CN101822750B

CN101822750B - 金花茶茶多酚缓释微球颗粒及其生产方法

Info

Publication number: CN101822750B
Application number: CN2010101530064A
Authority: CN
Inventors: 宁恩创; 刘志新; 杨继住; 秦小明
Original assignee: GUANGXI GUIREN TANG GOLDEN CAMELLIA TEA INDUSTRY GROUP Co Ltd
Current assignee: GUANGXI GUIREN TANG GOLDEN CAMELLIA TEA INDUSTRY GROUP Co Ltd
Priority date: 2010-04-22
Filing date: 2010-04-22
Publication date: 2012-07-04
Anticipated expiration: 2030-04-22
Also published as: CN101822750A

Abstract

本发明是一种用金花茶叶制成的金花茶茶多酚缓释微球颗粒，它的主要成分包括金花茶茶多酚浸膏、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和十二烷基硫酸钠，其生产方法是将金花茶新鲜叶片清洗切碎、超声波浸提、纳滤膜分离浓缩、大孔吸附树脂纯化和低温真空浓缩后得到金花茶茶多酚浸膏，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇水溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，喷雾干燥，即得到金花茶茶多酚缓释微球产品。

Description

金花茶茶多酚缓释微球颗粒及其生产方法

技术领域

本发明属于从植物提取物质制成的保健产品，特别是从植物金花茶叶提取的物质制成缓释微球颗粒及其生产方法。

背景技术

金花茶(Camellia chuyxanth(Hu)Tuyanma)是山茶科、山茶属、金花茶组、金花茶系植物，20世纪60年代初在我国广西首次被发现，是世界珍稀的的植物资源，被誉为“茶族皇后”和植物界的“大熊猫”，喜欢温暖湿润的气候，常分布于土壤疏松、排水良好的阴坡溪沟处，主要分布在北回归线以南、广西北热带季雨林、沟谷雨林地带内。金花茶金瓣玉蕊，腊质金黄，风姿绰约，美艳怡人，高贵雅致，是一种具有极高药用价值的天然中草药，目前主要用于咽喉炎、痢疾、高血压、预防肿瘤，花用于便血、月经不调。近年来多家权威机构检测发现，金花茶叶含有茶多糖、茶多酚、茶皂甙、黄酮类等多种生理活性成分，同时含有丰富的锗、硒和锌等维持人体健康有益的微量元素。动物及临床实验也表明金花茶叶对移植性恶性肿瘤有抑制作用，还具有降血压、降血脂和防止动脉粥样硬化等作用，随着人们对金花茶研究的不断深入，金花茶的高活性成分和医学药用方面的潜力已逐渐被世人所认识。

围绕着金花茶在医药上的应用，目前人们对金花茶及其提取物进行了许多有效的研究和探索，例如广西师范大学的陈全斌、湛志华、张巧云、廖娜在《广西热带农业》2005(6).-10-11，发表题名为“金花茶叶中黄酮甙元的分离提纯及其表征”的文章，以金花茶叶为原料提取黄酮，黄酮经水解，溶剂萃取、柱层析等，得到高纯度甙元；经熔点、TLC、液相色谱、红外光谱、核磁共振法等分析手段进行结构表征，首次证实金花茶叶含有黄酮甙，其甙元为槲皮素和山奈酚。广东海洋大学和广西富新科技股份有限公司的韦璐、秦小明、黄日秋、黄映仪、刘志新在《食品科技》.2007，32(11).-100-102发表了“超声波提取金花茶多糖的工艺研究”该文章通过单因素和正交实验对超声波提取金花茶多糖的工艺进行了研究，探讨了料液比、提取温度、提取时间及超声波频率这4个影响因素，确定了金花茶多糖的最佳提取工艺条件为料液比1∶50、温度80℃、时间1.0h、超声波频率为53.2kHz，在该条件下多糖的得率为3.1％。同时将超声波法与传统浸提法进行比较，结果表明采用超声波提取法提高了茶多糖的得率1.0％。

在金花茶提取和制作保健食品方面，我们也检索到以下一些公开文献，例如：

1、中国专利申请号：03149225.8，申请日：2003.06.18，名称：一种金花茶浓缩液，公开(公告)号：CN1460438，申请(专利权)人：广西富新科技股份有限公司，地址：广西壮族自治区北海市北海大道全景大厦东座8楼，摘要：该发明公开了一种金花茶浓缩液。该发明采用的是纳米膜分离浓缩技术，在25-40℃条件下对金花茶提取液进行浓缩，避免了加热浓缩过程对活性成分的破坏，以及有效成分的流失。

