JPS63219398A - 過酸化水素の定量法 - Google Patents
過酸化水素の定量法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は過酸化水素、ルミノール、および微生物由来の
ペルオキシダーゼを用いることにより化学発光を生じさ
せるものであり、醇索により検体中の微量成分に特異的
反応を生じさせて過酸化水素を生成させることを特徴と
する検体中の微量成分分析法に関するものである。
ペルオキシダーゼを用いることにより化学発光を生じさ
せるものであり、醇索により検体中の微量成分に特異的
反応を生じさせて過酸化水素を生成させることを特徴と
する検体中の微量成分分析法に関するものである。
ペルオキシダーゼを用いた化学発光は過酸化水素の定量
のみならず過酸化脂質の定量さらに免疫定量法と広く利
用されている。しかし、従来の西洋ワサビ由来のペルオ
キシダーゼを用いた化学発光は反応速度が遅く、その九
め高感度検出装置を必要とした。そこで、西洋ワサビ由
来のペルオキシダーゼにかわりうる、よシ反応速度の迷
いものが強く望まれている。
のみならず過酸化脂質の定量さらに免疫定量法と広く利
用されている。しかし、従来の西洋ワサビ由来のペルオ
キシダーゼを用いた化学発光は反応速度が遅く、その九
め高感度検出装置を必要とした。そこで、西洋ワサビ由
来のペルオキシダーゼにかわりうる、よシ反応速度の迷
いものが強く望まれている。
過酸化水素、るるいは酵素法により生成した過酸化水素
を定量するための従来例として過酸化水素に４−アミノ
アンチピリンおよびフェノールをペルオキシダーゼを触
媒として反応させて赤色キノンを生成させうる方法が周
知でＩＣ１生成した赤色キノンは分光光度計によって、
その吸光度が測定されていた０以上の方法において、検
体に試薬を反応させて得られた発色体を分光光度計によ
り定量しているので、良好な感度を得ることができず、
また赤色キノン等の生成のために反応物を定温保持する
インキユベーシヨンを行わなければならず、このため、
少なからぬ分析時間を必要とする欠点があった。そこで
、過酸化水素を迅速に高感度で定量する方法として化学
発光法が用いられた。これは過酸化水素あるいは生成し
た過酸化水素に発光試薬を加えて発光させ、この発光量
を測定することにより発光量に比例した検体中の微址成
分を分析する方法である。ルミノール系の発光試薬にお
いては、過酸化水素との反応の触媒に、ンエロシアン化
カリウム、Ｋ２Ｓ２０４ 、 ＮａＣｊＯ、Ｆ−塩、ミ
クロペルオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ等が使われる
が、パックグラウンド発光の影響を下けるためには、ペ
ルオキシダーゼが好適であり、このときの反応を以下に
示す。
を定量するための従来例として過酸化水素に４−アミノ
アンチピリンおよびフェノールをペルオキシダーゼを触
媒として反応させて赤色キノンを生成させうる方法が周
知でＩＣ１生成した赤色キノンは分光光度計によって、
その吸光度が測定されていた０以上の方法において、検
体に試薬を反応させて得られた発色体を分光光度計によ
り定量しているので、良好な感度を得ることができず、
また赤色キノン等の生成のために反応物を定温保持する
インキユベーシヨンを行わなければならず、このため、
少なからぬ分析時間を必要とする欠点があった。そこで
、過酸化水素を迅速に高感度で定量する方法として化学
発光法が用いられた。これは過酸化水素あるいは生成し
た過酸化水素に発光試薬を加えて発光させ、この発光量
を測定することにより発光量に比例した検体中の微址成
分を分析する方法である。ルミノール系の発光試薬にお
いては、過酸化水素との反応の触媒に、ンエロシアン化
カリウム、Ｋ２Ｓ２０４ 、 ＮａＣｊＯ、Ｆ−塩、ミ
クロペルオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ等が使われる
が、パックグラウンド発光の影響を下けるためには、ペ
ルオキシダーゼが好適であり、このときの反応を以下に
示す。
過酸化水素にルミノール（５−アミノ−２，３−ジヒド
ロ７タラノンー１．４−フォノ）およびペルオキシダー
