CN104262424B - 天麻素的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从天麻提取天麻素的方法，包括：将天麻粉在超声作用下，用水-醇混合溶剂渗漉；将渗漉液上样中性氧化铝色谱柱，用甲醇溶液洗脱，收集天麻素段洗脱液；上样至大孔树脂色谱柱，用醇-酯混合溶剂洗脱，收集天麻素段洗脱液；蒸发，浓缩，干燥，得天麻素提取物。通过方法得到的天麻素提取物纯度高，而且天麻素提取率高。
Description
技术领域
本发明涉及中草药的药效成分提取纯化领域，具体涉及从天麻提取天麻素的方法。
背景技术
天麻为兰科植物，也称为赤箭、离母、鬼督邮、神草、独摇芝、赤箭脂、定风草、合离草、独摇、自动草或水洋芋等。天麻中含量较高的主要成分是天麻甙(gasTCMLIBodin)，也称天麻素，其化学组成为对-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖甙(p-hydroxymethylphenyl-β-D-glucopyranoside)，具有较好的镇静和安眠作用，对神经衰弱、失眠、头痛症状有缓解作用。
天麻素可以从天麻中提取或化学合成获得。截止目前，关于从天麻中提取天麻素的报道较多，一般在加热下使用溶剂提取。
例如，中国专利申请200910232804.3披露了一种天麻素的制备方法，将天麻粗粉用60-90％乙醇渗漉，减压浓缩干燥，甲醇溶解，然后逆流萃取，收集天麻素段，析晶，用甲醇-乙酸乙酯重结晶。
中国专利申请201110225943.0披露了一种天麻素的提纯方法，将天麻粉末用含醇溶液超声提取，浓缩至无醇，浓缩液过聚酰胺树脂纯化，采用乙醇-水梯度洗脱，目标液通过ODS硅胶柱，用甲醇-水或者乙腈-水混合溶剂洗脱。
中国专利申请201210035854.4披露了一种同时提取天麻多糖和天麻素的方法，将天麻粉水提、醇沉，将沉淀物醇洗、减压干燥、粉碎得到天麻多糖，将醇滤液减压浓缩得到天麻素浸膏。
中国专利申请200910022107.5披露了一种生物酶法提取天麻素的方法，将天麻粉溶于醋酸-醋酸钠缓冲溶液，加入复合酶进行酶解，再加入酒精，过滤去渣，旋蒸浓缩成浸膏，干燥得天麻素提取物。
不过，采用目前技术方法获得的天麻素普遍存在提取率(天麻素得率)低和纯度低的问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种从天麻提取天麻素的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将天麻粉碎，在超声作用下，用水-醇混合溶剂渗漉，得渗漉液；
(2)将渗漉液上样至色谱柱后，用甲醇溶液洗脱，收集天麻素段洗脱液；
(3)将(2)中所得洗脱液上样至大孔树脂色谱柱，用醇-酯混合溶剂洗脱，收集天麻素段洗脱液；
(4)将(3)中所得洗脱液旋转蒸发，浓缩，干燥，得天麻素提取物。
其中，在本发明方法的一个优选实施方式中，在步骤(1)中，所述水-醇混合溶剂为水-甲醇-乙醇三者形成的混合溶剂，优选其体积比为水∶甲醇∶乙醇＝(4-6)∶1∶(0.5-1)，更优选使用水-甲醇-乙醇的体积比为4∶1∶(0.5-1)，特别是4∶1∶0.5的混合溶剂。
其中，在本发明方法的一个优选实施方式中，在步骤(1)中，渗漉时间为12-48小时，优选为约24小时。
其中，在本发明方法的一个优选实施方式中，在步骤(1)中，在整个渗漉过程中，都伴随超声作用，或者，超声作用时间为20分钟-1小时，优选为20-30分钟。
其中，在本发明方法的一个优选实施方式中，在步骤(2)中，所述色谱柱为填充中性氧化铝的色谱柱，洗脱用的甲醇溶液浓度为60％-95％，优选70％-85％，更优选用75-80％甲醇溶液洗脱。
其中，在本发明方法的一个优选实施方式中，在步骤(3)中，所述大孔树脂为极性大孔树脂HPD500。
其中，在本发明方法的一个优选实施方式中，在步骤(3)中，所述醇-酯混合溶剂为乙醇-乙酸乙酯形成的混合溶剂，优选其体积比为乙醇∶乙酸乙酯＝3-5∶1，更优选用乙醇-乙酸乙酯以体积比为3∶1的混合溶剂洗脱。
本发明方法具有以下效果：
1)通过超声渗漉，提高天麻素的转化率和溶出度；
2)通过渗漉，最大程度避免淀粉溶出和糊化，便于后续处理；
3)通过色谱柱，提高天麻素的纯度；
4)通过选用适当的色谱柱和洗脱溶剂，在不损失天麻素的情况下，获得纯度高达98.0％以上的天麻素提取物；
5)本发明方法工艺简单，易于操作，便于控制；
6)本发明方法适用于新鲜天麻，也适用于干天麻。
具体实施方式
实施例
以下通过具体实例进一步描述本发明。不过这些实施例仅仅是范例性的，并不对本发明的保护范围构成任何限制。
实施例1
将自然干燥的天麻粉碎，称取500g天麻粉末，在50W微波作用下，用体积比4∶1∶1的水∶甲醇∶乙醇混合溶剂3000mL渗漉24小时，将渗漉液上样至中性氧化铝色谱柱，用80％甲醇溶液1200mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，并上样至大孔树脂柱HPD500，用体积比3∶1的乙醇∶乙酸乙酯混合溶剂1600mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，旋蒸、干燥得到天麻素提取物1.67g，HPLC纯度98.2％，天麻素提取率0.328％。