2、中国专利申请号：03140885.0，名称：一种金花茶提取液，公开(公告)号：CN1476767，申请(专利权)人：广西富新科技股份有限公司，地址：广西壮族自治区北海市北海大道全景大厦东座8楼，摘要：一种金花茶提取液。该发明采用醇提和水提相结合，并采用超声波振荡，以提高提取效率，全过程采用了低于60℃的低温条件，有效保护了金花茶中的芳香类物质和具有保健功能的各种成分，提取率达到90％以上，并可缩短提取时间，降低了成本。

3、【题名】金花茶饮料工艺的研究【作者】赵彦华，田呈瑞，徐长波，韦能，秦立虎【机构】陕西师范大学食品工程系，西安海星现代饮品有限公司，防城港市金花茶有限公司，西安市奶业科学研究所。【刊名】食品科学.2005，26(9).-323-326【文摘】本文研究了生产条件下金花茶饮料浸提的基本工艺，及防止金花茶饮料出现货架期浑浊的澄清工艺。

4、【题名】金花茶口服液加工工艺研究【作者】宁恩创，秦小明，杨宏【机构】广西大学轻工与食品工程学院，湛江海洋大学食品科技学院，广西富新科技股份有限公司【刊名】食品工业科技.2006，27(1).-121-122，125【文摘】探讨了金花茶口服液的加工工艺和最佳配方，以金花茶为原料，采用酶解处理，结合超声波振荡处理提取金花茶叶药用保健成分，通过正交实验筛选出了口服液的最佳配方，研制出一种具有金花茶独特风味，入口微苦，回味悠长，降血脂功能明显的保健产品。

5、【题名】金花茶叶药用保健成分提取新工艺研究【作者】秦小明，宁恩创，杨宏【机构】湛江海洋大学食品科技学院，广西大学轻工与食品工程学院，广西富新科技股份有限公司。【刊名】食品工业科技.2005，26(10).-122-124【文摘】目的：探讨采用酶解处理结合超声波振荡处理对金花茶叶药用保健成分浸出率的作用效果。方法：以茶多酚和总皂甙作为浸出指标，通过正交实验，确定从金花茶叶中提取药用保健成分的最佳提取工艺条件。结果：最佳组合为超声波频率为25kHz，提取温度85℃，提取时间90min；中试生产的实际效果表明。新工艺与现行的生产工艺相比，茶多酚、总黄酮和总皂甙的浸提率分别提高了17.3％、13.2％和9.3％，抽提工序时间缩短了2h。

6、【题名】金花茶浓缩饮液加工工艺研究【作者】杨宏，秦小明，宁恩创【机构】广西富新科技股份有限公司，湛江海洋大学，广西大学【刊名】广西热带农业.2005(3).-38-39【文摘】采用酶解处理结合超声波振荡处理提取金花茶叶药用保健成分，通过正交试验筛选出浓缩饮液的最佳配方，研制具有金花茶独特风味的保健产品。

7、【题名】金花茶叶酶法提取工艺条件的研究【作者】王元凤、王登良等【机构】江南大学食品学院，华南农业大学【刊名】无锡轻工大学学报：食品与生物技术.2001，20(6).-582-587，593【文摘】添加外源酶把金花茶叶中的有效成分提取出来，其最佳提取条件为：加水量为金花茶叶干样的100倍，添加的木瓜蛋白酶的质量分数为0.4％，pH值为5.0-5.5，温度为50-55℃，恒温120min。在此条件下，金花茶叶水浸出率、可溶性糖和氨基酸含量分别比对照增加39.47％、7.39％和1.84％，粗蛋白氨基酸的总浸出率为25.5％左右，金花茶叶中矿质元素Fe、Zn、Se、Mn、Co、Mo、Ge、V的浸出率都在95％以上。

8、中国专利申请号：200910114040.8，申请日：2009.05.8，名称：金花茶软胶囊及其生产方法，申请(专利权)人：广西桂人堂金花茶产业集团股份有限公司，地址：广西壮族自治区防城港市防城镇河西工业园，摘要：该发明是一种用金花茶叶提取有效物质制成的软胶囊，它的主要原料包括金花茶叶提取物、植物油、蜂蜡，其生产方法是从金花茶新鲜叶片提取皂甙成分，经过分离纯化，喷雾干燥等，得到金花茶皂甙软胶囊。

从上述公开文献了解到，目前金花茶的成分研究和提取，生产的产品较多，但是因为用普通方法提取金花茶叶的有效成分有几方面缺点，一是金花茶叶片蜡质层极厚，活性成分很难转移到提取液中，二是产品容易氧化变色。因此金花茶活性成分的回收率和活性较低，做成产品的功效也随之降低。

许多植物抗氧化成分，比如茶多酚粉术在潮湿、阳光、高温等条件下极易发生氧化、聚合、缩合等反应；茶多酚在作抗氧化保护时会发生自身氧化；脂溶性差；在肠胃消化时，结构会遭到破坏以及自身存在涩味等问题，从而限制了茶多酚的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种从植物金花茶鲜叶提取的多酚类物质，并将其制成缓释微球颗粒，及其该缓释微球颗粒的生产方法。

