CN104396752B - 能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基，其由以下浓度(mg/L)的成分组成：硝酸钾496～516、磷酸二氢钾126～146、硫酸镁237～257、硝酸钙462～482、硼酸2.8～3.2、硫酸锰9～11、钼酸钠0.025、硫酸铜0.025、乙二胺四乙酸二钠37～38、硫酸亚铁27～28、肌醇90～110、甘氨酸1.8～2.2、盐酸硫胺素0.8～1.2、盐酸吡哆醇0.5、烟酸0.5、水解乳蛋白490～510、硫酸腺嘌呤9～11、蔗糖29000～31000mg/L。采用该培养基能促进藏丹参毛状根中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA这四种活性的成分含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基。
背景技术
藏丹参，又称林芝丹参，是西藏林芝地区特有植物，丹参酮类成分含量较高。藏丹参为地方习用丹参，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦之功效。主要用于胸痹心痛，腕腹胁痛的治疗。目前现有的藏丹参毛状根采用MS培养基进行培养，MS培养基的配方如表1所示。一般称取新鲜毛状根0.2g，接种于50mLMS液体培养基中进行黑暗培养。
当采用MS培养基培养藏丹参毛状根时，经检测，四种丹参酮类成分---二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的含量仅为0.004％、0.017％、0.004％和0.19％。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基，采用该培养基能促进藏丹参毛状根中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA这四种活性的成分含量。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基，由以下浓度的成分组成：
余量为水；
pH5.8。
作为本发明的能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基的改进：该培养基由以下浓度的成分组成：
余量为水；
pH5.8。
采用本发明的能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基(培养基P1)对藏丹参毛状根进行培养，发现P1培养基能够促进丹参酮类成分的大量积累，其中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA等四种活性成分含量分别达到0.02％、0.38％、0.10％和0.88％，其中丹参酮IIA含量达到2010版《药典》标准的4.4倍。而同时采用普通MS培养基培养藏丹参毛状根，四种丹参酮类成分含量仅为0.004％、0.017％、0.004％和0.19％，含量远低于本发明的P1培养基。
本发明的能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基(培养基P1)实际使用时的方法和用量等同于MS培养基。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为分别使用P1培养基和MS培养基时，藏丹参毛状根中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA等四种活性的成分含量对比图。
具体实施方式
实施例1、
培养基配方，如表1所示。
表1
备注说明：P1培养基，即为本发明的能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基。
P1培养基的制备方法为：按照表1中P1培养基所示的配方配制后，按照常规的培养基的制备工艺进行制备。
即，具体为：将硝酸钾506mg、磷酸二氢钾136mg、硫酸镁247mg、硝酸钙472mg、硼酸3mg、硫酸锰10mg、钼酸钠0.025mg、硫酸铜0.025mg、乙二胺四乙酸二钠37.25mg、硫酸亚铁27.85mg、肌醇100mg、甘氨酸2.0mg、盐酸硫胺素1.0mg、盐酸吡哆醇0.5mg、烟酸0.5mg、水解乳蛋白(水解乳清蛋白)500mg、硫酸腺嘌呤10mg、蔗糖30000mg，用水定容至1L；然后用浓度为1M的氢氧化钠溶液调节PH至5.8；最后高温灭菌(为常规的高温灭菌，一般为在1.1个大气压，121℃下灭菌20min)。
实验1、将上述实施例1所得的P1培养基和常规的MS培养基分别进行如下实验：
1.实验材料
藏丹参(Salviacastaneadielsf.Tomentosastib)毛状根。
2.毛状根培养
将上述灭菌后的培养基分装为50mL/三角瓶，无菌接种新鲜藏丹参毛状根0.2g/瓶，置于摇床中，110转/分，25℃，黑暗培养24天采样，用清水冲洗干净，50℃烘干至恒重，得干燥毛状根，备用。
3.丹参酮类成分含量测定
干燥毛状根研钵中磨碎，过0.45mm筛，精密称取0.10g，加入2mL甲醇-水(7:3的体积比)提取液，于40KHZ下超声提取60min，提取液10000rpm离心15min，取上清液过0.45μm滤膜，备用。
含量测定采用Waters1525二元高效液相色谱仪，色谱柱为WatersSunFireC18(250mm×4.6mm，5μm)。流速1mLmin-1，柱温30℃，上样体积20μL.检测波长270nm，流动相乙腈和水，梯度洗脱，测定丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I和二氢丹参酮I含量。
4.结果与分析
结果表明P1培养基能够促进丹参酮类成分的大量积累，其中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA等四种活性成分含量分别达到0.02％(即0.2mg/g干重)、0.38％、0.10％和0.88％。而同时采用普通MS培养基培养藏丹参毛状根，四种丹参酮类成分含量仅为0.004％、0.017％、0.004％和0.19％，含量远低于P1培养基。与MS培养基相比，P1培养基中毛状根四种丹参酮成分含量分别提高了5、20、25和4倍以上，其中丹参酮IIA含量达到2010版《药典》标准的4.4倍。
因此，P1培养基可以作为一种能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分大量积累的专用培养基。
备注说明：采用上述检测方法，对原始的培养前的新鲜藏丹参毛状根进行检测，二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA这四种活性成分含量分别为0.003％、0.006％、0.002％、和0.1％。
对比例1～5、改变培养基的配方，从而获得相应的对比例1～5；各对比例的配方具体如表2所述。
表2
备注说明：上述表2中的各配方均为蔗糖30000mg/L，余量为水；pH5.8。
将上述所有对比例所得的培养基替代P1培养基，如同实验1进行检测，结果如下表3所述。
表3、不同对比例三种活性成分含量(％)
综上所述，采用本发明配方所得的培养基(P1培养基)对提升藏丹参毛状根中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA这四种活性的成分含量具有协同增效作用。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (2)
1.能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基，其特征是由以下浓度的成分组成：
所述丹参酮类成分为二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA。
2.根据权利要求1所述的能够促进藏丹参毛状根中丹参酮类成分积累的培养基，其特征是所述培养基由以下浓度的成分组成：
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