CN111855996A - 一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，所述稀释液包括以下成分：Tris‑base：5~7g；浓盐酸：3.5～4.0 mL；聚乙二醇‑6000：9~11g；10%十二烷基硫酸钠：0.95～1.05mL；吐温：9.5～10.5mL；乙二胺四乙酸二钠：0.8~1.0g；酪蛋白钠：9~11g；Proclin300：0.95～1.05mL；曲拉通X‑100：9.5～10.5mL；体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL；本发明的优点在于成分少，聚乙二醇6000，十二烷基硫酸钠，吐温，几种活性剂混合使用，同时配合Tris‑base缓冲液体系，多种原料之间起到了相互增效和协同作用，使得稀释液对吖啶酯标记抗原抗体的保护效果更好，可长期保存，能为抗体提供良好的阻断性与保护性，降低非特异性反应；同时节约物料成本，且试剂的特异性、稳定性、重复性等性能不受影响，适合推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域。
具体地说，是涉及一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液及其制备方法。
背景技术
吖啶盐和相关化合物已被证明是非常有优势的化学发光标记物，稳定性，活性和敏感性超过了那些放射性同位素。吖啶酯能与任何含有氨基的蛋白发生反应，在碱性条件下，NHS将会离去，吖啶酯将会以一个稳定的酰胺键与蛋白质结合形成吖啶化合物。反应完成后，多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。
在存在碱性过氧化氢，吖啶标记的蛋白不需要酶催化可自行发光。加入激发试剂后，体系立即释放光子，可以用430nm标准光度计检测。这个发光过程是十分短暂（整个过程的发生小于2秒），触发方案必须增加内部光度计和光子探测器。蛋白质，多肽，抗体，核酸都可以用吖啶标记。标记化合物在碱性过氧化氢的激发下快速发光，通过收集光子可以检测到标记化合物。
但是在具体实施过程中，吖啶酯抗原抗体结合物并没有想象的稳定，在一般的缓冲液中易水解，易出现试剂不稳定情况，在长期保存过程中，本底也通常很容易升高，由于保存稀释液效果不好，长期储存，保护性降低，因此非特异性结合升高，导致试剂在性能以及稳定性上会大打折扣。由于吖啶酯底物研发简单，成本较低，从目前的体外诊断试剂市场来看，吖啶酯作为发光物质已经是一种大趋势，因此研制一种合适的稀释液，至关重要。
发明内容
本发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液。
本发明的目的是通过以下技术措施来达到的：一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，所述稀释液包括以下成分：
Tris-base：5~7g；
浓盐酸：3.5～4.0 mL；
聚乙二醇-6000：9~11g；
10%十二烷基硫酸钠：0.95～1.05mL；
吐温：9.5～10.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.8~1.0g；
酪蛋白钠：9~11g；
Proclin300：0.95～1.05mL；
曲拉通X-100：9.5～10.5mL；
体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL。
作为一种改进，所述稀释液包括以下成分：
Tris-base：5.0g；
浓盐酸：3.5mL；
聚乙二醇-6000：9.0g；
10%十二烷基硫酸钠：0.95mL；
吐温：9.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.8g；
酪蛋白钠：9g；
Proclin300：0.95mL；
曲拉通X-100：9.5mL；
纯化水，加至1000mL。
作为一种改进，所述稀释液包括以下成分：
Tris-base：6.057g；
浓盐酸：3.8mL；
聚乙二醇-6000：10g；
10%十二烷基硫酸钠：1.0mL；
吐温：10mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.93g；
酪蛋白钠：10g；
Proclin300：1.0mL；
曲拉通X-100：10mL；
纯化水，加至1000mL。
作为一种改进，所述稀释液包括以下成分：
Tris-base：7.0g；
浓盐酸：4.0mL；
聚乙二醇-6000：11g；
10%十二烷基硫酸钠：1.05mL；
吐温：10.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：1.0g；