本发明的金花茶茶多酚缓释微球颗粒，包括以下质量份数的原料：

金花茶茶多酚浸膏 60～66；

羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯28～34；

十二烷基硫酸钠 3～6；

所述的金花茶茶多酚浸膏是用金花茶新鲜叶片提取的有效物质制备；

所述的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯选自医药食品级；

所述的十二烷基硫酸钠选自医药食品级。

所述的金花茶茶多酚浸膏制备方法如下：

(1)原料预处理：将采摘不超过24小时的金花茶鲜叶除去杂质及腐烂、病黄叶，清洗干净并切成1～2cm宽的小叶条；

(2)果胶酶处理和超声波浸提：将金花茶碎片移入超声波提取罐，加5倍重量的纯净水进行搅拌，加热到40℃后加入料液量0.05％(w/w)的复合果浆酶，恒温搅拌酶解处理2小时，然后迅速加热至100℃灭酶10分钟，再添加鲜叶重量5倍纯净水，搅拌至浆液温度达到60～70℃左右时，用频率为25～80kHz的超声波提取设备振荡浸提60～70分钟，结束后过滤，将残渣加入10倍的纯水进行二次超声波振荡提取，提取条件与第一次相同，并将浸提液经120目的双效过滤机过滤后备用；

所述的超声波提取设备选用的是超声波中药提取机组(TCD-1000)；

(3)纳滤膜分离浓缩：将过滤后的超声波提取液用纳滤膜分离浓缩设备进行过滤浓缩和分离，得到固形物含量8～10％的浓缩液；

(4)大孔吸附树脂纯化：以体积浓度为30％～80％的乙醇溶液为洗脱剂，用大孔吸附树脂对金花茶浓缩液进行分离纯化，得到金花茶多酚洗脱液；

(5)低温真空浓缩：在低温真空条件下把金花茶多酚溶液浓缩成含水10～15％的金花茶茶多酚浸膏。

所述的复合果浆酶是以酸性果胶酶(Pectinase)为主，同时还包括木聚糖酶(Xylanase)、β-葡聚糖酶(β-glucanase)或其他半纤维素酶一种或多种的混合。

所述的金花茶茶多酚缓释微球颗粒的生产方法，是按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(用作缓释微球颗粒的骨架材料)∶体积浓度为80％的乙醇＝1∶25的质量比例，将羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于体积浓度为80％的乙醇溶液中，搅拌混匀，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，对所得溶液在进口风温度为90～110℃，出口风温度为70～80℃，进料速度5～7ml/min的条件下进行喷雾干燥，即得到金花茶茶多酚缓释微球产品。

本发明的优点：

1.金花茶叶片角质层极厚，含有丰富的纤维素，原果胶和叶绿素，表面又分布有大量的蜡质层，对有效成分的提取十分不利。本发明采用的复合果浆酶是以果胶酶为主，还包括含木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、甘露聚糖酶等中的一种或多种的混合。这些复合酶系的协同作用能够降解金花茶叶细胞壁的果胶质、半纤维素、纤维素等，有利于金花茶叶功效成分的溶出，有效提高了功效成分(金花茶茶多酚)的提取率。

2.本发明采用低温超声波提取技术对金花茶中的活性成分进行提取分离，可以降低能量消耗，缩短提取时间，减少提取过程中可能的破坏，有效提高金花茶活性成分的回收率和活性保持。而传统的金花茶鲜叶浸提工艺是沿用传统的作坊式中草药熬制方法即采用夹层锅高温提取，常压高温浓缩工艺，致使具有保健功能的生理活性物质的部分或者完全丧失，特有的芳香物质也大部分挥发损失；药用保健成分的提取率低，造成单位产品原料(鲜叶)消耗量大，所加工的产品档次低(风味差，带有刺激性异味)，质量很不稳定。

3.本发明采用的纳滤膜分离浓缩技术与常规真空浓缩相比，简化生产工艺，缩短加热时间，大大降低能耗，有效地提高了浸提液中金花茶茶多酚的回收率和活性成分保持。而我国中药的传统浓缩方法一般采用常温高压浓缩或者多效真空浓缩，这些浓缩方法都有能耗高、有机溶剂损耗大、污染严重、产品的固有风味损失大、香气差、活性成分损失大等缺点。

4.本发明采用大孔吸附树脂高效吸附剂分离纯化金花茶茶多酚，与常规分离纯化方法相比，具有提取时间短、产率高、低温高效等优点。

5.本发明生产得到的金花茶茶多酚缓释微球活性成分含量高，金花茶茶多酚的稳定性好，产品保存时间长，且具有较好的缓释效果，作为天然抗氧化剂和保健药品，在肠胃消化时，有效减少了消化液的破坏作用，具有广阔的应用前景。

