CN102645530B - 甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法 - Google Patents
甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法，其步骤为：在500ml的蒸馏水中依次加入下列试剂，待前一种溶解后再加入后一种；Tris；HCL；明胶；BSA；ANS；Tween-20；Proclin300；酚红；待充分溶解后补足蒸馏水至1L；用NaO或HCL调PH值为7.4。将浓缩酶结合物以所需的比例加入到上述酶稀释液中充分混匀。本发明同现有技术相比，通过改进酶联免疫体外诊断试剂中的酶稀释液来提高酶结合物的稳定性，提高灵敏度。
Description
[技术领域]
本发明属于生物体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法。
[背景技术]
ELISA试剂的具体检测方法很多，各种方法都不可缺少酶结合物。酶结合物在ELISA实际中非常关键，其灵敏度、显色背景和稳定性对试剂质量至关重要。高灵敏度、低显色背景和良好的稳定性是高品质ELISA试剂所要达到的基本要求。酶结合物的灵敏度在很大程度上是由其自身的性质决定的，但酶结合物所用稀释液对其灵敏度有一定的影响，酶稀释液的良好与否还对酶结合物的稳定性和显色背景有非常明显影响。因此，制备性能良好的酶稀释液是ELISA试剂生产的重要环节。
常见的用于甲状腺素酶稀释液一般使用缓冲系统(如PBS)、小牛血清(或牛血清白蛋白等)、解离剂、防腐剂及表面活性剂等制备而成。但用该稀释液制备的工作浓度酶结合物稳定性较差，有效期很短。为了保持酶结合物的稳定，传统的酶联免疫体外诊断试剂中的酶结合物是以浓缩液的形式储存的，当使用时用酶稀释液作适当倍数的稀释，现配现用，一般在2-8℃保存不超过一周。用户使用比较麻烦，而且往往由于稀释液误差造成实验结果不准确。
如何提高酶联免疫体外诊断试剂中的酶结合物的稳定性，又能方便检验人员的使用，是众多诊断试剂制造商长期以来努力解决的问题。
[发明内容]
本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法。
为了实现上述目的，本发明设计了一种甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法，包括以下步骤，在500ml蒸馏水中依次加入下列物质：
A）配制缓冲液，pH值为7.0-8.0；
B）在上述缓冲液中加入明胶，终浓度为0.3-1.3g/L，加热搅拌，使其充分溶解；
C）加入BSA，浓度为0.5-1.5g/L，搅拌，使其充分溶解；
D）加入解离剂，浓度为0.2-1.2g/L，搅拌，使其充分溶解；
E）加入Tween-20，浓度为0.1ml/L-1.2ml/L，搅拌，使其充分溶解；
F）加入Proclin300，浓度为0.2-1.2g/L，搅拌，使其充分溶解；
G）加入酚红1%的无水乙醇溶液1ml，终浓度为1-2ml/L，搅拌，使其充分溶解；
H）待充分溶解后补足蒸馏水至1L；
I）最后用10M NaOH或10M HCL调pH值为7.0-8.0得到酶稀释液；
J）将浓缩酶结合物以所需的比例加入到上述酶稀释液中充分混匀即可。
所述缓冲液为浓度为0.05M-0.2M PBS或浓度为0.01-0.2M Tris-HCL缓冲液。
所述解离剂为ANS解离剂。
所述的酶结合物为使辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶与抗原或抗体通过化学交联而成的复合物。
所述浓缩酶结合物与酶稀释液的比例为1:2000。
本发明同现有技术相比，通过改进酶联免疫体外诊断试剂中的酶稀释液来提高酶结合物的稳定性，提高灵敏度。
[具体实施方式]
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1：
在500ml蒸馏水中依次加入下列物质。
A)配置Tris-HCL缓冲液，其中Tris 12.11g；HCL 49ml；缓冲液的pH值为7.0-8.0。
B)在上述缓冲液中加入明胶0.5g，终浓度为0.3-1.3g/L，加热搅拌，使其充分溶解。
C)加入BSA 0.5g，浓度为0.5-1.5g/L，搅拌，使其充分溶解。
D)加入ANS 0.5g，浓度为0.2-1.2g/L，搅拌，使其充分溶解。
E)加入Tween-200.5ml，浓度为0.1ml/L-1.2ml/L，搅拌，使其充分溶解。
F)加入Proclin3000.5ml，浓度为0.2-1.2g/L，搅拌，使其充分溶解。
G)加入酚红(1％的无水乙醇溶液)1ml，终浓度为1-2ml/L，搅拌，使其充分溶解。
H)待充分溶解后补足蒸馏水至1L。
I)最后用10M NaOH或10M HCL调pH值为7.4得到酶稀释液。
J)将浓缩酶结合物以1∶2000的比例加入到上述酶稀释液中充分混匀即可。
实验一：