ゼを反応させると、励起状態の７ミノ７タル酸を生成し
、これが基底状態に戻るときエネルギーを光（４２５ｎ
ｍ ）として放出する反応機ｍが考えられている。
ロ７タラノンー１．４−フォノ）およびペルオキシダー
ゼを反応させると、励起状態の７ミノ７タル酸を生成し
、これが基底状態に戻るときエネルギーを光（４２５ｎ
ｍ ）として放出する反応機ｍが考えられている。
臨床化学分析においては、近年、高感度の点で優れてい
るラジオイムノアッセイ法が導入されてきたが、安全衛
生面での問題点も多く分析手段の大部分のものは酵素を
用いた吸光法によって占められている０発光法には従来
の吸光法に比べて次のような特徴を備えている。
るラジオイムノアッセイ法が導入されてきたが、安全衛
生面での問題点も多く分析手段の大部分のものは酵素を
用いた吸光法によって占められている０発光法には従来
の吸光法に比べて次のような特徴を備えている。
（１）高感度である。（吸光法に比べて１０ 〜１０３
倍高感度である。〕 （２）装置が簡単である。（発光分析では分光分析法に
不可欠な光源および分光器の必要がなく・光子量を検出
する装置のみである事から装置そのものが簡単であり従
って廉価である。〕 （３）ダイナミックレンジが広い。（発光量の測定はダ
イナミックレンジが広（１０〜１０ オーダーで直線
性がなりたつとされている。ン しかしながら、化学発光反応の量子収率は生物発光と比
べて一般に低く、西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼを
用いた化学発光でも反応速度は遅く、そのため高感度検
出装ｆｔ−必要とした。したがって、装置は簡単である
が極微弱光の検出を要求する場合には高価なものとなっ
た。したがって、安価な検出装ｍｅ用いた場合には高感
度化もおのずと限界を生ずるという欠点があった。
倍高感度である。〕 （２）装置が簡単である。（発光分析では分光分析法に
不可欠な光源および分光器の必要がなく・光子量を検出
する装置のみである事から装置そのものが簡単であり従
って廉価である。〕 （３）ダイナミックレンジが広い。（発光量の測定はダ
イナミックレンジが広（１０〜１０ オーダーで直線
性がなりたつとされている。ン しかしながら、化学発光反応の量子収率は生物発光と比
べて一般に低く、西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼを
用いた化学発光でも反応速度は遅く、そのため高感度検
出装ｆｔ−必要とした。したがって、装置は簡単である
が極微弱光の検出を要求する場合には高価なものとなっ
た。したがって、安価な検出装ｍｅ用いた場合には高感
度化もおのずと限界を生ずるという欠点があった。
本発明は上記の問題点を解決するために、過酸化水素、
または酵素法により生成した過酸化水素を高感度で定量
することを目的として、化学発光の反応性が高い微生物
由来のペルオキシダーゼによる化学発光を提供すること
にある。
または酵素法により生成した過酸化水素を高感度で定量
することを目的として、化学発光の反応性が高い微生物
由来のペルオキシダーゼによる化学発光を提供すること
にある。
微生物由来のペルオキシダーゼは不完全菌類（Ａｒｔｈ
ｒｏｍｙｃ＠ｓ ｒａｍｏｇｕａ ）（微工研： ＦＥ
ＲＮ ＢＰ−８３８）の培養液から数稽のイオン交換ク
ロマトグラフィーを組み合わせ高度に純化させたもので
、ＲＺ２．０５、比活性１７６ Ｕ／５ｏｌｉｄダ（４
−アミノアンチピリン−７エノール法）、および担子菌
類（Ｃｏｐｒｉｎｕｓｃｉｎ＊ｒ＠ｕｓ ）の培養液か
ら高度に純化させたものＲＺ２．５６、比活性１１３Ｕ
／５ｏｌｉｄ１９を用いた（％開昭６１−０４３９８７
、特開昭６ｌ−１０４７８４）。又、西洋ワサビ由来の
ベルオキシダーゼハＲＺ１．９６、比活性３２９ Ｕ／
５ｏｌｉｄｌＱ（シグマ社製）を用いた。
ｒｏｍｙｃ＠ｓ ｒａｍｏｇｕａ ）（微工研： ＦＥ
ＲＮ ＢＰ−８３８）の培養液から数稽のイオン交換ク
ロマトグラフィーを組み合わせ高度に純化させたもので
、ＲＺ２．０５、比活性１７６ Ｕ／５ｏｌｉｄダ（４
−アミノアンチピリン−７エノール法）、および担子菌