6.通过对金花茶的深加工，采用高新技术，实施三高一低(高科技、高品质、高质服务、低成本)的战略，以低值的农副产品生产高附加值的产品，使农产品增值，达到农民增收，企业获利，增加国家税收，同时还能提高人们对金花茶的保健作用的认识，加强对金花茶这一珍稀植物资源的有效保护，解决一部分剩余劳动力的就业问题，体现了良好的社会效益。本发明也能将金花茶的经济价值开发出来并形成产业，提升金花茶产品的附加值，使金花茶原料得到合理利用。

7.大量医学临床试验结果表明，金花茶具有抗氧化、降血糖、降血压、抑制肿瘤生长、防止动脉粥样硬化、提高机体免疫能力、延缓衰老等作用。根据金花茶的成分分析结果，许多专家推测金花茶的这些功效与金花茶茶多酚化学成分有密切相关。本发明的金花茶茶多酚缓释微球产品由于具有很好的缓释效果和保健作用，具有很强的市场竞争力，将会产生巨大的经济效益。

附图说明

图1不同浓度的试样对羟基自由基的清除能力。

图2不同浓度的试样对DPPH·的清除能力。

图3不同浓度的试样对超氧阴离子的清除能力。

图4不同浓度的试样对亚硝酸根的清除能力。

图5不同浓度的试样的还原能力。

具体实施方式

实施例1

将采摘不超过24小时的金花茶叶除去杂质及腐烂、病黄叶，清洗干净并切成1～2cm宽的小叶条，加入5倍的水和料液重量0.05％的复合果浆酶(青岛康地恩生物科技有限公司生产的KDN-F01果浆酶，主要成分：酸性果胶酶为主，含木聚糖酶、β-葡聚糖酶等半纤维素酶。)，搅拌加热到40℃，恒温2小时后，迅速加热至100℃灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当料液温度达到60℃左右时，采用超声波中药提取机组(TCD-1000)进行振荡浸提，浸提时间65分钟，频率25kHz。第一次超声波振荡结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡浸提(浸提条件同第一次)。浸提液经120目的双效过滤机过滤后合并至不锈钢储罐中备用。将过滤后的浸提液采用纳滤膜分离浓缩设备进行浓缩，装置由厦门三达膜工程有限公司提供，纳滤膜组件为OSMONIC公司生产，型号DK2540，有效面积2.5m²，材质聚酰胺，pH值使用范围2-12，纳滤膜型号为DK2540(最低截留分子量为200，截留率为95％)，工作温度为40～45℃，工作压力1.5MPa，得到浓度为固形物含量9％的浓缩液。将XAD-16大孔吸附树脂(美国罗门哈斯公司)装填到玻璃圆柱体内，并以蒸馏水充分冲洗层析柱，把纳滤膜分离浓缩的溶液按每小时约70升的速度经过树脂柱，然后用体积浓度为45％乙醇溶液洗脱，得到金花茶多酚洗脱液，再在低温真空条件下浓缩成含水量15％的金花茶茶多酚浸膏(按QB/T 8313中规定的方法检验茶多酚含量；树脂的再生用95％乙醇浸泡8小时)。按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯∶体积浓度为80％乙醇＝1∶25的质量比例，将20公斤的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于500公斤的体积浓度为80％乙醇溶液中，搅拌混匀，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将40公斤金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16，即2.5公斤的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，对所得溶液在进口风温度为90～110℃，出口风温度为70～80℃，进料速度5～7ml/min的条件下进行喷雾干燥，得出茶多酚缓释微球产品。

实施例2

将采摘不超过24小时的金花茶叶除去杂质及腐烂、病黄叶，清洗干净并切成1～2cm宽的小叶条，加5倍的水将其打成浆。将打浆得到的浆液加热到40℃，加入浆液量0.05％的果胶酶(湖南尤特尔生化有限公司生产的NCB-PE200复合果浆酶，主要由果胶酶与纤维素酶的复合制成，并含一定的半纤维素酶、β-葡聚糖酶。)，恒温搅拌2小时后，迅速加热至100℃灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当料液温度达到65℃左右时，采用超声波中药提取机组(TCD-1000)进行振荡浸提，浸提时间60分钟，频率50kHz。第一次超声波振荡浸提结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡浸提(浸提条件同第一次)。将浸提液经120目的双效过滤机过滤后合并至不锈钢储罐中备用。将过滤后的超声波浸提液在40-45℃条件下用纳滤膜分离浓缩设备过滤并浓缩，装置由厦门三达膜工程有限公司提供，纳滤膜组件为OSMONIC公司生产，型号DK2540，有效面积2.5m²，材质聚酰胺，pH值使用范围2～12，纳滤膜型号为DK2540(最低截留分子量为200，截留率为95％)，工作压力1.5MPa，得到浓度为固形物含量10％的浓缩液。将XAD-16大孔吸附树脂(美国罗门哈斯公司)装填到玻璃圆柱体内，并以蒸馏水充分冲洗层析柱，把纳滤膜分离浓缩的溶液按每小时70升的速度经过树脂柱，然后用体积浓度为70％乙醇溶液洗脱，得到金花茶多酚洗脱液，再在低温真空条件下浓缩成含水量10％的金花茶茶多酚浸膏(按QB/T 8313中规定的方法检验茶多酚含量；树脂的再生用95％乙醇浸泡8小时)。按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯∶体积浓度为80％乙醇＝1∶25的质量比例，将30公斤的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于750公斤的体积浓度为80％乙醇溶液中，搅拌混匀，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将60公斤金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16，即3.75公斤的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，对所得溶液在进口风温度为90～110℃，出口风温度为70～80℃，进料速度5～7ml/min的条件下进行喷雾干燥，即得到茶多酚缓释微球产品。

