免疫分 析技术，具有灵敏度高，检测范围宽，检测时间短等优点，是一种新兴的体 外检测技术。

磁微粒化学发光免疫分析技术的检测步骤是：待检测的抗原(抗体)与 抗体(抗原)结合，形成磁微粒——酶联免疫复合物，然后用清洗液对复合 物进行多次清洗，去除未结合的酶联抗体(抗原)，最后将复合物加入到发 光底物中，酶催化底物发出荧光，发光强度与待测物的含量成正比。

抗原抗体的免疫反应步骤和清洗步骤是免疫分析过程中的关键步骤。清 洗步骤通过磁场的变化转移磁微粒——酶联免疫复合物，去除未结合的酶联 抗体(抗原)。清洗步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号。而不充分的 清洗会导致差异和高背景，影响检测的灵敏性。

现有磁微粒化学发光免疫分析的清洗液清洗效果差，背景值较高，从而 影响检测的灵敏性，甚至造成假阳性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的首要目的是提供一种磁微粒化学发光免疫 分析用清洗液，该化学发光清洗液能够显著降低检测结果的背景值，提高检 测的灵敏度。

为了解决上述问题，本发明的另一目的是提供一种磁微粒化学发光免疫 分析用清洗液的制备方法，其配方简单，原料易于获得，配置后清洗液的保 质期较长。

为实现上述首要目的，本发明提供如下技术方案：

磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，包括免疫复合物保持稳定剂、非离 子型表面活性剂、缓冲剂和超纯水；所述免疫复合物保持稳定剂为氯化钠溶 剂，所述非离子型表面活性剂为吐温20，所述缓冲剂为Tris-HCl缓冲剂。

优选，所述清洗液中氯化钠溶剂的含量为150g-160g，吐温20溶剂的含 量为52g-60g。

进一步优选，所述清洗液中Tris溶剂的含量为154.4g，氯化钠溶剂的 含量为149g，吐温20溶剂的含量为56.2g，HCl的含量为94.4ml。

再进一步优选，所述HCl采用浓度为37％HCl。

为实现上述另一目的，本发明提供如下技术方案：

磁微粒化学发光免疫分析用清洗液的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：37％HCl的制备：取37ml的浓盐酸，加入50ml的超纯水，混 匀，然后定容至100ml；

步骤二：称取56.2g的Tween 20，用500ml的超纯水充分溶解；然后 加入154.4g的Tris，149g的NaCl，充分溶解；然后加入94.4ml的37％HCl， 充分溶解；最后定容至1L。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

1)本发明通过调整清洗液中的组分和含量，通过实验获得一种新的化学 发光清洗液，其能够显著降低检测结果的背景值，提高检测的灵敏度。

2)本发明清洗液的主要组分为Tris，Nacl，Tween 20，37％HCl，其配 方简单，原料易于获得，制造成本低，配置后清洗液的保质期也较长。

3)本发明通过设定特定的配比，使混合后的溶液清洗效果更佳。

具体实施方式

本发明提供的磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，包括免疫复合物保持 稳定剂、非离子型表面活性剂、缓冲剂和超纯水；所述免疫复合物保持稳定 剂为氯化钠溶剂，所述非离子型表面活性剂为吐温20，所述缓冲剂为Tris-HCl 缓冲剂。

优选，所述清洗液中氯化钠溶剂的含量为150g-160g，吐温20溶剂的含 量为52g-60g。

进一步优选，所述清洗液中Tris溶剂的含量为154.4g，氯化钠溶剂的 含量为149g，吐温20溶剂的含量为56.2g，HCl的含量为94.4ml。

再进一步优选，所述HCl采用浓度为37％HCl。

本发明提供的磁微粒化学发光免疫分析用清洗液的制备方法，包括如下 步骤：

步骤一：37％HCl的制备：取37ml的浓盐酸，加入50ml的超纯水，混 匀，然后定容至100ml；

步骤二：称取56.2g的Tween 20，用500ml的超纯水充分溶解；然后 加入154.4g的Tris，149g的NaCl，充分溶解；然后加入94.4ml的37％HCl， 充分溶解；最后定容至1L，通过调整配方中化合物的比例，实验得到最佳的 清洗效果。

