CN104710484A - 一种天麻素的提取及分离方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种天麻素的提取及分离方法，包括：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用水或者有机溶剂的水溶液提取天麻素，得到提取液；将提取液减压浓缩，得到浓缩液，将浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％至10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％至50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；采用高效液相色谱法测定洗脱液中天麻素的含量；将高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。本发明解决了现有技术无法实现的操作简单、容易实现，能够有效地对整个工艺流程进行质量控制，并且保证有效成分的含量，使取得的天麻素具有纯度高，色泽好的技术指标。

Description

一种天麻素的提取及分离方法

技术领域

本发明涉及天然产物提取领域，具体地说，是涉及一种天麻素的提取及分离方法。

背景技术

天麻为兰科植物天麻(Gastrodia elata Bl.)的干燥块茎。天麻具有平肝息风、止痉之功效，用于治疗头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫抽搐、破伤风等病症。已有研究表明天麻的主要活性成分是天麻素类化合物，其中，天麻素有镇痛、镇静及增加脑血流量，减少脑血流阻力，特别是能增加椎基底动脉供血，改善迷路动脉及内耳供血等作用，常作为天麻药材质量控制指标性成分。近年来研究发现，天麻素还具有增智、健脑、延缓衰老的作用，对老年痴呆症有一定疗效。天麻素(Gastrodin)，其分子式为C₁₂H₁₈O₇，分子量为286.28，化学名称为4-羟基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷。天麻素为白色针状结晶或棱柱状丛晶，其熔点为154至155℃，且易溶于水、甲醇、乙醇，但不溶于氯仿和醚，而天麻素提取得率的高低是衡量天麻精加工工艺的主要标志。

现有技术中的天麻的提取的方法有超声法、乙醇热回流处理和酶解法等，超声波提取是利用超声波破坏植物细胞壁，使胞内的天麻素释放而达到提取的目的；而醇提取方法需加热几个小时，使有效成份溶入有机溶剂。这两种提取工艺对设备要求高，消耗能源和溶剂较多，处理能力低，污染较严重，更重要的是提取的得率较低，并没有对提取物进行分离提纯，不能最大限度地提取天麻中所含的天麻素。

专利文件200710134318.9提供了一种天麻配方颗粒的制备方法，该方法采用乙醇热回流提取，药渣再加水回流提取，浓缩，喷雾干燥得天麻素。但是采用热回流提取时，天麻素中的淀粉易糊化，提取液难于处理；专利文件200910022107.5提供了一种酶法提取天麻素的方法，将天麻粉溶于醋酸-醋酸钠缓冲液混合均匀，加入复合酶搅拌均匀酶解，再加入酒精充分搅拌，过滤去渣，将提取液用旋蒸法浓缩成浸膏，经干燥后得天麻素提取物。但是此方法并没有对天麻素进一步的提纯分离，提取过程复杂，提取率较低，而且复合酶的成本较高。

因此，如何研发一种天麻素的提取及分离方法，解决上述问题，便成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本申请解决的主要问题是提供了一种天麻素的提取及分离方法，以解决现有技术无法实现的操作简单、容易实现，能够有效地对整个工艺流程进行质量控制，并且保证有效成分的含量，使取得的天麻素具有纯度高，色泽好的技术指标。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种天麻素的提取及分离方法，包括：

将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用水或者有机溶剂的水溶液提取天麻素，得到提取液；

将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％至10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％至50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

进一步地，其中，所述提取天麻素，进一步为：煎煮法提取、热回流提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取。

进一步地，其中，当用水提取天麻素时，其反应条件为：料液比为1：5至1：10，煎煮重复提取2至4次，每次30至120min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。

进一步地，其中，当用有机溶剂的水溶液提取天麻素时，其反应条件为：体积分数为50％到100％的有机溶剂水溶液，所述有机溶剂的水溶液的用量为天麻的4至10倍，重复提取2至4次，每次30至120min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。

进一步地，其中，所述聚酰胺层析柱，进一步为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱。

进一步地，其中，所述聚酰胺层析柱内的聚酰胺，进一步为30-60目、60-80目、60-100目和80-100目中的任意一种。

进一步地，其中，所述有机溶剂，进一步为低碳醇或丙酮。

进一步地，其中，所述的低碳醇，进一步为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇。

进一步地，其中，所述天麻切片的厚度，进一步为0.3至1.5cm。

进一步地，其中，所述干燥，进一步包括：减压真空干燥或冷冻干燥。

与现有技术相比，本申请所述的一种天麻素的提取及分离方法，达到了如下效果：

(1)本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，其操作简单，用水或者有机溶剂的水溶液提取天麻素，容易实现，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，能够有效地对整个工艺流程进行质量控制，并且保证有效成分的含量；

