CN110118768A - 化学发光试剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种化学发光试剂及其应用，所述化学发光试剂包括过氧化物、荧光试剂、增强试剂及环糊精或含有环糊精的混合物。本发明中通过在化学发光试剂中添加环糊精或含有环糊精的混合物，具有发光强度高、发光时间长的优点，有效提高了检测灵敏度，降低了检测成本。

Description

化学发光试剂及其应用
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种化学发光试剂及其应用。
背景技术
化学发光方法是生化检测时常用的一种检测方法，在蛋白印迹检测、核酸印迹检测、蛋白、核酸或特定抗原的酶联免疫检测等方面有着非常广泛的应用，也可以用于荧光棒等具有化学发光的玩具或装饰物。
该方法在过氧化物酶、碱性磷酸酶等酶的催化下，催化荧光底物如鲁米诺等发出可以检测的化学发光。鲁米诺及其类似物如异鲁米诺等，在碱性条件下，与过氧化氢等过氧化物，在过氧化物酶，如辣根过氧化物酶的催化下，会发生反应产生化学发光。该发光反应在对碘苯酚等增强剂存在的情况下会被增强，而检测到更强的发光。
现有的化学发光试剂主要存在如下的不足。
1、发光相对较弱，检测灵敏度相对不高，对于较低量的过氧化物酶不易被检测到，或者难以精确定量；
2、发光时间相对较短，导致检测时有有效检测时间短，对蛋白印迹、酶联免疫检测、核酸印迹等生化检测带来很大的不便。
因此，针对上述技术问题，有必要提供一种化学发光试剂及其应用。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种化学发光试剂及其应用。
为了实现上述目的，本发明一实施例提供的技术方案如下：
一种化学发光试剂，所述化学发光试剂包括过氧化物、荧光试剂、增强试剂及环糊精或含有环糊精的混合物。
作为本发明的进一步改进，所述环糊精包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精、2,6-二-O-戊基-β-环糊精、全甲基α-环糊精、全甲基β-环糊精、全甲基γ-环糊精、全甲基δ-环糊精、羟丙基环糊精、乙基环糊精中的一种或多种。
作为本发明的进一步改进，所述环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.01％-30％。
作为本发明的进一步改进，所述环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.1％～15％。
作为本发明的进一步改进，所述环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.5％-5％。
作为本发明的进一步改进，所述过氧化物包括过氧化氢、尿素过氧化氢、过硼酸钠中的一种或多种。
作为本发明的进一步改进，所述荧光试剂包括鲁米诺、异鲁米诺及鲁米诺衍生物、异鲁米诺衍生物中的一种或多种。
作为本发明的进一步改进，所述增强试剂包括对碘苯酚、对苯基苯酚、对溴苯酚中的一种或多种。
本发明一实施例提供的技术方案如下：
一种化学发光试剂的应用，所述化学发光试剂用于进行检测过氧化物酶。
作为本发明的进一步改进，所述过氧化物酶包括辣根过氧化物酶、和抗体偶联的辣根过氧化物酶、和蛋白或核酸偶联的辣根过氧化物酶、和生物小分子偶联的辣根过氧化物酶、和生物大分子偶联的过氧化物酶、具有过氧化物酶活性的天然或合成的分子或混合物中的一种或多种。
本发明的有益效果是：
本发明中通过在化学发光试剂中添加环糊精或含有环糊精的混合物，具有发光强度高、发光时间长的优点，有效提高了检测灵敏度，降低了检测成本；
化学发光试剂可用于生物医学等领域内蛋白印迹、核酸印迹、酶联免疫检测等生化检测过程中过氧化物酶检测，也可以用于检测荧光棒等具有化学发光的玩具或装饰品。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中A0+B、A1+B、A2+B溶液发光反应刚开始时相对发光强度的对比示意图；
图2为本发明实施例1中A0+B、A1+B、A2+B溶液发光反应1小时后相对发光强度的对比示意图；
图3为本发明实施例2中A0+B、A1+B、A2+B溶液发光反应刚开始时相对发光强度的对比示意图；
图4为本发明实施例2中A0+B、A1+B、A2+B溶液发光反应1小时后相对发光强度的对比示意图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明公开了一种化学发光试剂，该化学发光试剂包括过氧化物、荧光试剂、增强试剂及环糊精或含有环糊精的混合物。
其中，环糊精包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精、2,6-二-O-戊基-β-环糊精、全甲基α-环糊精、全甲基β-环糊精、全甲基γ-环糊精、全甲基δ-环糊精、羟丙基环糊精、乙基环糊精中的一种或多种。
优选地，环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.01％-30％，较佳的质量分数范围为0.1％～15％，最优的质量分数范围为0.5％-5％。
另外，本发明的化学发光试剂中，过氧化物包括过氧化氢、尿素过氧化氢、过硼酸钠等中的一种或多种；荧光试剂包括鲁米诺、异鲁米诺及鲁米诺衍生物、异鲁米诺衍生物等中的一种或多种；增强试剂包括对碘苯酚、对苯基苯酚、对溴苯酚等中的一种或多种。