類（Ｃｏｐｒｉｎｕｓｃｉｎ＊ｒ＠ｕｓ ）の培養液か
ら高度に純化させたものＲＺ２．５６、比活性１１３Ｕ
／５ｏｌｉｄ１９を用いた（％開昭６１−０４３９８７
、特開昭６ｌ−１０４７８４）。又、西洋ワサビ由来の
ベルオキシダーゼハＲＺ１．９６、比活性３２９ Ｕ／
５ｏｌｉｄｌＱ（シグマ社製）を用いた。
Ａｒｔｈｒｏｍｙｃ＠ｓ ｒｍｍｏｓｕｓ 由来のペル
オキシダーゼ（以後ＡＲＰと略す〕およびＣｏｐｒｉｎ
ｕａ ａｉｎｅｒ＠ｕａ由来のペルオキシダーゼ（以後
ＣＣＰと略す）と西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼ（
以後ＨＲＰと略す〕の発光の反応速度の差を過酸化水素
の検量線で示す。
オキシダーゼ（以後ＡＲＰと略す〕およびＣｏｐｒｉｎ
ｕａ ａｉｎｅｒ＠ｕａ由来のペルオキシダーゼ（以後
ＣＣＰと略す）と西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼ（
以後ＨＲＰと略す〕の発光の反応速度の差を過酸化水素
の検量線で示す。
過酸化水Ｘ（１００μＭ 〜０．０１μＭ）５０ｍＭピ
ロリン酸緩衝溶液（ｐＨ９，０）７００μＪにＡＲＰ
（２μｊｌ／１ｍ）、ＣＣＰ （３ｐ９／ｒｎｌ ）あ
るいはＨＲＰ （２，２ａ９／ｒｄ ）を含む１ｍＭル
ミノール５０ｍＭビロリン酸緩衝溶液１００μ！添加し
、ルミネッセンスフォトメーター（スリーエム薬品製、
ルーマ、クパイオカウンターＭ２Ｏ１０マルチジェット
）で発光ｔ’を求めた。 ＡＲＰ 、 ＣＣＰ 。
ロリン酸緩衝溶液（ｐＨ９，０）７００μＪにＡＲＰ
（２μｊｌ／１ｍ）、ＣＣＰ （３ｐ９／ｒｎｌ ）あ
るいはＨＲＰ （２，２ａ９／ｒｄ ）を含む１ｍＭル
ミノール５０ｍＭビロリン酸緩衝溶液１００μ！添加し
、ルミネッセンスフォトメーター（スリーエム薬品製、
ルーマ、クパイオカウンターＭ２Ｏ１０マルチジェット
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ＨＲＰ量はＡ４０ｉＳあたフのヘム含量で調製した。結
果を図１に示す。微生物由来のペルオキシダーゼである
ＡＲＰ 、 ＣＣＰは良好な検量関係を示し、ＨＲＰと
比べて３０倍程度の発光量が得られた。又、このＨＲＰ
量では良好な検量関係は得られなかった。このように、
微生物由来のペルオキシダーゼは西洋ワサビ由来のペル
オキシダーゼと比べて化学発光の反応速度が速く、過酸
化水素めるｈはＩｅ累法により生成した過酸化水素を良
好な感度で定量することが可能となる。
果を図１に示す。微生物由来のペルオキシダーゼである
ＡＲＰ 、 ＣＣＰは良好な検量関係を示し、ＨＲＰと
比べて３０倍程度の発光量が得られた。又、このＨＲＰ
量では良好な検量関係は得られなかった。このように、
微生物由来のペルオキシダーゼは西洋ワサビ由来のペル
オキシダーゼと比べて化学発光の反応速度が速く、過酸
化水素めるｈはＩｅ累法により生成した過酸化水素を良
好な感度で定量することが可能となる。
次に、実施例によシ本発明の方法をさらに具体的に説明
する。尚、実施例において、微生物由来のペルオキシダ
ーゼはＡＲＰについて述べるが、ＣＣＰについても同様
でアフ、さらに微生物由来のペルオキシダーゼがこれら
両者に限られるものではないことは当然である。
する。尚、実施例において、微生物由来のペルオキシダ
ーゼはＡＲＰについて述べるが、ＣＣＰについても同様
でアフ、さらに微生物由来のペルオキシダーゼがこれら
両者に限られるものではないことは当然である。
実施例１
過酸化水素濃度を一定にして、ペルオキシダーゼ量をか
え発光量の変化を調べた。ＡＲＰ（２μ欣〜０．０１μ
Ｐ〜）またはＨＲＰ （２，２μ２〜〜０．０４μＭ哨
を含む１ｍＭルミノール５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液（
ｐＨ９，０） ７００ ｆｉｔ Ｋ １０μＭ過酸化水
素５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液１００μ！添加し発光量
を求め、全発光量及びＩＡＰペルオキシダーゼ当９の発
光量をプロ、トシた（図２９゜高濃度のＡＲＰが存在す