酪蛋白钠：11g；
Proclin300：1.05mL；
曲拉通X-100：10.5mL；
纯化水，加至1000mL。
本发明还公布了一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：按照所述权利要求2所述的配方，称取各个组分备用；
步骤二：量取适量纯化水，将上述步骤一中称量好的所述Tris-base、聚乙二醇-6000、10%十二烷基硫酸钠、吐温、乙二胺四乙酸二钠、Proclin300、曲拉通X-100依次加入纯化水中，搅拌均匀使其充分溶解混匀；
步骤三：加入浓盐酸调节PH值到PH7.2~7.4之间；
步骤四：加入酪蛋白钠，室温静置溶解12~24h，充分溶解后混匀，用纯化水定容至1000ml；
步骤五：用0.45um滤膜过滤后得到稀释液，置于2℃～8℃保存备用。
由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：本发明的优点在于成分少，制备方法简单，在原料中采用酪蛋白钠，与牛血清白蛋白相比，保护吖啶酯结合物的能力更好，与小牛血清相比，成分相对简单，批间差更容易控制；聚乙二醇6000，十二烷基硫酸钠，吐温，几种活性剂混合使用，同时配合Tris-base缓冲液体系，多种原料之间起到了相互增效和协同作用，使得稀释液对吖啶酯标记抗原抗体的保护效果更好，可长期保存，能为抗体提供良好的阻断性与保护性，降低非特异性反应；同时节约物料成本，且试剂的特异性、稳定性、重复性等性能不受影响，适合推广使用。
下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例一：一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，包括以下成分：
Tris-base：5.0g；
浓盐酸：3.5mL；
聚乙二醇-6000：9.0g；
10%十二烷基硫酸钠：0.95mL；
吐温：9.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.8g；
酪蛋白钠：9.0g；
Proclin300：0.95mL；
曲拉通X-100：9.5mL；
体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL。
一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第一步，按照上述配方，称取各个组分备用；
第二步，量取适量纯化水，将Tris-base，聚乙二醇6000，10%十二烷基硫酸钠，吐温，乙二胺四乙酸二钠，Proclin300，曲拉通X-100依次加入纯化水中，搅拌均匀使其充分溶解混匀；
第三步，加入浓盐酸调节PH值到PH7.20之间；
第四步，加入酪蛋白钠，室温静置溶解12h，充分溶解后混匀，用纯化水定容至1000ml；
第五步，用0.45um滤膜过滤后得到稀释液，置于2℃～8℃保存备用。
实施例二：
一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，包括以下成分：
Tris-base:6.057g
浓盐酸：3.8mL
聚乙二醇-6000:10g
10%十二烷基硫酸钠:1.0mL
吐温：10mL
乙二胺四乙酸二钠：0.93g
酪蛋白钠:10g
Proclin300:1.0mL
曲拉通X-100:10mL
纯化水，加至1000mL。
一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第一步，按照上述配方，称取各个组分备用；
第二步，量取适量纯化水，将Tris-base，聚乙二醇6000，10%十二烷基硫酸钠，吐温，乙二胺四乙酸二钠，Proclin300，曲拉通X-100依次加入纯化水中，搅拌均匀使其充分溶解混匀；
第三步，加入浓盐酸调节PH值到PH7.30；
第四步，加入酪蛋白钠，室温静置溶解15h，充分溶解后混匀，用纯化水定容至1000ml；
第五步，用0.45um滤膜过滤后得到稀释液，置于2℃～8℃保存备用。
实施例三：
一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，包括以下成分：
Tris-base:7.0g
浓盐酸：4.0mL
聚乙二醇-6000:11.0g
10%十二烷基硫酸钠:1.05mL
吐温：10.5mL
乙二胺四乙酸二钠：1.0g
酪蛋白钠:11.0g
Proclin300:1.05mL
曲拉通X-100:10.5mL
体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL。
一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液的制备方法，包括以下步骤：
