CN104263788A - 一种海参多肽的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开的海参多肽的制备方法包括以下步骤：原料筛选；原料清洗；低温酶解；离心分离；第一次浓缩过滤；第二次浓缩过滤去盐；干燥。本本发明的整个制备过程中反应条件温和，可确保海参多肽的活性，本发明采用40-60℃的低温酶解，并通过木瓜蛋白酶和胶原蛋白酶对海参蛋白的酶切位点进行选择性剪切，使海参蛋白的酶解更彻底，将大分子量的海参蛋白分解为多个分子量较小的小分子多肽，满足人体吸收需要，有利于人体对海参多肽的充分吸收，其吸收率可达80%以上；并且本发明方法制得的海参多肽中有害重金属离子含量极低，安全无毒。本发明方法制备过程废水排放量低，有利于降低能耗，可最大限度利用海参的价值，具有重要的社会经济意义。

Description

一种海参多肽的制备方法

技术领域

本发明涉及一种多肽的制备方法，具体涉及一种海参多肽的制备方法。

背景技术

海参早在大约6亿年前的寒武纪就开始存在，是现存最早的生物物种之一，被形象地喻为“海洋活化石”。海参是世界上少有的高蛋白、低脂肪、低糖、无胆固醇的天然营养食品，是目前药食同源、阴阳双补的神奇动物。它的营养成分不仅丰富，而且均衡、合理，人们将其比作是大海中的营养宝库。海参中含有许多具有重要生物学活性的物质，包括海参毒素、海参多糖、海参皂苷、海参多肽、脂肪酸、海参神经节苷脂等，其中海参多糖和海参皂苷具有抗癌防癌、抗肿瘤、增强机体免疫力、抗凝血、延缓衰老和抗病毒等功效，也是研究最多的两种提取自海参的活性物质。

目前关于海参多肽的研究报道较少，其生物学活性往往被忽视。海参多肽是一种具有抗氧化功能的活性肽，一般存在于海参体壁中，在海参体壁中的含量可高达76.5％，同样具有重要的生物学意义。海参多肽中含有十几种以上的氨基酸，且其中大多为人体必需的氨基酸，因此，海参多肽也具有增强人体免疫力、抗肿瘤和抗炎活性，其药用和保健价值不可忽视。但是海参多肽大多由数百个氨基酸通过肽键连接而成，其分子量较大，采用传统方法制备的海参产品，其海参多肽被包围在大分子链的海参体壁中，若采用传统食用方法，很难被人体充分吸收，吸收率仅为5-18％。另外，因生长环境因素的影响，海参体内往往富集砷、汞、铅等重有害金属元素，虽然相关部门对水产品及即食海产品中的重金属的含量的限量标准作出过规定，但由于海域污染等问题造成的海参体内重金属含量超标的现象屡见不鲜，传统的食用方法会迫使人体一并吸收，长期食用会对人体健康造成不利影响。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种海参多肽的制备方法，该方法可最大限度利用海参的价值，制备得到的海参多肽分子量小，有利于人体的充分吸收。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海参多肽的制备方法，包括以下步骤：

1)原料筛选：筛选准备新鲜的海参原料若干；

2)原料清洗：将筛选得到的海参原料，先用自来水冲洗，再用电导率为0.1-20Us/cm的超纯水清洗，以洗清海参体内泥沙；

3)低温酶解：在生物酶解罐中放入与海参原料等重量的电导率为0.1-10Us/cm的超纯水，加温至50-60℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的海参原料，加温至40-60℃；放入海参原料重量0.3-0.7％的木瓜蛋白酶，在40-60℃温度下酶解处理2-5h；放入海参原料重量0.3-0.7％的胶原蛋白酶，在40-60℃温度下酶解处理5-25h；放入海参原料重量0.3-0.8％的活性炭，放置0.5-2h；放入海参原料重量0.5-2％的石英砂，放置0.5-2h；放入海参原料重量0.05-0.25％的风味酶，放置0.5-2h；加温至70-90℃灭酶0.5-2h；