る時、反応速度が速いため瞬間の発光をルミネッセンス
フォトメーターで検出できず、全発光蓋は高いが、単位
ＡＲＰ当りでは発光量が低くなる。しかし、ＡＲＰ Ｉ
ｋを下げると、全発光量は低下するが、単位ＡＲＩ’当
シの発光量は一定となる。この時全発光量はＡＲＰ量と
良好な検量関係を示し、エンディムイムノアッセイに利
用することができるだけでなく、その感度は図２からも
明らかなようにＨＲＰと比べて１００倍程度期待できる
。
え発光量の変化を調べた。ＡＲＰ（２μ欣〜０．０１μ
Ｐ〜）またはＨＲＰ （２，２μ２〜〜０．０４μＭ哨
を含む１ｍＭルミノール５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液（
ｐＨ９，０） ７００ ｆｉｔ Ｋ １０μＭ過酸化水
素５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液１００μ！添加し発光量
を求め、全発光量及びＩＡＰペルオキシダーゼ当９の発
光量をプロ、トシた（図２９゜高濃度のＡＲＰが存在す
る時、反応速度が速いため瞬間の発光をルミネッセンス
フォトメーターで検出できず、全発光蓋は高いが、単位
ＡＲＰ当りでは発光量が低くなる。しかし、ＡＲＰ Ｉ
ｋを下げると、全発光量は低下するが、単位ＡＲＩ’当
シの発光量は一定となる。この時全発光量はＡＲＰ量と
良好な検量関係を示し、エンディムイムノアッセイに利
用することができるだけでなく、その感度は図２からも
明らかなようにＨＲＰと比べて１００倍程度期待できる
。
実施例２
ＡＲＰ （！： ＨＲＰの発光強度の差をスト、７″ト
フロー法で調べた。
フロー法で調べた。
過酸化水素はグルコース、コレステロ−Ａ４Ｃ％異的反
応を生じさせるグルコースオキシダーゼ、コレステロー
ルオキシダーゼ（東洋紡社製）’に用いて発生きせた。
応を生じさせるグルコースオキシダーゼ、コレステロー
ルオキシダーゼ（東洋紡社製）’に用いて発生きせた。
１０ｍＭグルコース溶液６０μノに５０ ｍＭ ＩＪン
酸緩衝溶液（声７． Ｏ） １ゴ加え、グル：Ｆ Ｘ
オキ’／ｆ−セ溶液（２，６Ｉｎ９７Ｍ ） ２００
ｐｌ添加し、３７℃で５分間反応を行い、反応液１ｄを
５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液（ｐＨ９，０）９ｍに加え
て反応を終結させた。又コレステロール１ｉ（１００ｔ
ｎ／ｙｄ） ２４０ ｆｉｌに０．０５ ％ Ｔｒｉｔ
ｏｎ Ｘ −１００を含む１０ｍＭリン酸緩衝溶液（Ｐ
ｌ’１７．Ｏ）２ｍｌ！加え、コレステロールオキシダ
ーゼ溶！（２，３η／ｍ）４００μｌ添加し室温で１０
分間反応を行い、反応溶液２プを５０ｍＭピロリン酸緩
衝溶液（ｐｆ（９，０）８′ＩＬＩＫ加えて反応を終結
させた。以上のようにして、酵素反応で生じ九過酸化水
素とＡＲＰ（５０μμｌ）あるいはＨＲＰ （５５Ａｌ
ｌ／ＴＲＩ ）を含む１ｍＭルミノール５０ ｍＭ ｋ
’ロリン酸緩衝溶液を用いて、スト、ブトフローフォト
メーター（ユニオン技研社製、ＲＡ−４０１〕で発光強
度を調べた。グルコース、コレステロールそれぞれの結
果を図３、図４に示す。
酸緩衝溶液（声７． Ｏ） １ゴ加え、グル：Ｆ Ｘ
オキ’／ｆ−セ溶液（２，６Ｉｎ９７Ｍ ） ２００
ｐｌ添加し、３７℃で５分間反応を行い、反応液１ｄを
５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液（ｐＨ９，０）９ｍに加え
て反応を終結させた。又コレステロール１ｉ（１００ｔ
ｎ／ｙｄ） ２４０ ｆｉｌに０．０５ ％ Ｔｒｉｔ
ｏｎ Ｘ −１００を含む１０ｍＭリン酸緩衝溶液（Ｐ
ｌ’１７．Ｏ）２ｍｌ！加え、コレステロールオキシダ
ーゼ溶！（２，３η／ｍ）４００μｌ添加し室温で１０
分間反応を行い、反応溶液２プを５０ｍＭピロリン酸緩
衝溶液（ｐｆ（９，０）８′ＩＬＩＫ加えて反応を終結
させた。以上のようにして、酵素反応で生じ九過酸化水
素とＡＲＰ（５０μμｌ）あるいはＨＲＰ （５５Ａｌ
ｌ／ＴＲＩ ）を含む１ｍＭルミノール５０ ｍＭ ｋ
’ロリン酸緩衝溶液を用いて、スト、ブトフローフォト