第一步，按照上述配方，称取各个组分备用；
第二步，量取适量纯化水，将Tris-base，聚乙二醇6000，10%十二烷基硫酸钠，吐温，乙二胺四乙酸二钠，Proclin300，曲拉通X-100依次加入纯化水中，搅拌均匀使其充分溶解混匀；
第三步，加入浓盐酸调节PH值到PH7.40；
第四步，加入酪蛋白钠，室温静置溶解16h，充分溶解后混匀，用纯化水定容至1000ml；
第五步，用0.45um滤膜过滤后得到稀释液，置于2℃～8℃保存备用。
将实施例一至三制备获得的吖啶酯抗原抗体稀释液用于稀释标记好的吖啶酯抗原抗体母液，然后制成工作液，将其与配对组合的抗体共同进行加速稳定性试验，重复性试验与准确度试验，与空白试验，以CA50和HBsAb为例得出的实验数据如下；
CA50标记抗体热稳定性实验数据如下：
CS50标记抗体准确度实验数据如下：
CS50标记抗体重复性实验数据如下：
CS50标记抗体空白实验数据如下：
HBsAb标记抗原热稳定性实验数据如下：
HBsAb标记抗原准确度实验数据如下：
HBsAb标记抗原重复性实验数据如下：
HBsAb标记抗原空白实验数据如下：
综上所述，本发明克服了一般的吖啶酯稀释液不稳定，本底高的缺点，具有稳定、易保存、便捷等优点，方法简单，性价比高、便于操作、重复性好等优势。
Claims (5)
1.一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，其特征在于：
包括以下成分：
Tris-base：5~7g；
浓盐酸：3.5～4.0 mL；
聚乙二醇-6000：9~11g；
10%十二烷基硫酸钠：0.95～1.05mL；
吐温：9.5～10.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.8~1.0g；
酪蛋白钠：9~11g；
Proclin300：0.95～1.05mL；
曲拉通X-100：9.5～10.5mL；
体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL。
2.根据权利要求1所述的一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，其特征在于：以下成分各为：
Tris-base：6.057g；
浓盐酸：3.8 mL；
聚乙二醇-6000：10g；
10%十二烷基硫酸钠：1.0mL；
吐温：10mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.93g；
酪蛋白钠：10g；
Proclin300：1.0mL；
曲拉通X-100：10mL；
纯化水，加至1000mL。
3.根据权利要求1所述的一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，其特征在于：以下成分各为：
Tris-base：5g；
浓盐酸：3.5mL；
聚乙二醇-6000：9g；
10%十二烷基硫酸钠：0.95mL；
吐温：9.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：0.8g；
酪蛋白钠：9g；
Proclin300：0.95mL；
曲拉通X-100：9.5mL；
体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL。
4.根据权利要求1所述的一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液，其特征在于：以下成分各为：
Tris-base：7g；
浓盐酸：4.0 mL；
聚乙二醇-6000：11g；
10%十二烷基硫酸钠：1.05mL；
吐温：10.5mL；
乙二胺四乙酸二钠：1.0g；
酪蛋白钠：11g；
Proclin300：1.05mL；
曲拉通X-100：10.5mL；
体外诊断试剂用纯化水，加至1000mL。
5.一种能提高吖啶酯抗原抗体结合物稳定性并降低本底的稀释液的制备方法，其特征在于：
包括以下步骤：
步骤一：按照所述权利要求2-4所述的任一配方，称取各个组分备用；
步骤二：量取适量纯化水，将上述步骤一中称量好的所述Tris-base、聚乙二醇-6000、10%十二烷基硫酸钠、吐温、乙二胺四乙酸二钠、Proclin300、曲拉通X-100依次加入纯化水中，搅拌均匀使其充分溶解混匀；
步骤三：加入浓盐酸调节PH值到PH7.2~7.4之间；
步骤四：加入酪蛋白钠，室温静置溶解12~24h，充分溶解后混匀，用纯化水定容至1000ml；
步骤五：用0.45um滤膜过滤后得到稀释液，置于2℃～8℃保存备用。
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