JP7202559B2 - 基質溶液 - Google Patents
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Description
項1. リパーゼ基質と、一般式(1)に示すベタイン誘導体、及び/又は一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩とを含む基質溶液。
項2. ロイコ型色原体と、一般式(1)に示すベタイン誘導体、及び/又は一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩とを含む基質溶液。
項3. 前記一般式(1)中、R1~R3は、同一又は異なって、n-ブチル基及び/又はn-ペンチル基である、項1又は項2に記載の基質溶液。
項4. 前記一般式(2)中、R4~R7は、同一又は異なって、n-ブチル基及び/又はn-ペンチル基である、項1又は項2に記載の基質溶液。
項5. 一般式(1)に示すベタイン誘導体、及び/又は一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩を含む、リパーゼ基質及び/又はロイコ型色原体の可溶化剤。
項6. 一般式(1)に示すベタイン誘導体及び/又は一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩と、リパーゼ基質及び/又はロイコ型色原体とを、水性溶媒中で共存させることを特徴とする、リパーゼ基質及び/又はロイコ型色原体の可溶化方法。
本発明の可溶化剤は、難水溶性基質であるリパーゼ基質又はロイコ型色原体を水性溶媒に可溶化させるために使用される添加剤であり、一般式(1)に示すベタイン誘導体及び/又は一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩から構成されることを特徴とする。以下、本発明の可溶化剤について詳述する。
本発明の可溶化剤として、一般式(1)に示すベタイン誘導体又は一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩のいずれか一方のみを使用してもよく、また、これらを組み合わせて使用してもよい。また、一般式(1)に示すベタイン誘導体を使用する場合、一般式(1)に示すベタイン誘導体の内、1種の構造のものを単独で使用してもよく、また2種以上の構造のものを組み合わせて使用してもよい。また、一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩を使用する場合、一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩の内、1種の構造のものを単独で使用してもよく、また2種以上の構造のものを組み合わせて使用してもよい。
本発明の可溶化剤の可溶化対象は、難水溶性基質であるリパーゼ基質又はロイコ型色原体である。ここで、「難水溶性基質」とは、20℃において、1g又は1mLを溶かすに要する水の量が10000mL以上であり、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素の作用を受けて発色又は発光する難水溶性の基質を意味する。なお、本明細書において、リパーゼ基質及びロイコ型色原体を「難水溶性基質」と称することがある。
本発明の可溶化剤は、難水溶性基質であるリパーゼ基質又はロイコ型色原体を可溶化させる水性溶媒に添加して使用される。
R1~R3が炭素数3のアルキル基である一般式(1)に示すベタイン誘導体の場合:通常1000mM以上、好ましくは1000~3000mM、更に好ましくは1000~2000mM。
R1~R3が炭素数4のアルキル基である一般式(1)に示すベタイン誘導体の場合:通常500mM以上、好ましくは500~3000mM、更に好ましくは500~2000mM。
R1~R3が炭素数5のアルキル基である一般式(1)に示すベタイン誘導体の場合:通常250mM以上、好ましくは250~3000mM、更に好ましくは250~2000mM。
R4~R7が炭素数3のアルキル基である一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩の場合:通常500mM以上、好ましくは500~3000mM、更に好ましくは500~2000mM。
R4~R7が炭素数4のアルキル基である一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩の場合:通常250mM以上、好ましくは250~3000mM、更に好ましくは250~2000mM。
R4~R7が炭素数5のアルキル基である一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩の場合:通常250mM以上、好ましくは250~3000mM、更に好ましくは250~2000mM。
リパーゼ基質の場合:水溶液全体に対して、0.0001w/v%~0.5w/v%程度、好ましくは0.0001w/v%~0.2w/v%程度、更に好ましくは0.0001w/v%~0.1w/v%程度。
ロイコ型色原体の場合:水溶液全体に対して、0.0001w/v%~5w/v%程度、好ましくは0.0001w/v%~2w/v%程度、更に好ましくは0.0001w/v%~1w/v%程度。
本発明の基質溶液は、前記可溶化剤によって難水溶性基質であるリパーゼ基質又はロイコ型色原体を高濃度に可溶化できるので、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素の基質溶液として提供できる。また、本発明の基質溶液は、標識酵素(リパーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等)を利用した測定キットの付属品として提供することもできる。
以下に示す構造のベタイン誘導体(ベタイン3~5)を準備した。ベタイン3~5は特開2010-220607号公報等に記載の公知の合成方法を用いて合成した。
テトラアルキルアンモニウム塩は、市販のテトラメチルアンモニウムクロライド(型番T0136、東京化成工業製)、テトラエチルアンモニウムクロライド(型番T0095、東京化成工業製)、テトラプロピルアンモニウムクロライド(型番T2106、東京化成工業製)、テトラブチルアンモニウムクロライド(型番T0055、東京化成工業製)、テトラアミルアンモニウムクロライド(型番T1433、東京化成工業製)を使用した。本実験では対アニオンとしてクロライド(塩化物イオン)を用いた。
ベタイン誘導体水溶液に対するリパーゼ基質の溶解挙動を調べるために次の実験を行った。リパーゼ基質は、市販のLipase Substrate(1,2-o-ジラウリル-rac-グリセロ-3-グルタル酸-(6-メチルレゾルフィン)-エステル、CAS番号195833-46-6、Aldrich製)を使用した。ベタイン誘導体としてはベタイン5を用いた。
ベタイン誘導体水溶液に対するフェノチアジン系化合物の溶解挙動を調べるために次の実験を行った。フェノチアジン系化合物は、市販のDA-67(10-(カルボキシメチルアミノカルボニル)-3,7-ビス(ジメチルアミノ)フェノチアジン、CAS番号115871-18-6、和光純薬製)を使用した。ベタイン誘導体としてはベタイン5を用いた。
試験例2において、ベタイン誘導体にベタイン4を用いた以外は試験例2と同様にして試験を行った。
試験例2において、ベタイン誘導体を一般式(2)に示すテトラアルキルアンモニウム塩に変更した以外は試験例2と同様にして試験を行う。テトラアルキルアンモニウム塩としてはテトラプロピルアンモニウムクロライド、テトラブチルアンモニウムクロライド、又はテトラペンチルアンモニウムクロライドを用いる。
Claims (6)
- 前記一般式(1)中、R1~R3は、n-ペンチル基である、請求項1に記載の基質溶液。
- 前記一般式(1)中、R1~R3は、n-ペンチル基である、請求項3に記載の可溶化剤。
- 前記一般式(1)中、R1~R3は、n-ペンチル基である、請求項5に記載の可溶化方法。
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