メーター（ユニオン技研社製、ＲＡ−４０１〕で発光強
度を調べた。グルコース、コレステロールそれぞれの結
果を図３、図４に示す。
結果から明らかなように％ＡＲＰ Ｋ ＨＲＰに比べて
発光強度が高く、実にグルコースの場合３６５倍、コレ
ステロールの場合でも４９倍でめった。このように微生
物由来のペルオキシダーゼが西洋ワサビ由来のペルオキ
シダーゼと比べて、いかに反応速度が速いかがわかる。
発光強度が高く、実にグルコースの場合３６５倍、コレ
ステロールの場合でも４９倍でめった。このように微生
物由来のペルオキシダーゼが西洋ワサビ由来のペルオキ
シダーゼと比べて、いかに反応速度が速いかがわかる。
実施例３
種々の濃度のグルコース溶液６０μｌに５０ ｍＭ Ｉ
Ｊン酸緩衝＃液（−１７，０） １ ｍ加え、グルコー
スオキシ／ −−ｋ” 浴液（２，６ｍ９１ｒｔｒ＆
） ２００ μｉ 添加し、３７℃で５分間反応を行
い、反応溶液ｉｔｔを５゜ｆｌＩＭピロリン酸緩衝溶液
（ｐｉ（９，０）９ｔ／に加えて反応を終結させた。こ
の反応液７００μ７ＫＡＲＰ（２μＦ／１）１１）ある
いはＨＲＰ （２，２μＰ／ゴ）を含む１娼ルミノ一ル
５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液１００μ！添加し、ルミネ
ッセンスフォトメーターで発光量を求め、検ｔａｌヲ得
りＣ図５ ） 、 Ｍ’ｊＬＡＲＰ ハＨＲＰ 、！−
比ヘテ２８倍の発光蓋が得られた。このようにＡＲＰは
高感度分析に適することが示唆される。
Ｊン酸緩衝＃液（−１７，０） １ ｍ加え、グルコー
スオキシ／ −−ｋ” 浴液（２，６ｍ９１ｒｔｒ＆
） ２００ μｉ 添加し、３７℃で５分間反応を行
い、反応溶液ｉｔｔを５゜ｆｌＩＭピロリン酸緩衝溶液
（ｐｉ（９，０）９ｔ／に加えて反応を終結させた。こ
の反応液７００μ７ＫＡＲＰ（２μＦ／１）１１）ある
いはＨＲＰ （２，２μＰ／ゴ）を含む１娼ルミノ一ル
５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液１００μ！添加し、ルミネ
ッセンスフォトメーターで発光量を求め、検ｔａｌヲ得
りＣ図５ ） 、 Ｍ’ｊＬＡＲＰ ハＨＲＰ 、！−
比ヘテ２８倍の発光蓋が得られた。このようにＡＲＰは
高感度分析に適することが示唆される。
実施例４
種々の限度のコレステロール溶液１２０μノに０、０５
９６ Ｔｒｌｔｏｎ Ｘ −１００を含む１０−リン酸
緩衝浴ｉ（Ｐ＃１７．０）１−加工、コレヌテロールオ
キシダーゼ溶液（ｃ）、２ｒＩＶｕり ２００ ａｌ
添加し３７℃で１５分間反応を行い、反応液１ ”Ｌ
’ ｔ ５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液（ＰＨ９，０）４
ｔｄに加えて反応を終結させた。この反応溶液７００μ
ノにＡＲＰ （２μｍ！／Ｍｌ ）あるいは）ｉＲＰ
（２，２μ２／Ｅ／ンを含む１ｍＭルミノール５０ｍＭ
ビロリン酸緩衝溶液１００１ＡＩ添加し、ルミネッセン
スフォトメーターで発光量を求め、検量線を得九（図６
）、結果ＡＲＰはＨＲＰと比べて１３４倍の発光量が得
られた。
９６ Ｔｒｌｔｏｎ Ｘ −１００を含む１０−リン酸
緩衝浴ｉ（Ｐ＃１７．０）１−加工、コレヌテロールオ
キシダーゼ溶液（ｃ）、２ｒＩＶｕり ２００ ａｌ
添加し３７℃で１５分間反応を行い、反応液１ ”Ｌ
’ ｔ ５０ｍＭピロリン酸緩衝溶液（ＰＨ９，０）４
ｔｄに加えて反応を終結させた。この反応溶液７００μ
ノにＡＲＰ （２μｍ！／Ｍｌ ）あるいは）ｉＲＰ
（２，２μ２／Ｅ／ンを含む１ｍＭルミノール５０ｍＭ
ビロリン酸緩衝溶液１００１ＡＩ添加し、ルミネッセン
スフォトメーターで発光量を求め、検量線を得九（図６
）、結果ＡＲＰはＨＲＰと比べて１３４倍の発光量が得
られた。
以上のように、微生物由来のペルオキシダーゼを化学発
光に利用すると、従来の西洋ワサビ由来のペルオキシダ
ーゼよシも発光強度か１００倍以上強くなるので、高感
度のルミネッセンスフォトメーターを使わなくても十分
に高感度分析が可能となった。
光に利用すると、従来の西洋ワサビ由来のペルオキシダ
ーゼよシも発光強度か１００倍以上強くなるので、高感