本发明还公开了一种化学发光试剂的应用，用于进行检测过氧化物酶，其中，过氧化物酶包括辣根过氧化物酶、和抗体偶联的辣根过氧化物酶、和蛋白或核酸偶联的辣根过氧化物酶、和生物小分子偶联的辣根过氧化物酶、和生物大分子偶联的过氧化物酶、具有过氧化物酶活性的天然或合成的分子或混合物中的一种或多种。
以下结合具体实施例和对比例对本发明作进一步说明。
实施例1：
配置溶液A0
鲁米诺钠盐，质量分数浓度为0.01％；
对碘苯酚，质量分数浓度为0.05％；
用纯水配置。
配置溶液A1
鲁米诺钠盐，质量分数浓度为0.01％；
对碘苯酚，质量分数浓度为0.05％；
β-环糊精，质量分数浓度为2.5％；
用纯水配置。
配置溶液A2
鲁米诺钠盐，质量分数浓度为0.01％；
对碘苯酚，质量分数浓度为0.05％；
羟丙基环糊精，质量分数浓度为2.5％；
用纯水配置。
配置溶液B
过氧化氢，质量分数浓度为0.03％；
缓冲试剂三羟甲基氨基甲烷Tris，浓度为50mM，pH 8.5。
溶液A0和B、A1和B、A2和B分别等体积混合后，分别取200微升混合液，然后加入1微升经过1:1000稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG，混合后用可以检测96孔板的化学发光仪进行检测。
参图1所示，在添加了β-环糊精或羟丙基环糊精后化学发光显著增强，参图2所示，在发光1小时后，添加了环糊精的发光体系仍有较强的发光，而未添加β-环糊精的发光体系发光已经相对非常微弱。
实施例2：
配置溶液A0
异鲁米诺钠盐，质量分数浓度为0.02％；
对碘苯酚，质量分数浓度为0.03％；
用纯水配置。
配置溶液A1
异鲁米诺钠盐，质量分数浓度为0.02％；
对碘苯酚，质量分数浓度为0.03％；
α-环糊精，质量分数浓度为0.5％；
用纯水配置。
配置溶液A2
异鲁米诺钠盐，质量分数浓度为0.02％；
对碘苯酚，质量分数浓度为0.03％；
2,6-二-O-戊基-β-环糊精，质量分数浓度为0.5％；
用纯水配置。
配置溶液B
过硼酸钠，质量分数浓度为0.02％；
缓冲试剂三羟甲基氨基甲烷Tris，浓度为20mM，pH 8.2。
溶液A0和B、A1和B、A2和B分别等体积混合后，分别取200微升混合液，然后加入1微升经过1:1000稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG，混合后用可以检测96孔板的化学发光仪进行检测。
参图3所示，在添加了α-环糊精或2,6-二-O-戊基-β-环糊精后化学发光显著增强，参图4所示，在发光1小时后，添加了环糊精的发光体系仍有较强的发光，而未添加环糊精的发光体系发光已经相对非常微弱。
由以上技术方案可以看出，本发明具有如下有益效果：
本发明中通过在化学发光试剂中添加环糊精或含有环糊精的混合物，具有发光强度高、发光时间长的优点，有效提高了检测灵敏度，降低了检测成本；
化学发光试剂可用于生物医学等领域内蛋白印迹、核酸印迹、酶联免疫检测等生化检测过程中过氧化物酶检测，也可以用于检测荧光棒等具有化学发光的玩具或装饰品。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.一种化学发光试剂，其特征在于，所述化学发光试剂包括过氧化物、荧光试剂、增强试剂及环糊精或含有环糊精的混合物。
2.根据权利要求1所述的化学发光试剂，其特征在于，所述环糊精包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精、2,6-二-O-戊基-β-环糊精、全甲基α-环糊精、全甲基β-环糊精、全甲基γ-环糊精、全甲基δ-环糊精、羟丙基环糊精、乙基环糊精中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的化学发光试剂，其特征在于，所述环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.01％-30％。
4.根据权利要求2所述的化学发光试剂，其特征在于，所述环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.1％～15％。
5.根据权利要求2所述的化学发光试剂，其特征在于，所述环糊精或含有环糊精的混合物的质量分数范围为0.5％-5％。
6.根据权利要求1所述的化学发光试剂，其特征在于，所述过氧化物包括过氧化氢、尿素过氧化氢、过硼酸钠中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的化学发光试剂，其特征在于，所述荧光试剂包括鲁米诺、异鲁米诺及鲁米诺衍生物、异鲁米诺衍生物中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的化学发光试剂，其特征在于，所述增强试剂包括对碘苯酚、对苯基苯酚、对溴苯酚中的一种或多种。
9.一种如权利要求1～8中任一项所述的化学发光试剂的应用，其特征在于，所述化学发光试剂用于进行检测过氧化物酶。
10.根据权利要求9所述的化学发光试剂的应用，其特征在于，所述过氧化物酶包括辣根过氧化物酶、和抗体偶联的辣根过氧化物酶、和蛋白或核酸偶联的辣根过氧化物酶、和生物小分子偶联的辣根过氧化物酶、和生物大分子偶联的过氧化物酶、具有过氧化物酶活性的天然或合成的分子或混合物中的一种或多种。
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