CN112540175A - 一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒及其制备方法与应用，试剂盒包括：定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗浓缩液；其中，所述定标品、阴性对照品和阳性对照品包括：新型冠状病毒lgM抗体；所述抗试剂包括：异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白；所述二抗试剂包括：碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体；所述磁微粒试剂包括：抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁微粒；所述发光底物包括：ALPS发光底物。该试剂盒可以直接对新冠病毒的IgM抗体进行检测，检测快，可靠性强。

Description

一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及病毒检测技术领域，更具体地说是涉及一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒及其制备方法与应用。
背景技术
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。人首次感染新型病毒后，机体的免疫系统会对病毒进行免疫防御，产生特异性的抗体。一般1-2周出现IgM抗体，约4周左右产生IgG抗体。新冠病毒IgM/IgG抗体试剂的使用，为临床提供了血清学的证据，可与核酸检测方法联合使用，从而为新冠病毒的诊断提供更全面、准确的信息。
抗体测定试剂盒可用于流行病学调查，了解人群中有多少个体接触过相应的新型病毒，有助于国家对疫情的整体判断和控制。现阶段，新型冠状病毒S蛋白和N蛋白(2019-nCOV-IgM)检测临床上主要以核酸检测和CT检测为准，检测速率慢，专业操作要求高。所以，有待开发对新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)检测具有谱筛性高、可靠性强、检测速率快的免疫学检测技术。
因此，如何提供一种谱筛性高、可靠性强、检测速率快的新型冠状病毒IgM检测试剂盒是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种检测试剂盒，该试剂盒可以直接对新冠病毒的IgM抗体进行检测，检测快，可靠性强。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，包括：定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗浓缩液；
其中，所述定标品、阴性对照品和阳性对照品包括：新型冠状病毒lgM抗体；所述抗试剂包括：异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白；所述二抗试剂包括：碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体；所述磁微粒试剂包括：抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁微粒；所述发光底物包括：ALPS发光底物。
以上技术方案达到的技术效果是：以碱性磷酸酶为标记酶，通过化学反应标记抗体，提高了反应的灵敏度；异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白可以特异性地与血清中的新冠病毒IgM抗体结合，碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体可以与血清中的IgM抗体结合，形成抗原抗体免疫复合物；抗异硫氰酸荧光素抗体与异硫氰酸荧光素特异性结合使得抗原抗体免疫复合物固定在磁微粒上，在磁场的作用下，方便混合，大大提高了反应速度；以新型化学发光底物ALPS为底物，该底物是辉光性底物，而且快速达到平台期，有利于信号的检测，提高了最终试剂盒的灵敏度和特异性性能；并进一步优化了化学发光增强体系，保证了终产品的信号灵敏度高和稳定性好、变异小。
试剂盒的检测原理是：样本、定标液或质控品中的新型冠状病毒(NCP)抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的新型冠状病毒Spike蛋白结合，随后加入包被着抗荧光素抗体的磁微粒，通过抗荧光素抗体与荧光素的特异性结合使抗原抗体复合物连接在磁微粒上，在外加磁场中直接沉淀，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离。去上清后清洗沉淀的复合物，加入碱性磷酸酶(AP)标记的抗人IgM抗体，形成磁微粒－Spike抗原－新型冠状病毒(NCP)抗体－酶标二抗夹心免疫复合物。再次清洗后，加入酶促化学发光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光测定仪检测反应的发光强度，与计算的Cutoff值相比较，确定样本中相应抗体存在与否。
作为本发明优选的技术方案，所述新型冠状病毒lgM抗体通过蛋白缓冲液溶解，并稀释至新生牛血清的缓冲液中配制得到所述定标品、阳性对照品和阴性对照品。