4)离心分离：在45-60℃温度下，在离心机中以8000-12000转/小时的离心速度对灭酶后的低温酶解产物进行离心分离；

5)第一次浓缩过滤：对离心分离后得到的产物用1200-2800道尔顿口径的超滤膜进行第一次浓缩过滤，分离提取下清液；

6)第二次浓缩过滤：对第一次浓缩过滤得到的下清液用100-500道尔顿口径的超滤膜进行第二次浓缩过滤去盐，分离提取上清液；

7)干燥：对第二次浓缩过滤得到的上清液进行冷冻干燥或喷雾干燥，即得到海参多肽。

优选地，步骤2)中所述的低温酶解过程如下：在生物酶解罐中放入与海参原料等重量的电导率为0.1-8Us/cm的超纯水，加温至55-60℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的海参原料，加温至40-55℃；放入海参原料重量0.4-0.6％的木瓜蛋白酶，在40-55℃温度下酶解处理2-4h；放入海参原料重量0.4-0.6％的胶原蛋白酶，在40-45℃温度下酶解处理8-23h；放入海参原料重量0.4-0.8％的活性炭，放置0.5-1.5h；放入海参原料重量0.8-1.6％的石英砂，放置0.5-1.5h；放入海参原料重量0.08-0.2％的风味酶，放置0.5-1.5h；加温至75-95℃灭酶0.5-1.5h。

优选地，步骤3)中所述的活性炭的目数为130-200目。130-200目的活性炭的脱色、除臭及吸附重金属离子的效果较好。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明将低温酶解过程控制在40-60℃，可更好地保留海参多肽的活性；对于酶解处理后的海参蛋白，首先通过木瓜蛋白酶对海参蛋白的相应酶切位点进行选择性剪切，再通过胶原蛋白酶对海参蛋白的其他相应酶切位点进行选择性剪切，使海参蛋白的酶解更彻底，通过木瓜蛋白酶和胶原蛋白酶的选择性酶解剪切，将大分子量的海参蛋白分解为多个分子量较小的多肽和氨基酸，并将不需要的无效氨基酸过滤掉，最终得到分子量在约1000道尔顿至1200道尔顿之间的小分子海参多肽，满足人体吸收需要，有利于人体对海参多肽的充分吸收，其吸收率可达80％以上；整个制备过程中反应条件温和，可确保海参多肽的活性；此外，通过活性炭起到脱色、除臭左右，并且活性炭还可吸附并去除重金属离子，在活性炭去除重金属离子的基础上，通过石英砂可进一步去除海参多肽中所含的甲基汞、无机砷、铅等重金属离子，使最终制备得到的海参多肽产品安全无毒；本发明方法制备过程废水排放量低，有利于降低能耗，可最大限度利用海参的价值，具有重要的社会经济意义。

附图说明

图1为海参多肽分子量检测中的标准品出峰图；

图2为海参多肽分子量检测中的样品出峰图。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1：选择新鲜的辽刺参作为海参原料，进行海参多肽的制备：

1)原料筛选：筛选准备新鲜的辽刺参若干；

2)原料清洗：将筛选得到的辽刺参，先用自来水冲洗，再用电导率为10Us/cm的超纯水清洗，以洗清辽刺参体内泥沙；

3)低温酶解：在生物酶解罐中放入与辽刺参等重量的电导率为5Us/cm的超纯水，加温至60℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的辽刺参，加温至50℃；放入辽刺参重量0.5％的木瓜蛋白酶，在50℃温度下酶解处理3h；放入辽刺参重量0.5％的胶原蛋白酶，在50℃温度下酶解处理15h；放入辽刺参重量0.5％的活性炭，放置1h；放入辽刺参重量1％的石英砂，放置1h；放入辽刺参重量0.1％的风味酶，放置1h；加温至80℃灭酶1h；