(2)本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，可以选用多种提取方法，对多种提取方法提取出的天麻素采用聚酰胺层析柱分离纯化，得到纯度高，色泽好的天麻素；

(3)本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，可以保证有效成分的含量达90％以上。

当然，实施本申请的任一产品不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明实施例一、实施例二和实施例三的一种天麻素的提取及分离方法的具体流程图；

图2是本发明实施例四、实施例五和实施例六的一种天麻素的提取及分离方法的具体流程图。

具体实施方式

如在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可理解，硬件制造商可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名称的差异来作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异来作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的误差范围内，本领域技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题，基本达到所述技术效果。此外，“耦接”一词在此包含任何直接及间接的电性耦接手段。因此，若文中描述一第一装置耦接于一第二装置，则代表所述第一装置可直接电性耦接于所述第二装置，或通过其他装置或耦接手段间接地电性耦接至所述第二装置。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明本申请的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。

以下结合附图对本申请作进一步详细说明，但不作为对本申请的限定。实施例1

如图1所示，为本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，具体包括以下步骤：

步骤101：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用水提取天麻素，得到提取液；

具体地，将1000g天麻块茎洗净除去杂质、切为0.3mm的薄片、晾干并粉碎，用水提取天麻素，得到提取液；水提取天麻素的反应条件为：料液比为1：5，煎煮法提取2次，每次60min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液；当然这里还可用浸渍提取、超声提取或渗漉提取，不限于煎煮法提取。

所述煎煮法提取，是将药材加水将煮取汁的方法。该法是最早使用的一种简易浸出方法，至今仍是制备浸出制剂最常用的方法。由于浸出溶煤通常用水，故有时也称为“水煮法”或“水提法”。适用于有效成分能溶于水、对湿和热较稳定的药材。该法浸提成分范围广，符合中医传统用药习惯，溶剂易得价廉，至今仍为最广泛适用的基本提取方法。

步骤102：将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％-10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱至无糖反应，再用体积分数为30％-50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

这里所述洗脱至无糖反应，是指在所述浓缩液中，最主要的杂质为低分子的糖类，当洗脱至无糖反应时，杂质也基本上除去。

具体地，将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至30～60目的聚酰胺层析柱上上样，当然还可以选用60-80目、60-100目和80-100目的聚酰胺层析柱，这里不做具体限定。

具体地，依次采用蒸馏水和体积分数为5％的甲醇水溶液洗脱除去杂质，这里的体积分数为5％的甲醇水溶液还可以为5％的乙醇水溶液，其目的是除去杂质，这里不做具体限定；再用体积分数为30％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，当然还可以用30％的乙醇水溶液洗脱，具体不作限定。

所述聚酰胺层析柱为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱，根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度也不同，因而可以通过聚酰胺层析柱的快慢不同而分离出高含量的天麻素。

步骤103：采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

具体地，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，其测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1，当采用高效液相色谱法测定出所述洗脱液中天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

所述高效液相色谱法，又叫做高压或高速液相色谱、高分离度液相色谱或近代柱色谱，以液体为流动相，采用高压输液系统，是色谱法的一个重要分支。它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

步骤104：将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

具体地，将所述高浓度的洗脱液浓缩、并冷冻干燥，当然还可以选用减压真空干燥，这里不做具体限定；得到天麻素6.3g，通过高效液相色谱法进行含量测定，利用峰面积比进行计算，纯度为95.6％。

另外，本实施例一所述的天麻为天麻块茎。

实施例2

如图1所示，为本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，具体包括以下步骤：

步骤101：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用水提取天麻素，得到提取液；

具体地，将1000g天麻洗净除去杂质、切为0.8mm的薄片、晾干并粉碎，用水提取天麻素，得到提取液；水提取天麻素的反应条件为：料液比为1：8，在沸水浴中重复浸渍提取3次，每次80min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。当然这里还可用煎煮法提取、超声提取或渗漉提取，不限于浸渍提取。