用抗T4-HRP酶结合物溶液(1∶2000)检测血清或血浆标本中的T4，采用如下步骤：
(1)在已包被T4-IgG抗原的微孔板中依次加入标本50ul，同时做两孔阴性对照、一孔阳性对照、一孔空白对照，然后每孔(除空白对照孔外)加入本发明实施例1制备的抗T4-HRP酶结合物溶液50ul，置37℃孵育30分钟。
(2)弃去孔内液体，用洗涤液洗板5次。
(3)各孔加底物溶液A 50ul，底物液B 50ul，置37℃孵育15分钟。
(4)各孔加终止液50ul，终止反应。
(5)将反应板置酶标仪比色计450nm波长处用空白孔校零，读取各孔OD值。
(6)计算，CutOff值＝(阴性对照平均OD值+阳性对照平均OD值)X0.5。
(7)结果判断：标本OD值小于CutOff值为阳性，大于或等于CutOff值为阴性。
在已包被T4-IgG抗原的微孔板中加入经系列稀释的抗体，按照常规反应过程进行试验，分别对比传统甲状腺素酶结合物和本发明酶结合物，加显色剂显色，用2M硫酸溶液终止反应后，在酶标仪上读数，结果如下：
以上数据表明，本发明同现有技术相比，通过改进酶联免疫体外诊断试剂中的酶稀释液来提高酶结合物的稳定性，提高灵敏度。
Claims (2)
1.一种甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法，包括以下步骤，在500ml蒸馏水中依次加入下列物质：
A）配制缓冲液，pH值为7.0-8.0；
B）在上述缓冲液中加入明胶，终浓度为0.3-1.3g/L，加热搅拌，使其充分溶解；
C）加入BSA，浓度为0.5-1.5g/L，搅拌，使其充分溶解；
D）加入解离剂，浓度为0.2-1.2g/L，搅拌，使其充分溶解；
E）加入Tween-20，浓度为0.1ml/L-1.2ml/L，搅拌，使其充分溶解；
F）加入Proclin300，浓度为0.2-1.2g/L，搅拌，使其充分溶解；
G）加入酚红1%的无水乙醇溶液1ml，终浓度为1-2ml/L，搅拌，使其充分溶解；
H）待充分溶解后补足蒸馏水至1L；
I）最后用10M NaOH或10M HCl调pH值为7.0-8.0得到酶稀释液；
J）将浓缩酶结合物以所需的比例加入到上述酶稀释液中充分混匀即可；
其中，所述缓冲液为浓度为0.01-0.2M Tris-HCl缓冲液；且所述解离剂为ANS解离剂。
2.根据权利要求1所述的甲状腺素酶联免疫体外诊断试剂盒中酶结合物稀释液的制备方法，其特征在于：所述的酶结合物为使辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶与抗原或抗体通过化学交联而成的复合物。
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Families Citing this family (4)
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|---|---|---|---|---|
| CN108490166B (zh) * | 2018-02-28 | 2020-10-09 | 广州市丰华生物工程有限公司 | 一种改良实验缓冲液及其应用 |
| CN108872613A (zh) * | 2018-05-09 | 2018-11-23 | 南京岚煜生物科技有限公司 | 基于微流控芯片检测总三碘甲状腺原氨酸tt3试剂盒及制备和检测方法 |
| CN113495157A (zh) * | 2020-03-20 | 2021-10-12 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 一种酶结合物稀释液、一种总甲状腺素定量检测试剂盒及其使用方法 |
| CN113493514B (zh) * | 2020-03-20 | 2023-09-26 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 抗三碘甲状腺原氨酸单抗的酶结合物、总三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其使用方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1217194C (zh) * | 2001-01-04 | 2005-08-31 | 上海数康生物科技有限公司 | 蛋白芯片及其制备方法和使用方法 |
| EP2031390A1 (en) * | 2003-08-20 | 2009-03-04 | Seikagaku Corporation | Stabilizing agent and blocking agent |
| CN101443445A (zh) * | 2006-03-17 | 2009-05-27 | 塞拉提斯股份公司 | 用于增殖人胚泡衍生干细胞的培养系统和方法 |
| CN101523220A (zh) * | 2006-10-04 | 2009-09-02 | 健泰科生物技术公司 | 针对vegf的elisa |