度のルミネッセンスフォトメーターを使わなくても十分
に高感度分析が可能となった。
第１図は微生物由来および西洋ワサビ由来のベルオキシ
ダーゼによる発光の反応速度の差を表わす検量Ｍｔ−示
す図でるり、 第２図は過酸化水素濃度を一定にして、ベルオキシ〆−
セの量を変えた時の発光蓋の変化を示す図であり、 第３図はグルコースから過酸化水ｋｆｔ鈍生させたとき
の微生物由来および西洋ワサビ由来のベルオ中シ〆一−
４１＃ｌＣよる発光強度の差を示す図でめり、第４図は
コレステロールから過酸化水素を発生させ九ときの微生
物由来および西洋ワサビ由来のベルオ中シ〆−ゼによる
発光強度の差を示す図でＴｏり、 第５図は各グルコース濃度より過酸化水素を発光させた
ときのルミネッセンスフォトメーターによる検量ＩｆＭ
を示す図であり、 第６図は各コレステロール濃度よシ過酸化水素を発生さ
せたときのルミネッセンスフォトメーターによる検量線
を示す図である。
ダーゼによる発光の反応速度の差を表わす検量Ｍｔ−示
す図でるり、 第２図は過酸化水素濃度を一定にして、ベルオキシ〆−
セの量を変えた時の発光蓋の変化を示す図であり、 第３図はグルコースから過酸化水ｋｆｔ鈍生させたとき
の微生物由来および西洋ワサビ由来のベルオ中シ〆一−
４１＃ｌＣよる発光強度の差を示す図でめり、第４図は
コレステロールから過酸化水素を発生させ九ときの微生
物由来および西洋ワサビ由来のベルオ中シ〆−ゼによる
発光強度の差を示す図でＴｏり、 第５図は各グルコース濃度より過酸化水素を発光させた
ときのルミネッセンスフォトメーターによる検量ＩｆＭ
を示す図であり、 第６図は各コレステロール濃度よシ過酸化水素を発生さ
せたときのルミネッセンスフォトメーターによる検量線
を示す図である。
Claims (4)
- （１）過酸化水素の定量において、微生物由来のペルオ
キシダーゼおよび水素供与体からなる測定試薬を使用す
ることを特徴とする過酸化水素の定量法。 - （２）ペルオキシダーゼがアリスロマイセス・ラモス（
Ａｒｙｔｈｒｏｍｙｃｅｓ ｒａｍｏｓｕｓ）由来のペ
ルオキシダーゼである特許請求の範囲第１項記載の定量
法。 - （３）ペルオキシダーゼがコプリヌス（Ｃｏｐｒｉｎｕ
ｓ）属由来のペルオキシダーゼであ る特許請求の範囲第１項に記載の定量法。 - （４）水素供与体が発光試薬である特許請求の範囲第１
項ないし第３項記載の定量法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62053390A JP2528457B2 (ja) | 1987-03-09 | 1987-03-09 | 過酸化水素の定量法 |
| EP88103705A EP0282024B1 (en) | 1987-03-09 | 1988-03-09 | An assay method for detecting hydrogen peroxide |
| DE88103705T DE3886072T2 (de) | 1987-03-09 | 1988-03-09 | Bestimmungsverfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid. |
| US07/166,102 US5084381A (en) | 1987-03-09 | 1988-03-09 | Assay method for detecting hydrogen peroxide |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62053390A JP2528457B2 (ja) | 1987-03-09 | 1987-03-09 | 過酸化水素の定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63219398A true JPS63219398A (ja) | 1988-09-13 |
| JP2528457B2 JP2528457B2 (ja) | 1996-08-28 |
Family
ID=12941498