作为本发明优选的技术方案，所述异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白、所述碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体分别与Tris盐酸缓冲液混合制得所述抗试剂和所述二抗试剂。
作为本发明优选的技术方案，所述抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁微粒按照一定比例加入到含表面活性剂的Tris盐酸缓冲液中制得所述磁微粒试剂，其中，所述表面活性剂选自Tween 20、Triton X-100、Bronidox中的一种或多种，且浓度为0.01-0.5％。
作为本发明优选的技术方案，所述ALPS发光底物按照1:4的体积比经缓冲液稀释制得所述发光底物。
作为本发明优选的技术方案，所述新生牛血清缓冲液包括以下体积比的组分：新生牛血清99.45-99.89％、四环素0.01％-0.05％和硫酸新霉素0.1-0.5％。
作为本发明优选的技术方案，所述Tris盐酸缓冲液包括Tris盐酸0.1-0.4mM和以下体积比的组分：四环素0.02％-0.05％、绵羊血清1％-5％、新生牛血清3％-10％和马血清1％-5％。
作为本发明优选的技术方案，所述缓冲液包括：三乙醇胺2％、二乙醇胺0.75％、CTAB2％、N，N-二甲二叮呢硝酸盐0.3％、牛血清白蛋白0.15％、Bronidox0.5％，pH9.5的盐酸余量。
一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒的制备方法，包括：
1)分别配制定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、和清洗浓缩液；
2)将定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、清洗浓缩液独立地置于包装容器内，得到新型冠状病毒IgM检测试剂盒。
上述制备方法制备得到的新型冠状病毒IgM检测试剂盒在检测新冠病毒IgM中的应用。
本发明达到的技术效果是：
本发明的新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)各试剂组分包括定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物等，稳定性良好，效期可至一年以上；检测灵敏度高，特异性能好、变异小；在本发明中，经过大量实验的工艺优化，得到完善统一工艺，并严格按照标准生产操作规程和质量控制规程进行生产；用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中所用各试剂材料均可商购获得，所用各仪器设备也是所属领域的现有仪器设备，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照制造商所建议的条件。
本发明中所述的各种缓冲液的配方如下：
Tris盐酸pH8.0缓冲液：
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
4M盐酸 Sigma pH7.5 约20mL
新生牛血清缓冲液：
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
新生牛血清 Sigma 100％ 1000mL
四环素 Sigma 0.01％ 10mg
硫酸新霉素 Sigma 0.01％ 10mg
抗试剂Tris盐酸缓冲液：
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
绵羊血清 广州蕊特 10％ 100mL
新生牛血清 广州蕊特 10％ 100mL
磁微粒Tris盐酸缓冲液
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
甲基纤维醚 Sigma 5％ 50g
发光底物缓冲液
Figure BDA0002812516420000051
定标品、阴性对照品、阳性对照品的定性为
Figure BDA0002812516420000052
Figure BDA0002812516420000061
浓缩清洗液的配制，按以下配方配制。
试剂名称 生产商 规格 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
Tween-20 Sigma 5％ 50mL
曲拉通-100 Sigma 5％ 50mL
上述定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、浓缩清洗浓缩液各试剂组分配制好后，独立地置于一个包装容器内，以组成本实施例的新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)套组。
实施例1制备定标品、阴性对照品和阳性对照品
所述定标品、阴性对照品、阳性对照品是按照以下方法配制得到的：采用含蛋白的缓冲液溶解重组新冠状病毒IgM抗体，并用含新生牛血清的缓冲液稀释成不同浓度点，通过定标得到定标品、阴性对照品、阳性对照品。
实施例2制备抗试剂