所述浸渍提取，是指采用适当的溶剂与设备将天麻中的可溶性成分浸出的过程。其目的是尽可能多地浸出天麻中的有效物质，最大限度地减少无效物质和有害成分的浸出，以便简化后期的分离精制工艺，降低服用量，确保制剂的安全、有效和稳定。

步骤102：将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％-10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％-50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

所述聚酰胺层析柱为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱，根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度也不同，因而可以通过聚酰胺层析柱的快慢不同而分离出高含量的天麻素。

具体地，将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至60-80目的聚酰胺层析柱上上样，当然还可以选用30-60目、60-100目和80-100目的聚酰胺层析柱，这里不做具体限定；

具体地，依次采用蒸馏水和体积分数为8％的甲醇水溶液洗脱除去杂质，当然所述体积分数为8％的甲醇水溶液还可以为8％的乙醇水溶液，这里不作具体限定，再用体积分数为40％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，当然，所述体积分数为40％的甲醇水溶液还可以为体积分数为40％的甲醇水溶液，这里不作具体限定。

步骤103：采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

具体地，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，其测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1；当采用高效液相色谱法测定出所述洗脱液中天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

步骤104：将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

具体地，将所述高浓度的洗脱液浓缩、并减压真空干燥，当然还可以选用减压真空干燥，这里不做具体限定；得到天麻素6.7g，通过高效液相色谱法进行含量测定，利用峰面积比进行计算，纯度为93.2％。

另外，本实施例一所述的天麻为天麻块茎。

实施例3

如图1所示，为本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，具体包括以下步骤：

步骤101：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用水提取天麻素，得到提取液；

具体地，将1000g天麻洗净除去杂质、切为1.5mm的薄片、晾干并粉碎，用水提取天麻素，得到提取液；水提取天麻素的反应条件为：料液比为1：10，超声重复提取4次，每次120min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。

所述超声提取，是利用超声波的空化作用、机械效应和热效应等加速胞内有效物质的释放、扩散和溶解，显著提高提取效率的提取方法。超声提取的主要理论依据是超声的空化效应、热效应和机械作用。当大能量的超声波作用于介质时，介质被撕裂成许多小空穴，这些小空穴瞬时闭合，并产生高达几千个大气压的瞬间压力，即空化现象。超声空化中微小气泡的爆裂会产生极大的压力，使植物细胞壁及整个生物体的破裂在瞬间完成，缩短了破碎时间，同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散和溶解，从而显著提高提取效率。

本实施例所述的提取天麻素的方法还可以渗漉提取，所述渗漉提取是将适度粉碎的天麻放置于渗漉筒中，由上部不断添加溶剂，溶剂渗过药材层向下流动过程中浸出药材成分的方法。渗漉法属于动态浸出方法，溶剂利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液。适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂；也可用于有效成分含量较低的药材提取。

步骤102：将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％-10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％-50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

所述聚酰胺层析柱为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱，根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度也不同，因而可以通过聚酰胺层析柱的快慢不同而分离出高含量的天麻素。

具体地，将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至60-100目的聚酰胺层析柱上上样，当然，还可以选用30-60目、60-80目、80-100目的聚酰胺层析柱，这里不做具体限定；

具体地，依次采用蒸馏水和体积分数为10％的甲醇水溶液，当然所述体积分数为10％的甲醇水溶液还可以为10％的乙醇水溶液，这里不作具体限定，洗脱除去杂质，再用体积分数为50％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液；，当然所述体积分数为50％的甲醇水溶液还可以为50％的乙醇水溶液，这里不做具体限定。

步骤103：采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

具体地，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，其测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1；当采用高效液相色谱法测定出所述洗脱液中天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

步骤104：将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

具体地，将所述高浓度的洗脱液浓缩、并冷冻干燥，当然还可以选用减压真空干燥，这里不做具体限定；得到天麻素7.1g，通过高效液相色谱法进行含量测定，利用峰面积比进行计算，纯度为90.8％。另外，本实施例一所述的天麻为天麻块茎。