其中，主要的组成成分如下：

NaCl、Tris、HCl、Tween 20和超纯水。

NaCl的作用是：提供合适的离子浓度，使免疫复合物保持稳定；

Tris和HCl：形成Tris-HCl缓冲体系，使溶液保持合适的pH值，使免 疫复合物保持稳定；Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷；氨基丁三醇；缓血酸 胺；2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水， 微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺 激性的化学物质。

Tween 20：非离子型表面活性剂，降低抗体抗原的非特异性结合。吐温 20，英文名：Tween-20；Polyoxyethy-lene(20)Sorbaitan Monolaurate； Polysorbate 20。别名：山梨醇酐单月桂酸酯聚氧乙烯(20)醚；聚氧乙烯 (20)失水山梨醇单月桂酸酯；乳化剂T-20，分子式：C₅₈H₁₁₄O₂₆，由山梨糖醇 酐单月桂酸酯与氧化乙烯反应制得。具体就是吐温20为山梨醇及其一失水、 双失水化合物与月桂酸酯按每摩尔山梨醇及其脱水化合物与约20摩尔的环氧 乙烷在碱性条件下缩合而制得。

实施例一：

使清洗液中其他组分不变，NaCl含量不同，对降钙素原(PCT)的检测， 观察不同清洗液对背景值和线性宽度的影响，如表1所示；

磁微粒化学发光免疫分析的清洗液的组成：

1L的清洗液浓缩液(13×)的配方为：

Tris：154.4g；

Nacl：149g；

Tween 20：56.2g；

37％HCl：94.4ml；

用超纯水定容至1L。

1L的清洗液工作液的配方为：

清洗液浓缩液(13×)：76.923ml；

用超纯水定容至1L。

表1降钙素原(PCT)的检测，清洗液中NaCl含量不同对背景值和线性 宽度的影响(n＝10，

)

备注：A样品PCT的浓度为0ng/ml，B样品的浓度为0.25ng/ml，C样 品的浓度为100ng/ml。

实施例二：

使清洗液中其他组分不变，Tween含量不同，对降钙素原(PCT)的检测， 观察不同清洗液对背景值和线性宽度的影响，如表2所示；

磁微粒化学发光免疫分析的清洗液的组成：

1L的清洗液浓缩液(13×)的配方为：

Tris：154.4g；

Nacl：149g；

Tween 20：56.2g；

37％HCl：94.4ml；

用超纯水定容至1L。

1L的清洗液工作液的配方为：

清洗液浓缩液(13×)：76.923ml；

用超纯水定容至1L。

表2降钙素原(PCT)的检测，清洗液中Tween 20含量不同对背景值和 线性宽度的影响(n＝10，

)

备注：A样品PCT的浓度为0ng/ml，B样品的浓度为0.25ng/ml，C样 品的浓度为100ng/ml。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而 言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行 多种变化、修改、替换和变型。本发明不受此处所公开的具体实施例的限制， 所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明的保护范围，简而 言之，其保护范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (5)

1.磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，其特征在于：包括免疫复合物保持稳定剂、非离子型表面活性剂、缓冲剂和超纯水；所述免疫复合物保持稳定剂为氯化钠溶剂，所述非离子型表面活性剂为吐温20，所述缓冲剂为Tris-HCl缓冲剂。

2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，其特征在于：所述清洗液中氯化钠溶剂的含量为150g-160g，吐温20溶剂的含量为52g-60g。

3.根据权利要求2所述的磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，其特征在于：所述清洗液中Tris溶剂的含量为154.4g，氯化钠溶剂的含量为149g，吐温20溶剂的含量为56.2g，HCl的含量为94.4ml。

4.根据权利要求3所述的磁微粒化学发光免疫分析用清洗液，其特征在于：所述HCl采用浓度为37％HCl。

5.磁微粒化学发光免疫分析用清洗液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一：37％HCl的制备：取37ml的浓盐酸，加入50ml的超纯水，混匀，然后定容至100ml；

步骤二：称取56.2g的Tween 20，用500ml的超纯水充分溶解；然后加入154.4g的Tris，149g的NaCl，充分溶解；然后加入94.4ml的37％HCl，充分溶解；最后定容至1L。