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62053390A Expired - Lifetime JP2528457B2 (ja) | 1987-03-09 | 1987-03-09 | 過酸化水素の定量法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5084381A (ja) |
| EP (1) | EP0282024B1 (ja) |
| JP (1) | JP2528457B2 (ja) |
| DE (1) | DE3886072T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010281652A (ja) * | 2009-06-04 | 2010-12-16 | Kikkoman Corp | ペルオキシダーゼ化学発光測定試薬 |
Families Citing this family (8)
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|---|---|---|---|---|
| WO1992016648A1 (en) * | 1991-03-18 | 1992-10-01 | Environmental Test Systems, Inc. | Chemiluminescent test for microorganisms |
| US5472381A (en) * | 1991-12-31 | 1995-12-05 | Ayre, Jr.; Fred P. | Method and arrangement for applying and securing edges of improved bowling lane surfaces |
| WO1997041442A1 (en) * | 1996-05-01 | 1997-11-06 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Chemiluminescent compositions and their use in the detection of hydrogen peroxide |
| WO2001055446A1 (en) * | 2000-01-28 | 2001-08-02 | Brij Pal Giri | Novel stabilized formulations for chemiluminescent assays |
| AU2006259307B2 (en) * | 2005-06-17 | 2012-12-20 | Mannkind Corporation | Epitope analogues |
| AU2008222860B2 (en) * | 2007-03-05 | 2013-10-31 | Advanced Liquid Logic, Inc. | Hydrogen peroxide droplet-based assays |
| US8748191B2 (en) * | 2010-08-02 | 2014-06-10 | Ecolab Usa Inc. | Stop-flow analytical systems and methods |
| CN104792771B (zh) * | 2015-04-13 | 2017-06-06 | 天津大学 | 鲁米诺‑过氧化氢‑溴酚红‑hrp‑bsa化学发光体系检测hrp的方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5425892A (en) * | 1977-07-29 | 1979-02-27 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Quantitative determination of hydrogen peroxide |
| JPS6033479B2 (ja) * | 1980-07-30 | 1985-08-02 | 協和醗酵工業株式会社 | 過酸化水素の定量方法 |
| JPS5937946B2 (ja) * | 1980-10-21 | 1984-09-12 | アロカ株式会社 | 検体中の微量成分分析装置 |