4)离心分离：在60℃温度下，在离心机中以10000转/小时的离心速度对灭酶后的低温酶解产物进行离心分离；

5)第一次浓缩过滤：对离心分离后得到的产物用2200道尔顿口径的超滤膜进行第一次浓缩过滤，分离提取下清液；

6)第二次浓缩过滤：对第一次浓缩过滤得到的下清液用350道尔顿口径的超滤膜进行第二次浓缩过滤去盐，分离提取上清液；

7)干燥：对第二次浓缩过滤得到的上清液进行冷冻干燥，即得到实施例1的海参多肽。

实施例2：选择新鲜的大红刺参作为海参原料，进行海参多肽的制备：

1)原料筛选：筛选准备新鲜的大红刺参若干；

2)原料清洗：将筛选得到的大红刺参，先用自来水冲洗，再用电导率为15Us/cm的超纯水清洗，以洗清大红刺参体内泥沙；

3)低温酶解：在生物酶解罐中放入与大红刺参等重量的电导率为2Us/cm的超纯水，加温至55℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的大红刺参，加温至48℃；放入大红刺参重量0.6％的木瓜蛋白酶，在48℃温度下酶解处理2.5h；放入大红刺参重量0.6％的胶原蛋白酶，在48℃温度下酶解处理18h；放入大红刺参重量0.5％的活性炭，放置1.5h；放入大红刺参重量1.2％的石英砂，放置1h；放入大红刺参重量0.15％的风味酶，放置1h；加温至85℃灭酶1h；

4)离心分离：在55℃温度下，在离心机中以11000转/小时的离心速度对灭酶后的低温酶解产物进行离心分离；

5)第一次浓缩过滤：对离心分离后得到的产物用1800道尔顿口径的超滤膜进行第一次浓缩过滤，分离提取下清液；

6)第二次浓缩过滤：对第一次浓缩过滤得到的下清液用280道尔顿口径的超滤膜进行第二次浓缩过滤去盐，分离提取上清液；

7)干燥：对第二次浓缩过滤得到的上清液进行冷冻干燥，即得到实施例2的海参多肽。

实施例3：选择新鲜的梅花参作为海参原料，进行海参多肽的制备：

1)原料筛选：筛选准备新鲜的梅花参若干；

2)原料清洗：将筛选得到的梅花参，先用自来水冲洗，再用电导率为5Us/cm的超纯水清洗，以洗清梅花参体内泥沙；

3)低温酶解：在生物酶解罐中放入与梅花参等重量的电导率为0.1Us/cm的超纯水，加温至60℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的梅花参，加温至52℃；放入梅花参重量0.4％的木瓜蛋白酶，在52℃温度下酶解处理4h；放入梅花参重量0.5％的胶原蛋白酶，在52℃温度下酶解处理18h；放入梅花参重量0.5％的活性炭，放置1.5h；放入梅花参重量1.5％的石英砂，放置1.5h；放入梅花参重量0.15％的风味酶，放置1.5h；加温至78℃灭酶1.5h；