实施例3

将采摘不超过24小时的金花茶鲜叶除去杂质及腐烂、病黄叶，清洗干净并切成1～2cm宽的小叶条，加5倍的水和料液量0.05％的果胶酶(青岛康地恩生物科技有限公司生产的KDN-FO1果浆酶)。搅拌加热到40℃，恒温2小时后，迅速加热至100℃灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当料液温度达到70℃左右时，采用超声波中药提取机组(TCD-1000)进行振荡浸提，浸提时间70分钟，频率70kHz。第一次超声波振荡浸提结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡浸提(浸提条件同第一次)。将浸提液经120目的双效过滤机过滤后合并至不锈钢储罐中备用。将过滤后的超声波浸提液采用纳滤膜分离浓缩设备进行浓缩，装置由厦门三达膜工程有限公司提供，纳滤膜组件为OSMONIC公司生产，型号DK2540，有效面积2.5m²，材质聚酰胺，pH值使用范围2～12，纳滤膜型号为DK2540(最低截留分子量为200，截留率为95％)，工作温度为40～45℃，工作压力1.5MPa，得到浓度为固形物含量10％的浓缩液。将XAD-16大孔吸附树脂(美国罗门哈斯公司)装填到玻璃圆柱体内，并以蒸馏水充分冲洗层析柱，把纳滤膜分离浓缩的溶液按每小时70升的速度经过树脂柱，然后用体积浓度为80％乙醇溶液洗脱，得到金花茶多酚洗脱液，再在低温真空条件下浓缩成含水量为12％的金花茶茶多酚浸膏(按QB/T 8313中规定的方法检验茶多酚含量；树脂的再生用95％乙醇浸泡8小时)。按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯∶体积浓度为80％乙醇＝1∶25的质量比例，将40公斤的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于1000公斤的体积浓度为80％乙醇溶液中，搅拌混匀，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将80公斤金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16，即5公斤的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，对所得溶液在进口风温度为90～110℃，出口风温度为70～80℃，进料速度5～7ml/min的条件下进行喷雾干燥，即得到茶多酚缓释微球产品。

实施例4

将采摘不超过24小时的金花茶鲜叶除去杂质及腐烂、病黄叶，清洗干净并切成1～2cm宽的小叶条，加5倍的水和料液量0.05％的果胶酶(湖南尤特尔生化有限公司生产的NCB-PE200复合果浆酶)。搅拌加热到40℃，恒温2小时后，迅速加热至100℃灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当料液温度达到65℃左右时，采用超声波中药提取机组(TCD-1000)进行振荡浸提，浸提时间65分钟，频率80kHz。第一次超声波振荡浸提结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡浸提(浸提条件同第一次)。将浸提液经120目的双效过滤机过滤后合并至不锈钢储罐中备用。将过滤后的超声波浸提液采用纳滤膜分离浓缩设备进行浓缩，装置由厦门三达膜工程有限公司提供，纳滤膜组件为OSMONIC公司生产，型号DK2540，有效面积2.5m²，材质聚酰胺，pH值使用范围2～12，纳滤膜型号为DK2540(最低截留分子量为200，截留率为95％)，工作温度为40～45℃，工作压力1.5MPa，得到浓度为固形物含量8％的浓缩液。将XAD-16大孔吸附树脂(美国罗门哈斯公司)装填到玻璃圆柱体内，并以蒸馏水充分冲洗层析柱，把纳滤膜分离浓缩的溶液按每小时70升的速度经过树脂柱，然后用体积浓度为80％乙醇溶液洗脱，得到金花茶多酚洗脱液，再在低温真空条件下浓缩成含水量为13％的金花茶茶多酚浸膏(按QB/T 8313中规定的方法检验茶多酚含量；树脂的再生用95％乙醇浸泡8小时)。按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯∶体积浓度为80％乙醇＝1∶25的质量比例，将10公斤的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于250公斤的体积浓度为80％乙醇溶液中，搅拌混匀，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将20公斤金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16，即1.25公斤的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，对所得溶液在进口风温度为90～110℃，出口风温度为70～80℃，进料速度5～7ml/min的条件下进行喷雾干燥，即得到茶多酚缓释微球产品。