试验组1：异硫氰酸荧光素与新冠状病毒S蛋白和N蛋白的偶联：异硫氰酸荧光素用0.1M抗试剂Tris缓冲液配制浓度为2.5mg/mL，使用分光光度计在495nm处读取吸光值，异硫氰酸荧光素的吸光值应该在0.9～1.1范围内。将需要连接的蛋白，按所需要的量转移到棕色玻璃瓶。计算所需要的异硫氰酸荧光素的体积，取上述异硫氰酸荧光素计算体积加入蛋白溶液中，室温下搅拌1.5小时，异硫氰酸荧光素与新冠状病毒S蛋白和N蛋白偶联物的纯化，使用pH＝9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡，pH＝8-9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，紫外监测，记录仪记录纯化图谱。确认含有连接物的试管，注意、避光防护，将得到的异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白按照一定比例加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；所述表面活性剂选自Tween 20在蛋白缓冲液中的浓度为0.01％。
试验组2：异硫氰酸荧光素与新冠状病毒S蛋白和N蛋白的偶联：异硫氰酸荧光素用缓冲液配制浓度为1.0mg/mL，使用分光光度计在495nm处读取吸光值，异硫氰酸荧光素的吸光值应该在一定的范围内。将需要连接的蛋白，按所需要的量转移到棕色玻璃瓶。计算所需要的异硫氰酸荧光素的体积，取上述异硫氰酸荧光素计算体积加入蛋白溶液中，室温下搅拌1小时，异硫氰酸荧光素与新冠状病毒S蛋白和N蛋白偶联物的纯化，使用pH＝8的碳酸氢盐缓冲液进行平衡，pH＝8-9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，紫外监测，记录仪记录纯化图谱。确认含有连接物的试管，注意、避光防护，将得到的异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白按照一定比例加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；所述表面活性剂选自Bronidox在蛋白缓冲液中的浓度为0.5％。
试验组3：异硫氰酸荧光素与新冠状病毒S蛋白和N蛋白的偶联：异硫氰酸荧光素用缓冲液配制浓度为5.0mg/mL，使用分光光度计在495nm处读取吸光值，异硫氰酸荧光素的吸光值应该在一定的范围内。将需要连接的蛋白，按所需要的量转移到棕色玻璃瓶。计算所需要的异硫氰酸荧光素的体积，取上述异硫氰酸荧光素计算体积加入蛋白溶液中，室温下搅拌2小时，异硫氰酸荧光素与新冠状病毒S蛋白和N蛋白偶联物的纯化，使用pH＝8-9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡，pH＝8-9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，紫外监测，记录仪记录纯化图谱。确认含有连接物的试管，注意、避光防护，将得到的异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白按照一定比例加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；所述表面活性剂选自TritonX-100在蛋白缓冲液中的浓度为0.1％。
实施例3制备二抗试剂
试验组1:碱性磷酸酶与抗人IgM抗体的偶联：碱性磷酸酶用缓冲液配制浓度为1.0mg/mL，使用分光光度计在280nm处读取吸光值，碱性磷酸酶的吸光值应该在0.9～1.1范围内。将需要连接的抗体，按1:2摩尔比转移到棕色玻璃瓶。计算所需要的碱性磷酸酶的体积，取上述碱性磷酸酶计算体积加入抗体溶液中。室温下搅拌4小时。碱性磷酸酶与抗人IgM抗体偶联物的纯化，使用pH＝8的碳酸氢盐缓冲液进行平衡，pH＝8.5的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，紫外监测，记录仪记录纯化图谱。确认含有连接物的试管，注意、避光防护，将得到的碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体按照1：1加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；所述表面活性剂选自Tween20，浓度为0.01％。
试验组2：碱性磷酸酶与抗人IgM抗体的偶联：碱性磷酸酶用缓冲液配制浓度为5.0mg/mL，使用分光光度计在280nm处读取吸光值，碱性磷酸酶的吸光值应该在一定的范围内。将需要连接的抗体，按摩尔比1:10的比例转移到棕色玻璃瓶。计算所需要的碱性磷酸酶的体积，取上述碱性磷酸酶计算体积加入抗体溶液中。室温下搅拌5小时。碱性磷酸酶与抗人IgM抗体偶联物的纯化，使用pH＝9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡。pH＝8.5的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，紫外监测，记录仪记录纯化图谱。确认含有连接物的试管，注意、避光防护，将得到的碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体按照一定比例加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；所述表面活性剂选自TritonX-100，浓度为0.5％。