实施例4

如图2所示，为本发明的一种天麻素的提取及分离方法，具体包括以下步骤：

步骤201：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用有机溶剂的水溶液提取天麻素，得到提取液；

具体地，将1000g天麻洗净除去杂质、切为0.3mm的薄片、晾干并粉碎，用甲醇的水溶液提取天麻素，得到提取液；用甲醇的水溶液提取天麻素的反应条件为：体积分数为50％的甲醇水溶液，所述甲醇的水溶液的用量为天麻的4倍，采用热回流提取的方法，重复提取2次，每次30min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。当然这里的甲醇的水溶液还可以为其他低碳醇的水溶液，例如：乙醇、丙醇、丁醇、戊醇，当然还可以为丙酮。这里还可用浸渍提取、超声提取或渗漉提取，不限于热回流提取。

步骤202：将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％至10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％至50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

具体地，将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至30-60目的聚酰胺层析柱上上样，当然还可以选用60-80目、60-100目和80-100目的聚酰胺层析柱，这里不做具体限定；

具体地，依次采用蒸馏水和体积分数为5％的甲醇水溶液洗脱除去杂质，这里的体积分数为5％的甲醇水溶液还可以为5％的乙醇水溶液，其目的是除去杂质，这里不做具体限定；再用体积分数为30％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，当然还可以用30％的乙醇水溶液洗脱，具体不作限定。

所述聚酰胺层析柱为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱，根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度也不同，因而可以通过聚酰胺层析柱的快慢不同而分离出高含量的天麻素。

步骤203：采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

具体地，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，其测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1；当采用高效液相色谱法测定出所述洗脱液中天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

步骤204：将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

具体地，将所述高浓度的洗脱液浓缩、并喷雾干燥，当然还可以选用冷冻干燥或减压真空干燥，这里不做具体限定；得到天麻素6.4g，通过高效液相色谱法进行含量测定，利用峰面积比进行计算，纯度为95.8％。

另外，本实施例一所述的天麻为天麻块茎。

实施例5

如图2所示，为本发明的一种天麻素的提取及分离方法，具体包括以下步骤：

步骤201：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用有机溶剂的水溶液提取天麻素，得到提取液；

具体地，将1000g天麻洗净除去杂质、切为0.8mm的薄片、晾干并粉碎，用乙醇的水溶液提取天麻素，得到提取液；用乙醇的水溶液提取天麻素的反应条件为：体积分数为75％的乙醇的水溶液，所述醇的水溶液的用量为天麻的7倍，采用浸渍提取法提取天麻素，重复提取3次，每次80min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液；当然这里的甲醇的水溶液还可以为其他低碳醇的水溶液，例如：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇。另外，这里还可用煎煮法提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取等提取方法，不限于热回流提取的提取方法。当然这里还可用热回流提取、超声提取或渗漉提取，不限于浸渍提取。

步骤202：将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％至10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％至50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

所述聚酰胺层析柱为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱，根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度也不同，因而可以通过聚酰胺层析柱的快慢不同而分离出高含量的天麻素。

具体地，将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至60-80目的聚酰胺层析柱上上样，当然还可以选用30-60目、60-100目和80-100目的聚酰胺层析柱，这里不做具体限定；

具体地，依次采用蒸馏水和体积分数为8％的甲醇水溶液洗脱除去杂质，当然所述体积分数为8％的甲醇水溶液还可以为8％的乙醇水溶液，这里不作具体限定，再用体积分数为40％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，当然，所述体积分数为40％的甲醇水溶液还可以为体积分数为40％的甲醇水溶液，这里不作具体限定。

步骤203：采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

具体地，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，其测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1；当采用高效液相色谱法测定出所述洗脱液中天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

步骤204：将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

具体地，将所述高浓度的洗脱液浓缩、并冷冻干燥，当然还可以选用减压真空干燥，这里不做具体限定；得到天麻素7.8g，通过高效液相色谱法进行含量测定，利用峰面积比进行计算，纯度为93.4％。。

另外，本实施例一所述的天麻为天麻块茎。

实施例6

如图2所示，为本发明的一种天麻素的提取及分离方法，具体包括以下步骤：

步骤201：将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用有机溶剂的水溶液提取天麻素，得到提取液；

具体地，将1000g天麻洗净除去杂质、切为1.5mm的薄片、晾干并粉碎，用丙酮的水溶液提取天麻素，得到提取液；用丙酮的水溶液提取天麻素的反应条件为：体积分数为100％的丙酮水溶液，所述丙酮的水溶液的用量为天麻的10倍，采用超声提取法，重复提取4次，每次120min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。当然这里的甲醇的水溶液还可以为其他低碳醇的水溶液，例如：甲醇、丙醇、丁醇、戊醇，当然还可以为丙酮。另外，这里还可用煎煮法提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取等提取方法，不限于热回流提取的提取方法。