本发明的金花茶茶多酚缓释颗粒的抗氧化活性研究

1.实验对象：上述实施例1制备的金花茶茶多酚缓释颗粒。

2.主要试剂：XAD-16大孔吸附树脂(美国罗门哈斯公司、)硫酸亚铁、邻苯三酚、双氧水、邻二氮菲、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和3-羟甲基氨基甲烷，二苯基苦味酰基苯肼基自由基(DPPH)、盐酸萘乙二胺、亚硝酸钠、铁氰化钾、三氯乙酸、抗坏血酸均为分析纯；绿茶多酚(含量95％，安徽华宝生物有限公司)。

3.主要仪器与设备：层析柱(3.0cm×40cm，上海沪西分析仪器厂)，RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，紫外可见分光光度计(UV-2120PC型，尤尼柯(上海)仪器有限公司)，可见分光光度计(722S，上海精密科学有限公司)，ES电子天平(ES-C300A型，湘仪天平仪器设备有限公司)。

4.试验方法：

(1)试验样品制备：取上述实施例1制备的金花茶茶多酚缓释颗粒，配制成质量浓度为20mg/mL的母液，备用。

(2)对羟基自由基(·OH)清除能力的测定：采用H₂O₂/Fe²⁺体系法进行测定：在试管中加入2mLpH＝7.4的磷酸缓冲溶液，1mL 1.5mmol/L的邻二氮菲溶液，充分混匀，加入1ml1.5mmol/L FeSO₄溶液，立即混匀，分别加入1mL一定不同浓度的各试样液，其中VC的浓度依次为0.25mg/mL，0.5mg/mL，0.75mg/mL，1mg/mL，1.5mg/mL，绿茶多酚的浓度依次为0.5mg/mL，1mg/mL，3mg/mL，5mg/mL，10mg/mL，金花茶多酚缓释颗粒的浓度依次为1mg/mL，2mg/mL，6mg/mL，10/mL，20mg/mL。

混匀，再加入1mL 0.02％H₂O₂，最后补充体积至8mL，同时做样品空白试验。另再做损伤管和未损伤管，其中损伤管中加入1ml 0.02％H₂O₂，未损伤管不加H₂O₂，最后补充各管体积至8ml。于37℃保温60min，510nm处测A值，实验重复2次。羟基自由基的清除率按下式计算：

(3)对有机自由基DPPH·清除能力的测定：采用DPPH法测定，取不同浓度的各试样液2mL于试管中(其中VC的浓度依次为0.01mg/mL，0.05mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL，绿茶多酚的浓度依次为0.05mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL，3mg/mL，5mg/mL，金花茶多酚缓释颗粒的浓度依次为0.1mg/mL，1mg/mL，2mg/mL，6mg/mL，10mg/mL)，再加入2mLDPPH·的乙醇溶液(DPPH·浓度为2X10^-4mol/L)，混合均匀，0.5h后用分光光度计在517nm处测定其吸光度A_i；同时测2mLDPPH·溶液+2mL乙醇混合后的吸光度A₀和2mL提取液+2mL乙醇混合后的吸光度A₀，实验重复2次，按下式计算各试样对DPPH·的清除率：

(4)对超氧阴离子(O₂ ^-)清除能力的测定：采用邻苯三酚自氧化体系法进行测定，取4.5mLpH＝8.2Tris-HCl缓冲溶液，分别加入1mL不同浓度的各试样液，(其中VC的浓度依次为0.01mg/mL，0.03mg/mL，0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.3mg/mL，绿茶多酚的浓度依次为0.01mg/mL，0.03mg/mL，0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.3mg/mL，金花茶多酚缓释颗粒的浓度依次为0.01mg/mL，0.03mg/mL，0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.3mg/mL)

25℃保温20min后加入0.3mL 1mmol的邻苯三酚启动反应，5min后测定325nm处的吸光度值A，同时设置对照(加入4.2mL的蒸馏水代替样品液)，对照管以缓冲溶液调零，加药管分别以相同浓度样品液调零实，验重复2次，按下式计算超氧阴离子的清除率：