试验组3：碱性磷酸酶与抗人IgM抗体的偶联：碱性磷酸酶用缓冲液配制浓度为2.5mg/mL，使用分光光度计在280nm处读取吸光值，碱性磷酸酶的吸光值应该在一定的范围内。将需要连接的抗体，按摩尔比1:5的比例转移到棕色玻璃瓶。计算所需要的碱性磷酸酶的体积，取上述碱性磷酸酶计算体积加入抗体溶液中。室温下搅拌4.5小时。碱性磷酸酶与抗人IgM抗体偶联物的纯化，使用pH＝8.5的碳酸氢盐缓冲液进行平衡。pH＝8.5的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，紫外监测，记录仪记录纯化图谱。确认含有连接物的试管，注意、避光防护，将得到的碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体按照一定比例加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；所述表面活性剂选自Bronidox，浓度为0.1
实施例4制备磁微粒试剂
试验组1：将磁珠浓缩液充分混匀。在充分混匀后取出相应体积的羧基磁珠浓缩液至反应瓶中。将反应容器置于磁场15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清。加入羧基磁珠体积5倍的磷酸缓冲液，混匀20min。再置于磁场中待磁珠全部沉降15min后吸去上清。重复清洗步骤3遍充分清洗羧基磁珠。最后将羧基磁珠溶液定容到10mg/mL。持续混匀。连接反应：按照磁珠：抗体总量＝100:1的质量比，在磁珠中加入处理后的抗体，保持混匀状态下2℃反应18小时。使用磷酸缓冲液清洗3遍。定容至10mg/mL。2℃保存待用，制得磁微粒试剂。
试验组2：将磁珠浓缩液充分混匀。在充分混匀后取出相应体积的羧基磁珠浓缩液至反应瓶中。将反应容器置于磁场15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清。加入羧基磁珠体积5倍的磷酸缓冲液，混匀30min。再置于磁场中待磁珠全部沉降15min后吸去上清。重复清洗步骤3遍充分清洗羧基磁珠。最后将羧基磁珠溶液定容到50mg/mL。持续混匀。连接反应：按照磁珠：抗体总量＝100:1的质量比，在磁珠中加入处理后的抗体，保持混匀状态下8℃反应18小时。使用磷酸缓冲液清洗3遍。定容至10mg/mL。8℃保存待用，制得磁微粒试剂。
试验组3：将磁珠浓缩液充分混匀。在充分混匀后取出相应体积的羧基磁珠浓缩液至反应瓶中。将反应容器置于磁场15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清。加入羧基磁珠2体积5倍的磷酸缓冲液，混匀25min。再置于磁场中待磁珠全部沉降15min后吸去上清。重复清洗步骤3遍充分清洗羧基磁珠。最后将羧基磁珠溶液定容到25mg/mL。持续混匀。连接反应：按照磁珠：抗体总量＝100:1的质量比，在磁珠中加入处理后的抗体，保持混匀状态下4℃反应18小时。使用磷酸缓冲液清洗3遍。定容至10mg/mL。4℃保存待用，制得磁微粒试剂。
实施例5制备发光底物
试验组1按1:4的比例将ALPS发光底物稀释至含有下列组分的缓冲液中：Tris0.1M，亚硫酸钠0.1％，SDS 1％，光泽精0.3％，牛血清白蛋白0.15％，pH9.5。
试验组2按1:10的比例将ALPS发光底物稀释至含有下列组分的缓冲液中：Tris0.1-1M，亚硫酸钠0.1％，SDS 1％，光泽精0.3％，牛血清白蛋白0.15％，pH9.5。
试验组3按1:6的比例将ALPS发光底物稀释至含有下列组分的缓冲液中：Tris0.1-1M，亚硫酸钠0.1％，SDS 1％，光泽精0.3％，牛血清白蛋白0.15％，pH9.5。
实施例6制备检测试剂盒
分别取实施例1、实施例2-5试验组3制备得到的物质配制定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、清洗浓缩液；将定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、清洗浓缩液、发光底物独立地置于包装容器内，得到新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)。
实施例7检测
1)样本稀释：加15μL未知样本和135μL样本稀释液(含1％BSA的Tris缓冲液，pH8.0)至对应反应管底部混匀，取15μL上一步稀释好的样本和135μL样本稀释液至另一对应反应管底部混匀；
2)加样：分别加15μL新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)定标品、阴性对照品、阳性对照品、100倍稀释的未知样本至对应反应管底部；
3)温育反应：加30μL抗试剂至每一试管中，混匀，置37℃反应条件下，反应15分钟；
4)温育反应：加30μL磁微粒试剂至每一试管中，混匀，置37℃反应条件下，反应5分钟；
5)清洗：将反应管置于磁场进行静置，排出上清液；加300μL清洗浓缩液至每一反应管中，混匀；重复3次；