4)离心分离：在58℃温度下，在离心机中以9000转/小时的离心速度对灭酶后的低温酶解产物进行离心分离；

5)第一次浓缩过滤：对离心分离后得到的产物用1200道尔顿口径的超滤膜进行第一次浓缩过滤，分离提取下清液；

6)第二次浓缩过滤：对第一次浓缩过滤得到的下清液用150道尔顿口径的超滤膜进行第二次浓缩过滤去盐，分离提取上清液；

7)干燥：对第二次浓缩过滤得到的上清液进行喷雾干燥，即得到实施例3的海参多肽。

对于上述实施例1～3，分别称取制备得到的海参多肽成品0.01g溶解于10mL去离子水中，充分溶解后用滤膜过滤去除杂质，得到样品；上样针取10μL样品上样，对海参多肽成品的分子量进行检测，检测设备及条件为：应用SHIMADZULC-10AT的HPLC系统，选用的色谱柱为：Shim-pack Diol-150(7.9mm×25cm)；流动相：磷酸盐缓冲液(1L体系，Na₂SO₄ 28.4g，NaH₂PO₄·2H₂O 0.66g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.066g，pH 7.0)；洗脱条件为14min洗脱；流速为1ml/min，柱温箱温度控制在28℃；检测波长：210nm。得到的标准品出峰图见图1，样品出峰图见图2。标准品VB12的出峰时间为：t＝8.870min，分子量为1.350kDa；标准品VB1的出峰时间为：t＝9.130min，分子量为0.340kDa；标准品Trp的出峰时间为：t＝10.685min，分子量为0.200kDa。实施例1样品的出峰时间为：t＝8.918min，测算得到的分子量为1.164kDa；实施例2样品的出峰时间为：t＝8.928min，测算得到的分子量为：1.125kDa；实施例3样品的出峰时间为：t＝8.946min，测算得到的分子量为1.055kDa。实施例1的海参多肽的分子量为1.164kDa，实施例2的海参多肽的分子量为1.125kDa，实施例3的海参多肽的分子量为1.055kDa，均满足人体的充分吸收需要，其吸收率可达80％以上。

对上述实施例1～3的新鲜海参原料以及制备得到的海参多肽成品中的重金属离子含量分别进行检测，其检测结果见表1，可见，本发明方法制备得到的海参多肽，其有害重金属元素含量极低。

Claims (3)

1.一种海参多肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）原料筛选：筛选准备新鲜的海参原料若干；

2）原料清洗：将筛选得到的海参原料，先用自来水冲洗，再用电导率为0.1-20Us/cm的超纯水清洗，以洗清海参体内泥沙；

3）低温酶解：在生物酶解罐中放入与海参原料等重量的电导率为0.1-10Us/cm的超纯水，加温至50-60℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的海参原料，加温至40-60℃；放入海参原料重量0.3-0.7%的木瓜蛋白酶，在40-60℃温度下酶解处理2-5h；放入海参原料重量0.3-0.7%的胶原蛋白酶，在40-60℃温度下酶解处理5-25h；放入海参原料重量0.3-0.8%的活性炭，放置0.5-2h；放入海参原料重量0.5-2%的石英砂，放置0.5-2h；放入海参原料重量0.05-0.25%的风味酶，放置0.5-2h；加温至70-90℃灭酶0.5-2h；

4）离心分离：在45-60℃温度下，在离心机中以8000-12000转/小时的离心速度对灭酶后的低温酶解产物进行离心分离；

5）第一次浓缩过滤：对离心分离后得到的产物用1200-2800道尔顿口径的超滤膜进行第一次浓缩过滤，分离提取下清液；

6）第二次浓缩过滤：对第一次浓缩过滤得到的下清液用100-500道尔顿口径的超滤膜进行第二次浓缩过滤去盐，分离提取上清液；

7）干燥：对第二次浓缩过滤得到的上清液进行冷冻干燥或喷雾干燥，即得到海参多肽。

2.根据权利要求1所述的一种海参多肽的制备方法，其特征在于步骤2）中所述的低温酶解过程如下：在生物酶解罐中放入与海参原料等重量的电导率为0.1-8Us/cm的超纯水，加温至55-60℃；再在该生物酶解罐中放入洗净的海参原料，加温至40-55℃；放入海参原料重量0.4-0.6%的木瓜蛋白酶，在40-55℃温度下酶解处理2-4h；放入海参原料重量0.4-0.6%的胶原蛋白酶，在40-45℃温度下酶解处理8-23h；放入海参原料重量0.4-0.8%的活性炭，放置0.5-1.5h；放入海参原料重量0.8-1.6%的石英砂，放置0.5-1.5h；放入海参原料重量0.08-0.2%的风味酶，放置0.5-1.5h；加温至75-95℃灭酶0.5-1.5h。

3.根据权利要求1或2所述的一种海参多肽的制备方法，其特征在于步骤3）中所述的活性炭的目数为130-200目。