(5)对亚硝酸根离子(NO₂ ^-)清除能力的测定：取1mL不同浓度的各试样液于10mL比色管中(其中VC的浓度依次为0.1mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL，3mg/mL，5mg/mL，绿茶多酚的浓度依次为0.1mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL，3mg/mL，5mg/mL，10mg/mL，金花茶多酚缓释颗粒的浓度依次为0.2mg/mL，1mg/mL，2mg/mL，6mg/mL，10mg/mL，20mg/mL)，加入5μg/mL的NaNO₂标准溶液0.5mL，在37℃恒温水浴中反应30min。取出后立即加入1mL0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置5min后加入0.5mL0.2％的盐酸萘乙二胺溶液，加水至10mL刻度，混匀，静置15min，以不加NaNO₂和样品溶液的试剂为空白，于538nm处测定吸光值。通过NaNO₂标准曲线得到相应的NaNO₂含量。重复两次，按下式计算其平均值。

(6)还原能力的测定：在2.5mL pH＝6.6的磷酸盐缓冲液中加入不同浓度的各试样液2.5mL(其中VC的浓度依次为0.01mg/mL，0.03mg/mL，0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.3mg/mL，绿茶多酚的浓度依次为0.05mg/mL，0.1mg/mL，0.3mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL，金花茶多酚缓释颗粒的浓度依次为0.1mg/mL，0.2mg/mL，0.6mg/mL，1mg/mL，2mg/mL)，1％的铁氰化钾溶液2.5mL，混合物在50℃恒温20min后，再加入2.5mL10％的三氯乙酸溶液，然后以3000r/min离心分离10min，取上层清液5mL加蒸馏水5mL和0.1％FeCl₃溶液1mL，在700nm处测定吸光度，吸光度越高，还原能力越强。

5.统计分析方法：

采用SPSS13.0统计分析软件对各试样液的半数清除浓度(IC₅₀)进行分析。

6.结果与分析：

(1)对羟基自由基(·OH)清除能力：以V_C和绿茶多酚作为阳性对照，按照4(2)的实验方法测定各试样对羟基自由基(·OH)的清除能力，实验结果见图1。由图可以看出，金花茶多酚缓释颗粒在较低浓度的时候就能产生清除羟自由基的活性，随着浓度的增高，清除羟自由基的能力也不断上升，并呈一定的剂量-效应关系。实验中发现当浓度在10mg/mL以下时，清除率随浓度的增大上升趋势较为明显，到达10mg/mL以后上升趋势变化较小。根据文献^[10]，可能是因为金花茶多酚结构中含供氢体，具有提供氢质子的能力，可使具有高度氧化性的自由基还原，从而能终止自由基连锁反应，起到清除或抑制自由基的目的。但在高浓度时，它将反应Fe²⁺+H₂O₂→Fe³⁺+OH+·OH中的Fe³⁺还原成Fe²⁺，反而促进了羟基自由基的产生。由各试样的线性回归方程计算得到，V_C、绿茶多酚以及金花茶多酚缓释颗粒的Ic₅₀分别为0.7157mg/mL、1.8206mg/mL、2.1388mg/mL。

(2)对有机自由基DPPH·清除能力：以V_C和绿茶多酚作为对照，按照4(3)的实验方法测定各试样对DPPH·的清除能力，实验结果见图2。由图2可以看出：金花茶多酚缓释颗粒对DPPH·的清除效果理想。由SPSS 13.0软件所得的各试样线性回归方程计算得V_C、绿茶多酚以及金花茶多酚缓释颗粒Ic₅₀分别为1.1272×10^-2mg/mL、0.1840mg/mL、9.6288×10^-2mg/mL。

(3)对超氧阴离子(O₂ ^·-)清除能力：以V_C和绿茶多酚作为对照，按照4(4)的实验方法测定各试样对O₂ ^·-的清除能力，实验结果见图3：在低浓度时，绿茶多酚、金花茶多酚缓释颗粒都对O₂ ^·-出现负清除作用，即促进了该自由基的形成，产生此现象的原因可能是由于以上试样与体系中使用的O₂ ^·-的发生物质邻苯三酚相似，分子中都有羟基结构，超氧阴离子自由基在加速邻苯三酚的自氧化的同时，也加速这些物质的自氧化，从而产生更多的超氧自由基，检测呈负清除作用^[11]。故推测绿茶多酚、金花茶多酚可能含有邻苯三酚结构。由SPSS13.0软件所得的各试样线性回归方程得到，V_C、绿茶多酚以及金花茶多酚缓释颗粒的Ic₅₀分别为0.1549mg/mL、5.9123mg/mL、8.7738mg/mL。

(4)对亚硝酸根离子(NO₂ ^-)的清除能力：以V_C和绿茶多酚作为对照，按照4(5)的实验方法测定各试样对NO₂ ^-的清除能力，实验结果见图4。实验结果表明，各试样对NO₂ ^-都具有明显的清除作用，且清除能力随着浓度的增加而增强。由SPSS软件分析计算得，V_C、绿茶多酚、金花茶多酚缓释颗粒的IC₅₀分别为0.1701mg/mL、0.3669mg/mL、0.9846mg/mL。