6)温育反应：加100μL二抗试剂至每一反应管中，混匀，置37℃反应条件下，反应15分钟；
7)清洗：将反应管置于磁场进行静置，排出上清液；加300μL清洗浓缩液至每一反应管中，混匀；重复3次；
8)加底物：加200μL发光底物溶液至每一试管中，混匀；
9)测值：用化学发光仪检测发光强度(RLU)。
分别在广州呼吸疾病研究所、合肥滨湖医院、南京第二医院汤山分院收集相关临床样本并进行临床测试，其中新型冠状病毒(2019-nCoV)免疫球蛋白M测试410例样本，包含确诊病例189例，正常人样本221例；样本中的2019-nCoV IgM抗体的量和RLU之间成正相关，按照上述方法和试剂盒对样本进行检测，化学发光测定仪检测反应的发光强度，与计算的Cutoff值相比较，确定样本中相应抗体存在与否，结果见表1；
表1新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)检测试剂盒与临床核酸检测结果的对比。
Figure BDA0002812516420000111
可知，新型冠状病毒(2019-nCoV)免疫球蛋白M测试阳性率为84.13％(159/189)，阴性率为90.95％(201/212)。两种方法进行一致性检验，kappa值为0.754，p＜0.05，说明两种试剂的一致性良好。
表2：新型冠状病毒IgM(2019-nCOV-IgM)检测试剂盒(磁微粒分离化学发光法)分析性能和37℃水浴稳定性表。
Figure BDA0002812516420000112
可以看出，本发明的试剂盒性能可靠，稳定性良好。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，包括：定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗浓缩液；
其中，所述定标品、阴性对照品和阳性对照品包括：新型冠状病毒lgM抗体；所述抗试剂包括：异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白；所述二抗试剂包括：碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体；所述磁微粒试剂包括：抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁微粒；所述发光底物包括：ALPS发光底物。
2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒lgM抗体通过0.1M的Tris缓冲液溶解，并稀释至新生牛血清的缓冲液中配制得到所述定标品、阳性对照品和阴性对照品。
3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸荧光素标记的新冠状病毒S蛋白和N蛋白、所述碱性磷酸酶标记的抗人IgM标记抗体分别与Tris盐酸缓冲液混合制得所述抗试剂和所述二抗试剂。
4.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁微粒按照10：1的比例加入到含表面活性剂的Tris盐酸缓冲液中制得所述磁微粒试剂，其中，所述表面活性剂选自Tween 20、Triton X-100、Bronidox中的一种或多种，且浓度为0.01-0.5％。
5.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述ALPS发光底物按照1:4的体积比经缓冲液稀释制得所述发光底物。
6.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述新生牛血清缓冲液包括以下体积比的组分：新生牛血清99.45-99.89％、四环素0.01％-0.05％和硫酸新霉素0.1-0.5％。
7.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述Tris盐酸缓冲液包括Tris盐酸0.1-0.4mM和以下体积比的组分：四环素0.02％-0.05％、绵羊血清1％-5％、新生牛血清3％-10％和马血清1％-5％。
8.根据权利要求5所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括下述体积分数的组分：三乙醇胺2％、二乙醇胺0.75％、CTAB2％、N，N-二甲二叮呢硝酸盐0.3％、牛血清白蛋白0.15％、Bronidox0.5％，pH9.5的盐酸余量。
9.根据权利要求1-8任一所述的一种新型冠状病毒IgM检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
1)分别配制定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、和清洗浓缩液；
2)将定标品、阴性对照品、阳性对照品、抗试剂、二抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、清洗浓缩液独立地置于包装容器内，得到新型冠状病毒IgM检测试剂盒。
10.根据权利要求9所述的制备方法制备得到的新型冠状病毒IgM检测试剂盒在检测新冠病毒IgM中的应用。
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