| EP2144063A1 (en) * | 2007-04-06 | 2010-01-13 | Maruha Nichiro Seafoods, Inc. | High-sensitive detection method for protein in food |
| CN101865916A (zh) * | 2009-04-14 | 2010-10-20 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 四碘甲状腺素的检测试剂盒及其使用方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050186642A1 (en) * | 2004-02-24 | 2005-08-25 | Biocare Medical, Inc. | Immunoassay reagents and methods of use thereof |
| CN101201354B (zh) * | 2006-12-14 | 2011-11-02 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 甲状腺素化学发光免疫分析定量测定试剂盒及制备方法 |
| CN101377496A (zh) * | 2008-04-16 | 2009-03-04 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种检测甲状腺过氧化物酶自身抗体的化学发光免疫分析测定试剂盒 |
| CN101639481A (zh) * | 2009-08-27 | 2010-02-03 | 清华大学 | 游离甲状腺素的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒 |
-
2012
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1217194C (zh) * | 2001-01-04 | 2005-08-31 | 上海数康生物科技有限公司 | 蛋白芯片及其制备方法和使用方法 |
| EP2031390A1 (en) * | 2003-08-20 | 2009-03-04 | Seikagaku Corporation | Stabilizing agent and blocking agent |
| CN101443445A (zh) * | 2006-03-17 | 2009-05-27 | 塞拉提斯股份公司 | 用于增殖人胚泡衍生干细胞的培养系统和方法 |
| CN101523220A (zh) * | 2006-10-04 | 2009-09-02 | 健泰科生物技术公司 | 针对vegf的elisa |
| EP2144063A1 (en) * | 2007-04-06 | 2010-01-13 | Maruha Nichiro Seafoods, Inc. | High-sensitive detection method for protein in food |
| CN101865916A (zh) * | 2009-04-14 | 2010-10-20 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 四碘甲状腺素的检测试剂盒及其使用方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 人促甲状腺激素酶联免疫吸附分析试剂盒的研制;王晓静 等;《同位素》;20020531;第15卷(第2期);97-99 * |
| 化学发光免疫分析在游离甲状腺素测定中的应用研究;靳辉;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20120215;E060-43 * |
| 段学军.游离甲状腺素(FT_4)酶联免疫分析方法的建立.《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》.2003,E060-10. |
| 游离甲状腺素(FT_4)酶联免疫分析方法的建立;段学军;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20030315;E060-10 * |
| 王晓静 等.人促甲状腺激素酶联免疫吸附分析试剂盒的研制.《同位素》.2002,第15卷(第2期),97-99. |
| 靳辉.化学发光免疫分析在游离甲状腺素测定中的应用研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》.2012,E060-43. |
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