(5)还原能力：按照4(6)的实验方法测定各试样的还原能力，实验结果见图5。由图5可以看出，V_C、绿茶多酚以及金花茶多酚缓释颗粒均具有良好的还原能力，是良好的电子供应者，其供应的电子除可以使Fe³⁺还原成Fe²⁺外，还可与自由基成为较惰性的物质，以中断自氧化链锁反应。

7.结论：

以V_C和绿茶多酚作为阳性对照，通过5种不同的体系探讨了金花茶多酚缓释颗粒的抗氧化活性，实验结果表明金花茶多酚缓释颗粒具有明显的清除·OH、O₂ ^-、DPPH·、NO₂ ^-的能力，且具有较强的还原能力，无论在哪种体系中各试样的浓度与清除效果均呈明显的正相关。

本发明金花茶茶多酚缓释颗粒的食用典型例证：

例1、石××，女，1970年生，广西北海市人，公务员，因长期工作繁忙，压力大，且长期使用电脑，少运动，经常失眠，感到身体疲倦，记忆力下降，易患感冒等感染性疾病。服用本发明金花茶茶多酚缓释颗粒，每包6克，每次1包，每天2次，服用20天后失眠症状消失，服用一个月后，工作效率明显提高，抵抗力增强，且精神好转，体力增加，脸色红润，感觉良好。

例2、陈××，男，50岁，广西南宁市人，企业主管，经常忙于应酬，烟酒伤身，以至积劳成疾、免疫力下降，感到身体疲倦，精力不充沛，经常便秘，脸色灰暗发黑、皮肤出现多处色斑，服用本发明金花茶茶多酚缓释颗粒，每包6克，每次1包，每天2次，2个月后，皮肤开始光滑红润富有弹性，色斑变淡甚至消失，睡眠改善，大便正常，感觉体力比以前好很多。

例3、王×，男，1963年生，广西防城市人，因患高血脂、高血压、脑动脉硬化，经常头晕眼花，四肢无力，2006年在某医院治疗，服用洛伐他汀，降压灵等西药，症状有所改善，但停药后易复发，且长期服用大量降脂和降压西药，身体愈发虚弱，经常昏昏欲睡。后改服用本发明金花茶茶多酚缓释颗粒，每包6克，每次1包，每天3次，服用2个月后，精神明显好转，头晕眼花等症状消失，腿脚比以前有力，脸色红润，感觉良好，到医院复查血脂和血压都明显好转。

Claims

1.一种金花茶茶多酚缓释微球颗粒，其特征在于：包括以下质量份数的原料：

金花茶茶多酚浸膏 60～66；

羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯 28～34；

十二烷基硫酸钠 3～6；

所述的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯为按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯∶体积浓度为80％乙醇＝1∶25的质量比例搅拌混匀的乙醇溶液；

所述的金花茶茶多酚浸膏制备方法如下：

(2)果胶酶处理和超声波浸提：将金花茶碎片移入超声波提取罐，加5倍重量的纯净水进行搅拌，加热到40℃后加入料液重量0.05％的复合果浆酶，恒温搅拌酶解处理2小时，然后迅速加热至100℃灭酶10分钟，再添加鲜叶重量5倍纯净水，搅拌至浆液温度达到60～70℃左右时，用频率为25～80kHz超声波提取设备振荡浸提60～70分钟，结束后过滤，将残渣加入10倍的纯水进行二次超声波振荡提取，提取条件与第一次相同，合并两次过滤后的提取液待用；

(4)大孔吸附树脂纯化：以30％～80％的乙醇溶液为洗脱剂，用大孔吸附树脂对金花茶浓缩液进行分离纯化，得到金花茶多酚洗脱液，所述的大孔吸附树脂为美国罗门哈斯公司生产的XAD-16型大孔吸附树脂；

2.根据权利要求1所述的金花茶茶多酚浸膏制备方法，其特征在于：所述的复合果浆酶是以酸性果胶酶(Pectinase)为主，同时还包括木聚糖酶(Xylanase)、β-葡聚糖酶(β-glucanase)或其他半纤维素酶一种或多种的混合。

3.根据权利要求1所述的金花茶茶多酚缓释微球颗粒的生产方法，其特征在于：按照羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯∶体积浓度为80％乙醇＝1∶25的质量比例，将羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于80％乙醇溶液中，搅拌混匀，然后按照金花茶茶多酚浸膏∶羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯＝2∶1的质量比例，将金花茶茶多酚浸膏加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的乙醇溶液中，加入金花茶茶多酚浸膏质量1/16的十二烷基硫酸钠作为乳化剂混匀，对所得溶液在进口风温度为90～110℃，出口风温度为70～80℃，进料速度5～7ml/min的条件下进行喷雾干燥，即得到金花茶茶多酚缓释微球颗粒。