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
| JPS5861446A (ja) * | 1981-10-07 | 1983-04-12 | Fuji Photo Film Co Ltd | 過酸化水素の定量方法 |
| JPS59205999A (ja) * | 1983-05-10 | 1984-11-21 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 還元型補酵素の定量方法 |
| JPS6143987A (ja) * | 1984-08-07 | 1986-03-03 | Suntory Ltd | ペルオキシダ−ゼ及びその製造法 |
| JPS61104784A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-23 | Suntory Ltd | ペルオキシダ−ゼの製造法 |
| JPS61128887A (ja) * | 1984-11-28 | 1986-06-16 | Takara Shuzo Co Ltd | ペルオキシダ−ゼの製造法 |
| IL73771A (en) * | 1984-12-10 | 1988-07-31 | Yissum Res Dev Co | Method and diagnostic kit for detecting the presence of diamines and polyamines in materials containing biological fluids |
| JPS61254189A (ja) * | 1985-05-02 | 1986-11-11 | Nissin Food Prod Co Ltd | パ−オキシダ−ゼの製造法 |
| CA1307480C (en) * | 1985-07-10 | 1992-09-15 | Nanibhushan Dattagupta | Prolonged chemiluminescence |
| AU603342B2 (en) * | 1985-10-15 | 1990-11-15 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Chemiluminescent methods and kit |
-
1987
- 1987-03-09 JP JP62053390A patent/JP2528457B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-03-09 DE DE88103705T patent/DE3886072T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-03-09 EP EP88103705A patent/EP0282024B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-03-09 US US07/166,102 patent/US5084381A/en not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| JP2010281652A (ja) * | 2009-06-04 | 2010-12-16 | Kikkoman Corp | ペルオキシダーゼ化学発光測定試薬 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5084381A (en) | 1992-01-28 |
| EP0282024A1 (en) | 1988-09-14 |
| JP2528457B2 (ja) | 1996-08-28 |
| EP0282024B1 (en) | 1993-12-08 |
| DE3886072D1 (de) | 1994-01-20 |
| DE3886072T2 (de) | 1994-05-05 |
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