实施例2
将自然干燥的天麻粉碎，称取500g天麻粉末，在50W微波作用下，用体积比5∶1∶1的水∶甲醇∶乙醇混合溶剂300mL渗漉24小时，将渗漉液上样至中性氧化铝色谱柱，用70％甲醇溶液1500mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，并上样至大孔树脂柱HPD500，用体积比4∶1的乙醇∶乙酸乙酯混合溶剂1500mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，旋蒸、干燥得到天麻素提取物1.64g，HPLC纯度98.0％，天麻素提取率0.323％。
实施例3
将自然干燥的天麻粉碎，称取500g天麻粉末，在50W微波作用下，用体积比4∶1∶0.5的水∶甲醇∶乙醇混合溶剂3000mL渗漉24小时，将渗漉液上样至中性氧化铝色谱柱，用80％甲醇溶液1200mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，并上样至大孔树脂柱HPD500，用体积比3∶1的乙醇∶乙酸乙酯混合溶剂1600mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，旋蒸、干燥得到天麻素提取物1.67g，HPLC纯度98.5％，天麻素提取率0.329％。
对比例1
将自然干燥的天麻粉碎，称取500g天麻粉末，用体积比4∶1的水∶甲醇混合溶剂(75％甲醇溶液)3000mL渗漉24小时，将渗漉液上样至中性氧化铝色谱柱，用70％甲醇溶液1500mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，并上样至大孔树脂柱HPD500，用体积比4∶1的乙醇∶乙酸乙酯混合溶剂1500mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，旋蒸、干燥得到天麻素提取物1.28g，HPLC纯度97.9％，天麻素提取率0.251％。
对比例2
将自然干燥的天麻粉碎，称取500g天麻粉末，用体积比4∶1的水∶甲醇混合溶剂(75％甲醇溶液)3000mL渗漉24小时，将渗漉液上样至中性氧化铝色谱柱，用70％甲醇溶液1500mL洗脱，收集天麻素段洗脱液，旋蒸、干燥得到天麻素提取物1.56g，HPLC纯度95.7％，天麻素提取率0.299％。
以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种从天麻提取天麻素的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将天麻粉碎，在超声作用下，用水-醇混合溶剂渗漉，得渗漉液，所述水-醇混合溶剂为水-甲醇-乙醇三者形成的体积比为水：甲醇：乙醇＝(4-6)：1：(0.5-1)的混合溶剂；
(2)将渗漉液上样至色谱柱后，用甲醇溶液洗脱，收集天麻素段洗脱液，所述色谱柱为填充中性氧化铝的色谱柱，洗脱用的甲醇溶液浓度为60％-95％；
(3)将(2)中所得洗脱液上样至大孔树脂色谱柱，用醇-酯混合溶剂洗脱，收集天麻素段洗脱液，所述大孔树脂为极性大孔树脂HPD500，所述醇-酯混合溶剂为乙醇-乙酸乙酯形成的混合溶剂；
(4)将(3)中所得洗脱液旋转蒸发，浓缩，干燥，得天麻素提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，
在步骤(1)中，所述水-醇混合溶剂为体积比水：甲醇：乙醇＝4：1：(0.5-1)的混合溶剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，
在步骤(1)中，所述水-醇混合溶剂为体积比水：甲醇：乙醇＝4：1：0.5的混合溶剂。
4.根据权利要求1至3之一所述的方法，其中，
在步骤(2)中，洗脱用的甲醇溶液浓度为70％-85％。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，
在步骤(2)中，洗脱用的甲醇溶液浓度为75-80％。
6.根据权利要求1至3之一所述的方法，其中，
在步骤(3)中，所述醇-酯混合溶剂为体积比为乙醇：乙酸乙酯＝3-5:1的混合溶剂。
7.根据权利要求4所述的方法，其中，
在步骤(3)中，所述醇-酯混合溶剂为体积比为乙醇：乙酸乙酯＝3-5:1的混合溶剂。
8.根据权利要求5所述的方法，其中，
在步骤(3)中，所述醇-酯混合溶剂为体积比为乙醇：乙酸乙酯＝3-5:1的混合溶剂。
9.根据权利要求1至3之一所述的方法，其中，
在步骤(3)中，所述乙醇：乙酸乙酯混合溶剂为体积比为乙醇：乙酸乙酯＝3:1的混合溶剂。
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