步骤202：将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％至10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％至50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

所述聚酰胺层析柱为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱，根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度也不同，因而可以通过聚酰胺层析柱的快慢不同而分离出高含量的天麻素。

具体地，将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至60-100目的聚酰胺层析柱上上样，当然，还可以选用30-60目、60-80目、80-100目的聚酰胺层析柱，这里不做具体限定；

具体地，依次采用蒸馏水和体积分数为10％的甲醇水溶液，当然所述体积分数为10％的甲醇水溶液还可以为10％的乙醇水溶液，这里不作具体限定，洗脱除去杂质，再用体积分数为50％的甲醇水溶液洗脱得到洗脱液，当然所述体积分数为50％的甲醇水溶液还可以为50％的乙醇水溶液，这里不做具体限定。

步骤203：采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

具体地，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，其测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1；当采用高效液相色谱法测定出所述洗脱液中天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

步骤204：将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

具体地，将所述高浓度的洗脱液浓缩、并减压真空干燥，当然还可以选用冷冻干燥，这里不做具体限定；得到天麻素7.0g，通过高效液相色谱法进行含量测定，利用峰面积比进行计算，纯度为90.6％。

另外，本实施例一所述的天麻为天麻块茎。

与现有技术相比，本申请所述的一种天麻素的提取及分离方法，达到了如下效果：

(1)本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，其操作简单，用水或者有机溶剂的水溶液提取天麻素，容易实现，采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，能够有效地对整个工艺流程进行质量控制，并且保证有效成分的含量；

(2)本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，可以选用多种提取方法，对多种提取方法提取出的天麻素采用聚酰胺层析柱分离纯化，得到纯度高，色泽好的天麻素；

(3)本发明所述的一种天麻素的提取及分离方法，可以保证有效成分的含量达90％以上。

当然，实施本发明的任一产品不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。由于方法部分已经对本申请实施例进行了详细描述，这里对实施例中涉及的系统与方法对应部分的展开描述省略，不再赘述。对于系统中具体内容的描述可参考方法实施例的内容，这里不再具体限定。

上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述申请构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种天麻素的提取及分离方法，其特征在于，包括：

将天麻洗净除去杂质、切片、晾干并粉碎，用水或者有机溶剂的水溶液提取天麻素，得到提取液；

将所述提取液减压浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液加至聚酰胺层析柱上上样，依次采用蒸馏水和体积分数为5％至10％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去杂质，再用体积分数为30％至50％的甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱得到洗脱液；

采用高效液相色谱法测定所述洗脱液中天麻素的含量，测定条件为：所采用的色谱柱为ODS-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，色谱柱温度为30℃，流动相为乙腈：水(含0.05％磷酸)＝3：97，检测波长为220nm，且流速为1.0mL·min^-1，当天麻素的含量降至85％时，停止洗脱，得到高浓度的洗脱液；

将所述高浓度的洗脱液浓缩、干燥，得到天麻素。

2.根据权利要求1所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述提取天麻素，进一步为：热回流提取、浸渍提取、超声提取或渗漉提取。

3.根据权利要求1所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，当用水提取天麻素时，其反应条件为：料液比为1：5至1：10，在沸水浴中重复提取2至4次，每次30至120min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。

4.根据权利要求1所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，当用有机溶剂的水溶液提取天麻素时，其反应条件为：体积分数为50％到100％的有机溶剂的水溶液，所述有机溶剂的水溶液的用量为天麻的4至10倍，重复提取2至4次，每次30至120min，静置冷却至室温，抽滤，得到提取液。

5.根据权利要求1所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述聚酰胺层析柱，进一步为含酰胺链段(-CONH-)的聚合物聚合而成的高分子化合物组成的层析柱。

6.根据权利要求5所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述聚酰胺层析柱内的聚酰胺，进一步为30-60目、60-80目、60-100目和80-100目中的任意一种。

7.根据权利要求4所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述有机溶剂，进一步为低碳醇或丙酮。

8.根据权利要求7所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述的低碳醇，进一步为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇。

9.根据权利要求1所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述天麻切片的厚度，进一步为0.3至1.5cm。

10.根据权利要求1所述的天麻素的提取及分离方法，其特征在于，所述干燥，进一步包括：减压真空干燥或冷冻干燥。